MỤC LỤC
Theo Nguyễn Thị Liên Thương (2016), Li (2006) cho thấy, chi Cordyceps thuộc ngành nấm túi Ascomycota, lớp Sordariomycetes, bộ Hypocreales, họ Clavicipitaceae và gồm có hơn 400 loài đã được tìm thấy và mô tả, trong số đó có khoảng 36 loài đã được nuôi trồng quả thể trong điều kiện nhân tạo [4]. Theo Phạm Quang Thu vs cs (2011) trong y học cổ truyền của Trung Quốc, nấm Cordyceps militaris được dùng để điều trị thành công các chứng rối loạn lipit máu, viêm phế quản mãn tính, hen phế quản, viêm thận mãn tính, suy thận, rối loạn nhịp tim, cao huyết áp, viêm mũi dị ứng, viêm gan B mãn tính và thiểu khả năng sinh dục. Giai đoạn nhân giống được xem là giai đoạn quan trọng vì đây là giai đoạn phát triển của các bào tử nấm, giống nấm sau khi phân lập sẽ được nuôi trong môi trường dinh dưỡng, ở giai đoạn này các ống bào tử của nấm Cordyceps militaris sẽ dần phát triển tạo nên các tế bào nấm non, sau đó được cấy sang môi trường giá môi để được lan tơ và phát triển thành quả thể nấm hoàn chỉnh.
Gạo lứt là cơ chất tốt nhất cung cấp hàm lượng Cacbon trong muôi trường dinh dưỡng nuôi trồng nấm Cordyceps militaris, hàm lượng gạo lứt và hàm lượng nước trong môi trường nuôi cũng ảnh hưởng đến chiều cao quả thể và trọng lượng tươi nấm/chai nuôi.[3]. Theo Phạm Đức Thịnh vs cs (2015) ở Việt Nam đến nay có khoảng 147 loài rong nâu đã được phân loại, trong đó các loài rong thuộc chi Sargassum có trữ lượng lớn nhất với khoảng 68 loài phân bố dọc ven biển Việt Nam và sản lượng ước tính trên 10.000 tấn khô/năm. Theo điều tra tới năm 2011 có 39 loài rong nâu thuộc chi Sargassum phân bố ở vùng biển Khánh Hòa, tập trung nhiều nhất và có trữ lượng lớn nhất là ở vịnh Nha Trang với 21 loài phổ biến và sản lượng ước tính gần 4.800 tấn khô/năm.[5].
Rong biển có chứa đa dạng các thành phần hoá học, chúng đều là các thành phần rất có giá trị về mặt dinh dưỡng cũng như dược liệu bao gồm: các axít amin, các axít béo nhiều nối đôi, các vitamin và khoáng chất, polyphenol, các hợp chất chứa iốt, laminaran, alginat và fucoidan với tiềm năng ứng dụng rất lớn để làm dược liệu.[5]. Theo Seulmee vs cs (2009) cho thấy cordycepin còn ngăn sự biểu hiện của gen T2D chịu trách nhiệm điều hòa bệnh tiểu đường thông qua viêc ức chế các đáp ứng phản ứng viêm phụ thuộc NF-κB, do đó được hy vọng sẽ ứng dụng được như một chất điều hòa miễn dịch dùng trong điều trị các bệnh về miễn dịch.[26].
Từ những chai giống lỏng ban đầu, hút 10 ml giống cho vào các hộp nhựa chứa môi trường dinh dưỡng rắn. Cân trọng lượng khô trong từng hộp: Lấy khối lượng tươi M0 của từng hộp mang đi sấy ở 40oC trong 24h đến 2 lần cân liên tiếp có khối lượng không đổi. Vẽ đồ thị biểu diễn sự biến thiên mật độ quang (∆OD) theo nồng độ protein chuẩn (àg/ml).
Hút 0,4ml dung dịch protein cần phân tích, thêm 2ml dung dịch C, lắc đều để yên ở nhiệt độ phòng trong 5 phút. Nên làm 3 ống nghiệm để lấy trung bình, pha loãng mẫu nếu màu vượt ngoài đường chuẩn. Tính % Nitơ khi đã xác định được % Protein từ phường pháp Lowry của nguyên liệu cần tìm.
Mục đích: Xác định hàm lượng rong biển Wakame tối ưu để bổ sung vào môi trường nuôi nấm Cordyceps militaris. Bố trí thí nghiệm theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên với 5 nghiệm thức, 3 lần lặp lại với mỗi lần 15 hộp. Mục đích: Xác định hàm lượng tảo xoắn Spirulina platensis tối ưu để bổ sung vào môi trường nuôi nấm Cordyceps militaris.
Bố trí thí nghiệm theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên với 5 nghiệm thức, 3 lần lặp lại với mỗi lần 15 hộp. Mục đích: Tìm ra hàm lượng kết hợp giữa rong biển Wakame và tảo xoắn Spirulia platensis cho sự phát triển của nấm Cordyceps militaris tốt hơn. Bố trí thí nghiệm theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên với 5 nghiệm thức, 3 lần lặp lại với mỗi lần 15 hộp.
Trọng lượng tươi, trọng lượng khô và năng suất sinh học của quả thể nấm Cordyceps militaris trong các môi trường dinh dưỡng khác nhau của thí nghiệm có sự khác biệt, có ý nghĩa qua thống kê ở mức nghĩa 5% qua phép thử Duncan. Qua bảng kết quả 4.1 cho thấy trọng lượng sinh khối của quả thể nấm Cordyceps militaris tươi từ môi trường dinh dưỡng có bổ sung 12% bột đậu nành (A0) cho kết quả 19,29g tươi cao hơn các nghiệm thức còn lại. Qua bảng kết quả 4.1 cho thấy trọng lượng sinh khối của quả thể nấm Cordyceps militaris khô từ môi trường dinh dưỡng có bổ sung 12% bột đậu nành (A0) cho kết quả 3,69g khô cao hơn các nghiệm thức còn lại còn lại.
Qua bảng kết quả 4.2 cho thấy trọng lượng sinh khối của quả thể nấm Cordyceps militaris tươi từ môi trường dinh dưỡng có bổ sung 3,7% rong biển (T0) cho kết quả 18,3g tươi cao hơn các nghiệm thức còn lại và có sự khác biệt qua thống kê ở mức ý nghĩa 5%. Qua bảng kết quả 4.2 cho thấy trọng lượng sinh khối của quả thể nấm Cordyceps militaris khô từ môi trường dinh dưỡng có bổ sung 3,7% rong biển (T0) cho kết quả 3,08g khô cao hơn các nghiệm thức còn lại còn lại và có sự khác biệt qua thống kê ở mức ý nghĩa 5%. Nitơ là thành phần dinh dưỡng quan trọng để giúp nấm phát triển tốt hơn nhưng theo các nghiên cứu của Gao và cs (2000), trong môi trường nuôi cấy nấm Cordyrceps militaris nhu cầu hàm lượng nitơ tương đối thấp, nếu hàm lượng nitơ quá cao sẽ làm chậm quá trình sinh trưởng hệ sợi và quá trình biệt hóa hình thành quả thể.[12].
Qua bảng kết quả 4.3 cho thấy trọng lượng sinh khối của quả thể nấm Cordyceps militaris tươi từ môi trường dinh dưỡng có bổ sung 3,6% tảo xoắn (L3) cho kết quả 18,85g tươi cao hơn các nghiệm thức còn lại và có sự khác biệt qua thống kê ở mức ý nghĩa 5%. Qua bảng kết quả 4.3 cho thấy trọng lượng sinh khối của quả thể nấm Cordyceps militaris khô từ môi trường dinh dưỡng có bổ sung 3,6% tảo xoắn (L3) cho kết quả 3,45g khô cao hơn các nghiệm thức còn lại còn lại và có sự khác biệt qua thống kê ở mức ý nghĩa 5%. Nitơ là thành phần dinh dưỡng quan trọng để giúp nấm phát triển tốt hơn nhưng theo các nghiên cứu của Gao và cs (2000), trong môi trường nuôi cấy nấm Cordyrceps militaris nhu cầu hàm lượng nitơ tương đối thấp, nếu hàm lượng nitơ quá cao sẽ làm chậm quá trình sinh trưởng hệ sợi và quá trình biệt hóa hình thành quả thể.[12].
Nhận xét: Sinh khối tươi và khô của quả thể nấm Cordyceps militaris trong các nồng độ bổ sung môi trường dinh dưỡng khác nhau của thí nghiệm có sự khác biệt, có ý nghĩa qua thống kê ở mức nghĩa 5% qua phép thử Duncan. Qua bảng kết quả 4.4 cho thấy trọng lượng sinh khối của quả thể nấm Cordyceps militaris khô từ môi trường dinh dưỡng có bổ sung 1,5% rong biển Wakame và 1,8% tảo xoắn Spirulina platensis (H4) cho kết quả 4,04g khô cao hơn các nghiệm thức còn lại còn lại và có sự khác biệt qua thống kê ở mức ý nghĩa 5%. Kết luận: Khi bổ sung kết hợp giữa rong biển Wakame và tảo xoắn Spirulina platensis vào môi trường nuôi trồng nấm Cordyceps militaris thì bổ sung theo tỷ lệ 1,5% rong biển Wakame và 1,8% tảo xoắn Spirulina platensis.
(2012),”Selenium enrichment on Cordy-ceps militaris Link and analysis on its main active components”, Applied Biochemistry and Biotechnology, 166:1215–1224. (2011),“Structural characterization and antioxidant activity of purified polysaccharide from cultured Cordyceps militaris”, African Journal of Microbiology Research, 5(18): 2743-2751. [12] Gao XH, Wu W và Qian GC (2000),”Study on influences of abiotic factors on fruitbody differentiation of Cordyceps militaris”, Acta Agric Shanghai.
(1982), “Keys to the taxa of the genera Cordyceps and Torrubiella”, Transactions of the Mycological Society of Japan, 23:329–364 Herbal, New York. (2006), “Quality control of Cordyceps sinensis, a valued traditional Chinese medicine”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 41, 1571–84. [22] Lo HC, Chienyan H, Fang YL anh Hsu TH (2013), “A systematic review of the mysterious caterpillar fungus OphioCordyceps sinensis in Dong Chong Xia Xao and Related Bioactive ingredients”, Joumal of Traditional and Complementary Medicine, 3(1): 16 – 32.
(2007), “Effects of culture conditions on the mycelial growth and bioactive metabolite production in submerged culture of Cordyceps militaris”, Biochemical Engineering Journal. (2010), “Efficient Production of Anticancer Agent Cordycepin by Repeated Batch Culture of Cordyceps militaris Mutant”, Lecture Notes in Engineering and Computer Science, 20- 22. “Cordycepin: Selective Growth Inhibitor Derived from Liquid Culture of Cordyceps militaris against Clostridium spp”, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 48: 2744−2748.
“In Vivo Antiinfluenza Virus Activity of an Immunomodulatory Acidic Polysaccharide Isolated from Cordyceps militaris Grown on Germinated Soybeans”, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 55: 10194–10199.