PHÂN LẬP MỘT SỐ DÒNG NẤM BẢN ĐỊA CÓKHẢ NĂNG PHÂN HỦY VẬT LIỆU HỮU CƠ CHỨACELLULOSE VÀ LIGNIN TỪ NỀN ĐẤT THÂMCANH LÚA TẠI XÃ PHONG HÒA, HUYỆN LAIVUNG,

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN “PHÂN LẬP MỘT SỐ DÒNG NẤM BẢN ĐỊA CÓ KHẢ NĂNG PHÂN HỦY VẬT LIỆU HỮU CƠ CHỨA CELLULOSE VÀ LIGNIN TỪ NỀN ĐẤT THÂM CANH LÚA TẠI XÃ PHONG HÒA, HUYỆN LAI VUNG, TỈNH ĐỒNG THÁP” TSV2014-54 Thuộc nhóm ngành khoa học: Cơng nghệ sinh học môi trường Cần Thơ, 12/2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN “PHÂN LẬP MỘT SỐ DỊNG NẤM BẢN ĐỊA CĨ KHẢ NĂNG PHÂN HỦY VẬT LIỆU HỮU CƠ CHỨA CELLULOSE VÀ LIGNIN TỪ NỀN ĐẤT THÂM CANH LÚA TẠI XÃ PHONG HỊA, HUYỆN LAI VUNG, TỈNH ĐỒNG THÁP” TSV2014-54 Thuộc nhóm ngành khoa học: Công nghệ sinh học môi trường Sinh viên thực hiện: Võ Thị Ngọc Cẩm Giới tính: Nữ Dân tộc: Kinh Khoa: Nông Nghiệp & Sinh Học Ứng Dụng Năm thứ: tổng số năm đào tạo Ngành học: Khoa Học Cây Trồng, chuyên ngành: Nông Nghiệp Sạch Khóa: 38 (2012-2016) Người hướng dẫn: Ts Nguyễn Khởi Nghĩa, Bộ Môn Khoa Học Đất Cần Thơ, 12/2014 MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC BẢNG BIỂU iii DANH MỤC HÌNH iv DANH MỤC NHỮNG TỪ VIẾT TẮT vi THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI vii THÔNG TIN VỀ SINH VIÊN ix MỞ ĐẦU 1.1 Tổng quan tình hình nghiên cứu thuộc lĩnh vực đề tài nước 1.1.1 Trong nước 1.1.2 Ngoài nước 1.2 Tính cấp thiết đề tài 1.3 Mục tiêu đề tài 1.4 Phương pháp nghiên cứu 1.4.1 Thời gian địa điểm thí nghiệm 1.4.2 Phương tiện 1.4.2.1 Thiết bị thí nghiệm 1.4.2.2 Các hóa chất thí nghiệm 1.4.3 Phương pháp 1.4.3.1 Nội dung nghiên cứu 1: Phân lập số dịng nấm có tiềm phân hủy cellulose lignin 1.4.3.2 Nội dung nghiên cứu 2: Đánh giá khả phân hủy số vật liệu hữu từ phế phẩm nông nghiệp chứa cellulose lignin điều kiện tiệt trùng 17 dòng nấm phân lập 1.4.3.3 Nội dung nghiên cứu 3: Đánh giá khả phân hủy số vật liệu hữu từ phế phẩm nông nghiệp chứa cellulose lignin điều kiện không tiệt trùng dòng nấm tuyển chọn 10 1.4.3.4 Nội dung nghiên cứu 4: Giải mã trình tự đoạn gene ITS dòng nấm tuyển chọn 11 1.5 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 1.5.1 Đối tượng nghiên cứu 13 13 1.5.2 Phạm vi nghiên cứu 14 KẾT QUẢ - THẢO LUẬN 15 2.1 Đặc tính hóa học mẫu đất số vật liệu hữu thí nghiệm 15 2.2 Kết nội dung nghiên cứu 1: Phân lập số dịng nấm có tiềm phân hủy vật liệu hữu chứa cellulose lignin 16 i 2.3 Kết nội dung nghiên cứu 2: Đánh giá khả phân hủy số vật liệu hữu từ phế phẩm nông nghiệp chứa cellulose lignin điều kiện tiệt trùng 17 dịng nấm phân lập 19 2.3.1 Xác mía 19 2.3.2 Mụn dừa 20 2.3.3 Rơm 21 2.3.4 Vỏ trấu22 2.3.5 Mùn cưa 23 2.3.6 Bã cà phê 24 2.4 Kết nội dung nghiêm cứu 3: Đánh giá khả phân hủy số vật liệu hữu từ phế phẩm nông nghiệp chứa cellulose lignin điều kiện khơng tiệt trùng dịng nấm tuyển chọn 25 2.4.1 Mụn dừa xác mía 25 2.4.2 Rơm bã cà phê 26 2.4.3 Vỏ trấu27 2.4.4 Mùn cưa 28 2.5 So sánh khả phân hủy số vật liệu hữu chứa cellulose lignin dòng nấm tuyển chọn hai điều kiện thí nghiệm tiệt trùng khơng tiệt trùng 29 2.6 Kết giải mã trình tự đoạn gene ITS xác định mức độ loài bốn dòng nấm phân lập thể khả phân hủy cao vật liệu hữu chứa cellulose lignin 31 KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ 36 3.1 Kết luận 36 3.2 Kiến nghị36 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 ii DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 2.1 Một số đặc tính lý hóa học mẫu đất thí nghiệm (Phịng phân tích Bộ Mơn Khoa Học Đất, Khoa Nông Nghiệp & Sinh Học Ứng Dụng, Trường Đại Học Cần Thơ) 15 Bảng 2.2 Một số đặc tính hóa học vật liệu hữu thí nghiệm (Phịng phân tích Bộ Mơn Khoa Học Đất, Khoa Nông Nghiệp & Sinh Học Ứng Dụng, Trường Đại Học Cần Thơ) 16 Bảng 2.3 Một số đặc tính hình thái khuẩn lạc 17 dòng nấm phân lập từ mẫu đất thâm canh lúa 16 iii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Sáu vật liệu hữu chứa cellulose lignin dùng thí nghiệm Hình 1.2 Sự phát triển sinh khối hai dòng nấm phân lập PH-L5 PH-L3 môi trường BHM bổ sung 0,5% Malt Extract lỏng sau ngày nuôi cấy 12 Hình 2.1 Hai dạng cuống bào tử nấm điển hình cho 17 dòng nấm phân lập: (A) cuống bào tử giống Aspergillus sp (B) cuống bào tử giống Penicillium sp quan sát kính viển vi vật kính 100 17 Hình 2.2 Hai dạng bào tử nấm điển hình cho 17 dịng nấm phân lập: (A) bào tử dạng hình cầu (B) bào tử dạng hình hạt lúa quan sát kính viển vi vật kính 100 18 Hình 2.3 Hai dạng sợi nấm điển hình cho 17 dịng nấm phân lập gồm: (A) Sợi nấm có vách ngăn (B) Sợi nấm khơng có vách ngăn quan sát kính hiển vi vật kính 100 18 Hình 2.4 Khả phân hủy xác mía điều kiện tiệt trùng 18 dịng nấm thử nghiệm sau 30 ngày ni cấy (n=3 độ lệch chuẩn) .20 Hình 2.5 Khả phân hủy mụn dừa điều kiện tiệt trùng 18 dòng nấm thử nghiệm sau 30 ngày nuôi cấy (n=3 độ lệch chuẩn) .21 Hình 2.6 Khả phân hủy rơm điều kiện tiệt trùng 18 dòng nấm thử nghiệm sau 30 ngày nuôi cấy (n=3 độ lệch chuẩn) .22 Hình 2.7 Khả phân hủy vỏ trấu điều kiện tiệt trùng 18 dòng nấm thử nghiệm sau 30 ngày nuôi cấy (n=3 độ lệch chuẩn) 23 Hình 2.8 Khả phân hủy mùn cưa điều kiện tiệt trùng 18 dịng nấm thử nghiệm sau 30 ngày ni cấy (n=3, độ lệch chuẩn) 24 Hình 2.9 Khả phân hủy bã cà phê điều kiện tiệt trùng 18 dòng nấm thử nghiệm sau 30 ngày nuôi cấy (n=3 độ lệch chuẩn) 25 Hình 2.10 Khả phân hủy mụn dừa xác mía điều kiện khơng tiệt trùng dịng nấm PH-L3 Trichoderma sp sau 30 ngày nuôi cấy (n=4 độ lệch chuẩn) 26 Hình 2.11 Khả phân hủy rơm bã cà phê điều kiện khơng tiệt trùng dịng nấm PH-C5 dịng Trichoderma sp sau 30 ngày nuôi cấy (n=4 độ lệch chuẩn) 27 Hình 2.12 Khả phân hủy vỏ trấu điều kiện khơng thiệt trùng dịng nấm PH-L6 Trichoderma sp sau 30 ngày nuôi cấy (n=4 độ lệch chuẩn) 28 Hình 2.13 Khả phân hủy mùn cưa điều kiện khơng tiệt trùng dịng nấm PH-L4 Trichoderma sp sau 30 ngày nuôi cấy (n=4 độ lệch chuẩn) …………………………………………………………………………………29 iv Hình 2.14 Khả phân hủy sáu vật liệu hữu hai điều kiện thí nghiệm: tiệt trùng khơng tiệt trùng sau 30 ngày ni cấy bốn dịng nấm tuyển chọn 30 Hình 2.15 Một số vật liệu hữu thí nghiệm nghiệm thức đối chứng sau 30 ngày nuôi cấy 31 Hình 2.16 Một số vật liệu hữu thí nghiệm chủng số dịng nấm tuyển chọn sau 30 ngày nuôi cấy 31 Hình 2.17 Kết điện di sản phẩm PCR dòng nấm PH-C5, PH-L6, PH-L3 PH-L4 32 Hình 2.18 Kết định danh tên lồi dịng nấm PH-C5 theo độ tương đồng đoạn gene 18S rRNA 33 Hình 2.19 Kết định danh tên lồi dịng nấm PH-L3 theo độ tương đồng đoạn gene 18S rRNA 34 Hình 2.20 Kết định danh tên lồi dòng nấm PH-L4 theo độ tương đồng đoạn gene 18S rRNA 34 Hình 2.21 Kết định danh tên lồi dịng nấm PH-L6 theo độ tương đồng đoạn gene 18S rRNA 35 v DANH MỤC NHỮNG TỪ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Giải thích từ BHM Bushnell Hass Medium CMC Carboxyl methyl cellulose CTAB Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide DNA Deoxyribo Nucleic Acid ĐBSCL Đồng sông Cửu Long PCR Polymerase Chain Reaction vi BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI Thông tin chung: - Tên đề tài: “Phân lập số dịng nấm địa có khả phân hủy vật liệu hữu chứa cellulose lignin từ đất thâm canh lúa xã Phong Hòa, huyện Lai Vung, tỉnh Đồng Tháp” - Sinh viên thực hiện: Võ Thị Ngọc Cẩm - Lớp: Nông Nghiệp Sạch, Khóa 38, Khoa Nơng Nghiệp & Sinh Học Ứng Dụng - Năm thứ: tổng số năm đào tạo - Người hướng dẫn: Ts Nguyễn Khởi Nghĩa, Bộ Môn Khoa Học Đất Mục tiêu đề tài: Phân lập số dịng nấm có khả phân hủy số vật liệu hữu từ phụ phế phẩm nông nghiệp chứa cellulose lingin từ đất thâm canh lúa xã Phong Hòa, huyện Lai Vung, tỉnh Đồng Tháp Tuyển chọn định danh mức độ tên lồi số dịng nấm thể khả phân hủy cao số vật liệu hữu từ phụ phế phẩm nông nghiệp chứa cellulose lignin từ dịng nấm phân lập Tính sáng tạo: Việc phân lập tuyển chọn số dòng nấm địa từ đất thâm canh lúa xã Phong Hịa, huyện Lai Vung, tỉnh Đồng Tháp có khả phân hủy cao số vật liệu hữu từ phụ phế phẩm nông nghiệp chứa cellulose lignin giúp hiểu rõ ảnh hưởng môi trường ngoại cảnh lên thích nghi đa dạng di truyền cộng đồng nấm có chức phân hủy vật liệu hữu chứa cellulose lignin đất thâm canh lúa Thêm vào đó, ứng dụng dòng nấm phân lập đề tài vào việc phân hủy nhanh xác bã hữu có nguồn gốc từ phế thải nông nghiệp giúp làm giảm vấn đề ô nhiễm môi trường, đồng thời, sản xuất phân hữu giúp cải tạo đất tăng suất trồng phục vụ sản xuất nông nghiệp theo hướng hữu cơ, bền vững Kết nghiên cứu: Tổng cộng 17 dịng nấm có tiềm phân hủy vật liệu hữu từ phụ phế phẩm nông nghiệp chứa cellulose lignin phân lập từ mẫu đất thâm canh lúa xã Phong Hòa, huyện Lai Vung, tỉnh Đồng Tháp Kết khảo sát đánh giá khả phân hủy 17 dòng nấm phân lập cho thấy sau: Dịng nấm ký hiệu PH-C5 có khả phân hủy cao so với dòng thử nghiệm khác vật liệu rơm 47,6% 38,6% điều kiện tiệt trùng không tiệt trùng, đồng thời, dịng nấm cịn có khả phân hủy cao so với dòng khác vật liệu bã cà phê, phân hủy 48,1% 41,1% điều kiện tiệt trùng khơng tiệt trùng Trong đó, dịng nấm ký hiệu PH-L3 có khả phân hủy cao so với dịng khác xác mía với tỷ lệ 46,9% 32,8% điều kiện tiệt trùng khơng tiệt trùng, ngồi dịng nấm cịn có khả phân hủy 37,2% 30,8%, cao dòng khác vật liệu mụn dừa điều kiện tiệt trùng không tiệt trùng Riêng dịng nấm ký hiệu PH-L4 có khả phân hủy cao dòng khác chiếm 32,9% 27,6% trọng lượng khô mùn cưa điều kiện tiệt trùng không tiệt trùng Cuối cùng, dịng nấm ký hiệu PH-L6 có khả phân hủy vii cao dòng khác với vật liệu vỏ trấu, chiếm 50,9% 32,1% điều kiện tiệt trùng không tiệt trùng Kết giải mã trình tự đoạn gen ITS cho thấy dịng nấm định danh tên lồi theo thứ tự sau: Aspergillus fumigatus (PH-C5), Penicillium janthinellum (PH-L3), Aspergillus fumigatus (PH-L4) Rhizomucor variabilis (PH-L6) Đóng góp mặt kinh tế - xã hội, giáo dục đào tạo, an ninh, quốc phòng khả áp dụng đề tài: Kết nghiên cứu đóng góp mặt kinh tế xã hội giúp nông dân xử lý nhanh vật liệu hữu có nguồn gốc từ nơng nghiệp giúp giảm nhiễm mơi trường, đồng thời giúp nơng dân giảm chi phí sản suất tận dụng nguồn hữu có sẵn, ngồi ra, giúp nơng dân tăng thu nhập thơng qua việc sản xuất phân hữu từ phế phẩn nông nghiệp giúp cải thiện dinh dưỡng đất dẫn đến suất trồng cải thiện Công bố khoa học sinh viên từ kết nghiên cứu đề tài: Bài báo chờ xét duyệt để đăng tạp chí Khoa Học Trường Đại Học Cần Thơ Ngày 30 tháng 12 năm 2014 Sinh viên chịu trách nhiệm thực đề tài (ký, họ tên) Nhận xét người hướng dẫn đóng góp khoa học sinh viên thực đề tài: Đề tài nghiên cứu khoa học sinh viên Võ Thị Ngọc Cẩm đóng góp phần khơng nhỏ việc tìm dịng nấm có khả phân hủy cao vật liệu hữu có nguồn gốc từ nơng nghiệp nhằm xử lý chúng thành phân bón hữu giúp giảm thiểu ô nhiễm môi trường, đồng thời cải thiện dinh dưỡng đất, chất lượng suất trồng theo hướng bền vững cho vùng Đồng sông Cửu Long Ngày 30 tháng 12 năm 2014 Người hướng dẫn (ký, họ tên) Xác nhận Trường Đại học Cần Thơ (ký tên đóng dấu) viii gene 18S rRNA loài Rhizomucor variabilis với độ tương đồng 98% trình bày Hình 2.21 Do đó, dịng PH-L6 định danh lồi: Rhizomucor variabilis (PH-L6) Hình 2.21 Kết định danh tên lồi dịng nấm PH-L6 theo độ tương đồng đoạn gene 18S rRNA 32 KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ 3.1 Kết luận Qua kết đạt từ thí nghiệm đề tài nghiên cứu rút số kết luận sau: - Mẫu đất thâm canh lúa xã Phong Hòa, huyện Lai Vung, tỉnh Đồng Tháp có chứa cộng đồng nấm phân hủy cao hiệu số vật liệu hữu từ phế phẩm nông nghiệp chứa cellulose lignin điều kiện tự nhiên đa dạng di truyền - Trong tổng số 17 dòng nấm phân lập từ đất này, có dịng nấm có khả phân hủy số vật liệu hữu chứa cellulose lignin cao so với dòng nấm Trichoderma sp (sản phẩm Đại Học Cần Thơ), dòng nấm chọn dòng nấm đối chứng dương hai điều kiện thí nghiệm tiệt trùng không tiệt trùng vật liệu hữu thí nghiệm - Khả phân hủy dịng nấm tuyển chọn sáu vật liệu hữu chứa cellulose lignin điều kiện tiệt trùng cao so với điều kiện không tiệt trùng - PH-C5 dòng nấm phân hủy hiệu hai vật liệu hữu rơm bã cà phê - PH-L3 dòng nấm phân hủy hiệu hai vật liệu hữu cơ: xác mía mụn dừa - PH-L4 dòng nấm phân hủy hiệu vật liệu hữu mùn cưa - PH-L6 dòng nấm phân hủy hiệu vật liệu hữu vỏ - Bốn dòng nấm PH-C5, PH-L3, PH-L4 PH-L6 định danh tên loài theo thứ tự sau: Aspergillus fumigatus (PH-C5), Penicillium janthinellum (PH-L3), Aspergillus fumigatus (PH-L4) Rhizomucor variabilis (PH-L6) 3.2 Kiến nghị - Tiếp tục nghiên cứu số đặc tính sinh lý dòng nấm định danh như: ảnh hưởng nhiệt độ, pH, nồng độ muối lên phát triển sinh khối nấm, khả nhạy cảm với số loại thuốc kháng sinh, thuốc trừ sâu bệnh trồng phổ biến điều kiện phịng thí nghiệm - Kiểm tra khả phịng trừ sinh học (biocontrol) tiềm gây bệnh dòng nấm định danh hạt giống, trưởng thành số trồng phát triển vùng Đồng sơng Cửu Long - Kiểm tra khả hòa tan lân, cố định đạm tiết phytohormone giúp kích 33 thích sinh trưởng phát triển trồng dòng nấm định danh - Tiếp tục đánh giá khả phân hủy số vật liệu hữu từ phế phẩm nơng nghiệp chứa cellulose lignin dịng nấm định danh cách phối trộn vật liệu hữu theo tỷ lệ định điều kiện phịng thí nghiệm nhà lưới 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt: Hoàng Thị Thu Hương, 2012 Nghiên cứu tận dụng số phế phẩm nông nghiệp để xử lý nước cấp phục vụ cho sinh hoạt Đồ án tốt nghiệp kỹ thuật môi trường Trường Đại học Kỹ Thuật Cơng Nghệ TP Hồ Chí Minh Lê Thị Hồng Mai, 1989 Nghiên cứu khả sinh tổng hợp số đặc tính cellulase Aspergilus niger mơi trường lỗng Đại học tổng hợp Hà Nội Nguyễn Đức Lượng, 1996 Nghiên cứu tính chất số vi sinh vật có khả phân giải cellulase cao ứng dụng công nghệ xử lý chất thải hữu Nguyễn Hồng Thắm, 2009 Khả phân hủy trấu ảnh hưởng môi trường đến phát triển nấm Trichoderma sp., Rhizopus sp Đồng Sông Cửu Long Luận văn Thạc sĩ khoa học Nông nghiệp & SHƯD Trường Đại học Cần Thơ Nguyễn Lân Dũng, 1984 Vi sinh vật đất chuyển hóa hợp chất cacbon, nitơ NXB Khoa học kỹ thuật Hà Nội Nguyễn Như Thanh, 2004 Vi sinh vật học đại cương NXB Nông nghiệp Hà Nội Nguyễn Thị Trúc Hương, 2011 Khảo sát ảnh hưởng đến môi trường sản xuất xơ dừa xã An Thạnh-Khánh Thạnh Tân, huyện Mỏ Cày-Bến Tre Luận văn tốt nghiệp đại học Kỹ Thuật Cơng Nghệ TP Hồ Chí Minh Nguyễn Thị Xuân Duyên, 2009 Khảo sát tiềm ứng dụng phế phẩm nông nghiệp làm nguồn nhiên liệu sản xuất điện Luận văn tốt nghiệp Kỹ thuật môi trường Trường Đại học Kỹ Thuật Công Nghệ TP Hồ Chí Minh Nguyễn Xn Thành Phạm Văn Tồn, 2003 Công nghệ vi sinh vật sản xuất nông nghiệp xử lí mơi trường Nhà xuất nơng nghiệp Hà Nội 10 Phạm Văn Kim, 2000 Vi sinh vật chuyển hóa vật chất đất Bộ mơn Bảo vệ thực vật Khoa nông nghiệp sinh học ứng dụng ĐH Cần Thơ 11 Vũ Thị Bách, 2010 Nghiên cứu tận dụng phế phẩm nông nghiệp làm vật liệu xây dựng Đồ án tốt nghiệp kỹ thuật môi trường Trường Đại học Kỹ Thuật Công Nghệ TP Hồ Chí Minh Tài liệu tiếng anh: Fareeha, R; Nasreen, A.R; Uzma, H; Ikram, H, 2011 Solid state fermentation for the production of -glucosidase by co-culture of Aspergillus niger and A Oryzae 35 Pak J Bot., 43(1): 75-83 Ito, J; Fujita, Y; Ueda, M; Fukuda, H; Kondo, A, 2004 Improvement of cellulosedegrading ability of a yeast strain displaying Trichoderma reesei endoglucanase II by recombination of cellulose-binding domains Biotechnol Progr., 20 (3): 688– 691 Jeris, J.S; Regan, R.W, 1973 Controlling environmental parameters for optimum composting—Part I Comp Sci., 14(1):10-15 Kang, M; Rhee, Y, 1995 Cacboxymethyl cellulases active and stable at alkaline pH from alkalophilic Cephalosporium sp RYM-202 Biotechnol Lett., 17: 507-512 Kantelinen, A.; Hatakka, V A, 1989 Production of lignin peroxidase and laccase by Phlebia radiate Appl Microbiol & Biotechnol., 31: 234-239 Kirk, TK; Farrell, RL, 1987 The microbial degradation of lignin United States Department of Agriculture, Madison, Wisconsin Ann Rev Microbiol., 41: 465– 505 Lars, E; Berghem, R; Göran, P, L, 2005 The mechanism of enzymatic cellulose degradation isolation and some properties of a β-glucosidase from Trichoderma viride DOI: 10.1111/j.1432-1033 Markku, S; Tiina, M.P, 2012 The cargo and the transport system: secreted proteins and protein secretion in Trichoderma reesei J of Microbiol., 158 (1): 46-57 Subhosh, C.M.; Rajasekhar, R.B, 2012 Exoglucanase production by Aspergillus niger grown on wheat bran Ann of Microbiol., 63 (3): 871-877 10 Xing, F H; Navaneetha, S; Dayakar, V B; William, H; Daniel, M; Stephen, D; Jorge, V; Kenneth, R, 2013 Isolatetion and characterization of lignin-degrading bacteria from rainforest soil Department of chemical and biological engineering Colorado State University, Fort Collins, Colorado 11 Yang, J S; Yuan, H L; Wang, H X; Chen, W X, 2005 Purification and characterization of lignin peroxidase from Penicillium decumbens P6 World J of Microbiol & Biotechnol., 21: 435-440 36 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phân tích phương sai số liệu thống kê Bảng phân tích phương sai khả phân hủy bã cà phê 18 dòng nấm thí nghiệm Source Nghiem thuc Error Total S = 1.888 Level PH-C1 PH-C2 PH-L6 PH-C8 PH-C9 PH-C10 PH-C11 PH-C3 PH-C4 PH-C5 PH-C6 PH-C7 PH-L1 PH-L5 PH-L2 PH-L3 PH-L4 Control Tricoderma DF 18 38 56 SS 7615.86 135.48 7751.34 R-Sq = 98.25% N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 MS 423.10 3.57 F 118.67 P 0.000 R-Sq(adj) = 97.42% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Mean StDev + -+ -+ -+ 44.043 2.021 (*-) 21.761 1.625 (-*) 42.922 1.038 (-*) 38.609 2.361 (-*) 22.931 1.294 (*-) 41.688 1.471 (-*) 45.265 2.144 (*-) 24.500 2.203 (*-) 24.426 2.568 (*-) 48.081 1.550 (*-) 42.025 1.310 (*) 26.048 2.357 (*-) 38.897 1.532 (-*) 25.445 2.627 (-*) 25.350 2.385 (-*) 44.017 1.887 (*-) 42.384 1.560 (*-) 2.587 0.637 (-*) 26.261 1.863 (-*) + -+ -+ -+ 15 30 45 Pooled StDev = 1.888 Grouping Information Using Tukey Method Nghiem thuc N Mean Grouping PH-C5 48.081 A PH-C11 45.265 A B PH-C1 44.043 A B C PH-L3 44.017 A B C PH-L6 42.922 A B C PH-L4 42.384 A B C PH-C6 42.025 B C PH-C10 41.688 B C PH-L1 38.897 C PH-C8 38.609 C Tricoderma 26.261 D PH-C7 26.048 D PH-L5 25.445 D PH-L2 25.350 D PH-C3 24.500 D PH-C4 24.426 D PH-C9 22.931 D PH-C2 21.761 D Control 2.587 E Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Nghiem thuc Individual confidence level = 99.94% Bảng phân tích phương sai khả phân hủy xác mía 18 dịng nấm thí nghiệm Source Nghiem thuc Error Total S = 1.422 Level PH-C1 PH-C2 PH-L6 PH-C8 PH-C9 PH-C10 PH-C11 PH-C3 PH-C4 PH-C5 PH-C6 PH-C7 PH-L1 PH-L5 PH-L2 PH-L3 PH-L4 Control Tricoderma DF 18 38 56 SS 4581.16 76.81 4657.98 R-Sq = 98.35% MS 254.51 2.02 F 125.91 P 0.000 R-Sq(adj) = 97.57% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Mean StDev + -+ -+ -+3 42.100 1.153 (*) 35.300 2.000 (*-) 45.133 0.850 (-*) 44.800 1.082 (*-) 34.467 1.747 (-*) 40.800 0.721 (*) 41.700 1.929 (-*) 37.333 1.150 (*) 34.467 0.902 (-*) 42.767 1.686 (-*) 42.867 1.387 (-*) 33.200 1.908 (-*) 41.533 1.007 (-*) 41.000 0.819 (*-) 35.700 0.361 (-*) 46.900 1.127 (*) 42.100 2.152 (*) 3.967 1.401 (*-) 35.100 1.916 (*-) + -+ -+ -+12 24 36 48 N Pooled StDev = 1.422 Grouping Information Using Tukey Method Nghiem thuc PH-L3 PH-L6 PH-C8 PH-C6 PH-C5 PH-L4 PH-C1 PH-C11 PH-L1 PH-L5 PH-C10 PH-C3 PH-L2 PH-C2 Tricoderma PH-C4 PH-C9 PH-C7 Control N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Mean Grouping 46.900 A 45.133 A B 44.800 A B 42.867 A B 42.767 A B 42.100 B 42.100 B 41.700 B C 41.533 B C 41.000 B C 40.800 B C 37.333 C 35.700 35.300 35.100 34.467 34.467 33.200 3.967 D D D D D D D E Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Nghiem thuc Individual confidence level = 99.94% Bảng phân tích phương sai khả phân hủy mụn dừa 18 dịng nấm thí nghiệm Source DF SS Nghiem thuc 18 3402.01 Error 38 73.48 Total 56 3475.49 S = 1.391 Level PH-C1 PH-C2 PH-L6 PH-C8 PH-C9 PH-C10 PH-C11 PH-C3 PH-C4 PH-C5 PH-C6 PH-C7 PH-L1 PH-L5 PH-L2 PH-L3 PH-L4 Control Tricoderma R-Sq = 97.89% N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 MS 189.00 1.93 F 97.74 P 0.000 R-Sq(adj) = 96.88% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Mean StDev + -+ -+ -+33.233 1.160 (*-) 26.142 0.578 (*-) 31.392 0.880 (*-) 30.300 1.706 (*-) 26.082 1.742 (-*-) 34.333 1.258 (*-) 35.513 1.195 (-*) 27.711 1.616 (-*) 21.025 1.447 (-*-) 36.654 1.880 (-*) 34.610 1.397 (-*) 25.443 1.248 (*-) 29.984 0.880 (-*-) 21.781 0.633 (-*) 22.311 2.162 (*-) 37.208 1.454 (*-) 25.571 1.850 (-*) 3.688 0.759 (-*) 20.283 1.275 (*-) + -+ -+ -+10 20 30 40 Pooled StDev = 1.391 Grouping Information Using Tukey Method Nhiem thuc PH-L3 PH-C5 PH-C11 PH-C6 PH-C10 PH-C1 PH-L6 PH-C8 PH-L1 PH-C3 PH-C2 PH-C9 PH-L4 PH-C7 PH-L2 PH-L5 PH-C5 Tricoderma Control N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Mean Grouping 37.208 A 36.654 A 35.513 A B 34.610 A B 34.333 A B C 33.233 A B C D 31.392 B C D 30.300 C D 29.984 D 27.711 26.142 26.082 25.571 25.443 22.311 21.781 21.025 20.283 3.688 E E F E F E F G F G F G G G H H H I H I H I J I J J J K Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Nghiem thuc Individual confidence level = 99.94% Bảng phân tích phương sai khả phân hủy mùn cưa 18 dịng nấm thí nghiệm Source Nghiem thuc DF 18 SS 2372.21 MS 131.79 F 80.66 P 0.000 Error Total S = 1.278 Level PH-C1 PH-C2 PH-L6 PH-C8 PH-C9 PH-C10 PH-C11 PH-C3 PH-C4 PH-C5 PH-C6 PH-C7 PH-L1 PH-L5 PH-L2 PH-L3 PH-L4 Control Tricoderma 38 56 62.08 2434.30 R-Sq = 97.45% N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 1.63 R-Sq(adj) = 96.24% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Mean StDev + -+ -+ -+20.333 1.473 (*-) 14.869 0.131 (-*) 18.089 1.273 (*-) 29.161 0.982 (*-) 18.199 1.070 (*-) 19.440 1.402 (*-) 14.167 1.150 (*-) 17.028 1.196 (*-) 18.608 1.795 (-*) 25.462 1.429 (*-) 16.784 1.033 (-*) 15.990 1.399 (-*) 29.048 1.203 (*-) 14.842 0.919 (-*) 15.943 1.990 (-*) 18.510 1.569 (-*) 32.525 1.430 (-*) 3.207 0.434 (*-) 14.012 1.083 (*-) + -+ -+ -+10 20 30 40 Pooled StDev = 1.278 Grouping Information Using Tukey Method Nghiem thuc PH-L4 PH-C8 PH-L1 PH-C5 PH-C1 PH-C10 PH-C4 PH-L3 PH-C9 PH-L6 PH-C3 PH-C6 PH-C7 PH-L2 PH-C2 PH-L5 PH-C11 Tricoderma Control N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Mean Grouping 32.525 A 29.161 A B 29.048 A B 25.462 B 20.333 C 19.440 C D 18.608 C D 18.510 C D 18.199 C D 18.089 C D 17.028 C D 16.784 C D 15.990 D 15.943 D 14.869 14.842 14.167 14.012 3.207 E E E E E E E E E E F F F F F F F F G G G G G G G G H Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Nghiem thuc Individual confidence level = 99.94% Bảng phân tích phương sai khả phân hủy vỏ trấu 18 dịng nấm thí nghiệm Source Nghiem thuc Error Total S = 1.236 DF 18 38 56 SS 5034.21 58.02 5092.23 R-Sq = 98.86% MS 279.68 1.53 F 183.19 P 0.000 R-Sq(adj) = 98.32% Level PH-C1 PH-C2 PH-L6 PH-C8 PH-C9 PH-C10 PH-C11 PH-C3 PH-C4 PH-C5 PH-C6 PH-C7 PH-L1 PH-L5 PH-L2 PH-L3 PH-L4 Control Tricoderma N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Mean StDev -+ -+ -+ -+ 36.911 1.600 (*) 26.736 1.079 (*) 50.875 1.088 (*) 36.576 1.026 (*) 28.509 1.579 (*) 41.546 1.536 (*) 28.824 1.702 (*) 35.144 1.209 (*) 29.046 1.262 (*) 35.980 0.994 (*) 36.830 0.170 (*) 31.757 1.279 (*) 36.674 1.124 (*) 29.630 1.331 (*) 29.598 1.110 (*) 44.064 1.192 (*) 39.638 1.202 (*) 2.667 0.691 (*) 29.408 1.408 (*) -+ -+ -+ -+ 15 30 45 60 Pooled StDev = 1.236 Grouping Information Using Tukey Method Nghiem thuc PH-L6 PH-L3 PH-C10 PH-L4 PH-C1 PH-C6 PH-L1 PH-C8 PH-C5 PH-C3 PH-C7 PH-L5 PH-L2 Tricoderma PH-C4 PH-C11 PH-C9 PH-C2 Control N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Mean Grouping 50.875 A 44.064 B 41.546 B C 39.638 C D 36.911 D 36.830 D 36.674 D 36.576 D 35.980 D 35.144 31.757 29.630 29.598 29.408 29.046 28.824 28.509 26.736 2.667 E E E E E E F F G G G G G G G H H H H H H H I Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Nghiem thuc Individual confidence level = 99.94% Bảng phân tích phương sai khả phân hủy rơm 18 dòng nấm thí nghiệm Source Nghiem thuc Error Total S = 1.112 DF 18 38 56 SS 4490.17 46.98 4537.15 R-Sq = 98.96% MS 249.45 1.24 F 201.76 P 0.000 R-Sq(adj) = 98.47% Individual 95% CIs For Mean Based on Level PH-C1 PH-C2 PH-L6 PH-C8 PH-C9 PH-C10 PH-C11 PH-C3 PH-C4 PH-C5 PH-C6 PH-C7 PH-L1 PH-L5 PH-L2 PH-L3 PH-L4 Control Tricoderma N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Pooled StDev Mean StDev -+ -+ -+ -+-46.636 1.081 (*) 42.303 0.900 (*) 40.316 1.852 (*) 46.309 1.235 (*) 37.055 0.642 (*) 42.210 0.610 (*) 40.390 1.711 (*) 40.749 0.358 (*) 39.950 0.250 (*) 47.610 0.968 (*) 37.610 1.768 (*) 44.118 1.407 (*) 44.586 0.586 (*) 41.510 0.758 (*) 42.453 0.995 (*) 45.287 0.213 (*) 40.232 1.232 (-*) 4.565 0.811 (*) 39.485 1.577 (*) -+ -+ -+ -+-12 24 36 48 Pooled StDev = 1.112 Grouping Information Using Tukey Method Nghiem thuc BN6 PH-C1 PH-C8 PH-L3 PH-L1 PH-C7 PH-L2 PH-C2 PH-C10 PH-L5 PH-C3 PH-C11 PH-L6 PH-L4 PH-C4 Tricoderma PH-C6 PH-C9 Control N 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Mean Grouping 47.610 A 46.636 A B 46.309 A B 45.287 A B C 44.586 A B C D 44.118 B C D 42.453 C D 42.303 C D 42.210 C D 41.510 D 40.749 40.390 40.316 40.232 39.950 39.485 37.610 37.055 4.565 E E E E E E F F F F F F F F F F G G G G G G G H H H H H H H I Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Nghiem thuc Individual confidence level = 99.94% Bảng phân tích phương sai khả phân hủy vật liệu hữu bã cà phê dòng nấm PH-C5 Tricoderma sp Source Code Error Total DF 11 SS 2832.284 1.862 2834.145 S = 0.4548 Level PH-C5 Control Tricoderma MS 1416.142 0.207 R-Sq = 99.93% N 4 F 6845.82 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.92% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Mean StDev -+ -+ -+ -+-41.413 0.380 *) 3.927 0.399 (* 25.534 0.563 (* -+ -+ -+ -+-10 20 30 40 Pooled StDev = 0.455 Grouping Information Using Tukey Method Code PH-C5 Tricoderma Control N 4 Mean Grouping 41.413 A 25.534 B 3.927 C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Code Individual confidence level = 97.91% Bảng phân tích phương sai khả phân hủy vật liệu hữu mùn cưa dòng nấm PH-L4 Tricoderma sp Source Code Error Total DF 11 SS 1142.780 3.107 1145.887 S = 0.5876 Level PH-L4 Control Tricoderma MS 571.390 0.345 R-Sq = 99.73% F 1654.95 N 4 Mean 27.579 4.107 11.927 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.67% StDev 0.855 0.291 0.470 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -(*) (*) (*) -+ -+ -+ -+ -7.0 14.0 21.0 28.0 Pooled StDev = 0.588 Grouping Information Using Tukey Method Code PH-L4 Tricoderma Control N 4 Mean 27.579 11.927 4.107 Grouping A B C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Code Individual confidence level = 97.91% Bảng phân tích phương sai khả phân hủy vật liệu hữu mụn dừa dòng nấm PH-L3 Tricoderma sp Source Code Error Total DF 11 S = 0.4966 SS 1444.668 2.219 1446.887 MS 722.334 0.247 R-Sq = 99.85% F 2929.21 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.81% Level PH-L3 Control Tricoderma N 4 Mean 30.758 3.958 19.107 StDev 0.698 0.207 0.458 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -(*) (* (*) -+ -+ -+ -+ -7.0 14.0 21.0 28.0 Pooled StDev = 0.497 Grouping Information Using Tukey Method Code PH-L3 Tricoderma Control N 4 Mean 30.758 19.107 3.958 Grouping A B C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Code Individual confidence level = 97.91% Bảng phân tích phương sai khả phân hủy vật liệu hữu xác mía dịng nấm PH-L5 Tricoderma sp Source Code Error Total DF 11 SS 1687.708 3.409 1691.117 S = 0.6154 Level PH-L3 Control Tricoderma MS 843.854 0.379 R-Sq = 99.80% F 2227.98 N 4 Mean 32.802 5.400 27.453 P 0.000 StDev 0.679 0.296 0.767 R-Sq(adj) = 99.75% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ (*) (*) (*) + -+ -+ -+ 8.0 16.0 24.0 32.0 Pooled StDev = 0.615 Grouping Information Using Tukey Method Code PH-L3 Tricoderma Control N 4 Mean 32.802 27.453 5.400 Grouping A B C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Code Individual confidence level = 97.91% Bảng phân tích phương sai khả phân hủy vật liệu hữu vỏ trấu dòng nấm PH-L6 Tricoderma sp Source Code DF SS 1929.528 MS 964.764 F 1782.49 P 0.000 Error Total 11 4.871 1934.400 S = 0.7357 Level PH-L6 Control Tricoderma 0.541 R-Sq = 99.75% N 4 R-Sq(adj) = 99.69% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Mean StDev -+ -+ -+ -+-32.124 0.878 (*) 3.335 0.127 (*) 27.827 0.915 (*) -+ -+ -+ -+-8.0 16.0 24.0 32.0 Pooled StDev = 0.736 Grouping Information Using Tukey Method Code PH-L6 Tricoderma Control N 4 Mean Grouping 32.124 A 27.827 B 3.335 C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Code Individual confidence level = 97.91% Bảng phân tích phương sai khả phân hủy vật liệu hữu rơm dòng nấm PH-C5 Tricoderma sp Source Code Error Total DF 11 SS 2844.194 4.895 2849.089 S = 0.7375 Level PH-C5 Control Tricoderma MS 1422.097 0.544 R-Sq = 99.83% N 4 F 2614.62 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.79% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Mean StDev + -+ -+ -+ 38.589 0.927 (* 5.031 0.216 (*) 36.710 0.852 (*) + -+ -+ -+ 10 20 30 40 Pooled StDev = 0.737 Grouping Information Using Tukey Method Code PH-C5 Tricoderma Control N 4 Mean Grouping 38.589 A 36.710 B 5.031 C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Code Individual confidence level = 97.91%