NUÔI CẤY NHÂN GIỐNG IN VITRO VÀ MỘT SỐ ỨNG DỤNG TRONG NHÂN GIỐNG CÁC CÂY LAN HOÀNG THẢO ý, BÁCH HỢP, CẨM CHƯỚNG, HOA TRÀ VÀNG

TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC KHOA SINH HỌC NGUYỄN HOÀNG CÁT NGUYÊN MÃ SINH VIÊN 17T3041054 NUÔI CẤY NHÂN GIỐNG IN VITRO VÀ MỘT SỐ ỨNG DỤNG TRONG NHÂN GIỐNG CÁC CÂY LAN HOÀNG THẢO Ý, BÁCH HỢP, CẨM CHƯỚNG, HOA TRÀ VÀNG NUÔI CẤY MÔ VÀ TẾ BÀO THỰC VẬT– 2020-2021.2.CNS4762.002 GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN: TS LÊ VĂN TƯỜNG HUÂN HUẾ, THÁNG NĂM 2021 MỤC LỤC MỞ ĐẦU NỘI DUNG I CÁC PHƯƠNG PHÁP NHÂN GIỐNG VƠ TÍNH IN VITRO Nuôi cấy đoạn thân mang chồi nách 2 Nuôi cấy đỉnh chồi Tái sinh chồi bất định Nhân giống thông qua callus Phát sinh phôi soma II ỨNG DỤNG NHÂN GIỐNG VƠ TÍNH IN VITRO TRONG NHÂN GIỐNG CÁC CÂY HOA Lan hoàng thảo ý thảo ba màu (Dendrobium gratiosissimum reichenb.f.) Cây Bách hợp (lilium brownii f.e brown) Hoa cẩm chướng Hoa trà vàng (Camellia sp.) 10 KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO MỞ ĐẦU Nuôi cấy mô tế bào thực vật hay nhân giống in vitro thuật ngữ mô tả phương thức nuôi cấy phận khác thực vật ống nghiệm môi trường xác định điều kiện vô trùng Môi trường bao gồm nhân tố thiết yếu đa lượng vi lượng, chất kích thích sinh trưởng, đường, vitamin số hợp chất hữu cần thiết khác Tế bào thực vật có tính tồn thế, tế bào đơn protoplast thực vật có khả tái sinh hoàn chỉnh Đây điều kiện quan trọng để ứng dụng nuôi cấy mô thực vật Kỹ thuật nuôi cấy mô cho phép tái sinh chồi quan từ mô lá, thân, hoa rễ tạo thành hoàn chỉnh nhờ vào điều chỉnh môi trường nuôi cấy in vitro Ngày xưa biết nhân giống trồng phương pháp vơ tính truyền thống giâm, chiết, ghép, Nhưng biện pháp ngày bộc lộ nhiều hạn chế : giống nhân nhiều lần bị thối hóa giống, mắc nhiều bệnh hơn, suất giảm, phân ly Bằng biện pháp nhân giống in vitro, với công nghệ vô trùng cao khắc phục hạn chế trên, nâng cao suất chất lượng giống trồng giá trị nông học giá trị thương phẩm Vì việc nghiên cứu, phát triển nhân giống in vitro ngày quan trọng cần trọng đầu tư Hiện nay, kỹ thuật nuôi cấy mô thực vật sử dụng rộng rãi để sản xuất giống trồng tạo nguồn giống đồng di truyền, bệnh, đồng sinh lý phát triển bình thường Những ứng dụng vi nhân giống nghề vườn nói riêng nơng nghiệp nói chung rộng khắp giới việc thương mại hóa cịn giới hạn chi phí sản xuất lớn, giá thành sản phẩm cao NỘI DUNG I CÁC PHƯƠNG PHÁP NHÂN GIỐNG VƠ TÍNH IN VITRO Nuôi cấy đoạn thân mang chồi nách - Một đoạn thân mang chồi nách phân lập nuôi cấy môi trường dinh dưỡng phát triển chồi phương pháp tự nhiên nuôi nhân giống vơ tính in vitro, chồi cấy chuyển để tạo nên chồi Khi thu chồi chồi tạo rễ cuối chuyển đất Nuôi cấy đoạn thân mang chồi nách nguyên tắc không cần thêm cytokinin Phương pháp nuôi cấy thân mang chồi nách thành công với nhiều khác [4] Nuôi cấy đỉnh chồi - Với phương pháp nuôi cấy đỉnh chồ đỉnh chồi phân lập từ nụ chồi nách phát triển ảnh hưởng cytokinin nồng độ cao Các chồi tiếp tục cấy chuyển sang môi trường chồi hình thành Khi số chồi đủ, chồi tạo rễ sau chuyển trồng đất - Trong thực tế, phương pháp nuôi cấy đỉnh chồi trở thành phương pháp nuôi cấy in vitro quan trọng Phương pháp nói chung đơn giản phương pháp khác tốc độ nhân giống cao sinh trưởng tốt - Có nhiều nhân tố ảnh hưởng đến hình thành chồi nhu cầu cytokinin hình thành chồi khác Nồng độ loại cytokinin phụ thuộc vào loài nhân giống Ngoài ra, nồng độ cytokinin phụ thuộc vào giai đoạn phát triển vật liệu - Sự hình thành callus phải tránh chồi bất định tái sinh từ callus mang đột biến Sự hình thành chồi đẩy mạnh cách sử dụng môi trường lỏng thay cho môi trường đặc Phương pháp nuôi cấy đỉnh chồi sử dụng cho hoa cẩm chướng (1967) sau áp dụng nhiều loài khác Đáng lưu ý sử dụng nhân giống ăn - Riêng trường hợp hoa lan Morel (1960) thực nuôi cấy đỉnh phân sinh lan Cymbidium (địa lan) với mục đích để thu nhận vi rút Morel nhận thấy từ đỉnh chồi nuôi cấy in vitro protocorm tạo thành Từ protocorm thu nhận protocorm mới, protocorm phát triển chồi với rễ Bằng cách Morel tạo hàng ngàn năm từ đỉnh chồi Tạo dòng hoa lan nuôi cấy đỉnh phân sinh trở thành ứng dụng thương mại nhân giống in vitro Phương pháp sử dụng Cymbidium sau sử dụng cho nhiều loại lan khác sử dụng quy mơ tồn giới kết hoa lan khơng cịn loại hoa đắt đỏ [4] Tái sinh chồi bất định - Hệ thống thống ni cấy có u cầu tương tự với ni cấy đỉnh chồi, khác nguồn mẫu vật nguồn gốc bất định chồi Đỉnh chồi bất định, phát triển trực tiếp mẫu vật, gián tiếp từ mơ callus mà mơ callus hình thành bề mặt vết cắt mẫu vật - Một số loại mẫu vật dùng cho tái sinh chồi bất định Ví dụ đoạn thân ( thuốc lá, cam, chanh, cà chua, bắp cải) Mẫu vật mảnh (thuốc lá, cà chua, hoa cải, cà phê, ca cao) Cuống ( hoa thủy tiên), phận hoa (cải hoa, lúa mì, thuốc lá), nhánh củ ( họ lay ơn, thủy tiên), đoạn mầm (cây măng tây) - Sự phát triển chồi bất định trực tiếp bắt đầu tế bào nhu mơ nằm biểu bì ngang phía bề mặt thân Một số tế bào trở thành mô phân sinh túi nhỏ gọi thể phân sinh Các thể phân sinh có nguồn gốc từ tế bào đích Chiều hướng phát triển thực vật phụ thuộc vào chất điều hịa sinh trưởng bổ sung Ví dụ nghiên cứu tạo chồi mô nuôi cấy linh sâm Douglas cho thấy cytokinin BAP nồng độ 5µM/L cần thiết cho phát sinh chồi bất định có kiểu phản ứng khác kết tùy thuộc vào nồng độ auxin NAA Nếu nồng độ NAA nhỏ 5µM/L có chồi phát triển, nồng độ NAA cao µM/L mầm tạo callus nhiều chồi Nếu cung cấp auxin NAA với nồng độ 5µM/L có callus tạo thành - Sự phát triển chồi bất định gián tiếp thơng qua giai đoạn callus, sau chồi phát triển từ loại vi mô callus mà khơng có quan hệ ban đầu với mơ có mạch dẫn thuộc mẫu vật [4] Nhân giống thơng qua callus - Trong khn khổ mục đích nhân giống in vitro, tái sinh hoàn chỉnh trực tiếp từ mẫu vật ban đầu khơng nhanh chóng thu mà đồng mặt di truyền Tuy nhiên nhiều trường hợp, mô nuôi cấy không tái sinh mà phát triển thành callus, tế bào callus cấy truyền nhiều lần không ổn định mặt di truyền Để tránh tình trạng đó, phải sử dụng loại callus phát sinh tức callus sơ cấp để tái sinh hi vọng thu tái sinh đồng [4] Phát sinh phôi soma - Khi phôi tái sinh từ tế bào hay phôi soma gọi phơi soma Năm 1958 Reinert Steward thông báo phát sinh phôi soma lần với nuôi cấy callus huyền phù tế bào cà rốt Người ta nhận thấy phát triển in vitro phơi soma có điểm giống với phát sinh phơi hữu tính xảy nội nhũ Ngoài cà rốt, loại khác thuộc họ Umbelliferae nghiên cứu phát sinh phơi soma, phát sinh phơi soma tạo mơi trường tổng hợp Mặc dù có nhiều giống phát sinh phơi hữu tính phơi soma có khác biệt rõ ràng -Các vật liệu khởi đầu tốt cho phát sinh phôi soma phận hoa phơi hữu tính mơ nội nhũ -Phát sinh phơi soma thực nhiều loại thực vật có nhiều thành công họ Umbelliferae, Ranuneulaceae, Rutaceae, Solanaceae, Gramineae -Có hai kiểu phát sinh phơi soma + Thứ trực tiếp: trường hợp phôi phát sinh trực tiếp từ tế bào hay mô mà khơng có hình thành callus trước Các vật liệu khởi đầu cho kiểu phát sinh phôi mơ phơi tâm lồi Citrus tế bào biểu bì trụ mầm cà rốt hay bắp cải + Thứ gián tiếp: kiểu phát sinh phôi này, callus tạo thành , sau phơi hình thành từ callus, vật liệu cho kiểu phát sinh phơi mảnh cà phê, măng tây - Có số quy định chung cho tạo phôi soma + Nồng độ auxin cao thường địi hỏi cho tạo phơi + Ánh sáng nói chung kích thích tạo phơi phát sinh phơi tạo tối + Nhiệt độ cao thường thích hợp cho tạo phơi + Nồng độ saccharose thích hợp 2-3% - Tạo phơi soma dược thực với mức độ thành công cao số loại cây, ví dụ cọ dầu Cây cọ dầu tạo dòng quy mô lớn tạo callus phôi chồi Các cọ dầu thu cho thấy khơng có biến động di truyền đáng kể Theo cách thức này, đồn điền khởi đầu với chọn lọc, cho sản lượng cao - Tuy nhiên thực tế, phát sinh phôi soma chưa dùng rộng rãi phương tiện nhân giống tạo phơi soma thường khơng dễ dàng chí khơng thích hợp cho số loài Mặt khác, cấy chuyển nhiều lần khả tái sinh giảm có khả xảy đột biến [4] ❖ Hạt tổng hợp (hạt nhân tạo) [4] - Để cho việc sản xuất phơi soma ứng dụng thực tế, phơi bọc lại biết đến hạt tổng hợp hay hạt nhân tạo Một gel chứa chất dinh dưỡng bao ngồi phơi soma đóng vai trị nội nhũ Gel agar, agarose alginate, phổ biến alginate Người ta phát triển máy bọc gói sản xuất, phân loại 6000 “hạt” phôi/1 - Sản xuất hạt nhân tạo cách bọc phôi soma thu nhận từ chúng không dễ dàng, vì: + Việc sản xuất hạt nhân tạo ổn định vài tháng địi hỏi q trình hóa học vật lý để làm cho phôi không hạt hoạt động + Hạt nhân tạo cần bảo vệ để khỏi bị khô phôi cần bảo vệ suốt trình vận chuyển, cất giữ gieo + Ở việc tạo từ hạt nhân tạo từ thấp hình thành phơi khơng hồn tồn, khó khăn việc tạo nội nhũ nhân tạo phù hợp + Phôi phải bảo vệ vi sinh vật chất kháng sinh hay chất diệt nấm Như sản xuất ứng dụng hạt tổng hợp bị hạn chế giới hạn giá thành cao so với hạt bình thường II ỨNG DỤNG NHÂN GIỐNG VƠ TÍNH IN VITRO TRONG NHÂN GIỐNG CÁC CÂY HOA Lan hoàng thảo ý thảo ba màu (Dendrobium gratiosissimum reichenb.f.) a) Đối tượng nhân giống: hạt từ lan hoàng thảo ý thảo ba màu(Dendrobium gratiosissimum Reichenb.f.) thu nhập Lâm Đồng, trồng Viện Công nghệ sinh học- Trường đại học lâm nghiệp b) Phương pháp nghiên cứu - Khử trùng mẫu: : Mẫu lan rửa sạch, ngâm mẫu dd xà phịng lỗng khoảng 5-10 phút rửa lại với nước Sát khuẩn bề mặt ethanol 70% phút, khử trùng HgCl2 0,1% với thời gian khác Sau lần dùng hóa chất phải rửa mẫu nước cất vô trùng [2,2] - Các giai đoạn ni cấy mơi trường thích hợp + Nuôi cấy khởi động môi trường MS bổ sung sucrose 30 g/l, agar g/l + Nhân nhanh chồi môi trường MS bổ sung BAP 0,5 mg/l, NAA 0,3 mg/l, Kinetin 0,3 mg/l, dịch chiết khoai tây 100 ml/l, nước dừa 100 ml/l, sucrose 30 g/l agar g/l + Chồi rễ tạo hoàn chỉnh môi trường MS bổ sung IBA 0,2 mg/l, NAA 0,3 mg/l, dịch chiết khoai tây 100 ml/l, sucrose 20 g/l, agar g/l c) Điều kiện nuôi cấy - Nuôi cấy môi trường MS - pH mức 5,8 trước khử trùng 1210C 15 phút - mẫu sau cấy nuôi ánh sáng giàn đèn neon, thời gian chiếu sáng 14 giờ/ngày, cường độ chiếu sáng 3000 lux, nhiệt độ phịng ni 25 ± 20C d) Kết Kỹ thuật nhân giống in vitro Lan Hoàng thảo Ý thảo ba màu nghiên cứu thành công kết nghiên cứu cho thấy tỷ lệ mẫu 96,67%, tỷ lệ mẫu tạo protocorm đạt 90% Nhân nhanh chồi đạt tỷ lệ 96,67%, hệ số nhân chồi đạt 9,53 Chồi rễ 93,33% chiều dài rễ trung bình 3,22cm sau tuần [2] Hình Các giai đoạn quy trình nhân giống lan Hồng thảo Ý thảo màu a) Tạo protocorm; b) Cụm chồi nuôi cấy môi trường MS; c) Nhân nhanh chồi môi trường N9; d) Tạo rễ công thức môi trường R8 Cây Bách hợp (lilium brownii f.e brown) a) Đối tượng nhân giống: vẩy thân hành đốt thân bách hợp (Lilium brownii F.E.Brown) có nguồn gốc từ Hà Giang b) Phương pháp nghiên cứu - Khử trùng mẫu: rửa sạch, sau chúng ngâm nước xà phịng lỗng 10 phút, rửa lại Tiếp đó, ngâm mẫu thuốc diệt nấm 20 phút tráng lại nước cất Các mẫu tráng cồn 700 30 giây, liền mẫu xử lý với HgCl20,1% với khoảng thời gian khác (8 phút, 10 phút, 12 phút 15 phút), sau tráng lại nhiều lần nước cất vô trùng [5] - Các giai đoạn ni cấy mơi trường thích hợp + Giai đoạn tái sinh chồi môi trường MS có bổ sung 30 g/l đường 0,5 mg/l NAA vảy thân MS bổ sung 30 g/l đường 0,5 mg/l BAP đốt thân + Giai đoạn tạo củ sơ cấp môi trường MS bổ sung 0,5 mg/l α-NAA + Giai đoạn nhân nhanh chồi từ củ nhỏ sơ cấp môi trường MS bổ sung 60g/l đường, 0,5 mg/l NAA 0,2 mg/l BAP +Giai đoạn tạo hoàn chỉnh mơi trường 1/2 MS có bổ sung tổ hợp 1,0 mg/l NAA 0,2 mg/l BAP c) Điều kiện nuôi cấy - Nuôi cấy môi trường MS - pH mức 5,8 trước khử trùng hấp khử trùng 121ºC - Áp suất atm 20 phút - Nhiệt độ 250C ± 2, cường độ ánh sáng 2000 lux, thời gian chiếu sáng 14h sáng/10 tối d) Kết Cây bách hợp nhân giống in vitro thành công sử dụng vật liệu ban đầu mẫu đốt thân vẩy củ Số củ tạo thành mẫu đạt cao 4,5 củ Tỷ lệ tạo rễ bách hợp đạt cao (86,67%) mơi trường 1/2 MS có bổ sung tổ hợp 1,0 mg/l NAA 0,2 mg/l BAP đưa trồng giá thể TN1 giá thể tốt cho bách hợp giai đoạn vườn ươm [5] Hình Củ hình thành mơi trường MS bổ sung 60g/ml đường 0,5mg/l NAA Hình Cây bách hợp giá thể khác vườn ươm a: TN1; b: Đất: bột xơ dừa; c:Xơ dừa; d: Đất:phân vi sinh: trấu hun (6:1:2) Hoa cẩm chướng a) Đối tượng nhân giống: Chồi đỉnh chồi nách hoa Cẩm chướng.[3,1] b) Phương pháp nghiên cứu - Khử trùng mẫu: chồi đỉnh chồi nách khử trùng sơ ethanol 70% phút, sau khử trùng HgCl2 0,1% hai lần, khoảng thời gian khác [3] - Các giai đoạn nuôi cấy môi trường thích hợp + Ni cấy khởi động mơi trường MS bổ sung Kinetin 0,3mg/l, NAA 0,1 mg/l, sucrose 20g/l + Nhân nhanh kích thích tăng trưởng chồi môi trường MS bổ sung 0,05mg/l BAP, 0,1mg/l Kinetin, 0,1mg/l NAA, 30g/l sucrose + Kích thích chồi rễ môi trường MS bổ sung 0,1mg/l IBA, 20g/l sucrose c) Điều kiện nuôi cấy: - Nuôi cấy môi trường MS - pH mức 5,6- 5,8 khử trùng 121ºC, áp suất 1atm 15 phút - Nhiệt độ 25 ± 20ºC, cường độ ánh sáng 3000 lux, thời gian chiếu sáng: 16 giờ/ngày d) Kết Cây hoa cẩm chướng nhân giống in vitro với tỷ lệ tái sinh đạt 44,44% sau - tuần Chồi non vơ trùng tái sinh từ mẫu cấy có - đốt cắt thành đoạn thân chồi, kích thước 1,0 – 2,0cm, mang chồi nách cho tỷ lệ mẫu tạo cụm chồi đạt 100%, hệ số nhân nhanh chồi đạt 3,4 lần, chiều cao trung bình chồi 4,13cm sau tuần nuôi Tỷ lệ chồi tạo rễ đạt 100%, số rễ trung bình/chồi đạt 4,5 rễ, chất lượng rễ tốt [3] (a) (b) (c) (d) (e) Hình Một số hình ảnh kết nghiên cứu (a) Mẫu vô trùng nảy mầm từ vật liệu ni cấy; (b) Bình in vitro giai đoạn nhân nhanh kích thích tăng trưởng chồi; (c) Cụm chồi có kiểu hình bình thường; (d) Cụm chồi mọng nước (bị thủy tinh hóa); (e) Cây Cẩm chướng hoàn chỉnh Hoa trà vàng (Camellia sp.) a) Đối tượng nhân giống: đoạn cành bánh tẻ mang mắt ngủ, lá, nụ hoa trà hoa vàng ( Camellia sp.) thu nhập Ba Ché , Quảng Ninh b) Phương pháp nghiên cứu - Khử trùng mẫu: mẫu rửa vịi nước chảy, sau rửa lại nước xà phòng nồng độ 0,01% – lần, lần phút tráng lại nước cất vơ trùng Mẫu sau ngâm dd KMnO4 1% 10 phút tráng – lần nước cất vô trùng Mẫu sau rửa đưa vào tủ cấy vô trùng, ngâm dd ethanol 70% phút tráng – lần nước cất vơ trùng Các mẫu sau lắc hóa chất khử trùng HgCl2 0,1% H2O2 15% NaOCl 7%trong 5-30 phút Đối với mẫu trà , sau khử trùng trà tách vỏ để thu lấy hạt [1,2] - Các giai đoạn nuôi cấy mơi trường thích hợp + Ni cấy khởi động môi trường MS bổ sung mg/l BA mg/l GA3 + Nhân nhanh chồi môi trường MS bổ sung mg/l BA, mg/l GA3, 300 ml/l nước dừa, 30 g/l sucrose, g/l agar + Tạo rễ cho chồi môi trường 1/4 MS, 0,5 mg/l α – NAA, mg/l IBA, 30 g/l sucrose, g/l agar c) Điều kiện nuôi cấy 10 Nuôi cấy môi trường MS WPM với pH 5,8 khử trùng 121ºC 20 phút Nhiệt độ 25 ± 2ºC, cường độ ánh sáng 2000 lux, thời gian chiếu sáng 16 sáng/8h tối d) Kết quả: Nghiên cứu nhân giống in vitro trà hoa vàng thành công với hệ số nhân chồi 4,7 lần/chồi, chất lượng chồi tốt Với tỷ lệ tạo rễ 100%, giai đoạn vườn ươm, trà hoa vàng in vitro trồng giá thể cát đạt tỷ lệ sống 93,75% sau 12 tuần cây.[1] Hình Ảnh hưởng giá thể đến khả thích nghi in vitro ngồi vườn ươm sau 12 tuần ni cấy 11 KẾT LUẬN “Nhân giống vơ tính ni cấy mô, tế bào thực vật” phương pháp ngày phổ biến không giới chuyên môn Công nghệ sinh học, mà biết đến rộng rãi xã hội Ứng dụng phương pháp nhân giống vơ tính in vitro đóng góp to lớn cho sản xuất nông nghiệp nước ta hàng chục năm qua, điển hình đối tượng lan, khoai tây, cúc dâu tây, nhiều trồng khác Các nhà thực vật học áp dụng phương pháp với mục đích sau • Tạo quần thể lớn đồng thời gian ngắn, với diện tích thí nghiệm nhỏ, có điều kiện hóa lý kiểm sốt • Tạo nhiều từ mơ quan (lóng, thân, phiến lá, hoa, hạt phấn, chồi phát hoa…) mà ngồi thiên nhiên khơng thực • Làm nguồn virus cho cách cấy mô phân sinh Tuy nhiên, cho dù lợi ích lớn lao phương pháp nhân giống in vitro ứng dụng rộng rãi phủ nhận, phương pháp cần đổi mới, tăng khả ứng dụng để thu kết ưu việt hơn, khoa học công nghệ kho tàng vô tận, chờ đợi người khám phá 12 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Đặng Quang Bích, Nguyễn Văn Huấn, Nguyễn Thị Thùy Linh, Trần Văn Lin, Trần Văn Phú, Đinh Trường Sơn, Nguyễn Thị Phương Thảo, Ninh Thị Thảo, (2018) Quy trình nhân giống in vitro hoa trà vàng (Camellia sp.) Tạp chí khoa học cơng nghệ Việt Nam [2] Vũ Kim Dung , Bùi Văn Thắng, Nguyễn Văn Việt (2016) Nhân giống lan hoàng thảo ý thảo ba màu (Dendrobium gratiosissimum reichenb.f.) kỹ thuật nuôi cấy in vitro Tạp chí khoa học cơng nghệ lâm nghiệp [3] Nguyễn Thị Thu Hằng (2013) Nghiên cứu nhân giống hoa cẩm chướng kỹ thuật nuôi cấy in vitro Tạp chí khoa học cơng nghệ lâm nghiệp [4] Lê Văn Tường Huân Bài giảng nuôi cấy mô tế bào thực vật [5] Nguyễn Thị Hương, Nguyễn Văn Khiêm, Bùi Đức Quỳnh, Vũ Hoài Sâm (2016) Nghiên cứu nhân giống in vitro bách hợp (lilium brown f.e.brown) Tạp chí Cơng nghệ sinh học TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC KHOA… CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc PHIẾU ĐÁNH GIÁ TIỂU LUẬN Học kỳ Năm học …-… Cán chấm thi Cán chấm thi Nhận xét: Nhận xét: Điểm đánh giá CBChT2: Điểm đánh giá CBChT2: Bằng số: Bằng số: Bằng chữ: Bằng chữ: Điểm kết luận: Bằng số Bằng chữ: CBChT1 (Ký ghi rõ họ tên) Thừa Thiên Huế, ngày …… tháng …… năm 20… CBChT2 (Ký ghi rõ họ tên) ... dụng thương mại nhân giống in vitro Phương pháp sử dụng Cymbidium sau sử dụng cho nhiều loại lan khác sử dụng quy mơ tồn giới kết hoa lan không loại hoa đắt đỏ [4] Tái sinh chồi bất định - Hệ thống... phát sinh tức callus sơ cấp để tái sinh hi vọng thu tái sinh đồng [4] Phát sinh phôi soma - Khi phôi tái sinh từ tế bào hay phơi soma gọi phơi soma Năm 1958 Reinert Steward thông báo phát sinh... reichenb.f.) kỹ thuật ni cấy in vitro Tạp chí khoa học công nghệ lâm nghiệp [3] Nguyễn Thị Thu Hằng (2013) Nghiên cứu nhân giống hoa cẩm chướng kỹ thuật ni cấy in vitro Tạp chí khoa học công nghệ lâm