Luận văn thạc sĩ phân lập vi khuẩn nitrate hóa thu tại vùng biển đảo hải phòng quảng ninh

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM Phonephet KONGMANY PHÂN LẬP VI KHUẨN NITRATE HÓA THU TẠI VÙNG BIỂN ĐẢO HẢI PHÒNG - QUẢNG NINH LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THÁI NGUYÊN, NĂM 2020 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM Phonephet KONGMANY PHÂN LẬP VI KHUẨN NITRATE HÓA THU TẠI VÙNG BIỂN ĐẢO HẢI PHÒNG - QUẢNG NINH Ngành: Di truyền học Mã số: 8.42.01.21 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Đỗ Mạnh Hào TS Hoàng Phú Hiệp THÁI NGUYÊN, NĂM 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng cá nhân Các số liệu, kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Nếu sai tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm Tác giả Phonephet KONGMANY i LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc đến TS Đỗ Mạnh Hào - Trạm nghiên cứu biển Đồ Sơn, Viện Tài Nguyên Môi Trường Biển, TS Hoàng Phú Hiệp- Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên, người thầy tận tình hướng dẫn, bảo giúp đỡ cho kiến thức, kinh nghiệm, lời khuyên quý báu, tạo điều kiện thuận lợi cho q trình triển khai, thực hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn kỹ thuật viên Trạm nghiên cứu biển Đồ Sơn nhiệt tình bảo, giúp đỡ tơi nhiều suốt thời gian thực tập Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè, tập thể lớp Cao học K26 thầy cô Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên người sẵn sàng giúp đỡ động viên tinh thần cho tơi q trình học tập thực đề tài Thái Nguyên, ngày 22 tháng 09 năm 2020 Học viên Phonephet KONGMANY ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Q trình nitrate hóa chu trình nitơ 1.2 Nhóm vi khuẩn nitrate hóa 1.2.1 Đặc điểm chung 1.2.2 Vi khuẩn oxy hóa ammonia 1.2.3 Vi khuẩn oxy hóa nitrite 1.3 Chu trình Nitơ đầm ni thủy sản ứng dụng nhóm vi khuẩn nitrate hóa ni trồng thủy sản 10 1.3.1 Chu trình Nitơ đầm nuôi thủy sản 10 1.3.2 Ứng dụng nhóm vi khuẩn nitrate hóa ni trồng thủy sản 12 1.4 Tình hình nghiên cứu nhóm vi khuẩn nitrate hóa giới Việt Nam 14 1.4.1 Tình hình nghiên cứu nước 14 1.4.2 Đánh giá tổng quan tình hình nghiên cứu nước 16 Chương 2: VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Vật liệu, thiết bị, hóa chất, địa điểm, thời gian nghiên cứu 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 22 2.2.1 Phương pháp thu mẫu bảo quản mẫu 22 iii 2.2.2 Phương pháp phân tích thơng số thủy lí 23 2.3.3 Phương pháp phân tích thơng số thủy hóa 23 2.3.4 Phương pháp phân tích, xác định mật độ vi khuẩn tổng số vi khuẩn nitrate hóa 24 2.3.5 Phương pháp phân lập, làm giàu khiết chủng vi khuẩn nitrate hóa 25 2.3.6 Phương pháp xác định hình thái tế bào, nhuộm Gram tế bào vi khuẩn 26 2.3.7 Định danh chủng vi khuẩn nitrate hóa gen 16S rRNA 27 2.3.8 Phương pháp xử lý số liệu 28 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 Kết quan trắc yếu tố môi trường khu vực nghiên cứu 29 3.1.1 Kết thông số thủy lí 29 3.1.2 Kết thơng số thủy hóa 30 3.1.3 Kết vi sinh vật 32 3.2 Kết phân lập khiết chủng vi khuẩn nitrate 33 3.2.1 Nhân giống cấp 33 3.2.2 Nhân giống cấp 35 3.3 Phân lập, tuyển chọn chủng vi khuẩn nitrate hóa 36 3.3.1 Phân lập chủng vi khuẩn nitrate hóa 36 3.3.2 Định danh chủng vi khuẩn nitrate hóa 39 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 PHỤ LỤC iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ viết tắt Diễn giải AOB Ammonia-oxidizing bacteria BBCs Rotating Biological Contactors BOD Nhu cầu oxy sinh hóa COD Nhu cầu oxy hóa học DO GHCP Giới hạn cho phép MBR Membrance Bio Reator MBBR NOB Nitrite-oxidizing bacteria 10 SAF Submerged Aerated Filter 11 SBR Sequencing batch reactor 12 TAN Ammonia tổng số Nhu cầu oxy Moving Bed Biological Reactor v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Bảng tọa độ thu mẫu 20 Bảng 2.2 Công thức pha môi trường tự dưỡng Winogradsky – agar 22 Bảng 2.3 Công thức pha môi trường dị dưỡng PCA 22 Bảng 2.4 Phương pháp phân tích thơng số thủy lí 23 Bảng 2.5 Phương pháp phân tích thơng số thủy hóa 23 Bảng 2.6 Thành phần phản ứng PCR 27 Bảng 2.7 Chu kỳ nhiệt phản ứng PCR 28 Bảng 3.1 Kết đo thông số thủy lí khu vực nghiên cứu 29 Bảng 3.2 Kết đo thơng số thủy hóa khu vực nghiên cứu 30 Bảng 3.3 Kết đo vi sinh vật tổng số khu vực nghiên cứu 32 Bảng 3.4 Kết đo vi khuẩn nitrate hóa khu vực nghiên cứu 32 Bảng 3.5 Kết lượng chất tiêu thụ ngày thời điểm mẫu thu thập Quảng Ninh thời gian làm giàu 34 Bảng 3.6 Kết lượng chất tiêu thụ ngày thời điểm mẫu thu thập Hải Phòng thời gian làm giàu 34 Bảng 3.7 Kết lượng chất tiêu thụ ngày thời điểm mẫu có hoạt tính cao thời gian làm giàu 36 Bảng 3.8 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc chủng vi khuẩn nitrate hóa phân lập Hải Phịng, Quảng Ninh 37 Bảng 3.9 Nồng độ chất NH4+ sản phẩm NO2+ tạo thành chủng vi khuẩn nitrate hóa trước sau ni 15 ngày 38 Bảng 3.10 Đặc điểm hình dạng tế bào vi khuẩn, Gram hình ảnh tế bào chủng vi khuẩn phân lập Hải Phòng, Quảng Ninh 39 Bảng 3.11 Kết so sánh trình tự tương đồng cơng cụ BLAST 42 Bảng 3.12 Bảng tên định danh loài vi khuẩn nitrate hóa phân lập Hải Phịng Quảng Ninh 44 vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Chu trình nitơ vi sinh vật hệ sinh thái tự nhiên Hình 1.2 Bốn giống vi khuẩn chủ yếu tham gia vào q trình nitrite hóa Hình 1.3 Ba giống vi khuẩn chủ yếu tham gia vào trình nitrate hóa Hình 1.4 Các giai đoạn q trình nitrate hóa Hình 1.5 Chu trình Nitơ hệ sinh thái ao ni thủy sản 11 Hình 1.6 Sơ đồ hệ thống ni thủy sản hồn lưu 13 Hình 2.1 Sơ đồ địa điểm thu mẫu tỉnh Quảng Ninh 21 Hình 2.2 Sơ đồ địa điểm thu mẫu thành phố Hải Phòng 21 Hình 3.1 Kết PCR mẫu DNA vi khuẩn nitrate hóa 42 vii MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Q trình nitrate hóa sinh học Schoesing Müntz phát năm 1877, đến năm 1890, nhà khoa học người Nga Winogradsky phân lập chủng vi khuẩn nhờ sử dụng mơi trường khống vơ [19] Sau đó, nhiều chủng vi khuẩn nitrate hóa phân lập từ môi trường khác khắp giới Cho đến nay, nhà khoa học ghi nhận khoảng 11 loài thuộc giống khác Dựa vào đặc tính sử dụng chất, vi khuẩn nitrate hóa chia thành hai nhóm nhóm oxy hóa ammonia thành nitrite nhóm oxy hóa nitrite thành nitrate Nhóm vi khuẩn oxy hóa ammonia gồm lồi thuộc giống Nitrosomonas, Nitrosococcus, Nitrosospira, Nitrosolobus Nitrosovibrio Nhóm vi khuẩn oxy hóa nitrite (NOB) gồm lồi thuộc giống Nitrobacter, Nitrospira, Nitrospina, Candidatus Nitromaritima, Nitrococcus [13] Đã có nhiều nghiên cứu phát số nhóm vi khuẩn khác có khả nitrate hóa, chúng có khả dinh dưỡng tùy nghi (mixotrophy) - tức có khả dinh dưỡng tự dưỡng dị dưỡng đồng thời [23], [28] Ammonia nitrite sản phẩm trình phân hủy chất thải giàu đạm từ nguồn chất thải sinh hoạt, nhà máy chế biến thức ăn, nuôi trồng thủy sản, Hai chất sinh thông qua tiết trực tiếp từ gia súc, gia cầm, vật nuôi Nếu ammonia nitrite không xử lý mà thải trực tiếp vào nguồn nước xung quanh gây ô nhiễm môi trường Ammonia nitrite có tính độc động vật thủy sinh Ammonia dạng khí (NH3) gây độc cho động vật thủy sinh nồng độ thấp đến 0,01 ppm Sự có mặt ammonia nitrite gây độc trực tiếp thủy sinh vật mà cịn kích thích nở hoa tảo dẫn đến cân hệ sinh thái thủy vực Trong tự nhiên, việc loại bỏ nitrite ammonia thực thơng qua q trình nitrate hóa sinh học nhóm vi khuẩn nitrate hóa Trước tiên, ammonia oxy hóa thành Tên mẫu Tiên n 01 Kí hiệu Hình dạng khuẩn lạc tế bào T2W Que ngắn - T3W Que - T5W Que - T6S Que - T8S Cầu - Hình thái tế bào 41 Gram 3.3.2.2 Kết giải trình tự gen 16S rRNA Sau tách chiết DNA tổng số,các mẫu vi khuẩn xác định tên chủng gen 16S rRNA Quá trình nhân đoạn gen 16S rRNA tiến hành với cặp mồi đặc hiệu 27F 1492R Thành phần chu trình nhiệt trình bày phần 2.3.7 Chương Kết phản ứng PCR thể hình 3.1 Hình 3.1 Kết PCR mẫu DNA vi khuẩn nitrate hóa M: Marker 100bp 1-12: H2W, H4S, H5S, D3W, D4S, D6S, D7S, T2W, T3W, T5W, T6S, T8S Trên điện di đồ (hình 3.10) cho thấy sản phẩm PCR mẫu có kích thước khoảng 1,5kb Kích thước hồn tồn phù hợp với tính tốn lý thuyết Các băng sáng, đậm, rõ nét đủ điều kiện thực thí nghiệm Sau giải trình tự, chúng tơi tiến hành so sánh trình tự nucleotide đoạn gen 16S rRNA thu chủng vi khuẩn nitrate hoá với trình tự gen 16S rRNA ngân hàng gen công cụ BLAST Kết thu bảng 3.11 phụ lục Bảng 3.11 Kết so sánh trình tự tương đồng cơng cụ BLAST 42 Chủng tỷ lệ tương đồng Trình tự vi khuẩn (%) tương đồng H2W 99,64 NR_117649 Nitrosomonas europaea H4S 99,58 NR_074324 Nitrobacter winogradskyi H5S 98,63 NR_104815 Nitrosomonas marina D3W 99,64 NR_117649 Nitrosomonas europaea D4S 97,85 NR_104819 Nitrosococcus nitrosa D6S 99,51 NR_074324 Nitrobacter winogradskyi D7S 97,68 NR_104817 Nitrosomonas halophila T2W 97,26 NR_027578 Nitrobacter hamburgensis T3W 98,20 NR_117649 Nitrosomonas europaea 10 T5W 96,71 NR_104818 Nitrosomonas aesturii 11 T6S 98,84 NR_104819 Nitrosomonas nitrosa 12 T8S 99,72 NR_074324 Nitrobacter winogradskyi STT Tên chủng tương đồng Kết cho thấy, 12 chủng vi khuẩn thu thuộc giống Nitrosomonas Nitrobacter Tỷ lệ tương đồng đạt 96,71% so với trình tự gốc ngân hàng gen giới 3.3.2.3 Kết định danh lồi vi khuẩn nitrate hóa Các lồi vi khuẩn nitrate hóa phân loại dựa đặc điểm hình thái, sinh hóa kết hợp với phương pháp sinh học phân tử theo khóa phân loại Bergey 1973 Phân lập 12 lồi vi khuẩn nitrate hóa thuộc giống vi khuẩn Hai loài vi khuẩn đặc trưng Nitrosomonas europaea Nitrobacter winogradskyi có mẫu phân tích Ngồi ra, cịn có loài vi khuẩn khác như: Nitrosomonas marina, Nitrosomonas nitrosa, Nitrosomonas aesturii (bảng 3.12) 43 Bảng 3.12 Bảng tên định danh lồi vi khuẩn nitrate hóa phân lập Hải Phòng Quảng Ninh Tên mẫu Hải Hà 01 Đồ Sơn 01 Tiên Yên 01 Kí hiệu khuẩn lạc Tên định danh H2W Nitrosomonas europaea H4S Nitrobacter winogradskyi H5S Nitrosomonas marina D3W Nitrosomonas europaea D4S Nitrosomonas nitrosa D6S Nitrobacter winogradskyi D7S Nitrosomonas halophila T2W Nitrobacter hamburgensis T3W Nitrosomonas europaea T5W Nitrosomonas aesturii T6S Nitrosomonas nitrosa T8S Nitrobacter winogradskyi 44 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Đã thu thập mẫu vật nghiên xác định yếu tố thuỷ lí, thuỷ hố nhiệt độ, pH, nồng độ muối, lượng oxy hoà tan, độ trong, NH4+, NO2ˉ, NO3ˉ, BOD5 COD Đối chiếu theo tiêu chuẩn Việt Nam QCVN: 10:2008/ BTNMT hầu hết tiêu đạt khoảng giới hạn cho phép nước nuôi trồng thủy sản Một số tiêu vượt giới hạn nồng độ TAN, COD Đã xác định mật độ vi sinh vật tổng số mật độ vi khuẩn nitrate hóa khu vực nghiên cứu Mật độ vi khuẩn nitrate hóa ghi nhận khu vực nghiên cứu dao động khoảng 4,00 đến 7,60.102 MPN/ml Phân lập 20 loài vi khuẩn từ mẫu có 12 lồi có hoạt tính, cịn lại 08 chủng khơng có hoạt tính, 12 lồi vi khuẩn thuộc nhóm Nitrosomonas Nitrobacter Hai lồi vi khuẩn đặc trưng Nitrosomonas europaea Nitrobacter winogradskyi có mẫu phân tích KIẾN NGHỊ Nghiên cứu thêm q trình xử lý mơi trường nước nhóm vi khuẩn nitrate hóa địa để làm chế phẩm sinh học đưa vào ứng dụng thực tế nuôi trồng thủy sản 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đặng Đức, Đặng Hồng Miên, Nguyễn Vĩnh Phước, Nguyễn Đình Quyến, Nguyễn Phùng Tiến, Phạm Văn Tỵ (1976) Các phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học, tập 2, NXB Khoa học kỹ thuật, Tr 21 – 30 Trần Liên Hà, Phạm Tuấn Anh, Nguyễn Thị Thanh (2007), "Phân lập tuyển chọn chủng vi khuẩn nitrate hóa đề xử lý nước hồ bị nhiễm", Tạp chí Khoa học Công nghệ ,45(10): 95-100 Cao Ngọc Điệp Đoàn Tấn Lực (2014), "Phân lập, tuyển chọn ứng dụng vi khuẩn chuyển hoá nitơ photpho từ bãi rác để xử lý N P nước rỉ rác", Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 33: 117-124 Vũ Thị Minh Đức (2001), Thực tập vi sinh vật, NXB Giáo dục, Tr 27 – 34, 103 -102 Hoàng Phương Hà, Nguyễn Quang Huy, Hoàng Thị Yến (2016), "Nghiên cứu số điều kiện thích hợp cho sinh trưởng tạo Biofilm chủng vi khuẩn khử nitrate", Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 14(1): 191-196 Lại Thị Thúy Hiền, Nguyễn Bá Tú, Đỗ Thu Phương, Phạm Thị Hằng, Nguyễn Thị Yến, Vương Thị Nga, Võ Mai Hương, Phạm Ngọc Lan, Nguyễn Thu Thủy, Bùi Lê Thanh Nhàn (2008), "Nghiêu cứu sản xuất chế phẩm sinh học Nitrobact ứng dụng xử lý nước ni tơm Thừa Thiên - Huế", Tạp chí Công nghệ Sinh học, (2):249-256 Nguyễn Thị Thanh, Trần Liên Hà (2006), "Phân lập chủng vi khuẩn phản nitrate hóa với mục tiêu ứng dụng xử lý nước hồ nhiễm", Tuyển tập báo cáo Hội nghị Khoa học lần thứ 20, Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội, 243 – 246 Trần Cẩm Vân (2005), Giáo trình Vi sinh vật học mơi trường, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội 46 TIẾNG ANH Achuthan C., Rejíh Kumar V J., Manju N J., Philip R., Singh I S B (2006) Development of nitrifying bacterial consortia for immobilizing in nitrifying bioreactors designed for penaeid and non-penaeid larval rearing systems in the tropics Indian J of marine science, 35(3): 240-248 10 Baskaran V., Patil P K., Antony M L., Avunje S., Nagaraju V T., Ghate S D., Nathamuni S., Dineshkumar N., Alavandi S V., Vijayan K K (2020) Microbial community profiling of ammonia and nitrite oxidizing bacterial enrichments from brackishwater ecosystems for mitigating nitrogen species Scientific Reports, (10): 5201 11 Brenner D J, Krieg N R, Staley J T, Garrity G M (2005) Bergey's Manual of Systematic Bacteriology-Part C.2 ed, Springer 12 Capone D G, Bronk D A, Mulholland M R, Carpenter E J (2008) Nitrogen in the marine environment ed.; Elsevier Inc 13 Daims H , Lücker S., Wagner M (2016) A new perspective on microbes formerly known as nitrite-oxidizing bacteria Trends Microbiol 24: 699–712 14 Ehrich S., Behrens D., Lebedeva E., Ludwig W., Bock E (1995) A new obligately chemolithoautotrophic, nitrite-oxidizing bacterium, Nitrospira moscoviensis sp nov and its phylogenetic relationship Arch Microbiol 146:16-23 15 Fan H., Bolhuis H., Stal L J (2015) Nitrification and Nitrifying Bacteria in a Coastal Microbial Mat Front Microbiol 6: 1367 doi: 10.3389/fmicb.2015.01367 16 Fujitani H., Kumagai A., Ushiki N., Momiuchi K., Tsuneda S (2015) Selective isolation of ammonia-oxidizing bacteria from autotrophic nitrifying granules by applying cell-sorting and sub-culturing of microcolonies Front Microbiol 6: 1159 doi: 10.3389/fmicb.2015.01159 17 Lau E., Frame C H., Nolan E J., Stewart F J., Dillard Z.W., Lukich D P., Mihalik N E., Yauch K E., Kinker M A., Waychof S L (2019) Diversity 47 and relative abundance of ammonia- and nitriteoxidizing microorganisms in the offshore Namibian hypoxic zone PLoS ONE 14(5): e0217136 https://doi.org/10.1371/journal.pone.0217136 18 Maeda J W (1985) Allowable ammonia for fish culure Prg Fish-Cult 47:135-145 19 Meiklejohn J (1949) The Isolation of Nitrosomonas europaea in pure culture Soil Microbiology Department, Rothamsted Experimental Station, Harpenden, Hertfordshire 185-191 20 Rodríguez A R., Inchaustegui S M., Castro L P., Montealegre R J., Vargas J P H (2017) Isolation of ammonium- and nitrite-oxidizing bacterial strains from soil, and their potential use in the reduction of nitrogen in household waste water Int J Trop Biol., 65 (4): 1527-1539 21 Shan H., Obbard J P., (2001) Ammonia removal from prawn aquaculture water using immobilized nitrifying bacteria Appl Microbiol Biotechnol., 57 (56):791-798 22 Smil V (2000) Cycles of Life ScientificAmerican Library, New York 23 Soulwène K., Saidi N., hiri F.M', Nasr H., Cherif H., Ouzari H., Hassen A (2011) Isolation and characterization of facultative mixotrophic ammoniaoxidizing bacteria from constructed wetlands Journal of Environmental Sciences 23 (10):1699-1708 24 Spieck E., Lipski A (2011) Methods in Enzymeology, Chapter five Cultivation, Growth Physiology, and Chemotaxonomy of Nitrite-Oxidizing Bacteria ScienceDirect, 486: 109-130 https://doi.org/10.1016/B978-0-12381294-0.00005-5 25 Subasinghe, R.P., Curry, D., McGladdery, S.E & Bartley, D (2003) Recent Technological Innovations in Aquaculture Review of the state of world aquaculture FAO Fisheries Circular No 886 26 Tal Y., Schreier H J., Sowers K R., Stubblefield J D., Place A R., Zohar Y (2009) Environmentally sustainable land-based marine aquaculture Aquaculture, 286: 28-35 48 27 Stein L Y (2015) Microbiology: Cyanate fuels the nitrogen cycle Nature 524(7563) DOI: 10.1038/nature14639 28 Taylor S M., He Y L., Zhao B., Huang J (2009) Heterotrophic ammonium removal characteristics of an aerobic heterotrophic nitrifying-denitrifying bacterium, Providencia rettgeri YL Journal of Environmental Sciences, 21 (10):1336-1341 29 Watson S W., Bock E., Harms H., Koops H P., Hooper A B (1989) Nitrifying bacteria in Bergey’s manual of systematic bacteriology, Vol.3 Stanley J.T (editor) Williams & Wilkins in Baltimore, Hong Kong, London and Sydney p.1808-1834 30 Van Riji J., Yossi Tal, Harold J Schreier (2006) Denitrification in recirculating system: Theory and application Aquacultural Eng 34: 364-376 TÀI LIỆU INTERNET 31 Alleman, J E., Preston, K (2005) Behavior and Physiology of Nitrifying Bacteria, 15/08/2020 http://web.deu.edu.tr/atiksu/ana58/nitri.doc 32 Mỹ Hạnh (2020) Chế phẩm sinh học xử lý nước bị nhiễm ammoni, 15/08/2020 http://www.noip.gov.vn/vi_VN/web/guest/sang-che-viet//asset_publisher/XzSH8lY4WRq7/content/che-pham-sinh-hoc-xu-ly-nuocbi-nhiem-ammoni 33 Q trình Nitrat hóa ứng dụng vi khuẩn Nitrat hóa ao tơm, 15/08/2020 https://drtom.vn/qua-trinh-nitrat-hoa.html 34 Xử Lý Nước Thải Nuôi Trồng Thủy Sản Bằng Hệ Thống RAS, 15/08/2020 http://www.congnghemoitruong.info/2016/04/xu-ly-nuoc-thai-nuoi-trongthuy-san.html 49 PHỤ LỤC KẾT QUẢ SO SÁNH TRÌNH TỰ TƯƠNG ĐỒNG BẰNG CƠNG CỤ BLAST Chủng vi khuẩn H2W Chủng vi khuẩn H4S Chủng vi khuẩn H5S Chủng vi khuẩn D3W Chủng vi khuẩn D4S Chủng vi khuẩn D6S Chủng vi khuẩn D7S Chủng vi khuẩn T2W Chủng vi khuẩn T3W Chủng vi khuẩn T5W Chủng vi khuẩn T6S Chủng vi khuẩn T8S PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH HOẠT ĐỘNG THU MẪU, PHÂN TÍCH MẪU Hình Khảo sát, thu thập phân tích mẫu Hình Nhân giống cấp mẫu thu Hình Nhân giống cấp mẫu có hoạt tính cao Hình Q trình ngâm hồn thiện gel Silica Winogradsky ... tài: ? ?Phân lập vi khuẩn nitrate hóa thu vùng biển đảo Hải Phịng- Quảng Ninh? ?? Mục tiêu nghiên cứu Thu thập nguồn gen chủng vi khuẩn nitrate môi trường nước thu vùng biển đảo Quảng Ninh - Hải Phòng. .. HỌC SƯ PHẠM Phonephet KONGMANY PHÂN LẬP VI KHUẨN NITRATE HÓA THU TẠI VÙNG BIỂN ĐẢO HẢI PHÒNG - QUẢNG NINH Ngành: Di truyền học Mã số: 8.42.01.21 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa... - Thu thập mẫu nghiên cứu xác định yếu tố môi trường vùng biển đảo Hải Phòng Quảng Ninh - Phân lập, xác định mật độ khiết chủng vi khuẩn nitrate - Phân loại định danh chủng vi khuẩn nitrate hóa