luận văn thạc sĩ nghiên cứu đánh giá sự ổn định của vi khuẩn bacillus subtilis và geobacillus thermophilus sau thời gian bảo tồn

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM SOMPHIK BOUDASAK NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ SỰ ỔN ĐỊNH CỦA VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS VÀ GEOBACILLUS THERMOPHILUS SAU THỜI GIAN BẢO TỒN Ngành: Thú y Mã số: 8640101 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Phạm Hồng Ngân TS Nguyễn Thi ̣Trang NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2018 c LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn, thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Tác giả luận văn Somphik Boudasak i c LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn, tơi nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy cô giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc PGS.TS Phạm Hồng Ngân TS Nguyễn Thị Trang tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Thú y cộng đồng, Khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán viên chức trường Cao đẳng kỹ thuật tỉnh Oudomxai giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận văn./ Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Tác giả luận văn Somphik Boudasak ii c luan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.ton MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục hình vii Trích yếu luận văn viii Thesis abstract ix Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Phạm vi nghiên cứu 1.4 Những góp ý mới, ý nghĩa khoa học đề tài Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Đặc điểm chung bảo tồn, lưu giữ giống vi khuẩn b Subtilus, g Thermophilus 2.1.1 Định nghĩa bảo tồn 2.1.2 Các phương pháp bảo tồn, lưu giữ giống 2.1.3 Vai trò, ý nghĩa bảo tồn, lưu giữ giống vi khuẩn đánh giá ổn định công tác bảo tồn, lưu giữ giống sau thời gian bảo tồn 2.2 Sơ lược vi khuẩn b Subtilus, g Thermophilus 2.2.1 Vi khuẩn b Subtilis 2.2.2 Vi khuẩn g Thermophilus 13 2.3 Tình hình nghiên cứu bảo tồn, lưu giữ giống vi khuẩn nước 15 2.3.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 15 2.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 18 Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu 22 3.1 Địa điểm nghiên cứu 22 3.2 Thời gian nghiên cứu 22 3.3 Vật liệu nghiên cứu 22 iii c luan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.ton luan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.ton 3.3.1 Mơi trường, hóa chất 22 3.3.2 Trang thiết bị 22 3.3.3 Vi khuẩn 22 3.5 Phương pháp nghiên cứu 23 3.5.1 Phương pháp đánh giá ổn định số lượng vi khuẩn b Subtillis g Thermophilus sau 12 tháng bảo tồn 23 3.5.2 Phương pháp kiểm tra hình thái vi khuẩn b Subtillis g Thermophilus 23 3.5.3 Kiểm tra số đặc tính sinh hóa b.subtilis g Thermophilus 24 3.5.4 Phương pháp kiểm tra ô nhiễm nấm chủng vi khuẩn b Subtillis g Thermophilus sau bảo tồn phương pháp đông khô 27 3.5.5 Phương pháp xử lý số liệu 27 Phần Kết thảo luận 28 4.1 Kết kiểm tra tính ổn định vi khuẩn b Subtilis, g Thermophilus 28 4.1.1 Kết kiểm tra số lượng vi khuẩn b Subtilis, g Thermophi lus sau bảo tồn đông khô môi trường cát 28 4.1.2 Kết kiểm tra ổn dịnh đặc điểm hình thái, đặc tính ni cấy đặc tính sinh hóa vi khuẩn b Subtilis, g Thermophilus sau bảo quản 29 4.1.3 Kết kiểm tra ô nhiễm nấm sau thời gian bảo tồn 35 4.1.4 Kết kiểm tra tính đối kháng b Subtilis g Thermophilus với vi khuẩn gây bệnh 35 Phần Kết luận kiến nghị 37 5.1 Kết luận 37 5.2 Kiến nghị 37 Tài liệu tham khảo 38 iv c luan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.ton luan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.ton DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt B subtilis Bacilus Subtilis BHI Brain Heart Infusion CFU Colony - Forming Unit Geobacilus thermophilus G thermophilus Gram (+) Gram dương Gram (-) Gram âm MR Methyl - Red NB Nutrient Broth TSA Tryptic Soya Agar TSB Tryptic Soya Broth v c luan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.ton luan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.ton DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Đặc tính sinh hóa B subtilis Bảng 2.2 Sự khác bào tử tế bào sinh dưỡng B subtilis 11 Bảng 2.2 Đặc tính sinh hóa G thermophilus 14 Bảng 4.1 Số lượng vi khuẩn B subtilis, G thermophilus sau 12 tháng bảo quản đông khô 28 Bảng 4.2 Số lượng vi khuẩn B subtilis, G thermophilus sau 12 tháng bảo quản môi trường cát 28 Bảng 4.3 Kết kiểm tra số đặc tính ni cấy vi khuẩn B subtilis sau thời gian bảo tồn 30 Bảng 4.4 Kết kiểm tra số đặc tính vi khuẩn G thermophilus sau thời gian bảo tồn 31 Bảng 4.5 Kết kiểm tra số đặc tính sinh hóa vi khuẩn B subtilis sau thời gian 12 tháng bảo tồn 33 Bảng 4.6 Kết kiểm tra số đặc tính vi khuẩn G thermophilus sau thời gian bảo tồn 33 Bảng 4.7 Kết kiểm tra ô nhiễm nấm vi khuẩn B subtilis, G thermophilus sau thời gian bảo tồn 35 Bảng 4.8 Kết kiểm tra tính đối kháng B subtilis G thermophilus với vi khuẩn Enterotoxigenic (chủng PD17) Enterotoxigenic (chủng TM21) 36 vi c luan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.ton luan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.ton DANH MỤC HÌNH Hình 4.1 Hình thái vi khuẩn G thermophilus 29 Hình 4.2 Hình thái vi khuẩn B subtilis 29 Hình 4.3 Khuẩn lạc vi khuẩn B subtilis môi trường TSA 30 Hình 4.4 Khuẩn lạc vi khuẩn G thermophilus môi trường TSA 30 Hình 4.5 Vi khuẩn B subtilis thạch nghiêng TSA 31 Hình 4.6 Vi khuẩn G thermophilus thạch nghiêng TSA 31 Hình 4.7 Vi khuẩn B subtilis phát triển làm đục môi trường nước thịt 32 Hình 4.8 Vi khuẩn B subtilis mơi trường thạch khoai tây 32 Hình 4.9 Phản ứng catalase vi khuẩn B subtilis, G thermophilus 34 Hình 4.10 Phản ứng Methyl Red vi khuẩn 34 vii c luan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.ton luan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.ton TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Sompik Boudasak Tên luận Văn: Nghiên cứu đánh giá ổn định B subtilis G thermophilus sau thời gian bảo tồn Ngành: Thú y Mã số: 8640101 Tên sở đào tạo: Học Viện Nơng Nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu: - Kiểm tra mức độ ổn định vi khuẩn B subtilis G.thermophilus số lượng, đặc điểm nuôi cấy, đặc tính sinh hóa, tính đối kháng với chủng E coli gây bệnh Phương pháp nghiên cứu - Phương pháp đếm số đánh giá ổn định số lượng vi khuẩn B subtilis G thermophilus sau thời gian bảo tồn - Phương pháp nuôi cấy - Phương pháp kháng sinh đồ Kết kết luận Từ nghiên cứu đạt đưa số kết luận sau: - Khi kiểm tra 50 ống giống B Subtilis 50 ống giống G thermophilus sau bảo quản đông khô 12 tháng tỷ lệ sống vi khuẩn B subtilis G thermophilus 87,76% 82,61% - Kiểm tra 50 ống giống B subtilis 50 ống giống G thermophilus sau 12 tháng bảo quản cát, tỷ lệ sống chủng vi khuẩn 71,19% 68% Những chúng vi khuẩn B subtilis G thermophilus bảo tồn Phịng thí nghiệm Bộ mơn Thú y cộng đồng, khoa thú y HVNNVN giữ ổn định số lượng có đầy đủ đặc điểm đặc trưng vi khuẩn B subtilis G thermophilus tài liệu kinh điển miêu tả viii c luan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.ton luan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.ton THESIS ABSTRACT Master candidate: Sompik Boudasak Thesis title: Evaluation the the stability of B subtilis and G thermophilus after conservation period Major: Veterinary Code: 8640101 Educational organization: Vietnam National University of Agriculture (VNUA) Research Objectives To test the stability of B subtilis and G thermophilus in terms of quantity, culture characteristics, biochemical characteristics Materials and Methods - Methods of counting the numbers of B subtilis and G thermophilus after the conservation period - Methods of culture - Methods of dick diffusion Main findings and conclusions From the above-mentioned studies, we have made some conclusions as follows: When testing 50 strain tubes of B subtilis and 50 strain tubes of G thermophilus after 12 months of lyophylization, the survival rates of B subtilis and G thermophilus were 87.76% and 82.61%, respectively When testing 50 strain tubes of B subtilis and 50 strain tubes of G thermophilus were stored in sand for 12 months and the survival rate of these two strains bacteria were 71.19% and 68%, respectively B subtilis and G thermophilus strains are currently being conserved in the Laboratory of the Department of Veterinary Medicine, Faculty of Veterinary Medicine of Vietnam National University of Agriculture remain stable in number and fully characterized of B subtilis and G thermophilus as described canonical ix c luan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.tonluan.van.thac.si.nghien.cuu.danh.gia.su.on.dinh.cua.vi.khuan.bacillus.subtilis.va.geobacillus.thermophilus.sau.thoi.gian.bao.ton