ỨNG DỤNG KỸ THUẬT LAI TẠI CHỖ ỨNG DỤNG KỸ THUẬT LAI TẠI CHỖ HUỲNH QUANG ĐỂ PHÁT HIỆN SỚM HUỲNH QUANG ĐỂ PHÁT HIỆN SỚM MỘT SỐ BẤT THƯỜNG NHIỄM SẮC THỂ MỘT SỐ BẤT THƯỜNG NHIỄM SẮC THỂ PGS. TS. TrÇn ThÞ Thanh H¬ng • DTBS: 2,7% tổng số đẻ • Ng/nhân: ĐB gen, ĐB NST TVDT & TVDT & CĐTS CĐTS • Thu thập mẫu: TB ối TB ối, tua rau, máu cuống rốn, sinh thiết thai, TB thai tự do trong máu mẹ • KT phát hiện: – DT tế bào: phân tích NST tiêu chuẩn C§RLNST – DT phân tử – DT tế bào – phân tử CÁC KỸ THUẬT CHẨN ĐOÁN THU THẬP MẪU: - Chọc ối Chọc ối - Sinh thiết rau - Máu cuống rốn - Soi phôi thai - ADN tự do máu mẹ DTTB - phân tích NST băng G DTPT: PCR, Sequencing, Southerblot, Northerblot DTTB – PT: FISH Tiêu chuẩn phát hiện ĐB NST phát hiện BĐ gen Phát hiện ĐB NST: SL, RL nhỏ Các loại ADN dò ADN dß ph?n tâm ADN dß đ?u mút ADN dß t? ch?c h?ch nhân ADN dß l?p đ?c hi?u trên băng R ADN dß toànb? NST ADN dß đ?c hi?u nhánh NST ADN dß đ?c hi?u locus TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU KT FISH THẾ GIỚI • 1969 bắt đầu, 1980 đầu dò huỳnh quang Thập kỷ 90 ứng dụng rộng rãi • Phát hiện trước sinh các RL NST:HC Down, Edward, Patau, Turner • Mất đoạn nhỏ <3Mb • RL đầu mút & gần đầu mút VIỆT NAM • 2003 B.V.M.Hoàng-T/p HCM: áp dụng CĐTS • 2004 BM YSH – DT ĐHYHN: hoàn chỉnh, CĐTS HC Down • 2007 viện HH-TM: CĐ leceumia DTTB khó hoặc không thể phát hiện 1 Hoàn chỉnh kỹ thuật FISH trên NST ở kỳ giữa và trên nhân tế bào gian kỳ của đầu dò ADN 13, 18, 21, X, Y 2 Ứng dụng kỹ thuật FISH để phát hiện sớm trước sinh một số bất thường NST 13, 18, 21, X, Y 3 Ứng dụng kỹ thuật FISH để phát hiện một số rối loạn cấu trúc NST liên quan NST 21, NST X Môc tiªu 1 §Çu dß ADN 13, 18, 21, X, Y: + 3 m u i: 15-18ẫ ố w + 3 m u i: 28-32ẫ ố w Môc tiªu 2 Môc tiªu 3 §Çu dß ADN TelXp/Yp & TelXq/Yq: 3 m u i: 15-18ẫ ố w 73 73 thai thai phụ phụ Dị dạng chi, Dị dạng chi, nội quan nội quan Siêu âm (+): Siêu âm (+): Nang BH Nang BH D D ày da gáy ày da gáy Triple test (+) hoặc (-) Triple test (+) hoặc (-) C n KQ FISH ầ đ i chi u:ố ế + 2 b nh nh©n:ệ RLCT NST 21, X + 1 m u i RLCT ẫ ố NST 13 C n KQ FISH ầ chÈn ®o¸n: + 2 b nh nh©n: ệ NST marker + 1 trÎ nam 46,XX Lấy mẫu – làm tiêu bản Lấy mẫu – làm tiêu bản nhân TB gian kỳ nhân TB gian kỳ Lấy mẫu - Nuôi cấy – Làm Lấy mẫu - Nuôi cấy – Làm tiêu bản NST kỳ giữa tiêu bản NST kỳ giữa QUY TRÌNH THỰC HIỆN KT FISH (Vysis) QUY TRÌNH THỰC HIỆN KT FISH (Vysis) Biến tính ADN Biến tính ADN Lai ADN dò và ADN đích Lai ADN dò và ADN đích Nhuộm mẫu lai bằng thuốc nhuộm huỳnh quang Nhuộm mẫu lai bằng thuốc nhuộm huỳnh quang Phân tích tín hiệu lai dưới KHV huỳnh quang Phân tích tín hiệu lai dưới KHV huỳnh quang (50 nhân gian kỳ/mẫu - 20 cụm kỳ giữa/mẫu) (50 nhân gian kỳ/mẫu - 20 cụm kỳ giữa/mẫu) 1. Lµm tiªu b¶n TB èi ë gian kú ho c nuặ ôi c y l m tiấ à ªu b n NST k gi aả ỳ ữ 2. BiÕn tÝnh ADN dß vµ ADN ®Ých cña m u XNẫ 3. Lai ADN dß víi ADN ®Ých cña thai (20-24h) 5. Ph©n tÝch d6íi KHV huúnh quang t×m tÝn hiÖu lai Kết quả Kết quả sau 2-3 ngày sau 2-3 ngày 4. Nhu m m u lai b ng ộ ẫ ằ thu c nhu m huúnh quangố ộ QUY TRÌNH THỰC HIỆN KT FISH (Vysis) QUY TRÌNH THỰC HIỆN KT FISH (Vysis) [...]... DNG K THUT FISH TRONG CTS LàM Hồ SƠ Thai phụ 35 tuổi TS sinh con DT XN triple test AFP, HCG, uE3 XĐ thai phụ nguy cơ cao sinh con bất thường NST TV di truyền Sản khoa Chọc ối CĐ trước sinh XN: DTTB phân tích NST KT FISH Tư vấn DT Theo dõi QT mang thai, sau sinh Siêu âm 1 Hoàn chỉnh kỹ thuật FISH 2 ứng dụng kỹ thuật fish trong chẩn đoán trước sinh một số bất thường nst 3 ứng dụng kỹ thuật fish trong... FISH 2 ứng dụng kỹ thuật fish trong chẩn đoán trước sinh một số bất thường nst 3 ứng dụng kỹ thuật fish trong chẩn đoán một số rối loạn nst 1 Hoàn chỉnh kỹ thuật FISH Bng 1 Kt qu hon chnh k thut FISH vi u dũ ADN 13, 18, 21, X, Y trờn nhõn gian k KT QU FISH (số tín hiệu lai) NST Y Kết quả DTTB 2 0 46, XX 2 1 1 46,XY 2 2 1 1 46,XY 2 3 2 2 0 47, XX +18 30 2 2 3 1 1 47,XY,+21 32 2 2 2 1 1 46, XY Mu Tuần... trờn NST k gia ca thai nam bỡnh thng u dũ Telq/Yq trờn NST k gia ca thai nam bỡnh thng 2 ứng dụng kỹ thuật fish trong chẩn đoán trước sinh một số bất thường nst Kt qu chn oỏn trc sinh mt s bt thng NST Kt qu chn oỏn trc sinh hi chng Turner i chiu kt qu siờu õm FISH DTTB trong hi chng Turner Số lư ợng FISH (số tín hiệu lai trên NST) Kết qu siêu âm mẫu 13 18 21 X Y Di truyền tế bào 4 NBH đơn thuần 2... 1 Chân tay vẹo, sứt môi hở hàm 2 3 2 1 1 47, XY, +18 Kt qu FISH trờn nhõn TB gian k v karyotyp ca thai hi chng Edward NST X NST X NST 18 NST 18 Kt qu sng lc huyt thanh m ca thai hi chng Edward 3 ứng dụng kỹ thuật fish trong chẩn đoán một số rối loạn nst Bnh nhõn B.T.H 24 tui Biu hin LS: HC Turner Karyotyp 46,X, i(Xq) NST isoXq NST X Kt qu FISH trờn cm NST k gia vi u dũ ADN Xq/Yq Thai ph .T.T.H, 32... chân tay ngắn, TDMP 2 2 2 1 0 45, X NBH, phù toàn TDMP, 1 (92%) 45, X (92%)/ Kt qu FISH trờn nhõn TB gian k v karyotyp ca thai hi chng Turner NST X NST 18 NST 18 S i chiu kt qu siờu õm nang bch huyt vi cỏc bt thng NST Kt qu chn oỏn trc sinh hi chng Down i chiu kt qu siờu õm FISH DTTB trong hi chng Down Số lư ợng mẫu FISH (số tín hiệu lai trên NST) Kết qu siêu âm Di truyền tế bào 18 21 X Y 2 2 3 1... màng bụng 2 2 3 2 0 47, XX + 21 2 Nang bạch huyết 2 2 3 1 1 47, XY + 21 Kt qu FISH trờn nhõn TB gian k v karyotyp ca thai hi chng Down NST 13 NST 21 NST 21 NST 21 NST 13 Kt qu sng lc huyt thanh m ca thai hi chng Down MoM Thai Kt qu chn oỏn trc sinh hi chng Edward i chiu kt qu siờu õm FISH DTTB trong h/c Edward Số lư ợng mẫu FISH (s tín hiệu lai trờn NST) Kết qu siêu âm 13 18 21 X Y Di truyền tế bào... qu FISH trờn nhõn t bo gian k ca u dũ ADN 13, 18, 21, X, Y v karyotyp ca thai nam bỡnh thng NST 13 NST 21 NST 21 NST 13 u dũ ADN 13, 21 NST 18 NST Y NST X NST 18 u dũ ADN 18, X, Y Kt qu FISH trờn nhõn t bo gian k ca u dũ ADN 13, 18, 21, X, Y v karyotyp ca thai n bỡnh thng NST 13 NST 21 NST 13 NST 21 u dũ ADN 13, 21 Trước sinh NST 18 NST X NST 18 NST X u dũ ADN 18, X, Y Bng 2 Kt qu hon chnh k thut FISH. .. 21 NST 21 Kt qu FISH trờn cm NST k gia vi u dũ ADN 13, 21 Bnh nhõn T.T.M.H, 12 tui Biu hin LS: HC Down Karyotyp: 46,XX,idic(21)(pterq22.3::q22.3pter) NST 13 NST 13 NST 21 NST idic(21)(pterq22.3::q22.3pter) Kt qu FISH trờn cm NST k gia vi u dũ ADN 13, 21 Bnh nhõn L.H.N, 22 tui Biu hin LS: vụ kinh I, lựn Karyotyp: 46,X,del(Xq),del(telXp) NST 18 NST X NST del(Xq),del(telXp) NST 18 Kt qu FISH trờn cm NST... lựn Karyotyp: 46,X,del(Xq),del(telXp) NST 18 NST X NST del(Xq),del(telXp) NST 18 Kt qu FISH trờn cm NST k gia vi u dũ ADN 18, X, Y Tel Xp Kt qu FISH trờn cm NST k gia vi u dũ ADN TelXp/Yp Tr nam, karyotyp 46,XX Kt qu PCR: gen TDF (+) NST X NST Y NST 18 Kt qu FISH trờn cm NST k gia vi u dũ ADN 18, X, Y ... NST 21 NST 13 NST 21 u dũ ADN 13, 21 Trước sinh NST 18 NST X NST 18 NST X u dũ ADN 18, X, Y Bng 2 Kt qu hon chnh k thut FISH vi cỏc u dũ ADN 13, 18, 21, X, Y v Tel Xp/Yp; Tel Xq/Yq trờn NST k gia Kết qu FISH (số tín hiệu lai) ầu dò Tel Xp/Yp ầu dò 13, 18, 21, X, Y Ký hiệu mẫu Tuần thai 1 15 2 2 2 15 2 3 18 2 NST 13 NST NST 18 21 ầu dò Tel Xq/Yq Kết qu di truyền tế bào NST X NST Y Xp Yp Xq Yq 2 2 0 2 0