9/11/2008 BM CNLM, HBKHN 1 Phõn tớch vi sinh vtth ự cph ẩ m Chơng II : Kiểm định vi sinh vật thực phẩm II.1. Chuẩn bị mẫu phân tích vi sinh : Cách lấy mẫu, vận chuyển, bảo quản mẫu và chuẩn bị mẫu phân tích II.2 Các phơng pháp định lợng vi sinh vật II.3 Phân tích các chỉ tiêu vi sinh vật 9/11/2008 BM CNLM, HBKHN 2 Lấy mẫu phân tích vi sinh Cách lấy mẫu : Bao gói độc lập ( hộp, chai, túi .) Từ các khối lợng lớn (bia hơi, nớc mắm, thịt . ) + Sát trùng vị trí lấy mẫu cũng nh dụng cụ chứa mẫu + Cho vào các lọ, bỡnh kín có nút kín đã tiệt trùng + Ghi đầy đủ các thông số : số bao gói, mẫu, nơi lấy mẫu, lô hàng sn xuất, ngày lấy mẫu, ký hiệu Chơng II Nguyên tắc : 2 điều kiện ộ tin cậy, đại diện và đủ số lợng Không bị nhiễm hoặc không có sự phát triển thêm 9/11/2008 BM CNLM, HBKHN 3 Vận chuyển & boqunmẫu Hạn chế tối đa sự nhiễm tạp và tránh sự phát triển của VSV Tuỳ SP mà vận chuyển và boqunhợplý t min (<8h ) & boqunlnh -Bin is lng, chtlng VSV - hot ng thay i, khú phỏt hin trờn mụi trng chnlc Chơng II BoqunTo âm( ở trạng thái đóng bng) 9/11/2008 BM CNLM, HBKHN 4 Chunb pha long mu To dung dch ng nht Pha loóng mu: Bis ca 10 : 10 -1 , 10 -2 , 10 -3 Dung dịch để pha loãng : Tuỳ theo snphẩm Thành phần các dung dịch pha long Hàm lợng (g) Các chất Nớc sinhlý Dd Ringer Trypton Trypton đệm Pepton/Trypton 1 20 NaCl 8,5 8,5 8,5 5 KCl 0,25 CaCl 2 0,3 Na 2 HPO 4 9 KH 2 PO 4 1 NaHCO 3 0,2 H 2 O Pha đủ cho 1 lit Chơng II 9/11/2008 BM CNLM, HBKHN 5 Phõn tớch vi sinh vtth ự cph ẩ m Chơng II : Kiểm định vi sinh vật thực phẩm II.1. Chuẩn bị mẫu phân tích vi sinh : Cách lấy mẫu, vận chuyển, bảo quản mẫu và chuẩn bị mẫu phân tích II.2 Các phơng pháp định lợng vi sinh vật II.3 Phân tích các chỉ tiêu vi sinh vật 9/11/2008 BM CNLM, HBKHN 6 S Cỏc phng phỏp định lợng VSV Khối lợng Đo độ đục đếm trực tiếp (buồng đếm) Đếm khuẩn lạc -Trong/trên mặt thạch Nuôi cấy trên mt lỏng Phơng pháp MPN Màng lọc Chơng II Phơng pháp chuẩn, truyn thng Phơng pháp xác định nhanh 9/11/2008 BM CNLM, HBKHN 7 Phơng pháp đếm khuẩn lạc " Phát hiện nhng tế bào vi sinh vật còn sống có trong mẫu (Mỗi khuẩn lạc = một tế bào). " Phơng pháp chuẩn để xác định tổng số vi sinh vật trong mẫu Nguyên tắc: -Cấy chính xác một thể tích mẫu (hoặc dịch pha loãng) vào trong hoặc lên trên bề mặt môi trờng thạch. -Từ mỗi độ pha loãng cần cấy lặp lại ít nhất là 2 hộp -Mỗi mẫu cần làm ít nhất 2 độ pha loãng liên tiếp, 30 - 300 khuẩn lạc/ hộp. 9/11/2008 BM CNLM, ĐHBKHN 8 §Õm khuÈn l¹c Trong môi trường thạch (Plate count) Trên môi trường thạch (Surface count) Pha loãng mẫu 1ml hộp petri Đổ mt thạch hộppetri Nuôi cấytrongtủấm Trộntheokỹ thuật Pha loãng mẫu Đổ mt thạch hộppetri 0,05-0,1ml hộppetri Trang đều trên bề mặt Nuôi cấytrongtủấm Ch−¬ng II 9/11/2008 BM CNLM, HBKHN 9 Tớnh ktqu Quan sát và đếm số lợng khuẩn lạc mọc trên đĩa (30-300). Tính tổng số VSV theo công thức : Chơng II vfnn C N .) 1,0( 121 + = C -tổngsốkhuẩnlạc đếmđợc trên tất c các đĩa n 1 - số đĩa đếm ở nồng độ pha long thứ 1 n 2 - số đĩa đếm ở nồng độ pha long thứ 2 f 1 -Hệsốphalong của đĩa đếm thứ 1 v - thể tích mẫu cấy vào mỗi hộp petri 9/11/2008 BM CNLM, ĐHBKHN 10 KhuÈn lạc [...]... Grady 2 ống 3 ống S c tr ng M P N S c tr ng M P N S c trn g 000 001 010 011 020 100 101 110 111 120 121 20 0 20 1 21 0 21 1 21 2 22 0 22 1 22 2 0,0 0,5 0,5 0,9 0,9 0,6 1 ,2 1,3 2, 0 2, 0 3,0 2, 5 5 6 13 20 25 70 11 0 9/11 /20 08 000 001 010 011 020 100 101 1 02 110 111 120 121 130 20 0 20 1 20 2 21 0 21 1 21 2 22 0 0 0,3 0,3 0,6 0,6 0,4 0,7 1,1 0,7 1,1 1,1 1,5 1,6 0,9 1,4 2, 0 1,5 2 3 2 221 22 2 22 3 23 0 23 1 23 2 300 301 3 02 310... 3 02 310 311 3 12 313 320 321 322 323 330 331 3 32 333 5 ống M P N S c tr ng M P N S c trn g 3 000 0,0 20 3 3,5 001 0 ,2 210 4 0 02 0,4 21 1 3 010 0 ,2 2 12 3,5 011 0,4 22 0 4 0 12 0,6 22 1 2, 5 020 0,4 22 2 4,0 021 0,6 23 0 6,5 030 0,6 23 1 4,5 100 0 ,2 240 7,5 101 0,4 300 11 1 02 0,6 301 16 103 0,8 3 02 9,5 110 0,4 310 15 111 0,6 311 20 1 12 0,8 3 12 30 120 0,6 313 25 121 0,8 320 45 122 1,0 321 110 130 0,8 322 BM CNLM,... . èng Số đặc trư ng M P N Số đặc trư ng M P N Số đặc trưn g M P N Số đặc trư ng M P N Số đặc trưn g M P N Số đặc trưn g M P N Số đặc trư ng M P N 000 001 010 011 020 100 101 110 111 120 121 20 0 20 1 21 0 21 1 21 2 22 0 22 1 22 2 0,0 0,5 0,5 0,9 0,9 0,6 1 ,2 1,3 2, 0 2, 0 3,0 2, 5 5 6 13 20 25 70 11 0 000 001 010 011 020 100 101 1 02 110 111 120 121 130 20 0 20 1 20 2 21 0 21 1 21 2 22 0 0 0,3 0,3 0,6 0,6 0,4 0,7 1,1 0,7 1,1 1,1 1,5 1,6 0,9 1,4 2, 0 1,5 2 3 2 221 22 2 22 3 23 0 23 1 23 2 300 301 3 02 310 311 3 12 313 320 321 322 323 330 331 3 32 333 3 3,5 4 3 3,5 4 2, 5 4,0 6,5 4,5 7,5 11 16 9,5 15 20 30 25 45 110 140 000 001 0 02 010 011 0 12 020 021 030 100 101 1 02 103 110 111 1 12 120 121 122 130 131 140 0,0 0 ,2 0,4 0 ,2 0,4 0,6 0,4 0,6 0,6 0 ,2 0,4 0,6 0,8 0,4 0,6 0,8 0,6 0,8 1,0 0,8 1,0 1,1 20 3 21 0 21 1 21 2 22 0 22 1 22 2 23 0 23 1 24 0 300 301 3 02 310 311 3 12 313 320 321 322 330 331 1 ,2 0,7 0,9 1 ,2 0,9 1 ,2 1,4 1 ,2 1,4 1,4 0,8 1,1 1,4 1,1 1,4 1,7 2, 0 1,4 1,7 2, 0 1,7 2, 0 400 401 4 02 403 410 411 4 12 420 421 422 430 431 4 32 440 441 450 451 500 501 5 02 503 504 1,3 1,7 2, 0 2, 5 1,7 2, 0 2, 5 2, 0 2, 5 3,0 2, 5 3,0 4,0 3,5 4,0 4,0 5,0 2, 5 3,0 4,0 6,0 7,5 513 520 521 522 523 524 525 530 531 5 32 533 534 535 540 541 5 42 543 544 545 550 551 5 52 8,5 5,0 7,0 9,5 12 15 17 8,0 11 14 17 20 25 13 17 25 30 35 45 25 35 60 9/11 /20 08. èng Số đặc trư ng M P N Số đặc trư ng M P N Số đặc trưn g M P N Số đặc trư ng M P N Số đặc trưn g M P N Số đặc trưn g M P N Số đặc trư ng M P N 000 001 010 011 020 100 101 110 111 120 121 20 0 20 1 21 0 21 1 21 2 22 0 22 1 22 2 0,0 0,5 0,5 0,9 0,9 0,6 1 ,2 1,3 2, 0 2, 0 3,0 2, 5 5 6 13 20 25 70 11 0 000 001 010 011 020 100 101 1 02 110 111 120 121 130 20 0 20 1 20 2 21 0 21 1 21 2 22 0 0 0,3 0,3 0,6 0,6 0,4 0,7 1,1 0,7 1,1 1,1 1,5 1,6 0,9 1,4 2, 0 1,5 2 3 2 221 22 2 22 3 23 0 23 1 23 2 300 301 3 02 310 311 3 12 313 320 321 322 323 330 331 3 32 333 3 3,5 4 3 3,5 4 2, 5 4,0 6,5 4,5 7,5 11 16 9,5 15 20 30 25 45 110 140 000 001 0 02 010 011 0 12 020 021 030 100 101 1 02 103 110 111 1 12 120 121 122 130 131 140 0,0 0 ,2 0,4 0 ,2 0,4 0,6 0,4 0,6 0,6 0 ,2 0,4 0,6 0,8 0,4 0,6 0,8 0,6 0,8 1,0 0,8 1,0 1,1 20 3 21 0 21 1 21 2 22 0 22 1 22 2 23 0 23 1 24 0 300 301 3 02 310 311 3 12 313 320 321 322 330 331 1 ,2 0,7 0,9 1 ,2 0,9 1 ,2 1,4 1 ,2 1,4 1,4 0,8 1,1 1,4 1,1 1,4 1,7 2, 0 1,4 1,7 2, 0 1,7 2, 0 400 401 4 02 403 410 411 4 12 420 421 422 430 431 4 32 440 441 450 451 500 501 5 02 503 504 1,3 1,7 2, 0 2, 5 1,7 2, 0 2, 5 2, 0 2, 5 3,0 2, 5 3,0 4,0 3,5 4,0 4,0 5,0 2, 5 3,0 4,0 6,0 7,5 513 520 521 522 523 524 525 530 531 5 32 533 534 535 540 541 5 42 543 544 545 550 551 5 52 8,5 5,0 7,0 9,5 12 15 17 8,0 11 14 17 20 25 13 17 25 30 35 45 25 35 60 9/11 /20 08. èng Số đặc trư ng M P N Số đặc trư ng M P N Số đặc trưn g M P N Số đặc trư ng M P N Số đặc trưn g M P N Số đặc trưn g M P N Số đặc trư ng M P N 000 001 010 011 020 100 101 110 111 120 121 20 0 20 1 21 0 21 1 21 2 22 0 22 1 22 2 0,0 0,5 0,5 0,9 0,9 0,6 1 ,2 1,3 2, 0 2, 0 3,0 2, 5 5 6 13 20 25 70 11 0 000 001 010 011 020 100 101 1 02 110 111 120 121 130 20 0 20 1 20 2 21 0 21 1 21 2 22 0 0 0,3 0,3 0,6 0,6 0,4 0,7 1,1 0,7 1,1 1,1 1,5 1,6 0,9 1,4 2, 0 1,5 2 3 2 221 22 2 22 3 23 0 23 1 23 2 300 301 3 02 310 311 3 12 313 320 321 322 323 330 331 3 32 333 3 3,5 4 3 3,5 4 2, 5 4,0 6,5 4,5 7,5 11 16 9,5 15 20 30 25 45 110 140 000 001 0 02 010 011 0 12 020 021 030 100 101 1 02 103 110 111 1 12 120 121 122 130 131 140 0,0 0 ,2 0,4 0 ,2 0,4 0,6 0,4 0,6 0,6 0 ,2 0,4 0,6 0,8 0,4 0,6 0,8 0,6 0,8 1,0 0,8 1,0 1,1 20 3 21 0 21 1 21 2 22 0 22 1 22 2 23 0 23 1 24 0 300 301 3 02 310 311 3 12 313 320 321 322 330 331 1 ,2 0,7 0,9 1 ,2 0,9 1 ,2 1,4 1 ,2 1,4 1,4 0,8 1,1 1,4 1,1 1,4 1,7 2, 0 1,4 1,7 2, 0 1,7 2, 0 400 401 4 02 403 410 411 4 12 420 421 422 430 431 4 32 440 441 450 451 500 501 5 02 503 504 1,3 1,7 2, 0 2, 5 1,7 2, 0 2, 5 2, 0 2, 5 3,0 2, 5 3,0 4,0 3,5 4,0 4,0 5,0 2, 5 3,0 4,0 6,0 7,5 513 520 521 522 523 524 525 530 531 5 32 533 534 535 540 541 5 42 543 544 545 550 551 5 52 8,5 5,0 7,0 9,5 12 15 17 8,0 11 14 17 20 25 13 17 25 30 35 45 25 35 60 9/11 /20 08