K62CNSHC-13-620576-Đinh Thị Hiên-SH03006-Công nghệ tế bào động vật-Bài thi kết thúc học phần

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - BÀI THI KẾT THÚC HỌC PHẦN SH03006 - CÔNG NGHỆ TẾ BÀO ĐỘNG VẬT ĐỀ TÀI: Họ tên sinh viên : Đinh Thị Hiên Mã sinh viên : 620576 Lớp : K62CNSHC Khoa : Công nghệ sinh học HÀ NỘI – 04/03/2021 MỤC LỤC Giới thiệu công nghệ thụ tinh ống nghiệm người 1.1 Lịch sử công nghệ thụ tinh ống nghiệm người 1.2 Ý nghĩa công nghệ thụ tinh ống nghiệm người 1.3 Những trường hợp y khoa định sử dụng công nghệ thụ tinh ống nghiệm người 1.4 Phân biệt thụ tinh nhân tạo thụ tinh ống nghiệm người Yêu cầu chung sở vật chất, trang thiết bị để thụ tinh ống nghiệm người 2.1 Điều kiện sở khám bệnh, chữa bệnh thực IVF người 2.2 Điều kiện sở vật chất 2.3 Điều kiện trang thiết bị y tế 10 Các kỹ thuật thụ tinh ống nghiệm người 10 3.1 Kỹ thuật IVF cổ điển 10 3.2 Kỹ thuật vi thụ tinh (Microinsemination) 12 3.3 Quy trình thụ tinh ống nghiệm 15 3.3 Hỗ trợ phơi màng 17 3.4 Tỷ lệ thành công phương pháp thụ tinh ống nghiệm người 17 3.5 Những vấn đề hạn chế thường gặp tiến hành thụ tinh ống nghiệm người 18 Kết thụ tinh ống nghiệm người giới Việt Nam 18 4.1 Kết thụ tinh ống nghiệm người giới 18 4.2 Kết thụ tinh ống nghiệm người Đông Nam Á Việt Nam 20 4.3 Chi phí thực quốc gia giới Việt Nam 21 Kết luận 21 TÀI LIỆU THAM KHẢO 22 Giới thiệu công nghệ thụ tinh ống nghiệm người 1.1 Lịch sử công nghệ thụ tinh ống nghiệm người Thụ tinh ống nghiệm (In Vitro Fertilization - IVF) phương pháp thụ tinh theo trứng thụ tinh tinh trùng bên thể (trong hộp lồng, Petri, ống nghiệm tạo thành phôi) Các điều kiện cho trình IVF giống thể người mẹ Sau thời gian nuôi cấy bên ngồi (thường 2-5 ngày), phơi đưa trở lại buồng tử cung người mẹ Đây phương pháp áp dụng sau kỹ thuật hỗ trợ sinh sản thất bại, áp dụng cho dành cho cặp vợ chồng hay người phụ nữ độ tuổi sinh sản, lý đó, tinh trùng khơng thể thụ tinh cho trứng phương pháp tự nhiên Các nghiên cứu thụ tinh ống nghiệm có lịch sử kỷ đạt thành tựu to lớn, mang lại hạnh phúc cho hàng triệu gia đình khắp giới Lịch sử Thụ tinh ống nghiệm (IVF) chuyển phôi (Embryo Transfer - ET) năm 1890 Walter Heape, giáo sư bác sĩ Đại học Cambridge, Anh, người tiến hành nghiên cứu sinh sản số loài động vật, báo cáo trường hợp cấy phôi thai biết đến thỏ, lâu trước ứng dụng vào khả sinh sản người chí cịn đề xuất Nghiên cứu mở hướng việc ứng dụng nghiên cứu thụ tinh ống nghiệm người kỷ XX tới Năm 1934 Pincus Enzmann, thuộc Phịng thí nghiệm Sinh lý học tổng hợp Đại học Harvard, công bố báo cáo Kỷ yếu Viện Hàn lâm Khoa học Mỹ việc nâng cao khả trứng động vật có vú trải qua phát triển bình thường ống nghiệm Mười bốn năm sau, vào năm 1948, Miriam Menken John Rock lấy 800 tế bào trứng từ phụ nữ điều kiện khác nhau, lọc lấy 138 tế bào trứng cho tiếp xúc với tinh trùng ống nghiệm Họ cơng bố kinh nghiệm Tạp chí Sản khoa Phụ khoa Mỹ Tuy nhiên, phải đến năm 1959, chứng chối cãi thụ tinh ống nghiệm thu MC Chang (Chang MC, Thụ tinh buồng trứng thỏ ống nghiệm Nature, 1959 8: 184 (suul 7) 466), người đạt thành cơng sinh sản động vật có vú (thỏ) cách thụ tinh ống nghiệm Những trứng rụng thụ tinh ống nghiệm cách ủ với tinh trùng bình Carrel nhỏ giờ, mở phương thức để hỗ trợ sinh sản người Năm 1961, Palmer từ Pháp mô tả việc thu hồi tế bào trứng phẫu thuật nội soi Năm 1965, Robert Edwards với Georgeanna Howard Jones Bệnh viện Johns Hopkins, Hoa Kỳ cố gắng thụ tinh tế bào trứng người ống nghiệm (Edwards RG, Donahue RP, Baramki TA, Jones HW Jr Những nỗ lực ban đầu để thụ tinh cho tế bào trứng người trưởng thành ống nghiệm Tạp chí Am J Obstet Gynecol 1966; 15; 96: 192-200) Năm 1973, lần mang thai IVF báo cáo nhóm nghiên cứu Monash gồm Giáo sư Carl Wood John Leeton Melbourne, Australia Thật không may, điều dẫn đến sẩy thai sớm (dDe Kretzer D, Dennis P, Hudson B, Leeton J, Lopata A, Outch K, Talbot J, Wood C Chuyển hợp tử người Lancet, 1973 29; 2: 728-9) Năm 1976, Y Menezo phát triển môi trường nuôi cấy B2 giới, gọi “môi trường Pháp” Môi trường cụ thể phản ánh môi trường nang trứng, ống dẫn trứng tử cung cừu, thỏ người Cũng năm này, Steptoe Edwards xuất báo cáo trường hợp mang thai ngồi tử cung sau chuyển phơi người giai đoạn phôi dâu muộn/phôi nang sớm (Steptoe PC, Edwards RG Việc cấy lại phơi thai người với q trình mang thai ống dẫn trứng sau Lancet, 1976; 24: 1: 880-2) Năm 1978, đứa trẻ (Louise Brown) đời phương pháp thụ tinh ống nghiệm Oldham, Anh vào ngày 25 tháng 7, năm 1978 Thành công kết hợp tác Patrick Steptoe Robert Edwards Hình 1.1 Hình ảnh Louise Brown em bé chào đời phương pháp thụ tinh ống nghiệm (Nguồn: Internet.) Năm 1979, Pez đồng bắt đầu theo dõi phát triển nang siêu âm Họ cho thấy mối quan hệ đáng kể quan sát siêu âm nội soi Việc sử dụng siêu âm công bố để xác định nang phát triển Năm 1980 đánh dấu sử đời môi trường nuôi cấy Năm 1981, nhóm Clamart Pháp phát triển xét nghiệm LH phát gia tăng LH ban đầu huyết tương cho phép dự đốn xác thời gian lý tưởng cho việc thu hồi tế bào trứng Năm 1983, cột mốc đánh dấu ca cho – nhận trứng Nhóm Monash đạt thành công thụ tinh ống nghiệm phụ nữ khơng có buồng trứng cách sử dụng trứng người cho trứng, tạo chu kỳ kinh nguyệt nhân tạo cơng thức kích thích tố đặc biệt 10 tuần đầu thai kỳ Nhóm báo cáo đời em bé từ phơi thai đơng lạnh Trong năm đó, Gleicher nhóm ơng báo cáo việc thu trứng qua đường âm đạo lần đầu tiên, sử dụng siêu âm bụng Năm 1984, Chính phủ Victoria thiết lập đánh giá nghiên cứu thực hành IVF, dẫn đến việc công bố Đạo luật Vô sinh (Thủ tục Y tế) năm 1984, đạo luật điều chỉnh IVF nghiên cứu phôi thai người liên quan Em bé chuyển phôi mang thai hộ sinh California Cặp sinh tư IVF giới sinh vào ngày tháng năm 1984, Melbourne Năm 1985, mang thai em bé cách thụ tinh ống nghiệm sử dụng tinh trùng hút từ mào tinh Báo cáo việc sử dụng siêu âm bụng cho việc cấy phôi Năm 1986 IVF Monash báo cáo mang thai đời em bé từ hoạt động phục hồi tinh trùng thực bệnh nhân tắc ống dẫn tinh Năm 1987, thụ tinh tế bào trứng người vi tiêm tinh trùng màng suốt Năm 1989, báo cáo việc sử dụng kỹ thuật laser lĩnh vực hỗ trợ sinh sản, áp dụng với giao tử phôi Gonen đồng nghiệp Toronto tiên phong việc sử dụng siêu âm chất lượng nội mạc tử cung liên quan đến mang thai thụ tinh ống nghiệm Năm 1990, Gonen, Jacobson Casper tiên phong việc sử dụng thuốc tránh thai để đồng hóa nang lập kế hoạch chu kỳ thụ tinh ống nghiệm Năm 1991, trưởng thành ống nghiệm (IVM) chu kỳ khơng kích thích dẫn đến mang thai với bệnh nhân cho – nhận trứng Năm 1992, báo cáo thai kỳ sau tiêm tinh trùng vào bào tương (ICSI) nhóm Brussel Năm 1993, báo cáo việc sử dụng tese (chiết xuất tinh trùng từ tinh hoàn) ICSI Năm 1995, ca sinh nở sau phát triển phôi nang từ trứng IVM ICSI, cộng với hỗ trợ phôi màng (Assisted Hatching) Năm 1996, nhóm Valencia báo cáo ca mang thai sử dụng tinh trùng tinh hoàn trữ lạnh sau IVF-ICSI Năm 1997, em bé sinh từ tế bào trứng đông lạnh sau ICSI Năm 1998, lần thiết lập mang thai sử dụng FSH tái tổ hợp GnRH đối kháng Báo cáo ca sinh nở từ trứng GV đông lạnh trứng cho Năm 2000, em bé sinh từ tế bào trứng tinh trùng đông lạnh Năm 2001, đời trẻ sơ sinh từ phôi trữ lạnh từ tế bào trứng IVM bệnh nhân khơng kích thích trứng, PCOS Năm 2002, em bé đời, áp dụng kỹ thuật sinh thiết phôi nang phân tích PGD (chẩn đốn di truyền tiền cấy phơi - kỹ thuật có khả phát bất thường nhiễm sắc thể gen) Năm 2004, báo cáo bảo tồn khả sinh sản cho bệnh nhân ung thư sử dụng IVM tế bào trứng đông lạnh nhanh Năm 2007, đời cặp song sinh từ tế bào trứng đông lạnh bệnh nhân ung thư Năm 2008, người mẹ IVF già giới Rajo Devi Lohan 69 tuổi vào thời điểm cô sinh bé gái, Naveen, sau thụ tinh ống nghiệm Ấn Độ Năm 2009, giáo sư Laufer Trung tâm Y tế Hadassah Jerusalem thành công giúp phụ nữ có gen BRCA2 bị lỗi mang thai sau phôi thụ tinh ống nghiệm thử nghiệm cấy ghép Năm 2010, Robert G Edwards, bác sĩ phát triển phương pháp này, trao Giải Nobel Sinh lý Y khoa Năm 2018, dựa sưu tập liệu IVF toàn cầu Ủy ban Quốc tế Giám sát Công nghệ Hỗ trợ Sinh sản (ICMART) ước tính kể từ Louise Brown's sinh năm 1978, triệu trẻ sơ sinh sinh từ thụ tinh ống nghiệm khắp giới (Nguồn: https://ivf.net/ivf/more-than-8million-babies-born-from-ivf-since-the-world-s-first-in-1978-o10583.html) Tại Việt Nam, việc nghiên cữu thụ tinh ống nghiệm người diễn từ năm 90 kỷ 20 có thành tựu đáng kể Năm 1995: Thực thành công trữ lạnh tinh trùng người Thực thành công IUI với tinh trùng lọc rửa Năm 1997: Ngày 19/8/1997, 30 phụ nữ vô sinh Việt Nam chuyển phôi làm thụ tinh ống nghiệm Năm 1998: Ngày 30/4/1998, Bệnh viện Từ Dũ, ba đứa trẻ sinh phương pháp thụ tinh ống nghiệm Hình 1.2: Bé gái chào đời phương pháp thụ tinh ống nghiệm năm 1998 (Nguồn ảnh BV Từ Dũ) Hình 1.3: Hình ảnh Phạm Tường Lan Thy, Mai Quốc Bảo, Lưu Tuyết Trân (từ trái qua) ba bé đời phương pháp thụ tinh ống nghiệm kỷ niệm năm ngày sinh 30-4 – 1998 Nguồn: Internet Năm 1999: Em bé ICSI đời Năm 2000: Em bé TTTON-cho trứng đời Năm 2001: Em bé mang thai hộ đời (hiện cấm thực hiện) Trường hợp sinh đời sau kỹ thuật giảm thai Năm 2002: Em bé từ ICSI với tinh trùng hút từ mào tinh (MESA/PESA) Năm 2003: Em bé đời từ phôi người đông lạnh đời Năm 2004: Em bé từ ICSI với tinh trùng lấy từ tinh hoàn (TESA/TESE)Em bé từ trứng tinh trùng người đơng lạnh Năm 2018: Có khoảng 40.000 đứa trẻ sinh nhờ phương pháp thụ tinh ống nghiệm Việt Nam 1.2 Ý nghĩa công nghệ thụ tinh ống nghiệm người Sự đời công nghệ thụ tinh ống nghiệm người đánh dấu bước đột phá đặc biệt ngành cơng nghệ sinh học nói chung ngành cơng nghệ y sinh nói riêng Kỹ thuật y khoa phức tạp sử dụng để điều trị trường hợp vô sinh, muộn vấn đề di truyền liên quan đến giới tính Hiện nay, phương pháp y khoa mang lại hiệu cao công nghệ hỗ trợ sinh sản Đây xem biện pháp cứu cánh cuối dành cho cặp vợ chồng vô sinh, muộn sau phương pháp hỗ trợ sinh sản khác dùng thuốc hay thụ tinh nhân tạo không thành công IVF đời mang đến niềm hy vọng làm cha mẹ cho cặp đôi vô sinh không rõ nguyên nhân gặp vấn đề nghiêm trọng quan sinh sản toàn giới Bên cạnh ý nghĩa khoa học, IVF mang lại tính nhân văn lớn đem lại hạnh phúc cho hàng triệu gia đình khắp giới 1.3 Những trường hợp y khoa định sử dụng công nghệ thụ tinh ống nghiệm người Không phải trường hợp muộn thực thụ tinh ống nghiệm Phương pháp khả thi cặp vợ chồng có ngun nhân gây vơ sinh khơng làm hoàn toàn khả thụ tinh trứng tinh trùng Những nguyên nhân bao gồm: • Ống dẫn trứng bị tổn thương bị tắc nghẽn: Tình trạng tắc ống dẫn trứng vịi trứng bị tổn thương khiến trứng khó thụ tinh phôi thai di chuyển tử cung làm tổ tử cung • Rối loạn phóng nỗn (rối loạn rụng trứng): Việc rụng trứng xảy khơng thường xun khiến q trình thụ thai khó diễn • Suy chức buồng trứng sớm: Là tình trạng chức buồng trứng diễn trước tuổi 40 Suy buồng trứng sớm khiến buồng trứng không tạo lượng estrogen cần thiết trứng khơng rụng thường xun • Lạc nội mạc tử cung: Lạc nội mạc tử cung xảy nội mạc tử cung nằm bên tử cung, gây ảnh hưởng đến chức buồng trứng, tử cung, ống dẫn trứng khả thụ thai • U xơ tử cung: Xơ khối u lành tính thành tử cung thường gặp phụ nữ độ tuổi 30 – 40, khiến việc thụ thai tự nhiên trở nên khó khăn Những phụ nữ bị u xơ tử cung mang thai cách thụ tinh ống nghiệm • Đã thắt ống dẫn trứng: Nếu bạn thực thủ thuật triệt sản này, song lại muốn mang thai sinh IVF phương pháp hỗ trợ sinh sản hữu ích • Lượng tinh trùng thấp tinh trùng yếu: Nồng độ tinh trùng người chồng mức trung bình, tinh trùng chuyển động yếu có bất thường kích thước hình dạng… khó thụ tinh cho trứng Do đó, bác sĩ định thực thụ tinh nhân tạo IVF • Vơ sinh nam: Tinh trùng ít, yếu, xuất tinh ngược không xuất tinh Không tinh trùng tinh dịch (lấy tinh trùng phẫu thuật mào tinh, tinh hoàn) Đứt niệu đạo sau di chứng vỡ xương chậu • Vô sinh nguyên nhân bơm tinh trùng vào buồng tử cung nhiều lần thất bại • Rối loạn di truyền liên quan đến giới tính: Nếu vợ chồng chẩn đoán mắc rối loạn di truyền có nguy truyền sang con, bác sĩ định làm IVF Mục đích IVF trường hợp nhằm sàng lọc phôi thai khỏe mạnh để cấy vào tử cung người vợ • Bảo vệ khả sinh sản cho bệnh nhân ung thư mắc bệnh liên quan nghiêm trọng đến sức khỏe: Nếu người phụ nữ tiến hành xạ trị hay hóa trị để điều trị bệnh ung thư bị bệnh tim bác sĩ đề nghị làm IVF nhằm bảo vệ khả sinh sản Trong trường hợp này, trứng lấy trữ đơng, trứng thụ tinh phôi làm đông lạnh để sử dụng sau • Ngồi ra, với phụ nữ mắc bệnh nghiêm trọng khơng thể mang thai có bất thường tử cung khiến khó thụ thai chọn thụ tinh ống nghiệm nhờ người mang thai hộ Trong trường hợp này, trứng người phụ nữ thụ tinh với tinh trùng, phôi thai cấy vào tử cung người mang thai hộ 1.4 Phân biệt thụ tinh nhân tạo thụ tinh ống nghiệm người Thụ tinh nhân tạo thụ tinh ống nghiệm phương pháp hỗ trợ sinh sản áp dụng điều trị vơ sinh muộn, nhiên, có nhiều người nhầm lẫn hai phương pháp cho hai phương pháp Hai phương pháp khác phương pháp thực Thụ tinh nhân tạo Là phương pháp bơm tinh trùng vào buồng tử cung Thụ tinh ống nghiệm Quá trình thụ tinh trứng tinh trùng xảy hoàn toàn bên thể người, sau tạo thành hợp tử (phơi thai) có từ – tế bào đưa vào buồng tử cung nữ giới Tinh trùng lọc rửa, lựa chọn tinh trùng khỏe mạnh để bơm trực tiếp vào buồng tử cung nữ giới Lựa chọn tinh trùng khỏe mạnh nhất, hút noãn từ buồng trứng nữ giới để nuôi ống nghiệm với điều kiện thích hợp để q trình thụ tinh xảy Quá trình thụ tinh tạo thành phôi thai diễn thể nữ giới, phôi tạo thành di chuyển xuống buồng tử cung để làm tổ Q trình thụ tinh xảy hồn toàn ống nghiệm – bên thể người, sau tạo thành phôi cấy vào buồng tử cung Điều kiện để áp dụng phương pháp tinh trùng nam giới giới hạn thực hiện, nữ giới có buồng tử cung, buồng trứng vịi trứng hoạt động bình thường Phương pháp áp dụng cho đối tượng vô sinh tinh trùng đáp ứng yêu cầu giới hạn cho phép, nữ giới có buồng trứng tử cung hoạt động bình thường Những trường hợp vơ sinh tắc nghẽn vịi trứng áp dụng Yêu cầu chung sở vật chất, trang thiết bị để thụ tinh ống nghiệm người 2.1 Điều kiện sở khám bệnh, chữa bệnh thực IVF người Cơ sở thực kỹ thuật phải thuộc sở khám bệnh, chữa bệnh sau đây: - Cơ sở phụ sản, sản – nhi Nhà nước từ tuyến tỉnh trở lên; - Bệnh viện đa khoa tư nhân có khoa sản, khoa sản – nhi; - Bệnh viện chuyên khoa phụ sản, chuyên khoa sản – nhi tư nhân; - Bệnh viện chuyên khoa nam học muộn 2.2 Điều kiện sở vật chất Cơ sở khám bệnh, chữa bệnh phải đáp ứng điều kiện sở vật chất sau: - Có phịng hồi sức cấp cứu; - Có xét nghiệm nội tiết sinh sản; - Có đơn nguyên riêng cho việc thực kỹ thuật thụ tinh ống nghiệm gồm phịng: Chọc hút nỗn; lấy tinh trùng; lab nuôi cấy; xét nghiệm lọc rửa tinh trùng đáp ứng tiêu chuẩn theo khuyến cáo Tổ chức Y tế giới 2.3 Điều kiện trang thiết bị y tế Cơ sở khám bệnh, chữa bệnh phải có tối thiểu trang thiết bị y tế sau: - 02 tủ cấy CO2; - 02 tủ ấm; - 01 bình trữ tinh trùng; - 01 máy ly tâm; - 01 bình trữ phơi đơng lạnh; - 01 máy siêu âm có đầu dị âm đạo; - 01 kính hiển vi đảo ngược; - 02 kính hiển vi soi nổi; - 01 tủ thao tác Các kỹ thuật thụ tinh ống nghiệm người - Hiện có hai kỹ thuật thụ tinh ống nghiệm là: IVF cổ điển vi thụ tinh (Microinsemination) 3.1 Kỹ thuật IVF cổ điển * Giới thiệu: - IVF trình kết hợp tinh trùng với trứng để tạo hợp tử bên thể mẹ (trong hộp lồng, Petri, ống nghiệm) - IVF thành công chuột đồng (1963), chuột trắng (1968), người (1969) sau IVF hồn chỉnh dần thu nhận tinh ni trứng chín - Với kỹ thuật IVF cổ điển, trứng trộn lẫn với hàng ngàn tinh trùng đĩa đặc biệt, sau đặt tủ cấy mơ điều kiện tự nhiên - Quá trình thụ tinh diễn điều kiện phịng thí nghiệm sau đảm bảo thụ tinh, phôi thai đưa vào tử cung người phụ nữ ống chuyển phôi đặc biệt qua cổ tử cung - Trong kỹ thuật này, trứng tinh trùng gặp nhau, hòa nhập cách “tự nhiên” để hình thành phơi * Vật liệu: Giao tử: - Trứng dùng cho IVF dạng: trứng non, trưởng thành hậu tưởng thành 10 - Trứng thường thụ tinh với nồng độ 100.000 tinh trùng bình thường/ml => tỷ lệ thụ tinh giảm tăng nồng độ tinh trùng cao * Môi trường thụ tinh: - Môi trường cho tinh trùng thuộc nhóm: muối, chất lượng protein, Ca ++, bicarbonate, tỷ lệ Na +/K +, pH= 7,4 - Phôi phát triển môi trường acid - Khi thực IVF cần phủ lên bề mặt môi trường lớp dầu khoáng * Thời gian thụ tinh: - Ở người: trứng thụ tinh vài - Thông thường, ca thụ tinh ống nghiệm (IVF) khoảng thời gian tối thiểu tháng * Các hệ thống thụ tinh ống nghiệm: - Thụ tinh ống nghiệm 5ml Hình 3.1 Ống nghiệm 5ml(Nguồn ảnh: internet) - Thụ tinh đĩa hay giếng 11 Hình 3.2 Đĩa giếng (Nguồn ảnh: internet) - Thụ tinh ống mao quản cọng rạ Hình 3.3 Cọng rạ (Nguồn ảnh: internet) - Thụ tinh vi giọt 3.2 Kỹ thuật vi thụ tinh (Microinsemination) * Giới thiệu: - Là phương pháp vi tiêm tinh trùng vào trứng thơng qua nhiều hình thức * Thiết bị dụng cụ đặc thù: - Kính hiển vi đảo ngược vi thao tác - Các dụng cụ vi tiêm chuyên biệt: • Pipette cố định trứng (holding pipette) • Pipette chọc tiêm tinh trùng (injectionpipette) * Các kỹ thuật vi thụ tinh bản: Bao gồm kỹ thuật: - (1) Khoan màng zona (ZD - Zona Drilling): • Gordon Talansky (1986), thực khoan thủng lỗ nhỏ màng suốt => tinh trùng dễ chui vào trứng • Ngay sau lỗ tạo ra, tiến hành rửa trứng vài lần mơi trường ni cấy để trung hịa pH • Lấy trứng thụ tinh in vitro - (2) Tách bỏ phần màng suốt (PZD - Partial Zona Dissection): • Tránh việc sử dụng hệ đệm acid, Malter Cohen (1990) tạo phương pháp phẫu tích phần màng suốt gọi PZD 12 - (3) Tiêm tinh trùng vào màng suốt (SUZI - Surzonal sperm injection): • Dùng ống hút nhỏ đưa thẳng tinh trùng xuyên qua màng suốt vào khoảng khơng quanh nỗn tương • Các thử nghiệm thường tiêm tinh trùng, kết khơng khả quan Sau đó, tiêm từ tới 10 tinh trùng, kết thụ tinh tăng lên kèo theo nguy đa thụ tinh tăng - (4) Bơm tinh trùng vào bào tương trứng (ICSI - Intracytoplasmic sperm injection): • Tinh trùng có hình thái bình thường làm bất động hút vào kim • Kim chọc qua vùng suốt màng nỗn, vào sâu bào tương vị trí loại bỏ hoàn toàn thể cực thứ nhất, ống hút kéo nhanh để tinh trùng lại vị trí • Chuẩn bị giao tử thao thác thực hiện: 13 + Kích thích buồng trứng để tăng tối đa số nang noãn phát triển phác đồ điều trị + Trứng thu nhận vào môi trường nuôi cấy (IVF-20) tủ ấm CO2 Sau đó, đưa trứng vào mơi trường Gamete -20 chứa menhyaluronidase (80IU/ml) để tách lớp tế bào xung quanh nang pasteur pipette kính sơi + Thu nhận tinh dịch, tiến hành lọc ,rửa tinh trùng + Trứng tốt thu nhận, sau đưa vào giọt môi trường đĩa cấy + Tinh trùng cho vào giọt PVP 10% đĩa cấy Tất giọt môi trường phủ lớp dầu (Ovoil-15), sau đặt đĩa cấy vào kính hiển vi đảo ngược với nhiệt độ 37 độ C, với độ phóng đại 200 lần + Trong quy trình ICSI ,thường tích nhỏ thủy ngân (0.5l) hút vào đầu injection pipette dầu khống vào bên - (5) Kỹ thuật ICSI hỗ trợ áp điện (Piezo-ICSI): • Nguyên lý Piezo-ICSI dụng cụ vi thao tác có áp điện để tạo lỗ xuyên màng zona noãn tương nhằm đưa tinh trùng vào trứng • Trứng định vị cho phần nhân quay hướng Đưa đầu pipette tiêm đến tiếp xúc với màng zona vị trí ba ,cùng lúc vài xung điện piezo tạo giúp cho việc xuyên màng dễ dàng • Khi đầu pipette xuyên vào trong, mảnh nhỏ màng zona tống vào theo Đầu pipette nhẹ nhàng xuyên sâu vào bào tương, tinh trùng đẩy nhanh khỏi ống đầu nằm gần đầu pipette • Ở vị trí giờ, đầu pipette làm cho màng nỗn căng, thủng mà khơng vỡ 14 - (6) ROSI (Round spermatid injection): • ROSI kỹ thuật ICSI, sử dụng tinh trùng khơng đi, hình trịn, tế bào hình thành trình sinh tinh (1n) • ROSI ứng dụng cho đơng khơ tinh trùng, liệu pháp gen, chuyển gen vào kỳ metaphase II nghiên cứu hoạt hóa trứng tinh trùng 3.3 Quy trình thụ tinh ống nghiệm Quy trình trải qua bước gồm: Bước 1: Kích thích trứng (hay cịn gọi kích trứng) • Người vợ tiêm thuốc kích thích buồng trứng liên tục ngày, thường khoảng thời gian 10-12 ngày Trong thời gian tiêm thuốc, người vợ hẹn để siêu âm xét nghiệm máu để theo dõi phát triển nang nỗn 15 • Khi nang nỗn đạt kích thước theo yêu cầu, người vợ tiêm mũi thuốc cuối để kích thích trứng trưởng thành (cịn gọi mũi kích rụng trứng) Mũi thuốc cần phải tiêm Bước 2: Chọc hút trứng • Khi trứng đạt yêu cầu, việc chọc hút trứng tiến hành qua đường âm đạo vào khoảng 36 sau mũi tiêm thuốc cuối Thời gian chọc hút trứng từ 10-15 phút cho ca Cùng lúc, người chồng lấy tinh trùng để chuẩn bị cấy phôi thông báo lấy mẫu tinh trùng đơng lạnh (nếu trữ đơng trước đó) • Sau chọc hút trứng, người vợ nằm theo dõi tình trạng sức khỏe bệnh viện 2-3 Bước 3: Tạo phơi • Trứng tinh trùng chuyển đến phòng labo để thụ tinh tạo phơi Phơi ni cấy bên ngồi 2-5 ngày • Trong thời gian này, người vợ dùng thuốc đường uống đặt âm đạo để chuẩn bị cho q trình chuyển phơi • Nếu chuyển phơi sau tạo phơi gọi chuyển phơi tươi • Trong trường hợp người vợ khơng đủ điều kiện sức khỏe để chuyển phơi tươi, tồn số phôi đạt chất lượng trữ đông người vợ chuyển phôi trữ vào chu kỳ Bước 4: Chuyển phơi • Khi niêm mạc tử cung đủ độ dày cần thiết chất lượng tốt, tạo thuận lợi cho làm tổ phát triển phôi sau đặt vào buồng tử cung, bác sĩ tiến hành chuyển phơi • Trong trường hợp chuyển phôi trữ, người vợ siêu âm dùng thuốc theo dõi niêm mạc từ ngày thứ chu kỳ kinh vòng từ 14-18 ngày Sau đó, bác sĩ chọn thời điểm phù hợp để chuyển phôi trữ Bước 5: Thử thai • Hai tuần sau, người vợ thưc xét nghiệm βeta HCG để xác định kết thụ thai Nếu nồng độ βeta HCG mức > 25 IU/l 16 xác định có thai, nồng độ cao hay thấp phụ thuộc vào người • Trong trường hợp chưa có thai cịn phơi trữ, người vợ tiếp tục dùng phôi trữ để chuyển vào tử cung chu kỳ mà khơng cần phải thực lại bước kích thích trứng, chọc hút trứng 3.3 Hỗ trợ phơi màng - Sau trứng tinh trùng thụ tinh với kỹ thuật IVF ICSI, phôi chuyển vào buồng tử cung để làm tổ phát triển thành thai - Bao bên ngồi phơi màng suốt Trong số trường hợp, lớp màng bị cứng bất thường khơng mỏng q trình phơi phát triển Khiến phơi khơng thể bám vào nội mạc tử cung để làm tổ - Kỹ thuật làm mỏng làm thủng màng suốt bên ngồi phơi đời, phơi dễ làm tổ Kỹ thuật gọi kỹ thuật phơi màng, giúp cải thiện tỉ lệ thành công làm thụ tinh ống nghiệm (10-15%) Phôi thoát khỏi màng suốt để làm tổ Nguồn: Internet 3.4 Tỷ lệ thành công phương pháp thụ tinh ống nghiệm người Tỷ lệ thành công phương pháp tùy thuộc vào nhiều yếu tố nguyên nhân vô sinh, tuổi tác người vợ, q trình điều trị trước đó, chun mơn bác sĩ thực chất lượng bệnh viện…Theo số liệu thống kê Mỹ, tỉ lệ phần trăm chu trình IVF cho kết sinh em bé khoảng: - 40% phụ nữ 34 tuổi - 31% phụ nữ độ tuổi từ 35 – 37 17 - 21% phụ nữ độ tuổi từ 38 – 40 - 11% phụ nữ độ tuổi từ 41 – 42 - 5% phụ nữ 42 tuổi 3.5 Những vấn đề hạn chế thường gặp tiến hành thụ tinh ống nghiệm người Thụ tinh ống nghiệm, giống hầu hết thủ thuật y tế có số rủi ro mang số hạn chế định: - Các loại thuốc nội tiết tố (FSH + hCG Lupron) sử dụng để kích thích buồng trứng nhằm tạo số lượng trứng cao bất thường trình thụ tinh ống nghiệm dẫn đến nguy mắc Hội chứng kích buồng trứng (OVHSS) OVHSS gây đau đớn gây buồn nơn, chóng mặt, nôn mửa, trường hợp đặc biệt nghiêm trọng, phải nhập viện, suy nội tạng tệ - Nguy thụ tinh ống nghiệm dẫn đến đa thai sinh tăng từ đến 30% chuyển nhiều phôi Bội số dẫn đến nguy cao theo cấp số nhân số bệnh nghiêm trọng bại não, chảy máu nhiều sinh, sinh non (và vấn đề liên quan đến nhận thức) tử vong trẻ sơ sinh May mắn thay, rủi ro giảm bớt cách chuyển phôi Chuyển phơi làm giảm tỷ lệ chuyển phôi nhẹ, không ảnh hưởng đến tỷ lệ sinh sống chu kỳ IVF (bằng cách sử dụng chuyển phơi đơng lạnh hình thành kích thích IVF) - Có thể xảy bất thường giới tính - Tỉ lệ sẩy thai khỏang 16% Tỉ lệ thai ngòai tử cung khỏang 5% - Nguy lúc chọc hút trứng 0.1% chảy máu từ điểm đâm kim buồng trứng, tử cung mạch máu …có thể tổn thương ruột, nội tạng gây xuất huyết nội, v.v… Kết thụ tinh ống nghiệm người giới Việt Nam 4.1 Kết thụ tinh ống nghiệm người giới Ngày 25/7/1978, Louise Brown – em bé giới sinh phương pháp thụ tinh ống nghiệm anh Sự kiện đánh dấu bước phát triển vượt bậc y học giới Ca sinh thành công thứ hai em bé ống nghiệm xảy Ấn Độ 67 ngày sau Louise Brown chào đời Cô gái tên Durga thụ thai 18 ống nghiệm phương pháp phát triển độc lập Tiến sĩ Subhash Mukhopadhyay , bác sĩ nhà nghiên cứu từ Kolkata, Ấn Độ Tại Mỹ, tính sẵn có IVF nói chung vào năm 2005 2,5 bác sĩ IVF 100.000 dân, tỷ lệ sử dụng 236 chu kỳ IVF 100.000 126 thủ tục thực triệu người năm Mức độ sử dụng tăng cao theo tính sẵn có bảo hiểm IVF, mức độ đáng kể theo tỷ lệ người độc thân thu nhập trung bình Ngày 28 tháng 12 ngày, năm 1981, Elizabeth Jordan Carr sinh qua mổ lấy thai em bé thụ tinh ống nghiệm Mỹ Hàng năm Hiệp hội Sinh sản người phôi học châu Âu (ESHRE) thống kê kết chương trình thụ tinh ống nghiệm toàn châu Âu Theo báo cáo ESHRE năm 2010, tỷ lệ có thai trung bình sau làm thụ tinh ống nghiệm châu Âu 32-33% Châu Âu khu vực mà thụ tinh ống nghiệm phát triển giới Bắt kịp kỹ thuật đại giới, năm sau đó, ngày 04/11/1982 em bé IVF Séc chào đời khỏe mạnh Brno, nặng 3,65 kg cao 51 cm Tiếp đó, năm sau em bé giới sinh nhờ kỹ thuật ICSI (intra-cytoplasmic sperm injection), năm 1994 em bé ICSI Séc cất tiếng khóc đời Trung tâm sinh sản Prague – trung tâm hỗ trợ sinh sản hàng đầu Cộng hòa Séc So với nhiều quốc gia khác, Cộng hòa Séc điểm đến hàng đầu nhiều bệnh nhân muộn khơng châu Âu mà cịn từ quốc gia khác toàn giới Theo số liệu Hiệp hội Sinh sản Phôi học Châu Âu (ESHRE), có gần 30.000 chu kỳ điều trị hỗ trợ sinh sản thực hàng năm Cộng hòa Séc, đưa đất nước trở thành quốc gia thực chu kỳ điều trị/ đầu người cao Châu Âu Israel có tỷ lệ thụ tinh ống nghiệm cao giới, với 1657 thủ thuật thực triệu người năm Các cặp vợ chồng khơng có nhận tài trợ cho IVF cho tối đa hai Nguồn tài trợ tương tự cung cấp cho phụ nữ khơng có con, người ni tối đa nhà cha mẹ đơn thân IVF có sẵn cho phụ nữ từ 18 đến 45 tuổi Bộ Y tế Israel cho biết họ chi khoảng 3450 đô la cho thủ thuật Mức độ thâm nhập thị trường IVF Ấn Độ thấp với 2.800 chu kỳ / triệu phụ nữ vô sinh độ tuổi sinh đẻ (20–44 tuổi) so với Trung Quốc có 6.500 chu kỳ Những thách thức thiếu nhận thức, khả chi trả khả tiếp cận Năm 2018, Ấn Độ trở thành điểm đến 19 Du lịch Sinh sản chi phí điều trị IVF phải Chi phí điều trị IVF Ấn Độ dao động từ $ 2000 đến $ 4000 (khoảng từ 150000 /- INR đến 250000/INR bao gồm tất khía cạnh điều trị IVF thuốc, thấp gần lần so với Chi phí IVF nước phương Tây giới Đến năm 2012, Costa Rica quốc gia giới cấm hồn tồn cơng nghệ thụ tinh ống nghiệm, bị Tịa án Tối cao quốc gia phán vi hiến "vi phạm sống" 4.2 Kết thụ tinh ống nghiệm người Đông Nam Á Việt Nam Tại nước khu vực ASEAN, IVF thành công Singapore, Thái Lan, Malaysia, Indonesia, Philippines năm 1980 Mãi đến năm 1998, em bé IVF Việt Nam đời, sau giới 20 năm sau nước khu vực từ 10 - 15 năm Thái Lan Singapore nước đầu dịch vụ IVF Đông Nam Á, thu hút nhiều bệnh nhân nước sử dụng dịch vụ nhờ du lịch y tế phát triển Ở Thái Lan, phần lớn trung tâm thụ tinh ống nghiệm có quy mơ lớn, kỹ thuật tốt, có bác sĩ kinh nghiệm… Khách nước ngồi đến điều trị thường nhóm khách hàng có thu nhập cao, có khả chi trả nhiều Singapore thu hút nhiều người thuộc giới thu nhập cao từ nước khu vực Trung Quốc đến để thực thụ tinh ống nghiệm Ước tính có khoảng 50% trường hợp thụ tinh ống nghiệm Singapore người nước Trong năm gần đây, theo kinh nghiệm phát triển Singapore Thái Lan, dựa tảng du lịch y tế phát triển, Malaysia đầu tư nhiều cho du lịch y tế Thụ tinh ống nghiệm Indonesia Philippines phát triển chi phí cao Từ năm 2010, Việt Nam bắt đầu trở thành trung tâm đào tạo thụ tinh ống nghiệm khu vực, năm có 20-30 chuyên viên nước khu vực đến Việt Nam để tìm hiểu học tập Từ năm 2017 trở đi, số ca thụ tinh ống nghiệm thực năm Việt Nam cao khu vực ASEAN Năm 2019, Việt Nam có gần 35.000 trường hợp thụ tinh ống nghiệm thực Việt Nam xem nước có chuyên ngành kỹ thuật hỗ trợ sinh sản phát triển mạnh khu vực ASEAN, nhờ vào yếu tố: quy mô lớn nhất, nhiều 20 kinh nghiệm, có nhiều chuyên gia biết đến giới chun mơn khu vực, có hoạt động học thuật mạnh khu vực… Với số lượng công bố khoa học thường xuyên tạp chí y học uy tín ngành thụ tinh ống nghiệm giới (khoảng 10 năm), nói, học thuật, thụ tinh ống nghiệm Việt Nam tương đương với nước phát triển Tuy nhiên, so với nước, ngành du lịch Việt Nam chưa phát triển bằng, dịch vụ y tế nói chung cịn nhiều bất cập, thụ tinh ống nghiệm Việt Nam chi phí rẻ, kỹ thuật tốt chưa thu hút nhiều bệnh nhân nước ngồi (chỉ khoảng 1-2%) 4.3 Chi phí thực quốc gia giới Việt Nam Ở Mỹ, chi phí thực ca IVF lên tới 25.000 USD (khoảng 570 triệu đồng) Còn Đông Nam Á, nước Philippines, Singapore, Thái Lan, chi phí IVF khoảng từ 10.000 USD/ca (khoảng 230 triệu đồng) Ở Malaysia hay Indonesia, chi phí dao động từ khoảng 6.000 - 7.000 USD (khoảng 140 triệu đồng - 160 triệu đồng) Trong đó, TS.BS Hồ Mạnh Tường - Tổng thư ký Hội Nội tiết sinh sản vơ sinh TP.HCM đánh giá chi phí cho ca IVF Việt Nam gần thấp giới, 3.000 USD (khoảng 70 triệu) Các cặp vợ chồng có nhiều lựa chọn, với mức chi phí khác Ở bệnh viện cơng, mức giá ca IVF thường vào khoảng từ 70 triệu đồng, bệnh viện tư từ 75 triệu trở lên Kết luận Với đời kỹ thuật thụ tinh nhân tạo mở chân trời khoa học y sinh, đem lại hy vọng cho hàng triệu gia đình vơ sinh muộn giới Mang lại hạnh phúc cho hàng triệu gia đình tồn cầu Tại Việt Nam kỹ thuật ngày phát triển, đem lại hy vọng cho hàng nghìn gia đình Việt Với trình độ kỹ thuật tốt giá phải chăng, dịch vụ thụ tinh ống nghiệm không mang lại hội cho gia đình Việt mà cịn hội để ngành du lịch y tế chất lượng cao Việt Nam phát triển Đây mở hội việc làm cho y bác sỹ, kỹ sư tốt nghiệp chuyên ngành công nghệ sinh học – công nghệ y sinh tương lai 21 TÀI LIỆU THAM KHẢO https://benhvienvietbi.vn/phan-biet-thu-tinh-nhan-tao-va-thu-tinh-trong-ongnghiem/ https://lawkey.vn/dieu-kien-thuc-hien-ky-thuat-thu-tinh-trong-ong-nghiem/ https://topbenh.com/thu-tinh-trong-ong-nghiem-ivf-la-gi-quy-trinh-thuc-hienivf-nhu-the-nao/ https://www.practo.com/health-wiki/ivf-procedure/270/article Các kĩ thuật thụ tinh ống nghiệm https://123doc.net/documents/home/document_download.php?id=2078132&t=161 4799000&aut=42653671b3a89095197a4d7dee5a0407 Thụ tinh ống nghiệm điều bạn cần biết https://hellobacsi.com/mang-thai/chuan-bi-mang-thai/thu-tinh-trong-ong-nghiem/ https://ivfhongngoc.com/thu-tinh-trong-ong-nghiem-ivf-icsi/ https://tamanhhospital.vn/a-z-ve-thu-tinh-ong-nghiem-ivf/ http://hiemmuonphusanhanoi.vn/thong-tin/Lich-su-cua-thu-tinh-trong-ongnghiem/766.aspx 10 https://www.cnyfertility.com/ivf/ 11 https://www.verywellfamily.com/what-does-in-vitro-mean-1960211 22 ... sinh từ tế bào trứng đông lạnh sau ICSI Năm 1998, lần thi? ??t lập mang thai sử dụng FSH tái tổ hợp GnRH đối kháng Báo cáo ca sinh nở từ trứng GV đông lạnh trứng cho Năm 2000, em bé sinh từ tế bào trứng... Nam 1.2 Ý nghĩa công nghệ thụ tinh ống nghiệm người Sự đời công nghệ thụ tinh ống nghiệm người đánh dấu bước đột phá đặc biệt ngành cơng nghệ sinh học nói chung ngành cơng nghệ y sinh nói riêng... chun mơn khu vực, có hoạt động học thuật mạnh khu vực… Với số lượng cơng bố khoa học thường xun tạp chí y học uy tín ngành thụ tinh ống nghiệm giới (khoảng 10 năm), nói, học thuật, thụ tinh ống