Mục tiêu nghiên cứu Xác định ảnh hưởng của Kali và Phosphore trong môi trường nuôi cấy mô Murashige & Skoog MS đến sự hình thành và phát triển chồi lan DendrobiumSonia, nhằm thiết lập mô
Mục tiêu nghiên cứu
Xác định ảnh hưởng của Kali và Phosphore trong môi trường nuôi cấy mô Murashige & Skoog (MS) đến sự hình thành và phát triển chồi lan Dendrobium
Sonia, nhằm thiết lập môi trường thích hợp để nhân chồi lan Dendrobium Sonia trong vi nhaân gioáng lan in vitro.
Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài nghiên cứu
Từ trước tới nay việc nhân giống in vitro đối với cây hoa lan hầu hết đều sử dung môi trường Murashige & Skoog, 1962) đây là môi trường cơ bản sử dung chung cho nuôi cấy mô thực vật Tuy nhiên dối với mỗi cây trồng khác nhau thi nhu cầu dinh dưỡng khác nhau đặc biệt là các nguyên tố đa lượng N, P, K Thậm chí ngay trên cùng một giống cây trồng ở các giai đoạn sinh trương khác nhau hai mục đích khai thác khác nhau của con người thi yêu cầu N, P, K cũng khác nhau Vi vậy việc xác định hàm lượng P, K thích hợp trong môi trường nhân chồi hoa lan là cơ sở khoa học cho việc hoàn thiện qui trình sản xuất cây giống có hiệu quả cao Ý nghĩa thực tiễn:
Việc xác định ảnh hưởng của K và P đến sự hình thành và phát triển chồi lan
Dendrobium Sonia làm cơ sở cho việc thiết lập và hoan thiện qui trình sản xuất cây lan giống in vitro có chất lượng và hiệu quả cao, phục cho sản xuất hoa lan thương mại ở nước ta, giảm nhập khẩu cây lan giống từ nước ngoài, góp phần ngăn ngừa sự lây lan bệnh dịch qua cây giống
Phương pháp nghiên cứu
Đề tài thực hiện nhân chồi trong môi trường MS (Murashige Skoog, 1962) đặc Nghiên cứu 9 môi trường nuôi với các nồng độ Kali khác nhau trên giống lan
Dendrobium Sonia Đồng thời, nghiên cứu 10 môi trường nuôi cấy với nồng độ
Phosphore khác nhau trên giống lan Dendrobium Sonia Thí nghiệm bố trí kiểu đầy đủ ngẫu nhiên hoàn toàn thực hiện với 5 lần lặp lại, gồm 9 nghiệm thức (thí nghiệm Kali) và 10 nghiệm thức (thí nghiệm Phosphreo).
Trong nuôi cấy mô vi nhân giống lan, chồi là nguyên liệu nền rất quan trọng hình thành cây giống Nó ảnh hưởng trực tiếp đến số lượng và chất lượng cây giống Sự hình thành và phát triển của chồi phụ thuộc vào các yếu tố trong môi trường nuôi cấy Đề tài nghiên cứu ảnh hưởng của Kali và Phospho trong môi trường nuôi cấy MS ảnh hưởng đến sự hình thành và phát triển chồi ở giống lan
Dendrobium Sonia Kết quả đã xác định được ảnh hưởng của Kali và Phosphore đến chồi giống lan nhiên cứu như sau: hàm lượng kali trong môi trường từ 780mg/l trở chồi lan phát triển mạnh nhất Hàm lượng Kali từ 950mg/l- 1120mg/l tăng khả năng tạo chồi lan Dendrobium Sonia Nếu thấp hơn hoặc vượt quá ngưỡng này thì vai trò của Kali đối chồi không rõ rệt Hàm lượng Kali trong môi trường ít ảnh hưởng đến sự hình thành và phát triển bộ rễ của cây lan.
Phosphore ảnh hưởng rõ khi hàm lượng P từ 615 -791mg/l làm cho chồi ra rễ sớm, rễ lớn, khỏe và dài Hàm lượng P trong môi trường từ 615-791mg/l số chồi đạt cao tập trung ở giai đoạn 6 tuần nuôi cấy hơn hẳn so với môi trường đối chứng Số lá/chồi và số chồi không phụ thuộc vào sự tăng hay giảm hàm lượng P trong môi trường nuôi cấy Chiều cao chồi tăng dần theo hàm lượng P từ P1(176mg/l)< P2(264mg/l) < P3(351mg/l) < P4(439mg/l) và đạt cực đại ở P 439mg/l rồi và có xu hướng giảm dần theo chiều tăng của hàm lượng P như sau: P4(439mg/l) > P5(527mg/l)> P6(615mg/l) > P7(703mg/l) > P8(791mg/l Sự tăng trưởng bộ rễ chỉ thễ hiện rõ từ môi rường P4 trở đi nghĩa là khi tăng hàm lượng lân trong môi trường từ 439mg/l trở lên thì sự tăng trưởng chiều dài bộ rễ cung tăng dân theo chiều tăng của hàm lượng P trong môi trường P4(439mg/l) 6 để đảm bảo giá trị pH sau hấp thích hợp.
K6 K7 K8 Hình 3.1: Số chồi hình thành sau 8 tuần nuôi cấy trên các môi trường có hàm lượng Kali khác nhau.
THÍ NGHIỆM 2: NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA PHOSPHORE ĐẾN SỰ HÌNH THÀNH VÀ PHÁT TRIỂN CHỒI LAN DENDROBIUM SONIA
Bảng 3.5.: Ảnh hưởng của Phosphore đến khả năng hình thành và phát triển chồi lanDendrobiumSonia sau 8 tuaàn nuoâi caáy
Số chồi lan hình thành qua các giai đoạn
TT Kớ hieọu moâi trường
Hàm lượng P (mg/l) 2 tuần 4 tuần 6 tuần 8 tuần
Ghi chú: Những chữ giống nhau trên cùng một cột, giá trị khác biệt không có ý nghĩa thống kê với P = 0,05 trong Duncan’s test.
(1)- chieàu cao choài ủo luực 8 tuaàn sau caỏy
Số chồi mẫu ban đầu là 6 chồi/bình
Kết quả bảng 3.5 cho thấy sự hình thành chồi ở các nghiệm thức môi trường tương ứng với cac giai đoạn 2 tuần, 4 tuần, 6 tuần và 8 tuần là không giống nhua va không theo môt qui luật nào Điều đáng lưu ý nhất ở đây là khi ta tăng hàm lượng P trong môi trường nuôi cấy lên cao từ 615-791 tương ứng với các môi hơn hẳn so với môi trường đối chứng Chiều cao chồi các nghiệm thức này tương đương như đối chứng (17-20mm) Điều này rất quan trọng cho giai đoạn sản xuất cây lan giống có chất lượng cao Trong khi đó các môi trường khác số chồi đạt cao ở giai đoạn 8 tuần sau cấy, chứng tỏ sự hình thành chồi muộn, chồi ra không tap trung, kéo dài thời gian nảy chồi đây là sự bất lợi cho công tác sản xuất cây giống sau này Sự hình thành chồi lan Dendrobium qua các giai đoan nuôi cấy được thể hiện rất rõ trên biểu đồ 3.5
Xét ảnh hưởng của Phosphore đến sự hình thành rễ của chồi lanDendrobium
Sonia sau 8 tuần nuôi cấy trên bảng 3.7 cho thấy ở giai đoạn 6 tuần sau cấy, ảnh hưởng của Phosphore đến sự hình thành rễ thể rõ ở các nghiệm thức môi trường có chứa P so với môi trường không có P (Po), đặc biệt là các môi trường có chứa hàm lượng P cao như P6, P7 và P8 (từ 615-791mg/l) Cụ thể khi tăng hàm lượng P trong môi trường nuôi cấy MS từ 615 mg/l đến 791mg/l sẽ tạo rễ sớm trên chồi lan Dendrobium Sonia ngay giai đoạn 6 tuần nuôi và số rễ tiếp tục tăng ở giai đoạn 8 tuần nuôi cấy Các rễ lan được tạo ra từ các chồi cấy trong các môi trường P6, P7 và P8 đều có màu xanh sáng, chiều dài rễ dài hơn các môi trường có hàm lượng P thấp hơn (bảng 3.7) Qua bảng 3.7 và biểu đồ 3.5 có thể nhận xét như sau:
Phosphore đóng vai trò quan trọng trong quá trình hình thành và phát triển bộ rễ của chồi lan Dendrobium Sonia Aûnh hưởng này thể hiện rõ nhất khi bổ sung vào môi trường nuôi cấy với hàm lượng P cao (từ 615 -791mg/l) sẽ làm cho chồi ra rễ sớm, rễ lớn, khỏe và dài.
Bảng 3.6: Aûnh hưởng của Phosphore đến sự hình thành rễ của chồi lan
DendrobiumSonia sau 8 tuaàn nuoâi caáy
Số rễ hình thành /chồi STT Kyự hieọu môi trường Hàm lượng P
Chiều dài rễ sau 8 tuaàn nuoâi (mm)
Ghi chú: Những chữ giống nhau trên cùng một cột, giá trị khác biệt không có ý nghĩa thống kê với P = 0.05 trong Duncan’s test.
Số chồi mẫu ban đầu là 6 chồi/bình
Xét một cách tổng quát đặc điểm chủa chồi lan Dendrobium Sonia sau 8 tuần nuôi trên biểu đồ 3.6 gồm các chỉ tiêu: chồi, lá rễ cho thấy: số lá hình thành trên chồi không phụ thuộc vào sự thay đổi hàm lượng P trong môi trương nuôi cấy Số chồi mới hình thành sau 8 tuần nuôi, sự tăng giảm không phụ thuộc vào sự tăng hay giảm hàm lượng P trong môi trường nuôi cấy Điều đáng lưu ý ở đây là sự tăng trưởng của chồi (chiều cao chồi), chiều cao chồi tăng dần theo sự tăng hàm lượng P bổ sung vào môi trường nuôi cấy từ P1(176mg/l)< P2(264mg/l) P5(527mg/l)> P6(615mg/l) > P7(703mg/l) > P8(791mg/l. Đối với sự tăng trưởng của bộ rễ thì khác hoàn toàn Sự tăng trưởng bộ rễ chỉ thễ hiện rõ từ môi rường P4 trở đi nghĩa là khi tăng hàm lượng lân trong môi trường từ 439mg/l trở lên thì sự tăng trưởng chiều dài bộ rễ cung tăng dân theo chiều tăng của hàm lượng P trong môi trường P4(439mg/l) < P5(527mg/l)