Nghiên cứu tác động của fluoxetin đến nồng độ cAMP và progesterone trong tế bào mLTC 1 khi kích thích bởi

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN ĐỖ THỊ BÍCH HẰNG NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG CỦA FLUOXETIN ĐẾN NỒNG ĐỘ cAMP VÀ PROGESTERONE TRONG TẾ BÀO mLTC-1 KHI KÍCH THÍCH BỞI FORSKOLIN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM Bình Định – Năm 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN ĐỖ THỊ BÍCH HẰNG NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG CỦA FLUOXETIN ĐẾN NỒNG ĐỘ cAMP VÀ PROGESTERONE TRONG TẾ BÀO mLTC-1 KHI KÍCH THÍCH BỞI FORSKOLIN Chuyên nghành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Thị Mộng Điệp LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Đỗ Thị Bích Hằng LỜI CẢM ƠN Trước hết tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc kính trọng tới Ban giám hiệu Trường Đại học Quy Nhơn, Quý Thầy Cô trường tạo điều kiện truyền thụ kiến thức q báu để tơi hồn thành khóa học Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành đến PGS.TS Nguyễn Thị Mộng Điệp, người thầy đầy tâm huyết tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành luận văn Cơ ln tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu khoa học, nguồn động lực lớn giúp vượt qua khó khăn q trình hồn thành luận văn Xin cảm ơn anh, chị cơng tác Phịng Sinh học phân tử- Viện công nghệ sinh học – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam hết lịng giúp đỡ, tạo điều kiện cho tơi q trình thực Luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn Quỹ Phát triển khoa học cơng nghệ Quốc gia (NAFOSTED) tài trợ kinh phí cho thực đề tài nghiên cứu Cuối xin gởi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè, người thân tập thể lớp Sinh học thực nghiệm K21 động viên giúp đỡ tơi suốt q trình học tập thực đề tài Do thời gian hiểu biết thân có hạn nên luận văn khó tránh khỏi sai sót Tơi mong nhận lời góp ý, bảo thầy để hồn thiện luận văn Quy Nhơn, ngày 20 tháng năm 2020 Tác giả luận văn Đỗ Thị Bích Hằng MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài lý chọn đề tài cAMP đóng vai trị chất truyền tin thứ hai tham gia vào nhiều hệ thống truyền tin khác tế bào Nồng độ cAMP nội bào điều chỉnh cân hoạt động hai enzyme: adenylate cyclase (AC) phosphodiesterase nucleotide vòng (PDE) Các đồng phân khác hai enzyme mã hoá số lượng lớn gen khác biểu kiểu hình chế điều hịa, tạo phản ứng tế bào kích thích đặc hiệu Fluoxetincịn có tên thương mại Prozac hay Sarafem số tên khác, thuốc phản ức chế chất ức chế tái hấp thu serotonin đặc hiệu (SSRI) Chúng sử dụng để điều trị rối loạn trầm cảm chính, rối loạn ám ảnh cưỡng chế (OCD), rối loạn thần kinh, rối loạn hoảng loạn rối loạn rối loạn tiền kinh nguyệt Fluoxetin cải thiện tâm trạng, giấc ngủ, ăn không ngon, tăng lượng giúp khơi phục mối quan tâm bạn sống hàng ngày Fluoxetin làm giảm sợ hãi, lo lắng, suy nghĩ hoảng loạn.Fluoxetin sử dụng để điều trị số rối loạn ăn uống khác, rối loạn căng thẳng sau chấn thương, số rối loạn hệ thần kinh, giấc ngủ.Thuốc sử dụng để điều trị nóng bừng xảy thời kỳ mãn kinh Đề tài tập trung nghiên cứu tác động Fluoxetin động học cAMP nội bào dòng tế bào Leydig mLTC-1 kích thích Forskolin Đây hướng nghiên cứu khoa học không Việt Nam mà giới Dòng tế bào Leydig mLTC-1 từ chuột thiết lập từ nhiều năm trước nhiều nhà nghiên cứu quan tâm nghiên cứu liên kết hCG với thụ thể LHR sản sinh hormone steroids kiểm soát hormone điều hòa tuyến sinh dục thùy trước tuyến yên tiết Chúng ta biết tế bào tinh hoàn Leydig có lượng thụ thể thấp, số cao nhiều chắn ảnh hưởng đến phương thức kích hoạt đường tổng hợp cAMP tác động cáchormone luteinizing(LH) khác phương phức điều khiển nhiều đường khác Do vậy, chọn sử dụng tế bào cho nghiên cứu Trong nghiên cứu này, lần nghiên cứu tác động Fluoxetin chu kì động học cAMP nội bào sản xuất progesterone dòng tế bào Leydig mLTC-1 để có nhìn xác chế hoạt động Fluoxetin đến chức sinh dục nam giới Ngoài ý nghĩa khoa học quan trọng, nghiên cứu vấn đề cần thiết cho việc hỗ trợ tư vấn chẩn đoán điều trị bệnh nhân bị trầm cảm Mục tiêu nghiên cứu đề tài Mục tiêu đề tài xác định vai trò Fluoxetin đến tổng hợp cAMP nội bào sản xuất progesterone thông qua tác động kích thích Forskolintrong tế bào Leydig chuột mLTC-1 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học Kết nghiên cứu giúp kiểm chứng ảnh hưởng dược phẩm Fluoxetin đến tổng hợp cAMP nội bào sản xuất progesterone đánh giá liệu chất hoạt hóa điều chỉnh sản xuất mức hay ức chế tổng hợp cAMP progesterone tế bào Leydig 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Những kết cung cấp hiểu biết sâu sắc việc sử dụng thuốc trị bệnh trầm cảm Fluoxetin cung cấp tư vấn vấn đề sinh lý cho bệnh nhân bị bệnh trầm cảm uống loại thuốc Cấu trúc luận văn - Mở đầu - Chương Tổng quan tài liệu - Chương Đối tượng, nội dung phương pháp nghiên cứu - Chương Kết nghiên cứu thảo luận - Kết luận kiến nghị - Tài liệu tham khảo Những đóng góp đề tài Kết hợp với nghiên cứu trước vai trò Fluoxetin dòng tế bào thần kinh khác nhau, đề tài cung cấp kết nghiên cứu vai trò Fluoxetin dòng tế bào Leydig, đề tài cho thấy Fluoxetin ức chế tổng hợp cAMP nội bào progesterone tác động kích thích Forskolin Điều cho thấy việc sử dụng Fluoxetin gây tác dụng phụ hoạt động truyền tín hiệu tế bào có liên quan đến chất truyền tin thứ hai cAMP nội tiết tố thể CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Fluoxetin 1.1.1.Tổng quan Fluoxetin Fluoxetin cịn có tên thương mại Prozac, Rapiflux, Sarafem hay Selfemra, thuốc ức chế tái hấp thu serotonin chọn lọc (SSRIs) [1] Chúng sử dụng để điều trị rối loạn trầm cảm, rối loạn ám ảnh cưỡng chế, rối loạn thần kinh bulimia, rối loạn hoảng loạn rối loạn tiền kinh nguyệt [1] Fluoxetin sử dụng để điều trị chứng ăn vô độ, trầm cảm sau sinh, xuất tinh sớm [2] Thuốc làm giảm nguy tự tử người 65 tuổi Fluoxetin dùng cách uống hấp thụ nhanh chóng vịng từ đến sau dùng [1] Tuy nhiên số nghiên cứu việc sử dụng Fluoxetin gây số tác dụng phụ thường gặp như: khó ngủ, rối loạn chức tình dục, chán ăn, khô miệng, phát ban giấc mơ bất thường [1] Tác dụng phụ nghiêm trọng có hội chứng serotonin, hưng cảm, co giật, tăng nguy tự tử người 25 tuổi tăng nguy chảy máu Nếu dừng sử dụng thuốc, hội chứng cai thuốc xảy với triệu chứng lo lắng, chóng mặt thay đổi cảm giác [1] Fluoxetin công ty Eli Lilly Company phát năm 1972 sử dụng vào năm 1986 [3] Kể từ đó, trở thành thuốc chống trầm cảm sử dụng rộng rãi Ở hầu hết quốc gia, Fluoxetin SSRIs có sẵn cho sử dụng lâm sàng [4] Nó nằm danh sách thuốc thiết yếu Tổ chức Y tế Thế giới, tức nhóm loại thuốc hiệu an tồn cần thiết hệ thống y tế Tên thương mại Prozac thấm nhuần văn hóa, giúp nâng cao nhận thức trầm cảm làm giảm kỳ thị liên quan đến bệnh 1.1.2 Cơ chế hoạt động Fluoxetin Serotonin (hay biết đến Hydroxytryptamine-5, 5-HT) chất dẫn truyền thần kinh Monoamine phát vào năm 1935 nhà khoa học người Ý, Vittorio Erspamer [5] Khoảng 80% tổng số serotonin thể người nằm ruột, sử dụng để điều chỉnh chuyển động ruột, 20% lại tổng hợp hệ thần kinh trung ương tiểu cầu Ở người, serotonin chất dẫn truyền thần kinh sử dụng khắp thể có liên quan đến việc điều chỉnh tâm trạng, lo lắng, giấc ngủ, thèm ăn, nhiệt độ, hành vi ăn uống, hành vi tình dục, vận động nhu động đường tiêu hóa Serotonin truyền tín hiệu dọc theo tế bào thần kinh (neuron) tế bào thần kinh với Nồng độ serotonin bị suy giảm dẫn đến việc cảm thấy buồn chán, giảm ham muốn, giảm quan tâm dễ dàng cáu giận, gặp khó khăn việc hồn thành cơng việc Trong não, serotonin truyền từ tế bào thần kinh sang tế bào thần kinh khác thông qua khe synap Các tế bào trước synap gửi xung thần kinh phát hành thông tin bao gồm seretonin vào khe synap Serotonin liên kết với thụ thể màng sau synap để điều chỉnh trình tổng hợp, phân giải serotonin lan truyền tín hiệu tiếp dạng xung thần kinh Khoảng 10% serotonin bị trình cịn lại 90% giải phóng khỏi thụ thể đưa trở lại màng trước synap chất vận chuyển monoamin, gọi trình tái hấp thu Fluoxetin dạng SSRIs có tác dụng ngăn chặn tái hấp thu serotonin trở lại tế bào thần kinh kích thích [6] Do đó, serotonin tồn khe synap lâu bình thường kích thích thụ thể tế bào nhận lên nhiều lần Trong thời gian ngắn, điều dẫn đến gia tăng tín hiệu serotonin khe synap Vì vậy, Fluoxetin làm tăng mức serotonin não, giúp giảm lo lắng ức chế hoảng loạn… Hình 1.1 Cơ chế tác dụng thuốc SSRIs Serotonin giải phóng từ tế bào thần kinh tiền synap để liên kết thụ thể tế bào thần kinh sau synap Thơng thường, serotonin sau tái hấp thu vào tế bào thần kinh tiền synap đóng gói lại SSRIs chặn kênh tái hấp thu, giữ serotonin khớp thần kinh lâu để hoạt động tế bào thần kinh sau synap 1.1.3 Fluoxetin ảnh hưởng đến chức sinh dục nam giới Xuất tinh sớm (premature ejaculation) rối loạn chức tình dục phổ biến nam giới, khoảng 21% đến 33% dân số nam gặp rắc rối xuất tinh sớm Xuất tinh sớmcó thể gây tổn hại trực tiếp đến lòng tự trọng đàn ông ảnh hưởng đến ổn định mối quan hệ vợ chồng Hiện nay, phương pháp điều trị cho xuất tinh sớm chủ yếu bao gồm liệu pháp tâm lý, hành vi điều trị thuốc ức chế tái hấp thu serotonin ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN ĐỖ THỊ BÍCH HẰNG NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG CỦA FLUOXETIN ĐẾN NỒNG ĐỘ cAMP VÀ PROGESTERONE TRONG TẾ BÀO mLTC- 1 KHI KÍCH THÍCH BỞI FORSKOLIN Chuyên... tập trung nghiên cứu tác động Fluoxetin động học cAMP nội bào dòng tế bào Leydig mLTC- 1 kích thích Forskolin Đây hướng nghiên cứu khoa học không Việt Nam mà giới Dòng tế bào Leydig mLTC- 1 từ chuột... Trong nghiên cứu này, lần nghiên cứu tác động Fluoxetin chu kì động học cAMP nội bào sản xuất progesterone dòng tế bào Leydig mLTC- 1 để có nhìn xác chế hoạt động Fluoxetin đến chức sinh dục nam giới