Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8400-5:2011. Tiêu chuẩn trình bày nội dung về bệnh động vật – quy trình chẩn đoán – phần 5: bệnh tiên mao trùng. Quy trình này quy định quy trình chẩn đoán bệnh tiên mao trùng trên động vật như trâu, bò, lợn, ngựa, dê, cừu, chó, mèo... Mời các bạn tham khảo.
TCVN TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8400-5:2011 Xuất lần BỆNH ĐỘNG VẬT – QUY TRÌNH CHẨN ĐỐN – PHẦN 5: BỆNH TIÊN MAO TRÙNG Animal disease – Diagnostic procedure – Part 5: Trypanosomosis disease HÀ NỘI – 2011 TCVN 8400-5:2011 Lời nói đầu TCVN 8400-5:2011 chuyển đổi từ 10 TCN 821:2006 thành tiêu chuẩn quốc gia theo quy ñịnh khoản Điều 69 Luật Tiêu chuẩn Quy chuẩn kỹ thuật ñiểm a khoản Điều Nghị ñịnh số 127/2007/NĐ-CP ngày 01/8/2007 Chính phủ quy định chi tiết thi hành số ñiều Luật Tiêu chuẩn Quy chuẩn kỹ thuật; TCVN 8400-5:2011 Cục Thú y biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển nơng thơn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm ñịnh, Bộ Khoa học Công nghệ công bố TCVN 8400-5:2011 TCVN 8400-5:2011 TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8400-5:2011 Bệnh ñộng vật – Quy trình chẩn đốn – Phần 5: Bệnh tiên mao trùng Animal disease – Diagnostic procedure – Part 5: Trypanosomosis disease Phạm vi áp dụng Quy trình quy định quy trình chẩn đốn bệnh tiên mao trùng động vật trâu, bò, lợn, ngựa, dê, cừu, chó, mèo… Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ ñịnh nghĩa sau: Bệnh tiên mao trùng (trypanosomosis disease) Bệnh ký sinh trùng ñường máu gây giống Trypanosoma sp CHÚ THÍCH: Bệnh khơng lây trực tiếp từ vật ốm sang vật lành mà loại ruồi trâu mòng hút máu truyền bệnh Các lồi động vật mắc bệnh trâu, bò, lợn, ngựa, dê, cừu, chó, mèo Ở Việt Nam, xác ñịnh ñược lồi Trypanosoma evansi gây bệnh cho động vật trâu, bò, lợn, ngựa Thuốc thử Trong tiêu chuẩn sử dụng thuốc thử tinh khiết phân tích sử dụng nước cất nước có chất lượng tương đương, trừ có quy định khác – Cồn 700 – Metanol – Giemsa – Natri xitrat 3,8 % TCVN 8400-5:2011 Thiết bị, dụng cụ Trong tiêu chuẩn sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thí nghiệm thơng thường cụ thể sau: – Bơng – Kéo – Kim tiêm – Kính hiển vi – Lamen – Máy li tâm – Ống hematocrit – Ống nghiệm – Phiến kính – Xiranh Quy trình chẩn đốn 5.1 Chẩn đốn lâm sàng 5.1.1 Đặc ñiểm dịch tễ Bệnh tiên mao trùng gặp hầu hết vật ni trâu, ngựa, bò, lợn, cừu, dê, chó mèo Bệnh thường xảy vùng núi trung du, bệnh thường xảy ñồng Bệnh thường xảy thời tiết khắc nghiệt, thức ăn khan vào thời gian từ tháng 10 đến tháng (vụ đơng xn, bệnh gọi bệnh “đổ ngã vụ đơng xn”) 5.1.2 Triệu chứng lâm sàng 5.1.2.1 Thể cấp tính Con vật mắc bệnh sốt cao từ 40 0C ñến 41 0C; sốt theo chu kỳ gọi sốt hồi quy; mắt sưng, đỏ tía; vật sốt cao thường thể triệu chứng thần kinh: quay cuồng, ñi vòng tròn, chân run rẩy… Con vật chết TCVN 8400-5:2011 Nếu vật không chết chuyển sang thể mạn tính mang trùng 5.1.2.2 Thể mạn tính Sốt cách nhật: sốt từ 40 0C ñến 41 0C ngày đến ngày, sau nghỉ từ ngày đến ngày; Con vật gầy, da khơ; vật bị thiếu máu suy nhược; Biểu thuỷ thũng vùng thấp, da mỏng; nhiều mí mắt bị thuỷ thũng; Con vật chảy nước mắt mắt có nhiều dử đặc keo; Con vật mang thai bị sảy thai; Ở thể này, vật chết khơng 5.1.3 Bệnh tích Xác động vật gầy gò Niêm mạc mắt tụ máu màu đỏ tía màu vàng sẫm hay nhạt, niêm mạc miệng, âm đạo có màu vàng Thuỷ thũng vùng thấp hầu, ức, nách, chân, háng, chỗ thủy thũng chứa chất nhày keo, máu loãng có màu hồng; Mổ khám thấy: thịt gia súc nhão, mỡ màu vàng thẫm; tim, phổi, lách ñều sưng tụ máu; hạch lympho sưng; xoang ngực, xoang bụng, bao tim tích nước màu vàng; chỗ thuỷ thủng chứa chất nhầy keo 5.2 Chẩn đốn phòng thí nghiệm 5.2.1 Lấy mẫu Dùng tẩm cồn, sát trùng vị trí lấy mẫu Dùng bơm kim tiêm chích vào tĩnh mạch rìa tai, tĩnh mạch cổ, tĩnh mạch ñộng vật hút máu Mẫu bệnh phẩm sau lấy ghi rõ nội dung: tên chủ gia súc; ñịa ñiểm lấy mẫu, thời gian lấy mẫu, loại gia súc, tuổi, tính biệt; triệu chứng lâm sàng, bệnh tích Mẫu lấy xong, phải giữ lạnh từ 0C ñến 0C gửi phòng thí nghiệm 24 h CHÚ Ý: Lấy mẫu vật sốt khả tìm thấy tiên mao trùng máu cao so với bình thường TCVN 8400-5:2011 5.2.2 Phát tiên mao trùng 5.2.2.1 Yêu cầu chung Phát mầm bệnh (Trypanosoma evansi) máu ñộng vật ñang nhiễm bệnh 5.2.2.2 Phương pháp tiêu máu dàn mỏng nhuộm Giemsa 5.2.2.2.1 Nguyên tắc Dựa vào hình dạng tiên mao trùng máu, tính chất bắt màu với thuốc nhuộm Giemsa tiên mao trùng, thành phần hữu hình máu 5.2.2.2.2 Lấy mẫu Nhỏ giọt máu chống đơng (khoảng 20 µl) lên phần đầu phiến kính Dùng phiến kính khác đặt nghiêng góc từ 300 đến 450; đẩy nhanh đầu phiến kính, để khô tự nhiên Đặt tiêu lên khay 5.2.2.2.3 Các bước tiến hành Nhỏ cồn metanol ñể cố ñịnh tiêu bản, để khơ tự nhiên Nhỏ thuốc nhuộm Giemsa, để h Lấy tiêu ra, rửa vòi nước chảy, để khơ tự nhiên Kiểm tra kính hiển vi độ phóng đại 1000 lần 5.2.2.2.4 Đọc kết Dương tính tìm thấy tiên mao trùng bắt màu xanh lơ, nguyên sinh chất bắt màu tím xanh thẫm Tiên mao trùng có nhân nhân phụ, roi Hồng cầu bắt màu hồng ñều Bạch cầu nhân bắt màu sẫm 5.2.2.3 Phương pháp tập trung Haematocrit 5.2.2.3.1 Nguyên tắc Dựa vào trọng lượng tiên mao trùng máu, khả sống chúng ñược giữ ñiều kiện chất bảo quản nhiệt độ thích hợp 5.2.2.3.2 Lấy mẫu Lấy 70 µl máu cho vào hai ống thủy tinh kích thước 75 mm x 1,5 mm TCVN 8400-5:2011 5.2.2.3.3 Các bước tiến hành Bịt ñầu ống thủy tinh matit Đặt ống thủy tinh vào máy ly tâm chuyên dụng Hematocrit với ngun tắc đầu bịt kín theo chiều ngồi Sau ly tâm với tốc độ 3000 r/min 10 Lấy ống thủy tinh Bẻ phần tiếp giáp huyết dung dịch vàng sẫm phía Đổ dung dịch vào phiến kính Đặt lamen lên phía phiến kính, xem độ phóng đại từ 100 lần đến 200 lần CHÚ THÍCH: Phương pháp xác định khoảng 400 tiên mao trùng/ml máu; Có thể nhỏ dầu soi kính lên phần ñược tách biệt ống Haematocrit ñể ñảm bảo tiếp giáp vật kính dầu soi kính 5.2.2.3.4 Đọc kết Dương tính thấy Tiên mao trùng tập trung di ñộng 5.2.2.4 Phương pháp tiêm truyền động vật thí nghiệm 5.2.2.4.1 Ngun tắc Tiên mao trùng có khả sống, nhân lên động vật thí nghiệm mẫn cảm chuột nhắt trắng, chuột lang, thỏ 5.2.2.4.2 Lấy mẫu Lấy 0,2 ml máu chống đơng động vật thí nghiệm chuột nhắt trắng Lấy 0,5 ml máu chống đơng động vật thí nghiệm chuột lang, chuột cống trắng thỏ 5.2.2.4.3 Các bước tiến hành Đối với chuột nhắt trắng, chuột lang, chuột cống trắng: tiêm vào xoang phúc mạc; thỏ: tiêm truyền tĩnh mạch rìa tai Sau từ 24 h đến 48 h, lấy máu chuột kiểm tra tiên mao trùng (soi tươi) Kiểm tra chuột vòng từ tuần đến tuần CHÚ THÍCH: Khi làm nhiều mẫu phải đánh dấu chuột phương pháp cắt lơng 5.2.2.4.4 Đọc kết Dương tính thấy tiên mao trùng di ñộng huyết tương TCVN 8400-5:2011 5.2.2.5 Phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction) 5.2.2.5.1 Nguyên tắc Phương pháp sinh học phân tử ñược sử dụng ñể phát ñoạn gen ñặc hiệu tiên mao trùng cách khuếch đại đoạn gen lên nhờ kit Primer ñặc hiệu 5.2.2.5.2 Lấy mẫu Lấy mẫu máu tĩnh mạch cổ tai gia súc cho vào ống nghiệm có chất chống đơng 5.2.2.5.3 Các bước tiến hành Tách chiết DNA tiên mao trùng từ máu gia súc dùng KIT chiết tách thực quy trình theo hướng dẫn nhà sản xuất Chu trình nhiệt để nhân DNA PCR Chạy điện di: Chạy ñiện di agarose gel với nồng ñộ 1,5 % dung dịch ñệm TAE TBE Nhuộm gel Soi gel chụp ảnh CHÚ THÍCH: Có thể dùng kít phát tiên mao trùng hãng khác cho kết tương ñương 5.2.2.5.4 Đọc kết Phản ứng dương tính khi: – Mẫu đối chứng dương có vạch kích cỡ sản phẩm; – Mẫu đối chứng âm: khơng xuất vạch; – Mẫu kiểm tra có vạch giống mẫu ñối chứng dương 5.2.3 Phát kháng thể tiên mao trùng 5.2.3.1 Nguyên tắc Phát kháng thể tiên mao trùng phương pháp ngưng kết trực tiếp phiến kính Phản ứng ngưng kết xảy tiên mao trùng gặp kháng thể tương ứng có huyết gia súc cần chẩn đốn co cụm lại 5.2.3.2 Các bước tiến hành Nhỏ giọt natri xitrat 3,8 % giọt kháng nguyên sống lên phiến kính 10 TCVN 8400-5:2011 Nhỏ huyết nghi ngờ lên, trộn ñều, ñậy lamen, ñể từ đến 10 Kiểm tra kính hiển vi ñộ phóng ñại 100 200 lần 5.2.3.3 Đọc kết Dương tính thấy tiên mao trùng chụm lại hình hoa cúc CHÚ THÍCH: Các phương pháp phát kháng thể (IFAT, ELISA ) chi phí cao nên thường dùng ñiều tra huyết học Kết luận bệnh Động vật ñược xác ñịnh mắc bệnh tiên mao trùng có đặc điểm dịch tễ học, triệu chứng lâm sàng bệnh tiên mao trùng kết dương tính với phương pháp xét nghiệm sau: Phương pháp Haematocrit: Tiên mao trùng tập trung di ñộng Phương pháp tiêu máu dàn mỏng nhuộm Giemsa: Tiên mao trùng bắt màu xanh lơ, nguyên sinh chất bắt màu tím xanh thẫm Tiên mao trùng có nhân nhân phụ, roi Phương pháp ngưng kết trực tiếp phiến kính: Tiên mao trùng chụm lại hình hoa cúc Phương pháp PCR: mẫu kiểm tra có vạch giống mẫu ñối chứng dương 11 TCVN 8400-5:2011 Thư mục tài liệu tham khảo [1] OIE, 2009, Trypanosoma Evansi Infections (Including Surra) Aetiology Epidemiology [2] Diagnosis Prevention and Control References [3] OIE, 2004, SURRA, Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals [4] Phan Lục, 1997, Giáo trình ký sinh trùng bệnh ký sinh trùng [5] JICA, Quy trình chẩn ñoán bệnh 12 .. .TCVN 8400-5:2011 Lời nói đầu TCVN 8400-5:2011 chuyển đổi từ 10 TCN 821:2006 thành tiêu chuẩn quốc gia theo quy ñịnh khoản Điều 69 Luật Tiêu chuẩn Quy chuẩn kỹ thuật ñiểm a... chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm ñịnh, Bộ Khoa học Công nghệ công bố TCVN 8400-5:2011 TCVN 8400-5:2011 TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8400-5:2011 Bệnh ñộng vật – Quy trình chẩn đốn – Phần 5: Bệnh tiên... chi tiết thi hành số ñiều Luật Tiêu chuẩn Quy chuẩn kỹ thuật; TCVN 8400-5:2011 Cục Thú y biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển nơng thơn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm ñịnh,