tCvn T i ª u c h u È n V i Ö t N a m TCVN 5148 : 1990 ThÞt vμ s¶n phÈm cña thÞt Ph−¬ng ph¸p x¸c ®Þnh d− l−îng Streptomicin Hμ Néi - 1990 T I ª u c h u È n v I Ö t n a m tcvn 4836 : 1989 TCVN 5148:1990 2 Cơ quan biên soạn: Trung tâm kiểm dịch động vật xuất nhập khẩu H Nội Cơ quan đề nghị ban hnh: Bộ Nông nghiệp v Công nghiệp thực phẩm Cơ quan trình duyệt: Tổng cục Tiêu Chuẩn - Đo lờng Chất lợng Quyết định ban hnh số 736/ QĐ ngy 31 tháng 12 năm 1990 TCVN 5148 : 1990 3 T I ê u c h u ẩ n v I ệ t n a m tcvn 5148 : 1990 Thịt v sản phẩm của thịt. Phơng pháp xác định d lợng streptomyxin Meat and meat products. Determination of streptomycin residues Tiêu chuẩn ny quy định phơng pháp xác định d lợng tổng streptomicin tồn d trong thịt v sản phẩm của thịt dùng lm thực phẩm cho ngời v thức ăn gia súc. 1 Đặc tính chung Streptomycin l 1 bazơ hữu cơ chiết ra từ nấm streptomyces globisporus streptomyxini hay từ các loi sinh vật khác hoặc có đợc bằng các phơng pháp tổng hợp. Các streptomycin đều tạo muối với axít vô cơ. Các loại muối của kháng sinh thờng l sunfat, clohydrat, photphat v có cả phức chất canxi clorua của Streptomycin clohydrat. Các muối ny tan trong nớc, hầu nh không tan trong clorofoc, cồn v ête. 2 Nguyên tắc Thủy phân streptomycin bằng kiềm cho maltol l Methyl- 3 hydroxy 7 pyron. Sự tạo thnh maltol xảy ra hon ton định lợng cho phép xác định đợc streptomycin . Maltol sinh ra đợc tách khỏi hỗn hợp thủy phân bằng cách dùng clorofooc để chiết khỏi dung dịch mẫu trong môi trờng axit, sau đó giải chiết maltol bằng dung dịch kiềm trong nớc. Cho maltol tác dụng với phèn sắt (III) amonium, dung dịch 2% sẽ sinh ra phức mu đỏ tía đặc trng v đo mật độ quang của phức mu ny ở sóng 525 nm để xác định streptomycin. Nồng độ của streptomycin đợc xác định theo phơng pháp đờng chuẩn 3 Lấy mẫu Theo TCVN 4833 89 (ST SEV 2433 80) 4 Dụng cụ, thiết bị v hóa chất 4.1 Dụng cụ, thiết bị TCVN 5148:1990 4 + Máy trắc quang UV VIS + Cuvét thuỷ tinh có chiều dầy 2 cm + Máy xay sinh tố + Máy ly tâm + Bình định mức các loại + Pipét các loại + Phễu chiết cỡ 250 ml + Một số dụng cụ khác 4.2 Hóa chất : dùng hóa chất có độ tinh khiết phân tích + Axit clohydric, dung dịch 1M + natrihydroxyt, dung dịch 1N + Thuốc thử : phèn sắt (III) amonium, dung dịch 2% trong axit sunfuric 1N + Clorofooc + Dung dịch gốc tiêu chuẩn Streptomycin sunphat nồng độ 1 mg/ ml. + Nớc cất 2 lần. 5 Tiến hnh thử 5.1 Chuẩn bị mẫu phân tích: Mẫu thịt cần phân tích đợc thái nhỏ, nghiền mịn, trộn đều v cân 1 lợng a = 20 g vo máy xay sinh tố. Thêm 10ml nớc cất vo v cho máy chạy trong 5 phút. Cho 5 ml axit clohydric 1M vo v định mức đến 50 ml bằng nớc cất. Đun trong bếp cách thủy sôi trong 10 phút. Để nguội, ly tâm lắng cặn, lấy dung dịch trong nớc cho vo phễu chiết thêm 10 ml clorofooc, lắc trong 10 phút sau đó để yên trong 15 phút cho phần lớp hon ton trong phễu chiết rồi tách lấy tớng hữu cơ vo phễu chiết khác, thêm 2 ml natrihydroxyt 1 N v 4 ml thuốc thử phèn sắt (III) amonium 2% trong axit v nớc cất đến 20 ml. Lắc mạnh trong 30 phút, sau đó để yên trong 20 phút rồi tách lấy phần dung dịch nớc. Dung dịch ny dùng để đo mật độ quang, xác định streptomycin ở bớc sóng 525 nm. TCVN 5148 : 1990 5 5.2 Pha dãy chuẩn: Dùng dung dịch gốc tiêu chuẩn của streptomycin sunphat nồng độ 1 mg/ml, tính toán lợng phù hợp để pha dãy dung dịch chuẩn có nồng độ 0,1 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 g/ml trong các bình định mức có thể tích 20 ml sau đó thủy phân bằng kiềm, đun cách thủy cho sôi 10 phút, để nguội rồi cho 2 ml dung dịch thuốc thử phèn sắt (III) amonium 2%. định mức bằng nớc cất đến 20 ml rồi để sau 20 phút mới tiến hnh đo. 5.3 Mẫu trắng Mẫu trắng phải đợc chuẩn bị cùng một điều kiện nh mẫu phân tích nhng thay mẫu phân tích trên bằng nớc cất sao cho có cùng thể tích. 6 Tiến hnh thử + Đặt sóng đo v bật máy chạy cho ổn định (5 phút) + Đo mật độ quang của mẫu chuẩn v mẫu phân tích ở bớc sóng 525 nm bằng cuvét có chiều dầy 2 cm. Dùng mẫu trắng ở kênh so sánh lm mẫu so sánh v đo mỗi mẫu 3 lần. + Lập đồ thị đờng chuẩn theo hệ tọa độ Đ - C. Trong đó Đ l mật độ quang của dung dịch mẫu chuẩn có nồng độ C tơng ứng + Xác định nồng độ Cx của chất phân tích theo đờng chuẩn đã dựng đợc. 7 Tính kết quả Hm lợng streptomycin trong mẫu phân tích đợc tính theo công thức sau : Cc = (Cx.V)/a tính bằng g/g. Trong đó: a l lợng mẫu cân ( ở đây a = 20g) V l thể tích pha mẫu ( V = 20 ml) Cx l nồng độ streptomycin xác định đợc theo đờng chuẩn. TCVN 5148:1990 6 Phụ lục Cách pha dãy chuẩn: Sử dụng dung dịch gốc tiêu chuẩn của streptomycin có nồng độ 1 mg/ml ( gọi l dung dịch A) + Pha dung dịch streptomycin nồng độ 10g/ml: lấy 1 ml dung dịch A, pha loãng v định mức bằng nớc cất đến 100 ml (dung dịch ny gọi l B). + Pha dãy dung dịch chuẩn: lấy 6 bình định mức có thể tích 20 ml cho lần lợt vo các bình từ số 1 đến số 6 một lợng nh sau: 0,2 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 ml dung dịch B. Thêm vo mỗi bình 2 ml natrihydroxyt 1N v lợng nớc đến 10 ml. Đun cách thủy cho sôi để thủy phân trong 10 phút. Để nguội ở nhiệt độ phòng, thêm 4 ml thuốc thử phèn sắt (III) amonium 2% trong axit, lắc kỹ v định mức bằng nớc cất đến 20 ml. Nh vậy, ta đợc dãy dung dịch chuẩn có nồng độ l: 0,1 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 g/ml. . tCvn T i ª u c h u È n V i Ö t N a m TCVN 5148 : 1990 ThÞt vμ s¶n phÈm cña thÞt Ph−¬ng ph¸p x¸c. d− l−îng Streptomicin Hμ Néi - 1990 T I ª u c h u È n v I Ö t n a m tcvn 4836 : 1989 TCVN 5148:1990 2 Cơ quan biên soạn: Trung tâm kiểm dịch động vật xuất