Quy trình phân tích hàm lượng Carbaryl và Dimethoate trong cải xanh bằng phương pháp HPLC

Tính chất hoá học

Dựa vào sự thay đổi màu so với mẫu đối chứng (không có thuốc trừ sâu), hoặc dựa vào thang màu chuẩn có thể định tính hoặc bán định lượng thuốc trừ sâu trong maãu phaân tích [29]. Acid ascorbic bền trong môi trường trung tính, acid, không bền trong môi trường có các ion kim loại như Cu2+, Fe2+, Enzym ascorbatoxydase….

Nguoàn goác

Trong dung dịch, acid ascorbic nhanh chóng bị oxi hoá khi có mặt không khí và pH vùng kiềm.

Vai trò của Vitamin C [30]

Khi nhỏ dung dịch DCP vào một dung dịch có chứa vitamin C, thì hỗn hợp phản ứng không màu cho đến khi tất cả lượng vitamin C có trong hỗn hợp chuyển hết thành dạng dehydroascorbic acid. Bước xử lý với acid này nhằm làm biến tính và kết tủa protein trong mẫu để tránh ảnh hưởng đến kết quả phân tích, đồng thời cũng nhằm giúp ổn định acid ascorbic tránh bị phân huỷ.

KHẢO SÁT QUY TRÌNH PHÂN TÍCH CARBARYL, DIMETHOATE BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG CAO ÁP (HPLC)

Điều này có thể giải thích một cách dễ dàng do Acetonitrile là dung môi rửa cột nên khi tăng lượng Acetonitrile lên thì tốc độ cũng như hàm lượng Carbaryl được rửa giải ra khỏi cột tăng lên. Ở hệ pha động 55%Acetonitrile-45%nước thời gian lưu của Dimethoate không quá ngắn (3,973. ± 0,064) phút, tách ra so với peak của Carbaryl và của các thành phần khác trong rau, diện tích peak thu được tương đối cao. Bên cạnh đó khi sử dụng cùng hệ pha động 55%Acetonitrile-45%Nước ta có thể tiến hành phân tích đồâng thời cả hai chất, giúp tiết kiệm thời gian thay pha động cũng như giúp tiết kiệm lượng dung môi tiêu hao.

Cùng quy luật như đối với Carbaryl, hệ số góc thu được khi phân tích các mẫu chuẩn Dimethoate cũng nhỏ hơn hệ số góc thu được trong luận văn khoá trước (hệ số góc ở luận văn khoá trước là 17370).[8]. Kết quả trên cho ta thấy đột thu hồi qua cột của Dimethoate thấp hơn so với của Carbaryl, chứng tỏ hệ pha động 55%Acetonitrile-45%nước rửa giải Carbaryl ra khỏi cột tốt hơn nhiều so với rửa giải Dimethoate.

KHẢO SÁT QUY TRÌNH XỬ LÝ VÀ PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG CARBARYL, DIMETHOATE TRONG CẢI XANH

Kết quả phân tích hàm lượng Carbaryl, Dimethoate trong rau chịu ảnh hưởng của hiệu suất thu hồi mẫu sau cột HPLC và hiệu suất thu hồi mẫu sau quá trình trích (trước khi đưa vào cột HPLC). Quy trình trích ly được xây dựng dựa vào tài liệu tham khảo, được điều chỉnh cho phù hợp với điều kiện của phòng thí nghiệm cũng như kết quả khảo sát ảnh hưởng của số bậc trích ly lên hàm lượng Carbaryl, Dimethoate. So với tài liệu tham khảo, qui trình thực hiện trong luận văn đã cắt các bước: tách pha Acetonitrile từ hỗn hợp Acetonitrile – Petroleum ete, hòa tan dung môi Acetonitrile với Dicloromethane, hút kiệt pha nước bằng muối Natri sulfat, rửa giải qua cột Nuchar – Celite, sử dụng Aceton làm dung môi trích ly, tăng số bậc trích ly lên 2 bậc.

Về Dicloromethane: theo tài liệu tham khảo, qui trình tiến hành trích thuốc trừ sâu Carbamate thương phẩm nên cần phải tiến hành nhiều bước để làm giàu mẫu và loại bớt các tạp chất không cần thiết để quá trình phân tách qua cột sắc kí lỏng tốt hơn. Về cột Nuchar – Celite: việc không cho dịch trích rửa giải qua cột Nuchar – Celite có thể dẫn đến lượng tạp chất nhiều làm hư cột sắc ký nhưng dịch trích sau định mức đã có qua màng lọc 0.2 μm (loại được các tạp chất thô) rồi mới phân tích bằng HPLC.

HIỆU SUẤT PHÂN HUỶ CARBARYL TRONG CẢI XANH SAU QUÁ TRÌNH CHIẾU XẠ

Từ kết quả trên ta thấy khi tăng liều chiếu xạ lên thì hiệu suất phân huỷ Carbaryl cũng tăng leân. Tuy nhiên hiệu suất phân huỷ này thấp hơn nhiều so với hiệu suất phân huỷ của các mẫu nước ở cùng nồng độ. Điều này cho thấy các thành phần trong rau có ảnh hưởng khá lớn đến hiệu suất phân huỷ Carbaryl do tác động chiếu xạ.

Kết quả trên cho thấy từ liều chiếu 0.4kGy trở lên Carbaryl trong cải xanh có thể bị phân huỷ đến hơn 50%. Tức là nếu trong rau cải có dư lượng Carbaryl gấp đôi dư lượng cho phép trên rau (20ppm), thì chỉ cần ở liều chiếu 0.4kGy cũng đã làm giảm dư lượng xuống đạt mức cho phép của dư lượng.

KHẢO SÁT QUY TRÌNH PHÂN TÍCH VITAMIN C BẰNG THIẾT BỊ SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO ÁP (HPLC)

Với chế độ chạy sắc ký và bước sóng hoạt động của đầu dò UV như đã lựa chọn, sắc ký đồ của các mẫu dung dịch chuẩn Carbaryl trong nước có dạng như trên đồ thị hình 3.5. Hơn nữa trong luận văn này quá trình chuẩn bị mẫu chủ yếu thực hiện vào buổi tối, mẫu đo xong đem phân tích ngay nên việc mất mát mẫu hầu như khó xảy ra. Độ thu hồi Vitamin C qua cột khá cao, điều này chứng tỏ hiệu quả phân tích của hệ pha động sử dụng.

Điều này là do với mẫu nồng độ nhỏ, một lượng Vitamin C bị giữ lại trong cột cũng làm cho kết quả giảm xuống. Độ thu hồi của Vitamin C qua cột khá cao chứng tỏ hệ pha động có khả năng rửa giải Vitamin C ra khỏi cột tốt.

PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG VITAMIN C TRONG CẢI XANH BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG CAO ÁP

Kết quả phân tích hàm lượng Vitamin C trong rau chịu ảnh hưởng của hiệu suất thu hồi mẫu sau cột HPLC và hiệu suất thu hồi mẫu sau quá trình trích (trước khi đưa vào cột HPLC). Do đó, để xác định hiệu suất thu hồi mẫu của qui trình trích lựa chọn, cần làm đồng thời qui trình này với mẫu rau, và với mẫu rau có thêm chuẩn để so sánh. Với mẫu rau không thêm chuẩn diện tích peak thu được là 421916.7, dựa vào phương trình đường chuẩn, vào hệ số pha loãng, công thức tính trong phần thực nghiệm ta có thể xác định được hàm lượng Vitamin C có trong mẫu rau ban đầu là 36mg trong 100g rau.

Điều này có thể do quy trình này hiệu quả với Vitamin C ở dạng tự do (trong chuẩn bổ sung vào) nhưng chưa thực sự hiệu quả với Vitamin C ở trạng thái liên kết với rau, cần cải thiện để nâng cao hiệu quả trích vitamin C lieân keát trong rau. Bên cạnh đó còn có một vài yếu tố có thể ảnh hưởng đến lượng Vitamin C có trong rau như khoảng thời gian từứ lỳc thu hoạch đến khi phõn tớch, sự khỏc nhau về giống cõy….