Tình hình viêm gan vịt do virus ở ngoại thành Hà Nội: Phân lập, đặc tính sinh học và biện pháp phòng bệnh

Phương pháp nghiên cứu

Sau khi tiêm 20 giờ, soi trứng kiểm tra ngày 3 lần, những phôi chết và sống ủều ủược tiến hành mổ phụi, kiểm tra, quan sỏt bệnh tớch ủại thể. Sự cú mặt của virus viờm gan vịt ủược ủỏnh giỏ dựa vào sự nhõn lờn của virus trờn phụi, virus gõy chết phụi với bệnh tớch ủặc trưng trờn phụi. Thớ nghiệm ủược bố trớ 2 lần, mỗi lần dựng 15 con vịt 2 ngày tuổi, khỏe mạnh, không nằm trong ổ dịch, chưa tiêm vacxin viêm gan vịt, kháng thể viờm gan vịt.

- Bước 2: Thờm 140 àl dung dịch mẫu ủó xử lý là nước trứng chứa virus vào ống Eppendorf trờn, sau ủú lắc ủều nhanh trong 15 giõy rồi ủể ở nhiệt ủộ phũng trong 10 phỳt. - Cặp mồi (Primer) ủặc hiệu sử dụng trong nghiờn cứu gồm:. Cặp mồi ủược tổng hợp dựa trờn cơ sở trỡnh tự gen của virus viờm gan vịt ủó cụng bố trờn ngõn hàng gen quốc tế). Kỹ thuật ủiện di trờn gel là hết sức quan trọng ủối với nguời làm kỹ thuật di truyền, vỡ ủú là cỏch chủ yếu làm cho cỏc ủoạn axit nucleotit hiển thị trực tiếp ủể quan sỏt.

- Chuẩn bị virus: Virus ủược lấy từ mẫu phõn lập trờn phụi vịt 12 ngày tuổi và trờn vịt con cú triệu chứng, bệnh tớch ủiển hỡnh của bệnh viờm gan vịt. - Chuẩn bị trứng: Trứng vịt ấp ở 370C ủến ngày thứ 12 ủem soi trứng, chọn những quả cú phụi khoẻ mạnh, ủỏnh dấu buồng hơi và vị trớ phụi. - Chuẩn bị vịt con: vịt con 1 ngày tuổi, khoẻ mạnh, chưa ủược tiờm khỏng thể hoặc vacxin viờm gan vịt, nở từ trứng của ủàn vịt mẹ bố mẹ chưa ủược tiờm vacxin viờm gan vịt.

Tình hình chăn nuôi vịt ở huyện Gia Lâm và đông Anh - Hà Nội Gia Lâm và đông Anh là hai huyện ngoại thành Hà Nội có diện tắch ựất

Chăn nuôi vịt ở hai huyện ngoại thành Hà Nội chủ yếu theo phuơng thức chăn thả, nhỏ lẻ, tận dụng nguồn thức ăn có sẵn trong tự nhiên như: cua tụm cỏ, thúc lỳa sau thu hoạch… chớnh vỡ vậy, số lượng vịt nuụi trờn ủịa bàn huyện luụn cú nhiều biến ủộng. Vịt chăn nuụi theo mựa, số lượng vịt tăng mạnh vào cỏc thời ủiểm thu hoạch lỳa ( thỏng 5 - 6 thu hoạch lỳa chiờm xuõn, tháng 9 - 10 thu hoạch lúa mùa). Những năm gần ủõy nghề chăn nuụi vịt ủó gúp phần xoỏ ủúi giảm nghốo cho nhiều hộ chăn nuụi, người dõn ủó mạnh dạn ủầu tư về con giống, chuồng trại, kỹ thuật chăm súc, thức ăn và cụng tỏc phũng bệnh ủược coi trọng.

Nhờ vậy một số bệnh truyền nhiễm nguy hiểm như: dịch tả vịt, tụ huyết trựng gia cầm ủó cú phần giảm xuống. Trong những thỏng ủầu năm do ảnh hưởng của thời tiết và chi phớ cho chăn nuụi quỏ cao ủó làm cho số lượng ủàn vịt giảm hơn so với năm 2007. Trong quỏ trỡnh thực hiện ủề tài, chỳng tụi ủó tiến hành ủiều tra về tỡnh hỡnh mắc bệnh viờm gan do virus trờn ủàn vịt nuụi tại 24 xó, 1 thị trấn của 2 huyện Gia Lâm và đông Anh, kết quả ựược trình bày ở bảng 4.2.

Trong ủú cú 7 xó: ða Tốn, Trõu Quỳ, Kim Sơn, Yờn Thường, Phự ðổng, Trung Mầu và ðặng Xỏ cú bệnh viờm gan vịt xuất hiện trờn ủàn vịt. Như vậy kết quả ựiều tra trên các ựàn vịt nuôi ở 2 huyện Gia Lâm, đông Anh cho thấy bệnh viờm gan vịt vẫn thường xuất hiện trờn ủàn vịt. Mặc dự ủược can thiệp bằng khỏng thể viờm gan vịt nhưng tỷ lệ vịt chết vẫn từ 5,1% ủến 100% (Gia Lâm) gây tổn thất lớn cho người chăn nuôi.

Kết quả ủiều tra về lứa tuổi mắc bệnh và chết vỡ bệnh viờm gan vịt do virus trên ựàn vịt ở Huyện Gia Lâm và huyện đông Anh- Hà Nội

Theo OIE (2000), ủể phũng bệnh viờm gan vịt cho ủàn vịt con, ủặc biệt ở vịt con dưới 1 tuần, nờn dựng vacxin viờm gan vịt tiờm cho ủàn bố mẹ ủể tạo miễn dịch bị ủộng cho ủàn vịt con. Như vậy ở huyện Gia Lâm và đông Anh bệnh viêm gan vịt do virut xảy ra chủ yếu ở vịt con 1 -7 ngày tuổi, ở lứa tuổi này tỷ lệ vịt mắc bệnh rất cao chiếm 72,7%.

Kết quả phõn lập virus viờn gan vịt cường ủộc gõy bệnh trờn ủàn vịt con tại khu vực ngoại thành Hà Nội

Như vậy, trong bệnh phẩm nuụi cấy trờn phụi vịt ủó cú mặt virus viờm gan vịt, virus ủó nhõn lờn trờn phụi, gõy chết phụi và gõy cỏc bệnh tớch ủặc hiệu trên phôi. Theo Ngô đình Long (2005), virus phân lập từ ổ dịch viêm gan vịt ở huyện Hiệp Hoà - Bắc Giang cho thời gian chết phôi ngắn hơn. Khi phõn lập virus trờn vịt con, theo dừi số vịt ốm, vịt chết và thời gian chết của vịt sau khi tiờm virus (bảng 4.6).

Với mẫu bệnh phẩm lấy ủược từ ổ dịch viờm gan vịt ở xó ða Tốn cho chỳng ta kết quả tương tự: với 10 vịt con ủược tiờm huyễn dịch bệnh phẩm, sau khi tiêm 100% vịt có biểu hiện ốm và có triệu chứng của bệnh. Những vịt sống và chết ở vịt thớ nghiệm và ủối chứng chỳng tụi ủều mổ khỏm kiểm tra bệnh tớch ủại thể, kết quả cho thấy: những vịt ủược tiờm huyễn dịch bệnh phẩm, quan sỏt thấy cú những bệnh tớch ủiển hỡnh của bệnh viờm gan vịt do virus, gan sưng xuất huyết, thận sưng, lách sưng (bảng 4.8). Kết quả kiểm tra bệnh tớch ủại thể trờn vịt con thớ nghiệm ủược tiờm huyễn dịch bệnh phẩm từ ổ dịch ða Tốn cho nhận xột tương tự.

Trong khi ủú ở cỏc vịt ủối chứng vẫn mạnh khỏe, khi mổ kiểm tra cỏc cơ quan: gan, lỏch, thận ủều ở trạng thỏi bỡnh thường. Như vậy khi gây nhiễm cho vịt con 2 ngày tuổi một lần nữa cho thấy, trong bệnh phẩm lấy từ ổ dịch tại Kim Sơn, ða Tốn ủều cú mặt virus viờm gan vịt, virus nhân lên trên vịt gây ra các triệu chứng, bệnh tích, tỷ lệ chết phù hợp với ủặc tớnh của virus viờm gan vịt typ I như cỏc tài liệu ủó cụng bố. Theo Nguyễn Văn Cảm và cộng sự (2001), huyễn dịch bệnh phẩm gan của vịt mắc bệnh tự nhiên khi tiêm cho vịt 3 ngày tuổi, 17 giờ sau khi tiêm vịt bắt ủầu chết, tỷ lệ chết 80%, khi vịt chết nằm ở tư thế ngả ủầu ra ủằng sau, chân duỗi thẳng.

Kết quả giỏm ủịnh virus viờm gan vịt bằng kỹ thuật RT – PCR

Sản phẩm phản ứng PCR là một phần của hệ gen virus viêm gan vịt cường ủộc phõn lập tại Kim Sơn, Gia Lõm (DHV-GL08) cú ủộ dài khoảng 0,8kb. Phần nucleotit ủoạn gen 714bp của virus viờm gan vịt cường ủộc phõn lập tại Kim Sơn, Gia Lõm (DHV-GL08) của Việt Nam ủược so sỏnh với chủng virus vacxin viêm gan vịt của Hàn Quốc (DHV-HS) hình 4.2. So sánh trình tự Nucleotit (714bp) gen VP1 của virus viêm gan vịt cường ủộc phõn lập ở Gia Lõm, Hà Nội (ký hiệu DHV-GL08) và.

Kết quả khảo sỏt một số ủặc tớnh sinh học của chủng virus viờm gan vịt phõn lập ủược

Thực hiện chỉ tiờu này chỳng tụi tiến hành 3 lần thớ nghiệm trờn phụi vịt 12 ngày tuổi, khoẻ mạnh, ủược ấp từ ủàn trứng vịt bố mẹ khoẻ mạnh, chưa ủược tiờm phũng vacxin viờm gan vịt. Theo dừi phụi trong 96 giờ, ghi số phụi sống, phụi chết theo từng nồng ủộ và tớnh ELD50 theo cụng thức Reed - Muench. Cỏc ủộ pha loóng tiếp theo số phụi chết giảm dần, ở ủộ pha loóng 10-8 khụng cũn gõy chết phụi.

Theo dừi thời gian phụi chết chỳng tụi thấy phụi chết tập trung trong khoảng thời gian từ 19 - 72 giờ sau khi tiêm virus. So sánh chỉ số ELD50 của lần thí nghiệm thứ nhất với lần thí nghiệm thứ hai và thứ ba khụng cú sai khỏc với P > 0,05. Qua kết quả xỏc ủịnh chỉ số EID50, ELD50 cho thấy virus viờm gan vịt mà chỳng tụi phõn lập ủược tại Kim Sơn, Gia Lõm cú ủộc lực tương ủối cao, virus nhõn lờn và phỏt triển tốt trờn phụi vịt, ở ủộ pha loóng 10-4 virus làm chết 100% phôi, thời gian phôi chết tập trung từ 19 - 72 giờ sau khi tiêm.

Qua các lần thí nghiệm, chúng tôi thấy vịt chết trong khoảng thời gian từ 19 -72 giờ sau khi tiờm, vịt co giật và chết với tư thế ngoẹo ủầu rất rừ, mổ khỏm vịt chết cú bệnh tớch ủặc trưng của bệnh viờm gan vịt. Qua việc chuẩn ủộ virus trờn vịt con cho thấy chủng virus viờm gan vịt phõn lập ủược cú ủộc lực cao và ổn ủịnh. Như vậy kết quả xỏc ủịnh chỉ số EID50, ELD50, LD50 của chủng virus viờm gan vịt phõn lập ủược tại xó Kim Sơn - Gia Lõm - Hà Nội cho thấy ủõy là một chủng virus cú ủộc lực cao và ổn ủịnh.

Kết quả nghiờn cứu phương phỏp phũng bệnh viờm gan vịt cho ủàn vịt con

Khi virus xõm nhập vào vịt con, virus nhanh chóng nhân lên gây chết vịt với tỷ lệ cao. Sau khi vịt mẹ ủẻ ủược 1, 3, 6 thỏng chỳng tụi tiến hành thu trứng cho ấp nở, chọn vịt khỏe mạnh kiểm tra miễn dịch thụ ủộng ở vịt con (3 ngày tuổi) bằng phương phỏp cụng cường ủộc. + Vịt mẹ ủược gõy miễn dịch bằng cỏch dựng 3 lần vacxin, ở vịt con cú miễn dịch cao hơn so với vịt con của vịt mẹ dùng 2 lần vacxin.