luận văn thạc sĩ nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất kích thích sinh trưởng đến khả năng tái sinh và nhân nhanh chồi cây bình vôi tím stephania rotunda lour

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LÝ THỊ LIỄU Tên đề tài: NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT KÍCH THÍCH SINH TRƢỞNG ĐẾN KHẢ NĂNG TÁI SINH VÀ NHÂN NHANH CHỒI CÂY BÌNH VƠI TÍM (Stephania rotunda Lour) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chun ngành : Cơng nghệ Sinh học Khoa : CNSH-CNTP Khóa học : 2011-2015 Thái Nguyên, năm 2015 Thái Nguyên, 2015 n ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LÝ THỊ LIỄU Tên đề tài: NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT KÍCH THÍCH SINH TRƢỞNG ĐẾN KHẢ NĂNG TÁI SINH VÀ NHÂN NHANH CHỒI CÂY BÌNH VƠI TÍM (Stephania rotunda Lour) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo Chuyên ngành Khoa Lớp Khóa học Giảng viên hƣớng dẫn : Chính quy : Cơng nghệ Sinh học : CNSH-CNTP : 43-CNSH : 2011-2015 : PGS.TS Ngơ Xn Bình Bộ Khoa học Cơng nghệ ThS Nguyễn Thị Tình Khoa CNSH-CNTP - Trƣờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Thái Nguyên, năm 2015 n i LỜI CẢM ƠN Sau thời gian thực tập Phịng Thí nghiệm Khoa Cơng nghệ Sinh họcCông nghệ Thực phẩm, đến em hoàn thành đề tài tốt nghiệp Để đạt kết ngày hôm nay, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban Giám hiệu Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, Ban Chủ nhiệm Khoa Công nghệ Sinh học-Công nghệ Thực phẩm thầy cô giáo Khoa tạo điều kiện tốt cho em suốt thời gian thực tập Em xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến thầy giáo Ngơ Xn Bình, giáo Nguyễn Thị Tình kĩ sư Lã Văn Hiền tận tình bảo, giúp đỡ hướng dẫn em thời gian thực đề tài Cuối cùng, em xin cám ơn gia đình tạo điều kiện vật chất tốt ln chỗ dựa tinh thần cho em trình thực tập; cảm ơn bạn bè giúp đỡ em thời gian vừa qua Mặc dù thân cố gắng thời gian thực đề tài có hạn nên khóa luận khơng thể tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp chân thành từ thầy bạn để đề tài hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, tháng năm 2015 Sinh viên Lý Thị Liễu n ii DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 2.1: Phân loại khoa học Chi Bình vơi (Stephania spp) .4 Bảng 3.1: Thiết bị, dụng cụ hóa chất 26 Bảng 3.2: Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ, thời gian chất khử trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng cho nuôi cấy in vitro sau ngày .29 Bảng 3.3: Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng BA đến khả tái sinh chồi Bình vơi tím sau 20 ngày ni cấy 30 Bảng 3.4: Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng GA3 đến khả tái sinh chồi Bình vơi tím sau 20 ngày ni cấy 30 Bảng 3.5: Nghiên cứu ảnh hưởng BA+GA3 đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi tím sau 30 ngày nuôi cấy .31 Bảng 3.6: Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp BA+NAA đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi tím sau 40 ngày ni cấy 31 Bảng 3.7: Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp BA+ IBA đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi tím sau 40 ngày ni cấy 31 Bảng 3.8: Nghiên cứu ảnh hưởng IBA than hoạt tính (0,5 g/l) đến khả rễ Bình vơi tím sau 40 ngày nuôi cấy 32 Bảng 4.1: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ, thời gian HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng cho nuôi cấy in vitro (sau ngày) 33 Bảng 4.2: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA đến khả tái sinh chồi Bình vơi tím từ chồi ngủ sau 20 ngày nuôi cấy 35 Bảng 4.3: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 đến khả tái sinh chồi Bình vơi tím từ chồi ngủ sau 20 ngày ni cấy 37 Bảng 4.4: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA GA3 đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi tím sau 30 ngày nuôi cấy .39 Bảng 4.5: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi tím sau 40 ngày ni cấy .41 n iii Bảng 4.6: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA IBA đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi tím sau 40 ngày nuôi cấy 43 Bảng 4.7: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ IBA đến khả rễ Bình vơi tím sau 40 ngày nuôi cấy .45 n luan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lour iv DANH MỤC HÌNH Trang Hình 2.1: Cây Bình vơi tím (Stephania rotunda Lour) .5 Hình 2.2: Một số hình ảnh Bình vơi tím Hình 3.1: Sơ đồ nghiên cứu ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng đến khả tái sinh, nhân nhanh chồi rễ Bình vơi tím 27 Hình 4.1: Chồi Bình vơi tím MT bổ sung nồng độ BA khác sau 20 ngày nuôi cấy 36 Hình 4.2: Ảnh kết nghiên cứu ảnh hưởng GA3 đến khả tái sinh chồi Bình vơi tím sau 20 ngày ni cấy .38 Hình 4.3: Chồi Bình vơi tím MT MS bổ sung nồng độ BA + GA3 khác sau 30 ngày nuôi cấy 40 Hình 4.4: Chồi Bình vơi tím MT bổ sung tổ hợp BA + NAA với nồng độ khác sau 40 ngày nuôi cấy .42 Hình 4.5: Chồi Bình vơi tím MT bổ sung BA + IBA nồng độ khác sau 40 ngày nuôi cấy 44 Hình 4.6: Rễ Bình vơi tím MT MS bổ sung than hoạt tính (0,5 g/l) IBA nồng độ khác sau 40 ngày nuôi cấy 46 luan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lour n luan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lour v DANH MỤC CÁC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT BA : 6-Benzylaminopurine GA3 : Gibberellic Acid IBA : Indole butyric acid MS : Murashige & Skoog (1962) CS : Cộng CT : Công thức CV : Coeficient of Variation Đ/c : Đối chứng LSD : Least Singnificant Difference Test MS : Murashige & Skoog (1962) MT : Môi trường NAA : α-Naphthalene acetic acid WHO : World Health Organization luan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lour n luan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lour vi MỤC LỤC Trang PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục tiêu đề tài 1.2.2 Yêu cầu đề tài 1.3 Ý nghĩa đề tài PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung chi Bình vơi 2.1.1 Nguồn gốc 2.1.2 Phân loại Chi 2.1.3 Đặc điểm hình thái phân bố 2.1.4 Giới thiệu Bình vơi tím (Stephania rotunda Lour) 2.2 Vai trị Bình vơi tím .7 2.2.1 Giá trị kinh tế .7 2.2.2 Giá trị dược liệu 2.3 Khái niệm sở khoa học nuôi cấy mô-tế bào thực vật 2.3.1 Khái niệm 2.3.2 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô-tế bào thực vật .9 2.3.2 Sự phân hóa phản phân hóa tế bào 10 2.4 Các giai đoạn nhân giống vô tính in vitro 10 2.4.1 Giai đoạn chuẩn bị 10 2.4.2 Tái sinh mẫu nuôi cấy 10 2.4.3 Giai đoạn nhân nhanh chồi .11 2.4.4 Tạo hoàn chỉnh .11 2.4.5 Thích ứng in vitro ngồi điều kiện tự nhiên 12 2.5 Một số yếu tố ảnh hưởng đến q trình ni cấy mơ tế bào thực vật .12 2.5.1 Vật liệu nuôi cấy 12 luan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lour n luan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lour vii 2.5.2 Điều kiện nuôi cấy 13 2.5.3 Môi trường dinh dưỡng 13 2.5.4 Môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật 13 2.6 Tình hình nhân giống sử dụng củ Bình vơi tím 20 2.6.1 Nhân giống phương pháp hữu tính 21 2.6.2 Phương pháp nhân giống vơ tính 21 2.6.3 Phương pháp nhân giống in vitro 21 2.6.4 Phương pháp chế biến sử dụng .22 2.7 Tình hình nghiên cứu nước giới 22 2.7.1 Tình hình nghiên cứu giới 22 2.7.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 23 PHẦN 3: ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu .26 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu .26 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 26 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 26 3.3 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 26 3.4 Nội dung nghiên cứu 27 3.5 Phương pháp nghiên cứu 27 3.5.1 Chuẩn bị môi trường nuôi cấy invitro 27 3.5.2 Phương pháp nghiên cứu 27 3.5.3 Phương pháp bố trí thí nghiệm .28 3.6 Xử lí số liệu .32 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .33 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ, thời gian HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng cho nuôi cấy in vitro 33 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số auxin cytokinin đến khả tái sinh chồi Bình vơi tím 35 luan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lour n luan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lour viii 4.2.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA đến khả tái sinh chồi Bình vơi tím từ đoạn thân mang chồi ngủ 35 4.2.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 đến khả tái sinh chồi Bình vơi tím từ đoạn thân mang chồi ngủ 37 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ số auxin, gibberellin cytokinin đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi tím 39 4.3.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA GA3 đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi tím………………………………………….39 4.3.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi tím 41 4.3.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA IBA đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi tím 43 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ số auxin đến khả rễ Bình vơi tím 44 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 47 5.1 Kết luận .47 5.2 Kiến nghị 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 I Tài liệu Tiếng Việt 48 II Tài liệu Tiếng Anh .50 III Tài liệu internet 51 luan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lourluan.van.thac.si.nghien.cuu.anh.huong.cua.mot.so.chat.kich.thich.sinh.truong.den.kha.nang.tai.sinh.va.nhan.nhanh.choi.cay.binh.voi.tim.stephania.rotunda.lour n