Nhân giống bạch đàn urô (eucalyptus urophylla bleck) PN46 PN và PN47 bằng phương pháp nuôi cấy vintro​

Bộ giáo dục & đào tạo nông nghiệp ptnt Trường đại học lâm nghgiệp .o0o phạm đức huy nhân giống hai dòng bạch đàn urô (Eucalyptus urophylla Bleck) PN46 PN47 phương pháp nuôi cấy in vitro Chuyên ngành: lâm học Mà số : 60 62 60 Luận văn thạc sĩ khoa học lâm nghiƯp ng­êi h­íng dÉn khoa häc PGS-TS D­¬ng méng hïng Hà tây 2006 Luận văn hoàn thành tại: Khoa đào tạo Sau đại học Trường đại học Lâm nghiệp Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Dương Mộng Hùng Phản biÖn 1: Ph¶n biƯn 2: Luận văn bảo vệ Hội đồng chấm luận văn cấp nhà nước Họp tại: Trường Đại học Lâm nghiệp Việt Nam Xuân Mai, Chương Mỹ, Hà Tây Vào hồi: ngày tháng .năm 2006 Có thể tìm luận văn tại: Trung tâm thông tin tư liệu thư viện - Trường ĐHLN Thư viện Khoa đào tạo Sau đại học Hà tây 2006 Mở đầu Trong năm gần đây, kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật đà không ngừng phát triển thu thành tựu đáng kể Kỹ thuật đời đà mở hướng nghiên cứu thực vật nhanh chóng có vị trí quan träng lÜnh vùc c«ng nghƯ sinh häc vỊ sản xuất cải thiện giống trồng ưu điểm bật phương pháp nhân nhanh đồng di truyền số lượng lớn cá thể thời gian ngắn, trẻ hoá gần từ hạt [15] Một số loài thuộc chi Bạch đàn (Eucalyptus) đà nhập nội vào Việt Nam từ sớm trồng rộng rÃi hầu hết vùng sinh thái nhằm đáp ứng nhu cầu nguyên liệu giấy, bột giấy, gỗ trụ mỏ, gỗ xây dựng, gỗ xẻ củi Trong hội thảo quốc gia loài ưu tiên cho trồng rừng Việt Nam năm 2001, loài bạch đàn đối tượng ưu tiên số Danh mục loài ưu tiên cho trồng rừng toàn quốc [25] HiƯn nay, ngn c©y gièng cung cÊp cho trång rừng bạch đàn nước ta chủ yếu vô tính (sản xuất phương pháp giâm hom nh©n gièng in vitro) ë ViƯt Nam, nh©n gièng in vitro dòng bạch đàn Urô nước ta sản xuất công nghiệp từ năm 1994 đến đà thu thành công đáng kể Mỗi năm, công nghệ cung cấp khoảng 10 triệu giống bạch đàn loại phục vụ chương trình trồng rừng toàn quốc [25] Rừng trồng dòng vô tính bạch đàn từ mẹ ưu trội chọn lọc đà tạo bước đột phá suất chất lượng rừng trồng năm gần Tuy nhiên, nhược điểm lớn gây trồng nhập nội chúng có nguy tổn thất nặng nề địa xảy dịch sâu bệnh môi trường gây trồng sức đề kháng chúng địa Thêm vào đó, thực tế mà nhiều ng­êi ®Ịu thèng nhÊt r»ng, ®iĨm u nhÊt, râ nhÊt, nghiêm trọng trồng rừng từ nhân giống phương pháp in vitro làm giảm đáng kể biến dị di truyền giảm đa dạng di truyền Hiệu làm ngăn chặn trình chọn lọc tiếp, không tăng thu tiếp theo, tăng khả lây lan, tàn phá nhanh rộng sâu bệnh hại [16] Để hạn chế lây lan dịch bệnh xảy biện pháp kỹ thuật trồng nhiều loài, nhiều dòng khác diện tích lớn nước ta có khoảng 12 dòng bạch đàn đà Bộ NN&PTNT công nhận cho phép trồng rừng sản xuất, có 3-4 dòng nhân giống phương pháp in vitro Vì vậy, dòng đà Bộ NN&PTNT công nhận cần nghiên cứu nhân giống phương pháp in vitro để cung cấp cho trồng rừng khảo nghiệm trồng rừng sản xuất Năm 2003 Bộ NN&PTNT đà công nhận hai dòng bạch đàn urô PN46 PN47 (tên đầy đủ Dòng bạch đàn Phù Ninh số 46 Dòng bạch đàn Phù Ninh số 47) giống tiến kỹ thuật khuyến khích trồng rừng vùng có điều kiện sinh thái tương tự vùng Trung tâm Bắc Bộ (Phụ lục 1.1) Hiện nay, nhu cầu giống hai dòng nhằm phục vụ trồng rừng khảo nghiệm sản xuất lớn Thêm vào đó, việc nhân giống kỹ thuật nuôi in vitro dòng chưa nghiên cứu Thời gian vừa qua, Viện nghiên cứu nguyên liệu giấy đà thử nghiệm áp dụng quy trình nhân giống invitro hai dòng PN14 U6 vào nhân giống hai dòng không thành công Điều đặc điểm sinh lý, sinh hoá hai dòng có điểm khác so với dòng đà nhân giống quy trình Nên việc áp nghiên cứu nhân giống dòng bạch đàn kỹ thuật nuôi cấy in vitro để tiến tới hoàn thiện công nghệ phục vụ cho sản xuất cần thiết Từ đặc điểm, nhu cầu thực tiễn nhu cầu khoa học nêu trên, tiến hành đề tài Nhân giống hai dòng bạch đàn urô (Eucalyptus urophylla S.T Blake) PN46 PN47 phương pháp nuôi cấy in vitro Chương tổng quan vấn đề nghiên cứu 1.1 Khái niệm nhân giống in vitro Nuôi cấy mô tế bào thực vật gọi nuôi cấy thực vật in vitro (trong ống nghiệm) để phân biệt với trình nuôi cấy điều kiện tự nhiên gọi nuôi cấy in vivo (ngoài ống nghiệm) Thuật ngữ nuôi cấy mô tế bào thực vật hay nuôi cấy in vitro (Plant Tissue Culture) phạm trù khái niệm tất loại nuôi cấy mô tế bào điều kiện vô trùng Bao gồm [16]: Nuôi cấy cây: nuôi cấy thực vật Nuôi cấy phận đà tách khỏi thực vật: nuôi cấy quan Nuôi cấy phôi thành thục hay chưa thành đà tách khỏi thực vật: nuôi cấy phôi Nuôi cấy mô bắt nguồn từ quan thùc vËt: nu«i cÊy m« hay nu«i cÊy m« sĐo Nuôi cấy tế bào đơn lẻ hay cụm tế bào nhỏ môi trường lỏng Nuôi cấy tế bào thực vật sau đà tách bỏ phần vỏ, gọi nuôi cấy tế bào trần (protoplast) 1.2 Các giai đoạn nhân giống in vitro Nhân giống in vitro gồm nhiều giai đoạn nhau, trình chia thành giai đoạn sau đây: 1.2.1 Giai đoạn chuẩn bị Giai đoạn chuẩn bị giai đoạn quan trọng, định thành công thí nghiệm nhân giống in vitro Giai đoạn gồm nhiều nội dung khác pha môi trường nuôi cấy, chuẩn bị hoá chất khử trùng mẫu, chuẩn bị khử trùng thiết bị giai đoạn này, chuẩn bị môi trường dinh dưỡng có vai trò vô quan trọng mô nuôi cấy có sinh trưởng, phát triển hay không phụ thuộc vào thành phần, nồng độ chất có môi trường nuôi khả hấp thụ chất dinh d­ìng cã m«i tr­êng cđa m« nu«i cÊy Nhu cầu dinh dưỡng mô nuôi cấy khác tuỳ thuộc vào loài, giống, chí mô lấy từ quan khác cá thể có nhu cầu dinh dưỡng khác [23] Cho đến nay, người ta đà tìm nhiều loại môi trường dinh dưỡng thích hợp cho nhiều loài khác như: môi trường White (1934), môi trưòng MS (Murashige and Skoog, 1962), m«i tr­êng Litvay (1985),…vv, môi trường MS môi trường nuôi cấy thích hợp cho nhiều loài thực vật nói chung Các loại môi trường khác có thành phần nồng độ chất khác nhau, nhiên môi trường gồm thành phần bản: Nguồn cacbon: Nguồn cacbon thường sử dụng đường Glucose sucrose Ngoài ra, môi trường số loại thực vật sử dụng mantose lactose [12] Nguồn muối khoáng: Căn vào hàm lượng chứa cây, nguyên tố khoáng chia thành hai nhóm Nhóm nguyên tố chiếm lượng lớn từ 10-1 đến 10-4 chất khô gọi nguyên tố đa lượng gồm: C, H, O, Nvv Nhóm nguyên tố chiếm lượng nhỏ, từ 10-5 đến 10-7 chất khô gọi nguyên tố vi lượng, nguyên tố Mn, Bo, Cuvv [22] Vitamin: Nói chung mô nuôi cấy có khả tổng hợp đầy đủ vitamin cần thiết, nhiên với số lượng không đầy đủ Để mô nuôi cấy sinh trưởng phát triển tốt, người ta thường đưa thêm vào môi trường số vitamin nhãm B nh­: thiamine (B1), pyridoxine (B6), niconin (B3), riboflavin (B2) vµ vitamin C [17] [24]  Chất điều hoà sinh trưởng: Các chất điều hoà sinh trưởng chiếm hàm lượng nhỏ môi trường nuôi cấy có vai trò quan trọng định thành công trình nhân giống Trong môi trường nhân giống in vitro sử dụng chất nhãm chÊt kÝch thÝch sinh tr­ëng bao gåm: auxin, cytokinin gibberelin Auxin sử dụng để điều chỉnh phát sinh rễ Cytokinin sử dụng để điều chỉnh phát sinh chồi Tỷ lệ cân đối auxin/cytokinin tạo hoàn chỉnh [24] Trong nhân giống in vitro, ng­êi ta th­êng sư dơng auxin lµ IAA, NAA vµ IBA, cytokinin lµ BAP, BA vµ kinetin 1.2.2 LÊy mÉu, khử trùng mẫu cấy mẫu vào môi trường tạo chồi Mẫu sau lấy rửa nước sạnh (có thể rửa xà phòng chất tẩy rửa khác) Sau rửa nước cất vô trùng, ci cïng khư trïng b»ng chÊt diƯt khn bng cấy vô trùng Mẫu cấy thường lấy từ phận phát triển mạnh mô phân sinh đỉnh chồi rễ phận non phận có khả tái sinh, sinh trưởng phát triển mạnh Khả tái sinh mẫu cấy phụ thuộc vào loại cây, giai đoạn phát triển khác cá thể tuổi mẹ, tuổi cành Ngoài khả tái sinh mẫu cấy phụ thuộc vào thời điểm lấy mẫu, mùa lấy mẫu vị trí mẫu Khử trùng mẫu nuôi bước cấy khởi đầu quan trọng nuôi nhân giống in vitro Đặc biệt số trường hợp mẫu cấy loài quý hiếm, số lượng mẫu có hạn giai đoạn khử trùng vô quan trọng tỷ lệ mẫu sống cao tạo số lượng chồi đủ lín cho c¸c thư nghiƯm tiÕp theo Cã nhiỊu chÊt khác sử dụng để khử trùng mẫu chia chúng làm loại: Nhóm chất khử trùng bề mặt HgCl2, HgCr2, loại nuối hypoclorit, nước ôxi già (H2O2)vv Đặc điểm nhóm chất khử trùng chúng có khả tiêu diệt vi sinh vật nằm bề mặt mẫu vật mà không diệt vi sinh vật bên mô nuôi cấy [21] Nhóm chất khử trùng có khả thấm sâu vào bên mô nuôi cấy tiêu diệt vi sinh vật tồn mô (các chất kháng sinh penixillin, streptomyxin, xefotaxinvv) Khi sử dụng chất này, người ta không dùng riêng lẻ mà để khử trùng mẫu sau đà khử trùng bề mặt Nhiều loài thực vật thường chứa mầm bệnh nấm, vi khuẩn, virus bên mô nghiên cứu tạo giống bệnh người ta cần sử dụng phương pháp [21] 1.2.3 Cấy tạo chồi nhân chồi Sau thời gian định nuôi cấy chồi ë m«i tr­êng èng nghiƯm, chÊt dinh d­ìng môi trường giảm không hấp thụ Thêm vào đó, số chất ức chế sinh trưởng phát triển chồi tiết môi trường, chồi cần chuyển sang môi trường Thời gian cấy chuyển phụ thuộc vào loài mục tiêu trình nhân giống Đối với nhân giống in vitro bạch đàn, thời gian cấy chuyển từ 25 đến 30 ngày sau cấy Tuy nhiên, với thí nghiệm mà mục tiêu trì giống bảo tồn in vitro thời gian cấy chuyển dài Môi trường nhân chồi thường có mặt auxin cytokinin với tỷ lệ thích hợp với loài chí cá thể 1.2.4 Cấy tạo rễ Để tạo hoàn chỉnh gồm rễ, thân lá, chồi cấy vào môi trường tạo rễ Mục tiêu giai đoạn kích thích trình hình thành rễ phần mặt cắt (phần gốc) chồi Môi trường tạo rễ thường có mặt auxin mà mặt cytokinin 1.2.5 Huấn luyện cấy bầu Trong nhân giống in vitro, ống nghiệm sản xuất điều kiện nhân tạo nhiệt độ, ánh sáng môi trường dinh dưỡng Do cần huấn luyện nhằm tăng tỷ lệ sống cấy vườn ươm Huấn luyện cách đặt bình điều kiện nhiệt độ ánh sáng tự nhiên (thường không để ánh sáng chiếu trực tiếp vào cây, có che tuỳ theo thời ®iĨm vµ mïa) Thêi gian hn phơ thc vµ tõng loài mùa, với bạch đàn thường thời gian huấn luyện khoảng 6-10 ngày Kết thúc giai đoạn huấn luyện, lấy cấy vào bầu Tuỳ thuộc vào mục tiêu thí nghiệm sản xuất mà sử dụng thành phần ruột bầu khác Tóm lại, trình nhân giống in vitro chia thành giai đoạn kết giai đoạn không tách biệt mà có kế thừa giai đoạn trước Trong giai đoạn giai đoạn chuẩn bị môi trường đặc biệt quan trọng, giai đoạn ảnh hưởng xuyên suốt định thành công hay thất bại trình nhân giống 1.3 Cơ sở khoa học phưương pháp nuôi cấy in vitro 1.3.1 Tính toàn tế bào thực vật Nguyên lý nhân giống in vitro tính toàn tế bào thực vật Mỗi tế bào thể thực vật mang toàn lượng thông tin di truyền cần thiết đầy đủ thực vật gọi gen (genom) Đặc tính thực vật thể kiĨu h×nh thĨ tõng thêi kú cđa trình phát triển phụ thuộc vào giải mà thông tin di truyền tương ứng hệ gen tế bào Do đó, gặp điều kiện thích hợp, mối tương tác qua lại với điều kiện môi trường, quan, mô tế bào phát triển thành cá thể hoàn chỉnh mang đặc tính di truyền giống mẹ 1.3.2 Sự phân hoá phản phân hoá tế bào Quá trình phát sinh hình thái nuôi cấy mô tế bào thực vật thực chất kết phân hoá phản phân hoá tế bào Cơ thể thực vËt tr­ëng thµnh lµ mét chØnh thĨ thèng nhÊt bao gồm nhiều quan chức khác nhau, 94 ► Dßng PN46 Test of Homogeneity of Variances He so nhan choi (lan) Ty le choi huu hieu (%) Levene Statistic 1.921 537 df1 df2 4 Sig .183 712 10 10 ANOVA He so nhan choi (lan) Ty le choi huu hieu (%) Sum of Squares 247 013 Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total 260 211.153 37.500 248.653 df 10 Mean Square 062 001 F 47.688 Sig .000 52.788 3.750 14.077 000 14 10 14 He so nhan choi (lan) Duncana Nong kinetin (mg/l) 4.0 3.0 1.0 2.0 Sig N 1.9400 3 3 Subset for alpha = 05 2.0567 2.1133 2.2200 2.3100 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 .082 1.000 Ty le choi huu hieu (%) Duncana Nong kinetin (mg/l) 4.0 3.0 1.0 2.0 Sig N 3 3 Subset for alpha = 05 15.4667 20.3000 23.1667 23.1667 24.7333 26.0000 1.000 100 118 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 ► Dßng PN47 1.000 95 Test of Homogeneity of Variances He so nhan choi (lan) Ty le choi huu hieu (%) Levene Statistic 1.247 9.323 df1 df2 4 Sig .352 002 10 10 Multiple Comparisons Dependent Variable: Ty le choi huu hieu (%) Tamhane Mean Difference (I) Nong kinetin (mg/l)(J) Nong kinetin (mg/l) (I-J) Std Error 1.0 -.8000 18257 2.0 -2.0333 26034 3.0 7.0333 1.13920 4.0 11.0000* 32146 1.0 8000 18257 2.0 -1.2333 28480 3.0 7.8333 1.14504 4.0 11.8000* 34157 2.0 2.0333 26034 1.0 1.2333 28480 3.0 9.0667 1.15998 4.0 13.0333* 38873 3.0 -7.0333 1.13920 1.0 -7.8333 1.14504 2.0 -9.0667 1.15998 4.0 3.9667 1.17521 4.0 -11.0000* 32146 1.0 -11.8000* 34157 2.0 * -13.0333 38873 3.0 -3.9667 1.17521 * The mean difference is significant at the 05 level Sig .152 063 218 003 152 163 173 001 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -1.9606 3606 -4.2658 1991 -8.3543 22.4210 7.8179 14.1821 -.3606 1.9606 -3.0756 6089 -7.0395 22.7062 9.2136 14.3864 063 163 118 000 218 173 118 485 003 001 000 485 -.1991 -.6089 -4.6609 10.7704 -22.4210 -22.7062 -22.7943 -8.8054 -14.1821 -14.3864 -15.2963 -16.7388 4.2658 3.0756 22.7943 15.2963 8.3543 7.0395 4.6609 16.7388 -7.8179 -9.2136 -10.7704 8.8054 ANOVA He so nhan choi (lan) Ty le choi huu hieu (%) Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 172 013 186 387.103 8.833 395.936 df 10 14 10 14 Mean Square 043 001 F 33.003 Sig .000 96.776 883 109.557 000 96 He so nhan choi (lan) Duncana Nong kinetin (mg/l) 4.0 3.0 1.0 2.0 Sig N 1.9000 3 3 Subset for alpha = 05 2.0333 2.0967 1.000 057 2.0967 2.1267 333 2.2233 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Ty le choi huu hieu (%) Duncana Nong kinetin (mg/l) 4.0 3.0 1.0 2.0 Sig N 11.7000 3 3 Subset for alpha = 05 15.6667 22.7000 23.5000 1.000 1.000 322 23.5000 24.7333 139 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Phụ lục 3.9 ảnh hưởng phối hợp BAP + NAA + Kinetin đến hệ số nhân chồi tỷ lệ chồi hữu hiệu Dòng PN46 Test of Homogeneity of Variances He so nhan choi (lan) Ty le choi huu hieu (%) Levene Statistic 949 560 df1 df2 4 10 10 Sig .475 697 97 ANOVA He so nhan choi (lan) Ty le choi huu hieu (%) Sum of Squares 468 024 492 581.909 12.700 594.609 Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total df 10 14 10 14 Mean Square 117 002 F 48.918 Sig .000 145.477 1.270 114.549 000 He so nhan choi (lan) Duncana Nong kinetin (mg/l) 2.0 1.5 1.0 Sig N 2.4833 3 3 Subset for alpha = 05 2.6533 2.6667 2.8333 1.000 745 1.000 3.0033 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Ty le choi huu hieu (%) Duncana Nong kinetin (mg/l) 2.0 1.5 1.0 Sig N 15.6667 3 3 Subset for alpha = 05 18.2000 27.9333 29.8000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 ► Dßng PN47 Test of Homogeneity of Variances He so nhan choi (lan) Ty le choi huu hieu (%) Levene Statistic 4.684 1.245 df1 df2 4 10 10 Sig .022 353 070 29.8000 30.5333 444 98 ANOVA He so nhan choi (lan) Ty le choi huu hieu (%) Sum of Squares 588 127 715 601.937 5.860 607.797 Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total df 10 14 10 14 Mean Square 147 013 F 11.553 Sig .001 150.484 586 256.799 000 He so nhan choi (lan) Duncana Nong kinetin (mg/l) 2.0 1.5 1.0 Sig Subset for alpha = 05 2.1233 2.4133 2.4233 2.5900 2.5900 2.7100 1.000 097 222 N 3 3 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Ty le choi huu hieu (%) Duncana Nong kinetin (mg/l) 2.0 1.5 1.0 Sig N 3 3 Subset for alpha = 05 12.5667 17.9333 27.3000 27.4667 28.3000 1.000 1.000 157 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Phơ lơc 3.10 ¶nh hưởng IBA đến hiệu rễ Dòng PN46 Test of Homogeneity of Variances Ty le re (%) So re TB (re/cay) Levene Statistic 2.509 2.955 df1 df2 4 10 10 Sig .109 075 99 ANOVA Ty le re (%) So re TB (re/cay) Sum of Squares 6211.424 34.233 6245.657 2.671 244 2.915 Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total df 10 14 10 14 Mean Square 1552.856 3.423 F 453.609 Sig .000 668 024 27.354 000 Ty le re (%) Duncana Nong IBA (mg/l) 4.0 3.0 1.0 2.0 Sig N 3 3 14.433 Subset for alpha = 05 45.000 53.300 59.433 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 So re TB (re/cay) Duncana Nong IBA (mg/l) 4.0 1.0 3.0 2.0 Sig N 3 3 Subset for alpha = 05 1.400 1.560 2.040 2.073 2.593 238 799 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 1.000 76.100 1.000 100 Chieu dai re (cm) Duncana,b Nong IBA (mg/l) 4.0 3.0 2.0 1.0 Sig N Subset for alpha = 05 5244 41 90 90 90 90 6733 7778 1.000 077 7778 8700 119 1.1578 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 72.638 b The group sizes are unequal The harmonic mean of the group sizes is used Type I error levels are not guaranteed ► Dßng PN47 Test of Homogeneity of Variances Ty le re (%) So re TB (re/cay) Levene Statistic 1.329 1.438 df1 df2 4 Sig .325 291 10 10 ANOVA Ty le re (%) So re TB (re/cay) Sum of Squares 6323.697 286.120 6609.817 2.419 173 2.591 Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total df 10 14 10 14 Mean Square 1580.924 28.612 F 55.254 Sig .000 605 017 34.976 000 Ty le re (%) Duncana Nong IBA (mg/l) 4.0 3.0 1.0 2.0 Sig N 3 3 13.900 Subset for alpha = 05 42.233 51.667 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 .056 51.667 61.133 055 75.000 1.000 101 So re TB (re/cay) Duncana Nong IBA (mg/l) 4.0 1.0 3.0 2.0 Sig N 3 3 Subset for alpha = 05 1.280 1.807 1.833 2.027 2.527 1.000 078 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Chieu dai re (cm) Nong IBA (mg/l) Duncana,b 4.0 3.0 2.0 1.0 Sig N 37 90 90 90 90 4811 Subset for alpha = 05 6578 7111 8600 1.000 294 1.000 1.0878 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 69.958 b The group sizes are unequal The harmonic mean of the group sizes is used Type I error levels are not guaranteed Phụ lục 3.11 ảnh hưởng phối hợp IBA + ABT đến Dòng PN46 Test of Homogeneity of Variances Ty le re (%) So re TB (re/cay) Levene Statistic 988 4.059 df1 df2 4 10 10 Sig .457 033 102 Multiple Comparisons Dependent Variable: So re TB (re/cay) Tamhane Mean Difference (I) Nong ABT (mg/l) (J) Nong ABT (mg/l) (I-J) Std Error -.200 1579 1.0 -.043 1107 1.5 430 1222 2.0 593 1073 200 1579 1.0 157 1229 1.5 630 1334 2.0 793 1199 1.0 043 1107 -.157 1229 1.5 473 0715 2.0 637* 0411 1.5 -.430 1222 -.630 1334 1.0 -.473 0715 2.0 163 0662 2.0 -.593 1073 -.793 1199 1.0 -.637* 0411 1.5 -.163 0662 95% Confidence Interval Sig Lower Bound Upper Bound 960 -1.088 688 1.000 -1.132 1.045 294 -.394 1.254 230 -.683 1.870 960 -.688 1.088 977 -1.125 1.439 161 -.341 1.601 171 -.677 2.263 1.000 -1.045 1.132 977 -1.439 1.125 060 -.029 976 003 369 904 294 -1.254 394 161 -1.601 341 060 -.976 029 681 -.468 794 230 -1.870 683 171 -2.263 677 003 -.904 -.369 681 -.794 468 * The mean difference is significant at the 05 level ANOVA Ty le re (%) So re TB (re/cay) Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 2886.017 74.047 2960.064 1.096 087 1.184 df 10 14 10 14 Mean Square 721.504 7.405 F 97.439 Sig .000 274 009 31.359 000 103 So re TB (re/cay) Duncana Nong ABT (mg/l) 2.0 1.5 1.0 Sig N 3 3 Subset for alpha = 05 2.020 2.497 2.543 2.603 2.850 1.000 212 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Ty le re (%) Duncana Nong ABT (mg/l) 2.0 1.5 1.0 Sig N 3 3 42.200 Subset for alpha = 05 59.433 66.667 75.567 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Chieu dai re (cm) Duncana Nong ABT (mg/l) 2.0 1.5 1.0 Sig N 90 90 90 6711 7789 Subset for alpha = 05 90 90 1.0878 059 1.000 ► Dßng PN47 Test of Homogeneity of Variances Ty le re (%) So re TB (re/cay) df1 df2 4 9100 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 90.000 Levene Statistic 1.036 3.539 10 10 Sig .435 048 1.000 1.2889 1.000 82.233 1.000 104 ANOVA Ty le re (%) So re TB (re/cay) Sum of Squares 2633.151 119.267 2752.417 1.371 183 1.555 Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total df 10 14 10 14 Mean Square 658.288 11.927 F 55.195 Sig .000 343 018 18.722 000 Ty le re (%) Duncana Nong ABT (mg/l) 2.0 1.5 1.0 Sig N 3 3 45.000 Subset for alpha = 05 55.000 65.567 75.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 So re TB (re/cay) Duncana Nong ABT (mg/l) 2.0 1.5 1.0 Sig N 3 3 Subset for alpha = 05 1.807 1.970 2.400 2.443 2.600 170 114 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 1.000 1.000 81.700 1.000 105 Chieu dai re (cm) Duncana Nong ABT (mg/l) 2.0 1.5 1.0 Sig Subset for alpha = 05 6656 6933 8800 1.0611 1.1644 635 1.000 078 N 90 90 90 90 90 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 90.000 Phơ lơc 3.12 ¶nh h­ëng cđa thêi gian hn lun đến tỷ lệ sống chiều cao ► Dßng PN46 Test of Homogeneity of Variances Ty le song (%) Chieu cao trung binh (cm) Levene Statistic 1.595 df1 794 df2 10 Sig .250 10 556 ANOVA Ty le song (%) Chieu cao trung binh (cm) Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 4664.667 238.667 4903.333 137 180 317 df 10 14 10 14 Mean Square 1166.167 23.867 F 48.862 Sig .000 034 018 1.907 186 106 Ty le song (%) Duncana Thoi gian huan luyen (ngay) 16 12 Sig N 3 3 Subset for alpha = 05 45.667 75.667 86.667 92.000 93.333 1.000 1.000 141 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 ► Dßng PN47 Test of Homogeneity of Variances Ty le song (%) Chieu cao trung binh (cm) Levene Statistic 2.000 2.000 df1 df2 4 Sig .171 171 10 10 ANOVA Ty le song (%) Chieu cao trung binh (cm) Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 4971.600 121.333 5092.933 104 193 297 df 10 14 10 14 Mean Square 1242.900 12.133 F 102.437 Sig .000 026 019 1.345 320 107 Ty le cay song (%) Duncana Thoi gian huan luyen (ngay) Khong huan luyen 16 ngay 12 Sig N 3 3 Subset for alpha = 05 44.333 72.333 88.000 92.000 92.000 1.000 1.000 209 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 3.13 So sánh hệ số nhân chồi, tû lƯ chåi h÷u hiƯu, tû lƯ chåi rƠ tỷ lệ sống vườn ươm dòng PN46, PN47 PN14 Test of Homogeneity of Variances He so nhan choi (lan) Ty le choi huu hieu (%) Ty le ra re (%) Ty le song (%) Levene Statistic 173 1.256 602 1.180 df1 df2 2 2 Sig .845 350 578 370 6 6 ANOVA He so nhan choi (lan) Ty le choi huu hieu (%) Ty le ra re (%) Ty le song (%) Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 1.325 026 1.352 947.816 8.527 956.342 147.202 75.853 223.056 9.147 60.593 69.740 df 8 8 Mean Square 663 004 F 150.207 Sig .000 473.908 1.421 333.477 000 73.601 12.642 5.822 039 4.573 10.099 453 656 108 He so nhan choi (lan) Duncana Dong Dong PN47 Dong PN46 Dong PN14 Sig N 3 Subset for alpha = 05 2.7100 3.0033 3.6300 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Ty le choi huu hieu (%) Duncana Dong Dong PN47 Dong PN46 Dong PN14 Sig N 3 Subset for alpha = 05 28.300 30.533 51.100 062 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Ty le ra re (%) Duncana Dong Dong PN47 Dong PN46 Dong PN14 Sig N 3 Subset for alpha = 05 81.700 82.233 90.533 860 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Ty le song (%) Duncana Dong Dong PN47 Dong PN46 Dong PN14 Sig N 3 Subset for alpha = 05 92.000 93.333 94.467 393 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 ... (dòng PN4 6 = 0.17%, PN4 7 = 0.13%), 24 giê (dßng PN4 6 = 0.55%, PN4 7 = 0.48%) 48 (dòng PN4 6 = 0.94%, PN4 7 = 0.88%) sau giảm dần 72 (dòng PN4 6 = 0.82%, PN4 7 = 0.78% )và 32 96 (dòng PN4 6 = 0.76%, PN4 7... tài Nhân giống hai dòng bạch đàn urô (Eucalyptus urophylla S.T Blake) PN4 6 PN4 7 phương pháp nuôi cấy in vitro 3 Chương tổng quan vấn đề nghiên cứu 1.1 Khái niệm nhân giống in vitro Nuôi cấy. .. sống vườn ươm dòng PN4 6, PN4 7 với dòng PN1 4 2.4 Phương pháp nghiên cứu Sơ đồ nghiên cứu nhân giống in vitro hai dòng bạch đàn PN4 6 PN4 7 Cây cấp dòng vườn ươm (đối tượng cần nhân giống) Xử lý cho