MỤC LỤC TRANG Nhiệm vụ đồ án Lời cảm ơn i Mục lục ii Danh mục các hình v Danh mục các bảng vi Danh mục các từ viết tắt vii Chương I: Giới thiệu 1 1.1 Đặt vấn đề 1 1.2 Mục đích 1 1.3 Nội dung nghiên cứu 1 Chương II: Tổng quan 2 2.1 Tổng quan về một số vi sinh vật nhiễm trong thực phẩm 2 2.1.1 Escherichia Coli 2 2.1.1.1 Giới thiệu 2 2.1.1.2 Phân loại 2 2.1.1.3 Đặc điểm 2 2.1.1.4 Yếu tố độc lực 3 2.1.1.5 Khả năng gây bệnh 9 2.1.1.6 Các thực phẩm liên quan 9 2.1.1.7 Biện pháp phòng ngừa và kiểm soát 9 2.1.2 Listeria monocytogenes 9 2.1.2.1Giới thiệu 9 2.1.2.2 Phân loại 10 2.1.2.3 Đặc điểm 10 2.1.2.4 Yếu tố độc lực 10 2.1.2.5 Khả năng gây bệnh 12 2.1.2.6 Các thực phẩm liên quan 12 2.1.2.7 Biện pháp phòng ngừa và kiểm soát 12 2.2 Tổng quan về Salmonella sp. 13 2.2.1 Lịch sử phát hiện 13 2.2.2 Phân loại 13 2.2.3 Đặc điểm 14 2.2.3.1 Đặc điểm chung và đặc điểm nuôi cấy 14 2.2.3.2 Tính chất hóa sinh 15 2.2.4 Cấu trúc của Salmonella 15 2.2.5 Yếu tố độc lực 17 2.2.5.1 Nội độc tố - Endotoxin 17 2.2.5.2 Độc tố đường ruột 18 2.2.5.3 Độc tố tế bào 19 2.2.6 Cơ chế gây bệnh 19 2.2.6.1 Cơ chế gây bệnh thương hàn 20 2.2.6.2 Cơ chế gây nhiễm khuẩn và nhiễm độc thức ăn 21 2.2.7 Nguồn gốc lây nhiễm 21 2.2.8 Tình hình nhiễm Salmonella ở Việt Nam và trên thế giới 22 2.2.8.1 Trên thế giới 22 2.2.8.2 Trong nước 23 2.3 Các phương pháp phát hiện Salmonella 24 2.3.1 Phương pháp truyền thống 24 2.3.1.1 Nguyên tắc 24 2.3.1.2 Phương pháp thực hiện 25 2.3.2 Phương pháp hiện đại 29 2.3.2.1 Phương pháp PCR 30 2.3.2.2 Phương pháp ELISA 34 2.4 Các biện pháp kiểm soát Salmonella trong thực phẩm 34 Chương III: Nội dung và phương pháp nghiên cứu 36 3.1 Địa điểm và thời gian 36 3.2 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu 36 3.3 Vật liệu tiến hành thí nghiệm 36 3.3.1 Các dụng cụ và hóa chất thí nghiệm 36 3.3.2 Các môi trường sử dụng 36 3.4 Nội dung thực hiện 37 3.5 Phương pháp nghiên cứu 38 3.5.1 Quy trình phân tích 38 3.5.2 Thuyết minh quy trình 39 3.6 Kết quả 45 3.6.1 Kết quả cảm quan 45 3.6.2 Kết quả đánh giá mức độ nhiễm Salmonella 46 Chương IV: Kết luận và kiến nghị 47 4.1 Kết luận 47 4.2 Kiến nghị 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC
Salmonella Chương I: GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề !" #$ $!%& # !'! ( )( ( !#* ( + !" #$,-!./0 1)(2!!3 !" #45!$$ $ &!6. 7 ! - ! !" #8 ,+ 2 Clostridium butolinum, Escherichia Coli, Listeria monocytogenes…!Salmonella$$ -! !.Salmonella ! 6 Enterobactriaceae, )9!2:$;!<'!$)9&!6( . =!#(!!> ! !?1)9$ ( #(!9 @2 ( #A#A ?)9Salmonella!B!" 9& C !$D! SalmonellaE (!FG: Salmonella $!-? H-!( . 1.2 Mục đích IFG!-?3-!!2J;$!" # $!Salmonella * !? H. 1.3 Nội dung nghiên cứu IK& CL --M(& !?$ : ' H!-? H-!. IK& C ( #(!9Salmonella$N!)9#(##A >. OPQRS.QTP$ U SPQK;QV& Salmonella Chương II: TỔNG QUAN 2.1 Tổng quan về một số vi sinh vật nhiễm trong thực phẩm 2.1.1 Escherichia Coli 2.1.1.1 Giới thiệu IEscherichia Coli,5,5W- 5 XUYZ[\U]UU^!)( -_ 2J`#(!9UYYZ. IE.Coli$!!!$& 8 H9)!2J %2J!2 @$ & H)9;!<. IE.Coli02a -b,+$B& C-6 #!b !_" -6 &$-6 . HE.coliUc $B2a & C!.K!$!",!6 -6 0!2a ,"!& :-%& C$. 2.1.1.2 Phân loại IP#3Escherichia Coli2a N'#$ O*Bacteria K$Proteobacteria V*#Gamma Proteobacteria dEnterobacteriales Q6Enterobacteriaceae 7Escherichia V$Escherichia Coli 2.1.1.3 Đặc điểm IE.Coli$!" O8 !2* !)!>c\efghZ f.i!-?8! HE.Coli j2'! B$ 1,. IE.Coli 1&532J$ 1-: E.Coli 1-k,B-Q c SB-b,+2a l ) H !!!B!2JS- ,5N )N-5& 1#1 )N H-! $ ,! . b9PmXP5-\ m-5^-cn!8-nY !,2:!8 . OPQRS.QTP$ c SPQK;QV& Salmonella Qc.UPEscherichia Coli 2.1.1.4 Yếu tố độc lực IK2J! E.coli!$o- ( 3 !? ( 9 Z 8SW7XS!NI#, E.Coli^L PW7 XP5!N5 E.Coli^ $ WQW7 XW!55 E.Coli^ WmW7 XW!5#!5 E.Coli^WW7XW!5!N5 E.Coli^WpW7XW!55!5 E.Coli^$WkW7XW!5-5E.Coli^. a) Nhóm STEC IQ9 (!!( 6!& E.Coli $.&6P5!N5 E.Coli XPW7^2a q $ !( &XU][[^ L! $#(!99 -1N! !? ,A!')$P5.& 6W!55 E.Coli XWQW7^$,,A$&'!!$N!'! $ C'!9XK!$#5U]Y]^.P$!!S!NI#, E.Coli XSW7^X!2* 6$SI5!N#, E.Coli ISVW7^ rs1 -1- !? !')$?2 !?S. ISW7-1N! !?SI5!NXS!^ A6$S!NXS!N^ P5!NXP^.Q6 !?S!Nl 8B#1C t* $S!NU$S!Nc.S!NU !8)1!l !S!Nc!!F!!"!3 -)!#52S!Nc S!Nc)S!Nc5S!Nc.i!,ASW7 !-1-S!NU S!NcL 1S!NU$S!Nc$! 8,3 HS!Nc. IQ !?S!NU$S!Nc2a !3!>Z!:ud ? 2a#!b[[R$U!:up ?2a#!becR.:up l#5#!,5pUcYR$#5#!,5pcnR?*)v ?,-w. m5#!,5pU 3!!85x5$#5#!,5pc 9+y'!!:up$ !:ud.K!:udz# !?'!a#*5 5#!L 9O)e X)!- 5,5^9,9!&)L! H!')$5!5XS!Nc5 5 5#!$O)n^.S2a $)&!!')$!:up'!')$ !$!( &!#{hS H)-5.m5#!,5pU 3!!85x53! 2!KI -,-5 y!!? ,5j|KpcYS H)-5, !%3 -"!Fa##!5.RB!Fa#2a #!5!')$)u S!N!( X!')$B H!!')$)B!!')$P5!')$Q5 OPQRS.QTP$ e SPQK;QV& Salmonella )! C!')$$ 5 5#!$O)e5 5#!O)n?*S!Nc5^-} '!.QG1 !')$!,S!N$ ( '!? " ( HSW7$-"23 !')$!!& 1$&'!!$N!'!XQ5 !- \Q7^.S"23!')$!$3 (,S!Nc5-}&9!2a#< !H%5. I~'!?)(,8 HSW7•WQW702a C$!A G!6!-"uu%!./ 8$!!#!5$ $ !62a#!b]n\][R.k!2a 0)%5eae (E.Coli !! ,5ww ^. k!!F!2:,3)(,8$#(HX!! I ,I5ww p•W^%!$,)( L!$!')$)BXR5)5$ !U]]e^.O5eae $ @2a !!%WmW7.O5eae !F!2: p•W$!!-? ( 5v!&<)9eZZ)X6$<2 3!')$!\ -w5!5 !55ww 55!VWW^.P<VWW HSW7•WQW7 C50 !05 5#! H!X!- !5, !5 5#!^$!-?5( .P<VWWB r$9 $ A$ 9H 9 !$!F!2:p•W.&B#1!! 1SW7 5eae2!! 1WQW7 5eae. I ~' !? ( &G ' " H SW7 $ 9 !3 5!55- XWQW7IQ^ $ ! 1 !? ! u 9! WpSU X5!55!55!\-!)5!N\U^. WQW7IQ2a 0)%5!&#-, {hiRX#€UZ[^$ #-,$2a !!%2!! 1 ( ,A€UZ[Q[$ @(#F )' 1,ASW7I€UZ[XK!$#5U]]Y^.& #-, $ -"9,9 H!#5ln6 %X#55,w5 €|•^$hlyCABD.hlyA $5 !z % 5-. / !?! u9!WpSUX!&2a B!1%WpW7$ WpW75!I-!)55!5!N U^ @2a !!%,ASW7. G!6 HWpSU?*1 )9 HSW74 22a )'! 2 %!$!2Ja#!& 1 B ($!2J!% 2J;SW7. b) Nhóm EPEC I7( '!? " 8)l5eae0#!5! !'! 9 !3!F!2:,3p•W#-,Zh\[hi,XWp•^0d•m OPQRS.QTP$ n SPQK;QV& Salmonella X),5\w#-^mW|X#-,\5 ,5,5!^$V5XVWW\5 ,5, 5!^. 7( #!5 !'! W-#p W-#d W-#R W-#• W-#O $ ipm X! ,\-- !5,#!5^WpS\U 1#(H!')$)B$ 7RX7!5!,-!5,!N^ c) Nhóm ETEC IKWW7 G'!u " 8$ !?! X5!5!N^$'!?uuX x!w !\7•^. I/ !?!5!5!N ‚KWW7lE.Coli !38!!!!3 !?2J!$S$V.WW7)9)v ( )($)L! $!$!'! !?!$!!!3!'!,u .KWW7 !& 1!BG-"!'! !?2J!V$S.E.Coli $ ! r !'! !?VL r!'!SL !!'! 1V$S. / !?B u9!XQ5!I)5!NIV^/ !? V HE.Coli $#5#!,5 &9@L! !z $ C * !?!1 X 5!N\7^,Vibrio cholerae !'!.V$7?L !82 !z !!" ,X?1Yhƒ^!2:l 5 5#! 3!!85x$!( H!&!zB !')$. V c-5# 8$VIk$VIkk.VIk$VIkk B #1C t L!;,u . VIk2a !'!)%,AE. coli )9!&2J$!z.7AVkk 2a !! H'%E. coli !&!z$'% 2J.VIk$!#5#!,51Y{R2a !3)%U! :upcY R$Z!:udUUZR.:up u!( 9 !3!!8 5x5 H !?l#5#!,5pU$#5#!,5pc&'!)% ?,-w. K!:ud-y#N'#!$A&'! y y*-,5OiU$ &'!j„*ORU)$$ #!5! \ z$ ( 5 5#! HV.Q 3VIk &9$ !#1 C t!#*$V#XV#I k^!&2a ##!>5$ VXVIk^2a ##!>2J.O50 V$elt lt-I v!& #-,$#-,$ ! C 150S $•L 50 (& H'!?uuX x!w !!5 I7•p^. OPQRS.QTP$ Z SPQK;QV& Salmonella S !?$)$ z, !!' )$J9!? HO./8 ' HV!!')$$5x ,5!5 -5v%*#$$ H!')$)B!.m5#!,5pU 3! !8pRmI)-!-w5-5 #pRmI)-!>KpR' H #!5&'! OmXOmI),#!5^$OS3!5x5 ,5!5 -5$! pimAX pim^!!')$.P5x5 pimI,5#5,5!#!5-5Xp -5^2a 6!,4'-"#-# & ,5X7 I ^%$!')$ )B2a!G(C )!2J.'! G1, $8 !8 !')$)&,2* !'!7I$ 1-"#!+ K7)%!')$ B.Q$2a !A!! t!5-", !+ H2* !>!')$$A !!& 1 XK!$#5U]]Y^. iL ,<-"8 !8 H7 I ,-"! 2a pim!!')$$ ( 1!8 F : '!& 1 HV$ 7$ $ )v C !v(#C!!'!?* !?$ : '#C !3#:.i! : '!( ( H !? &G' #-!,WXmOWU$mOWc^$'!?3!! .S"!Fa#$ # !8 ! H , , 2 #-!, $ 5!55 !8 !8 -" ( !91$8 !8 !.7: '!( ( !C &G'9!!X5!5 5- --!5\WKS^A$-"!'!%!.7: '!C)$7$V (#C&!,3…. KVIkk?*VIk$71ZZIZ[ƒ% !:up2B?*VIk$7%!:ud.VIkk$! pim!!')$G : '!2:!"2VIk2VIkk-b,+ORU$ 5 5#!!OiU.K20%!&VIkkB &G')9!& 2J $!z. / !? u9!XQ5!I-!)5!NIS^ K2a * VS !62a#!bj$ ?,-w H1!8 1 u9! H !?$.S2a !$c$S$S)( !z $ : '3!.O50 1c2a !! H'!& #-,$$50S @2a !!!&!-#-.S!X A6$ SIk^ 2a !3 )% WW7 $ ! $ O ( 2 Yersinia OPQRS.QTP$ { SPQK;QV& Salmonella enterocolitica $V. cholerae \€U.S?Zhƒ!!" ,* !? u 9!WpSU HWpW7.O A )( ( v!$,A HWW7 @ !-1- !?WpSU$ !?S.7AS) r2a !!% WW7. S$!#5#!,5lUYIU] ,*!6 2a#!b1cR.S2a !$c3$S#XS# 5Sk^ ##2a !&!&5$SXSSk)^##!&2J.71c 3 !? !2a !!%,AWW72J.|5 5#! 8 HS$ 5x5N&$O77X!5 -57^ ! 65x55 5#! -5.S"'!a# HS$O7I78 !8 3!!8O7,4'9 ! 2a Oim)$.Q3!$ ? <,4'-"8 !8 !'!7 I L 1-"#!+K7-"!'! !j!!.S) S) H' &G ',AWW7##!>5L ,< @ )( ($ HWW72J @-1-S).B2SS)!F!2:L!B6 !& *#)B!2!!')$ H)B!$!5! #.|5 5#! HS) 22a )'!sL ,<2J! v !? !'!a#BL 9*$!')$ !!2* $!!')$.B!3 -"!'!7 I 2SS)8 !8 !')$!!'!) )!XQ7€ e I ^S)B$ ! pim Oim)$L ,<8 !8 !2a )$!>3 )$.S) @8 !8 #!8 mOWc$-5!!>2J! vWKS ! @ &G'(#C!'!)% !?$XQ!!-)-U]]c^. I~'!?uuX7•^ 7: '$WW7'!,8$ 2!z!&*#$ !02a & C†./!& 1WW7!'!,8$!' )$!J$B!&)L! H6$'!?uuX7•^.7•p !2a #3,"!&L !8!(.7e3 8l3BG5 CBG5 ,3)B !z 1.O5 H7•p !2J2a 0!&#-, @$:0 !?S$•L V. d) Nhóm EAEC IK'!? " 8 HWpW7)l ( ,)(,8'! !#pp•X5!5,5-w)5^'!?A)(,8'!!#| #!5m5!$ !?WpS\U.p••2a N5$'!?G'!u " .d3 OPQRS.QTP$ [ SPQK;QV& Salmonella pp•02a )'!'lpp••kpp••kk$pp••kkk!3k$3kk !z )3kkk !z ,3-a&)9!.7( pp•!3&)(,8 l3 &!')$Q5#\c.~'!?| !AA-")9 H ( pp•.m!5m5!2a !'!$$-"!+,u $ )B!&.WpS\U 1#(H!')$)B.K$ ( '!? " &!&WpW7 A!'!!#!5$!($$!!)v #!5G$.7( '!? " &!& HWpW7 H'2a 0 )% ( 5v!&#-, #!b2a{hiR.i!-?'!? " 2a 0 !& ( 5!&;-y !2a & C. e) Nhóm EIEC IWkW7)9 H',1N#$&3 3!$. 1N#2a 0)%5!&#-,UnhiR.7( 5!&#-, $0 ( (&N#Xk#p'k#Rk#k-#-, !5^.WkW7 A 1-1N! !?!-?Shigella. O50 !?$ !&$senXS55!5!N^ : ')9?‡. WkW7N#$!!')$)B3!$$!& ( !z!" )$$ &!)$!2:#(H!')$$N- ( !')$( . 2.1.1.5 Khả năng gây bệnh IE.Coli$& ( )92!& 1&2J!'! 9&2J!.V$!!& 8)9; '!$ &!2JL#!)9&$0&#F%!„* -.E.Coli AL#!;!<3;!<!)j. I ( 3 !? HE.Coli !?S$!2a )'!'!&2J$H3 ( #! H!')$)B!.K N#$!')$)B3!$C 'G(!!Fa##!5$ '!!' )$.QG1$&3!$N!'!!& 1#2(.K !2Ja#6!bL !!H!. 2.1.1.6 Các thực phẩm liên quan I7( !!-(!,u )9X7R7^!8v YZƒl? E.Coli l? $!" #.&!" !')!T-"!&!+!" #; #XL )9!$#-z ^ !,4'9 ;)9.7( !" # 2a N( u$l)9)l!u!)AN!u!Nz N8 -BXB OPQRS.QTP$ Y SPQK;QV& Salmonella 8^- 2!9!!<#B2* !( 2!9!!< j H 1$2* . 2.1.1.7 Biện pháp phòng ngừa và kiểm soát IQ9 2 )9#(##A>L 9./#A; 2J!&,E.Coli!" 9 ( )9#(##A>BL 9 ? ( 32J!( . I/#A;2J!'!9,E.Coli!" 9- <B$)#-,+ $./!u3!> ( '!? :( E.Coli$)9 :G!6. 2.1.2 Listeria monocytogenes 2.1.2.1 Giới thiệu IKU]cni$ -"!G(!& C!,u )9 !& ( !2a !890##2a ! H-!!> ( 3 # H ( !)u)9.SB H$!& ( !j53!! 9!2a!)3 :X !--^B L!& $Bacillus monocytogenes.d-!3Kmm5 & C-"Yersinina pestis!& !0##2a !> !! H$L!!& $ Listeria hepatolitica.V3$$!$ B!#)9!2a * H Hi.78m50N! !!&* ( H$$Listeria monocytogenes. 2.1.2.2 Phân loại O*Bacteria K$Firmicutes V*#Bacilli dBacillales Q6Listeriaceae 7Listeria V$Listeria monocytogenes 2.1.2.3 Đặc điểm I7( $Listeria$!" O,2: 8 !2* yXhn\ hZghZ\chf^ z6 !& ( B!2JB B ,B- )$. ˆ ch 7 z , )vB6 NG! X#5! - w5^2-",BG-(!2a %e[ 7.7z$u8 B)y!) $ !-!2%!!19!,!>e\ nZ 7X!?2$eh\e{ 7^L ,<!? 6 %9!!#$! .7z @ OPQRS.QTP$ ] SPQK;QV& Salmonella 6 !&!1#Q,!!-? H !6 %#Q]{2 3!9!?2%#Q:L B!2J!!8. Q c.c P Listeria monocytomonogenes 2.1.2.4 Yếu tố độc lực I V-!5- € XVV€^ $ ' !? " 8 H Listeria monocytigenes #t#!(!j-"!" )$.VV€ ?2a#!bZY{ R!$)%! o##5#!,5:lZc] ,-.!"K 3,9 L H!!",9 HO,2:# !& !8(2* $9!8 ,2:2a !5-)%ch‡2* . !"$0!" !'# #!5$2a # y!-u!8-5cZ.'!G1 $VV€2a )y!!> ,c{$!#!b#!5,$Zhn$ !6 2a#!bZZYR. IVV€! 6 !?y 5-!52a 3!)%!2a !3)%'! ( O,2:.Q3!!81 H ( !?$)%1 )*!!-?!( $)u0)%-"N$)9 5-!5L (!(-!5#!-€.7!-2a 3!)%! ! -!5:% <7$ z,;)u)!3!)%-"NL ,< -!5$ !2a !!')v5$B$! C 1.7z!3&o B&!+ *2J8)&!&'eh!$ C 5-!5.7: '3! H z,"$-"!2:!( * 5-!5 C B r$u!8y'!$ A2!!( $!F3! H 5x5,4'G(!5 H1ch\Yh!N5!$ !z AL ?A . OPQRS.QTP$ Uh SPQK;QV& . H Salmonella - !?-) !5 ?3 E.ColiShigella$ 1U-? H Salmonella ( . 2.2.4 Cấu trúc của Salmonella I Salmonella . SPQK;QV& Salmonella O? Salmonella lignieresU]hh IVz ( $ Salmonella 2a L!!&!5 C-$