Bào chế và đánh giá sinh khả dụng của viên nang fenofibrat

Đối tợng và nguyên vật liệu 1. Nguyên liệu tá dợc

Trong trờng hợp có sự khác biệt về liều phải chú thích để đa vào tính toán kết quả. Spectrex Laser Particle Counter (Model PC-2200, Spectrex Cop., USA) Máy đồng nhất hoá bằng siêu âm Sartorius. Thiết bị thử độ hoà tan ERWEKA Máy đo quang U1800 - HITACHI Máy ly tâm HERMLE.

Phơng pháp nghiên cứu

- Làm thí nghiệm thăm dò với các giá trị khác nhau của biến đầu vào để xác định khoảng biến thiên của biến độc lập. - Phơng trình hồi quy đợc tính toán nhờ phần mềm modde 5.0 dựa trên kết quả thực nghiệm của các biến đầu vào và các biến đầu ra. Đánh giá độ ổn định của mẫu viên nang bào chế ở mục 2.2.1.1 ở điều kiện thực và điều kiện lão hóa cấp tốc.

Qua tham khảo tài liệu và tiến hành các thử nghiệm thăm dò trên hệ thống HPLC nh: thay đổi tỷ lệ pha động, thể tích tiêm mẫu,..chúng tôi lựa chọn ra. Tính chọn lọc của phơng pháp: để xác định tính chọn lọc của phơng pháp, chúng tôi so sánh thời gian lu, hình dạng píc của FA giữa mẫu trắng và mẫu. Xác định tính chính xác: tính chính xác đợc xác định bằng cách pha 5 mẫu huyết tơng có cùng nồng độ FA là 4,0àg.

Khảo sát tính đúng: tính đúng của phơng pháp đợc xác định bằng phơng pháp thêm, dựa trên các mẫu huyết tơng đã có nồng độ FA xác định. Độ đúng của phơng pháp đợc đánh giá dựa trên tỉ lệ phần trăm của FA tìm lại đ- ợc so với lợng FA đã thêm vào. Ly tâm tách huyết tơng, hút lấy 1ml huyết tơng, bảo quản trong tủ lạnh sâu ở nhiệt độ -400C nếu không định lợng ngay.

Phơng pháp chiết tách dợc chất trong huyết tơng: rã đông huyết tơng bằng cách ngâm trong nớc ở nhiệt độ thờng. Từ kết quả diện tích píc so sánh với diện tích píc của mẫu chuẩn để tính đ- ợc nồng độ của FA trong huyết tơng.

Thử nghiệm in vitro 1. Xây dựng đờng chuẩn

Kết quả cho thấy độ tan của FB trong môi trờng nớc cất và các môi trờng pH khác nhau rất thấp, pH hầu nh không ảnh hởng đến độ tan của FB. Nhận xét: cùng một quy trình bào chế, cùng một nồng độ sử dụng, các chất nhũ hoá khác nhau cho các tiểu phân có kích thớc khác nhau. - Tỷ lệ của pha dầu và pha nớc, nồng độ của chất nhũ hoá là 2 yếu tố ảnh hởng đến kích thớc tiểu phân của nhũ tơng tạo thành.

Chúng tôi cũng đánh giá ảnh hởng của tỷ lệ hỗn hợp SP - FB đến độ hoà tan của vi hạt FB tạo thành trong công thức bào chế. - Để lấy căn cứ cho việc xác định các khoảng biến thiên của biến độc lập, chúng tôi làm các thí nghiệm thăm dò với thành phần công thức đợc trình bày ở bảng 3.1.5. - Mẫu T3 có nồng độ FB bé hơn mẫu T4 cho độ hoà tan của vi hạt FB lớn hơn và cho kích thớc tiểu phân bé hơn mẫu T4.

Nhìn chung những công thức có kích thớc nhỏ thì có độ hoà tan lớn nh công thức 9 có kích thớc 9,1àm có độ hoà tan gần nh hoàn toàn ở phút thứ 20. Tuy nhiên, có những công thức kích thớc tiểu phân không nhỏ nhng lại có độ hoà tan rất tốt nh công thức 5 và công thức 14. Nh vậy, kích thớc tiểu phân không phải là yếu tố duy nhất quyết định tốc độ hòa tan của vi hạt FB từ các mẫu thí nghiệm.

Viên nang bào chế chứa vi hạt đợc bào chế theo công thức tối u (NBC) có độ hoà tan cao hơn viên nang Lipanthyl 200M (LM 200). Kết quả so sánh mô hình hoà tan cho thấy trong môi trờng NaLS 1,5% độ hoà tan của FB từ viên NBC tơng đơng với viên Lipanthyl 200M và viên Lipanthyl supra 160mg. Kết quả định lợng cũng cho thấy hàm lợng FB trong các mẫu hầu nh không bị giảm sau 6 tháng bảo quản ở cả điều kiện thực và điều kiện lão hóa cấp tốc.

Có thể thấy rằng không có sự khác biệt về độ hòa tan của mẫu ban đầu và mẫu bảo quản ở điều kiện thực sau 6 tháng, nhng có sự khác biệt rõ rệt của hai mẫu này so với mẫu bảo quản ở điều kiện lão hóa cấp tốc.

Xây dựng và thẩm định phơng pháp định lợng FA trong huyết tơng 1. Điều kiện chạy sắc ký

Bảo quản ở điều kiện lão hóa cấp tốc làm giảm độ hòa tan của FB từ viên nang FB 200mg trong môi trêng NaLS 1%. Trớc khi tiến hành chạy sắc ký, siêu âm các thành phần pha động để loại khí hòa tan trong dung môi. Để xác định tính chọn lọc của phơng pháp, chúng tôi so sánh thời gian lu, hình dạng píc của FA giữa mẫu trắng và mẫu đánh giá.

Mẫu đánh giá : mẫu huyết tơng có thêm FA và mẫu huyết tơng sau khi uèng thuèc. Sắc ký đồ của FA trong pha động Sắc ký đồ của FA trong huyết tơng sau khi uèng thuèc. Vậy có thể kết luận phơng pháp có tính chọn lọc cao đối với FA đợc chiết tách từ huyết tơng.

Nh vậy có thể sử dụng đờng chuẩn này để tính toán nồng độ FA trong các mẫu huyết tơng định l- ợng. Hút 1ml, pha tiếp vào bình định mức 25 bằng huyết tơng trắng thu đ- ợc dung dịch có nồng độ 4àg/ml. Kết quả thống kê cho thấy phơng pháp có độ lặp lại cao, sai số tơng đối nhá.

Khảo sát độ đúng bằng phơng pháp thêm chuẩn: pha 5 mẫu huyết tơng có nồng độ FA 4 àg/ml. Khảo sát hiệu suất chiết FA từ huyết tơng Kết quả khảo sát đợc trình bày tại bảng 3.2.4.

Đánh giá và so sánh sinh khả dụng của nang bào chế và nang thuốc

Nồng độ FA trong huyết tơng của từng cá thể khi uống NBC và LM 200 Thêi. Từ diện tích píc, dựa vào đờng chuẩn ta tính đợc nồng độ FA trong huyết tơng chó thí nghiệm tại các thời điểm khác nhau, kết quả trình bày ở bảng 3.3.1. * Từ kết quả trung bình nồng độ FA trong huyết tơng chó theo thời gian khi uống 2 loại viên trên, ta có đồ thị so sánh 3.2.2.

Qua đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc của nồng độ trung bình FA trong huyết tơng chó vào thời gian, chúng ta thấy ban đầu khi uống nang Lipanthyl 200 M. Tuy nhiên các thời điểm sau thì mẫu uống NBC có nồng độ trung bình FA trong huyết tơng cao hơn. Diện tích dới đờng cong và Cmax trung bình của các cá thể uống NBC đều có giá trị lớn hơn các cá thể uống nang LM 200.

Từ các khoảng tin cậy trong bảng 3.3.3, ta có thể kết luận hai thuốc này không tơng đơng sinh học theo quy định của FDA (tơng đơng khi các giá trị nằm trong khoảng 0,8 đến 1,25).

Bàn luận

Việc phối hợp đợc biện pháp tăng độ hòa tan nhờ giảm kích thớc tiểu phân với tăng độ hòa tan bằng chế tạo hệ phân tán rắn đã tạo ra sản phẩm có khả năng hòa tan rất tốt. Đây là phơng pháp cá biệt thực hiện đợc nhờ tính chất hóa lý của FB, là chất có nhiệt độ nóng chảy thấp, bền với nhiệt độ và độ ẩm. Vì hầu nh không tan trong nớc nên FB khi vào đờng tiêu hóa phải đợc hoà tan vào lipid hoặc đợc nhũ hoá nhờ muối mật trớc khi hấp thu.

Trên cơ sở đó chúng ta có thể suy luận rằng, môi trờng có nồng độ chất diện hoạt thấp hơn sẽ đánh giá tốt hơn sự liên quan. Vì vậy, khi so sánh độ hoà tan của các mẫu với nhau cần lựa chọn nồng độ chất diện hoạt trong môi trờng hoà tan ở mức tối thiểu để có thể đánh giá đợc sự khác nhau về độ hoà tan liên quan đến sự hấp thu của fenofibrat. Kết quả phân tích các mẫu huyết tơng cho thấy khi vào máu FB bị thủy phân thành FA là chất có tác dụng sinh học.

Các thông số dợc động học cho thấy Tmax là tơng đơng, tuy nhiên AUC0-24, AUC0-∞ của những cá thể uống NBC. Kết quả thử SKD gợi ý có thể giảm hàm lợng vi hạt FB trong NBC để đảm bảo SKD tơng đơng viên LM 200. Kết quả đánh giá SKD trên 6 chó cho thấy NBC có SKD cao hơn nang LM 200 và nồng độ FA trong huyết tơng của các cá thể uống NBC ít biến động hơn.

Kết quả thử in vitro chỉ ra viên NBC có độ hòa tan tốt hơn viên LM 200, nh vậy có liên quan giữa SKD in vitro và SKD in vivo. Tăng SKD in vitro có thể làm tăng SKD in vivo, đồng thời giảm sự biến thiên cá thể.