luận văn thạc sĩ nghiên cứu mức độ ô nhiễm vi khuẩn e coli trong thịt lợn tại thành phố lạng sơn

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NÔNG ĐẠI THẾ NGHIÊN CỨU MỨC ĐỘ Ô NHIỄM VI KHUẨN E.COLI TRONG THỊT LỢN TẠI THÀNH PHỐ LẠNG SƠN LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y THÁI NGUYÊN - 2016 n ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NÔNG ĐẠI THẾ NGHIÊN CỨU MỨC ĐỘ Ô NHIỄM VI KHUẨN E.COLI TRONG THỊT LỢN TẠI THÀNH PHỐ LẠNG SƠN Chuyên ngành: Thú y Mã số ngành: 60 64 01 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y Người hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN THỊ NGÂN THÁI NGUYÊN - 2016 n i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi trực tiếp thực với cộng tác giúp đỡ TS Nguyễn Thị Ngân Viện Khoa học Sự sống - Đại học Nơng Lâm Thái Ngun Các số liệu, hình ảnh kết luận văn trung thực chưa công bố công trình khác Tơi xin đảm bảo thơng tin, trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Nông Đại Thế n ii LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập hoàn thành luận văn, với nỗ lực thân, nhận giúp đỡ, hướng dẫn tận tình nhiều cá nhân tập thể Nhân dịp hoàn thành luận văn tốt nghiệp, cho phép tơi tỏ lịng biết ơn cảm ơn chân thành tới: Giáo viên hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thị Ngân trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình suốt trình nghiên cứu hồn thành Luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo, Ban chủ nhiệm Khoa thầy cô giáo Khoa Chăn nuôi Thú y - Trường Đại học Nông Lâm - Đại học Thái Nguyên tạo điều kiện giúp đỡ suốt q trình học tập Tơi xin trân trọng cảm ơn thầy, cô giáo công tác Phịng thí nghiệm Bộ mơn Cơng nghệ Vi sinh - Viện Khoa học sống - Đại học Thái Nguyên giúp tơi q trình thực đề tài Tôi xin trân trọng cảm ơn lãnh đạo Chi cục Thú y tỉnh Lạng Sơn giúp q trình thực đề tài Cuối Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc ủng hộ, động viên, giúp đỡ gia đình, bạn bè đồng nghiệp suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành tốt luận văn Thái Nguyên, ngày 12 tháng 11 năm 2016 Học viên Nông Đại Thế n iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Ngộ độc thực phẩm 1.2 Tầm quan trọng vệ sinh an toàn thực phẩm 1.3 Ngộ độc thực phẩm vi khuẩn E coli 1.3.1 Đặc điểm hình dạng, ni cấy tính chất sinh hóa 1.3.2 Triệu chứng trúng độc 1.3.3 Biện pháp phòng ngừa ngộ độc 1.4 Hiểu biết vi sinh vật hệ vi sinh vật ô nhiễm thịt 1.4.1 Hệ vi sinh vật ô nhiễm thịt 1.4.2 Các yếu tố liên quan đến nhiễm khuẩn vào thịt 11 1.5 Thịt tươi dạng hư hỏng thịt 14 1.5.1 Thịt tươi 14 1.5.2 Các dạng hư hỏng thịt 15 1.5.3 Ô nhiễm thực phẩm nguồn gốc động vật 15 1.5.4 Ô nhiễm thực phẩm vi sinh vật 16 1.5.5 Ô nhiễm thịt tươi vi khuẩn 16 n luan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.son iv 1.5.6 Ý nghĩa ô nhiễm thịt tiêu tổng số vi khuẩn hiếu khí 17 1.6 Tình hình nghiên cứu nước giới 17 1.6.1 Nghiên cứu Việt Nam 17 1.6.2 Nghiên cứu giới 18 Chương NỘI DUNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 20 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 20 2.3 Vật liệu nghiên cứu 20 2.4 Nội dung nghiên cứu 21 2.5 Phương pháp nghiên cứu 21 2.5.1 Phương pháp lấy mẫu xét nghiệm 21 2.5.2 Phương pháp xác định tiêu tổng số VKHK thịt lợn tươi 21 2.5.3 Phương pháp xác định tiêu vi khuẩn thịt lợn tươi 23 2.5.4 Quy định kỹ thuật tiêu vi sinh vật thịt tươi 24 2.5.5 Phương pháp xác định tiêu vi khuẩn phân lập 25 2.5.6 Phương pháp xác phương pháp định gen quy định sản sinh độc tố đường ruột chủng vi khuẩn 25 2.5.7 Xác định gen VT1, VT2 chủng E coli phản ứng PCR 26 2.5.8 Phương pháp xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh vi khuẩn phân lập 28 2.5.9 Phương pháp xác định yếu tố gây bệnh vi khuẩn 28 2.6 Phương pháp xử lý số liệu 31 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 Khảo sát tình hình giết mổ tiêu thụ thịt lợn địa bàn thành phố Lạng Sơn 32 3.2 Xác định tiêu tổng số VKHK thịt lợn tươi 35 3.3 Xác định tiêu vi khuẩn E coli thịt lợn tươi 37 3.4 Xác định tiêu vi khuẩn E coli nhiễm thịt lợn tươi theo thời gian sau giết mổ 39 3.5 Xác định tiêu vi khuẩn E coli thịt lợn tươi theo tháng thời gian sau giết mổ 43 n luan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.son luan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.son v 3.6 Xác định tiêu vi khuẩn E coli nhiễm thịt lợn tươi theo mùa vụ thời gian sau giết mổ 45 3.7 Nghiên cứu đặc tính sinh học, đặc tính hóa học vi khuẩn phân lập 47 3.8 Xác định serotype chủng phân lập 49 3.9 Kết tách DNA tổng số vi khuẩn 51 3.10 Xác định gen quy định sản sinh độc tố đường ruột chủng vi khuẩn phân lập 53 3.11 Xác định gen mã hóa độc tố đường ruột PCR 54 3.12 Xác định độc lực chủng vi khuẩn E coli phân lập 54 3.13 Xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh hóa dược chủng vi khuẩn phân lập 56 3.14 Đề xuất biện pháp phòng, khống chế ngộ độc thực phẩm ô nhiễm vi khuẩn E coli 60 3.14.1 Giải pháp ngắn hạn 60 3.14.2 Giải pháp lâu dài 62 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 63 Kết luận 63 Kiến nghị 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO 65 MỘT SỐ HÌNH ẢNH CỦA ĐỀ TÀI 69 n luan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.son luan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.son vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ATVSTP An toàn vệ sinh thực phẩm CFU Colony Forming Unit E coli Escherichia coli FDA Food and Drug Administration (Quản lý Thực phẩm Dược phẩm) ISO International Organization for Standardization (Tổ chức tiêu chuẩn quốc tế) LAMP Loop Mediated Isothermal Aplification (Vòng lặp trung gian đẳng nhiệt Aplification) NĐTP Ngộ độc thực phẩm TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam TCVS Tiêu chuẩn vệ sinh VKHK Vi khuẩn hiếu khí WHO World Health Organization (Tổ chức Y tế giới) n luan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.son luan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.son vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Độc lực chủng E coli Bảng 1.2: Đánh giá kết cảm quan thịt 14 Bảng 1.3: Tiêu chuẩn đánh giá thịt tươi phản ứng sinh hóa học 15 Bảng 2.1: Các tiêu vi sinh vật thịt tươi TCVN 7046: 2002 24 Bảng 3.1: Kết khảo sát tình hình giết mổ tiêu thụ thịt lợn địa bàn thành phố Lạng Sơn 34 Bảng 3.2: Kết xác định tiêu tổng số VKHK thịt lợn tươi 35 Bảng 3.3: Kết xác định tiêu vi khuẩn E coli thịt lợn tươi 37 Bảng 3.4: Kết xác định vi khuẩn E coli nhiễm thịt lợn tươi theo thời gian sau giết mổ 40 Bảng 3.5: Kết xác định tiêu vi khuẩn E coli thịt lợn tươi theo tháng thời gian sau giết mổ 43 Bảng 3.6: Kết xác định tiêu vi khuẩn E coli nhiễm thịt lợn tươi theo mùa vụ thời gian sau giết mổ 46 Bảng 3.7: Kết nghiên cứu đặc tính sinh học, đặc tính hóa học vi khuẩn phân lập 48 Bảng 3.8: Kết xác định serotype chủng phân lập 50 Bảng 3.9: Kết đo OD chủng vi khuẩn 51 Bảng 3.10: Kết xác định gen quy định sản sinh độc tố đường ruột chủng vi khuẩn phân lập 53 Bảng 3.11: Kết xác định gen mã hóa độc tố đường ruột PCR 54 Bảng 3.12: Kết xác định độc lực chủng E coli phân lập 55 Bảng 3.13: Kết xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh hóa dược chủng vi khuẩn E coli phân lập 58 n luan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.son luan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.son viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1 Sơ đồ phân lập tổng số vi khuẩn hiếu khí 23 Hình 2.2 Sơ đồ phân lập E coli từ thịt 24 Hình 3.2 Biểu đồ xác định tiêu tổng số VKHK thịt lợn tươi 36 Hình 3.3 Biểu đồ định tiêu vi khuẩn E coli thịt lợn tươi 38 Hình 3.4 Biểu đồ xác định vi khuẩn E coli nhiễm thịt lợn tươi theo thời gian sau giết mổ 41 Hình 3.5 Vẽ Biểu đồ xác định tiêu vi khuẩn E coli thịt lợn tươi theo tháng thời gian sau giết mổ 45 Hình 3.6 Biểu đồ xác định tiêu vi khuẩn E coli nhiễm thịt lợn tươi theo mùa vụ thời gian sau giết mổ 46 Hình 3.7 Kết tách DNA tổng số vi khuẩn E.coli 52 Hình 3.8 Kết PCR xác định độc tố đường ruột 53 Hình 3.9 Biểu đồ xác định tính mẫn cảm với kháng sinh hóa dược số chủng vi khuẩn E coli phân lập 59 n luan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.sonluan.van.thac.si.nghien.cuu.muc.do.o.nhiem.vi.khuan.e.coli.trong.thit.lon.tai.thanh.pho.lang.son