luận văn thạc sĩ nghiên cứu nhân giống in vitro loài hoàng tinh trắng disporopsis longifolia craib

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NÔNG THỊ HOA NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO LOÀI HOÀNG TINH TRẮNG (Disporopsis longifolia Craib) Chuyên ngành: Lâm học Mã số: 60.62.02.01 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ LÂM HỌC Cao Bằng - 2020 download by : skknchat@gmail.com Cơng trình hồn thành tại: TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM - ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN Người hướng dẫn khoa học: Phản biện 1: Phản biện Luận văn bảo vệ trước Hội đồng chấm luận văn Họp tại: TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN Ngày 01 tháng 11 năm 2020 Có thể tìm hiểu luận văn tại: Trung tâm học liệu Đại học Thái Nguyên Thư viện Trường Đại học Nông lâm - Đại học Thái Nguyên download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Hồng tinh trắng (Disporopsis longifolia Craib) loài dược liệu quý đưa vào Dược điển Việt Nam tập 2, 3: vị thuốc ghi “Danh y biệt lục” với nhiều công tác dụng chữa bệnh tốt hữu ích Hồng tinh trắng có tác dụng: bổ âm, bổ phế, bổ huyết, sinh tân dịch, bồi dưỡng thể, đắp chữa sưng tấy, đụng dập, trĩ kết hợp với vị thuốc để chữa nhiều bệnh khác (Đỗ Tất Lợi, 2004) Với nhiều cơng dụng tốt nên Hồng tinh trắng ngồi tự nhiên bị khai thác ngày cạn kiệt Hiện có cơng trình nghiên cứu bảo tồn phát triển nguồn gen loài thuốc địa quý Ở nước ta công tác bảo tồn lồi dược liệu nói chung Hồng tinh trắng nói riêng chưa thực gắn liền với phát triển Để phát triển, công tác chọn tạo giống, công nghệ nhân nuôi trồng giống tốt cung cấp nguyên liệu chất lượng cần quan tâm Chính vậy, việc cải tiến áp dụng cơng nghệ bảo tồn, nhân giống giải pháp hữu hiệu giải vấn đề phát triển dược liệu Theo báo cáo hầu hết tỉnh vùng núi phía Bắc, việc bảo tồn phát triển lồi dược liệu địa phương cịn nhiều hạn chế từ giống trồng thu hoạch Giống sử dụng không rõ nguồn gốc, giống tạp, chất lượng chưa cao, nhân giống phương pháp truyền thống nên giống không đảm bảo số lượng chất lượng Trên giới, ứng dụng nhân giống công nghệ sinh học nhân giống đảm bảo giống tạo chất lượng cao, bệnh, đồng thích hợp để sản xuất đại trà, quy mơ cơng nghiệp theo hướng sản xuất hàng hóa phát triển Ở nước ta, công nghệ sinh học ứng dụng để nhân giống thành cơng nhiều lồi dược liệu quý sở nghiên cứu viện, trường, trung tâm Để bảo tồn phát triển loài Hồng tinh trắng việc điều tra, nghiên cứu đặc điểm sinh thái học, sinh học từ nghiên cứu biện pháp nhân giống nhằm tạo nguồn giống tốt, bệnh chất lượng cao để cung cấp nguồn giống tốt quy mô công nghiệp cần thiết Chính chúng Tơi tiến hành thực đề tài “Nghiên cứu nhân giống invitro loài Hoàng tinh trắng (Disporopsis longifolia Craib)” luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib 2 Mục tiêu nghiên cứu - Xác định phương pháp khử trùng mẫu củ Hoàng tinh trắng HgCl2 để tạo vật liệu vô trùng phục vụ việc tái sinh in vitro - Xác định nồng độ GA3 thích hợp cho khả tái sinh chồi; nồng độ BAP, BAP kết hợp với Kinetin đến khả nhân nhanh chồi; nồng độ IAA, NAA, IBA thích hợp đến khả rễ chồi - Đưa số đề xuất bảo tồn phát triển loài Hoàng tinh trắng từ kết nghiên cứu Ý nghĩa đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Chương TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU 1.1 Một số nghiên cứu loài Hoàng tinh trắng giới 1.2 Một số nghiên cứu loài Hoàng tinh trắng Việt Nam 1.3 Giới thiệu Hoàng tinh trắng (Disporopsis longifolia Craib) 1.4 Kế thừa kết nghiên cứu số đặc điểm sinh thái, sinh học loài Hoàng tinh trắng từ đề tài “Nghiên cứu bảo tồn phát triển nguồn gen Hồng tinh trắng (Disporopsis longifolia Craib) có giá trị kinh tế cao tỉnh Hà Giang” 1.5 Tổng quan nhân giống in vitro Chương ĐỐI TƯỢNG, PHẠM VI, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu loài Hoàng tinh trắng (Disporopsis longifolia Craib) thu thập Hà Giang, chọn lọc, đánh giá trồng vườn giống gốc Viện Nghiên cứu Phát triển Lâm nghiệp – Trường đại học Nông Lâm Thái nguyên - Phạm vi nghiên cứu: Nghiên cứu biện pháp khử trùng mẫu tạo vật liệu vô trùng cho nuôi cấy in vitro, nghiên cứu nồng độ chất GA3, BAP, BAP kết hợp với luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib kinetin, IAA, NAA, IBA đến khả tái sinh chồi, nhân nhanh rễ chồi Hoàng tinh trắng 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu - Địa điểm: Nghiên cứu nhân giống in vitro lồi Hồng tinh trắng phịng thí nghiệm Viện Nghiên cứu Phát triển Lâm nghiệp – Trường đại học Nông Lâm Thái nguyên - Thời gian: 05/2019 đến tháng 09/2020 2.3 Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu phương pháp khử trùng mẫu củ Hoàng tinh trắng HgCl2 để tạo vật liệu vô trùng phục vụ việc tái sinh in vitro - Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 đến khả tái sinh chồi Hoàng tinh trắng - Nghiên cứu ảnh hưởng BAP, BAP kết hợp với Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Hoàng tinh trắng - Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ IAA, NAA, IBA đến khả rễ Hoàng tinh trắng - Đề xuất số giải pháp bảo tồn phát triển loài Hoàng tinh trắng từ kết nghiên cứu 2.4 Phương pháp nghiên cứu 2.4.1 Phương pháp kế thừa tài liệu Kế thừa có chọn lọc tài liệu, cơng trình nghiên cứu nhà khoa học ngồi nước nghiên cứu có liên quan đến loài Hoàng tinh trắng Kế thừa kết nghiên cứu đặc điểm sinh thái học, sinh học phân tích lựa chọn giống Hồng tinh trắng có nguồn gen tốt trồng chăm sóc vườn giống gốc Viện Nghiên cứu Phát triển Lâm Nghiệp – Đại học Nông Lâm Thái Nguyên đề tài “Nghiên cứu bảo tồn phát triển nguồn gen Hoàng tinh trắng (Disporopsis longifolia Craib) có giá trị kinh tế cao tỉnh Hà Giang” thời gian thực từ năm 2018 – 2020 luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib 2.4.2 Hóa chất, thiết bị chuẩn bị cho ni cấy in vitro Hồng tinh trắng Các thí nghiệm ni cấy mơ tế bào (in vitro) tiến hành môi trường MS (Murashige Skoog, 1962) Bảng 2.1 Thành phần môi trường MS Thành phần Nồng độ (mg/l) Thành phần Nồng độ (mg/l) CaCl2.H2O 440,000 CuSO4.5H2O 0,025 KH2PO4 170,000 Na2MoO4.2H2O 0,250 KNO3 1.900,000 FeSO4.7H2O 27,800 MgSO4.7H2O 370,000 Na2EDTA.2H2O 37,300 NH4NO3 1.650,000 Glicine 2,000 H3BO3 6,200 Thiamin HCl 0,100 KI 0,830 Pyridoxin HCl 0,500 MnSO4.4H2O 22,300 Axit nicotinic 0,500 ZnSO4.7H2O 8,600 Myo-inositol 100,000 CoCl2.6H2O 0,025 Các thí nghiệm sử dụng loại hố chất tinh khiết thơng dụng có nguồn gốc từ Đức, Trung Quốc Thuỵ Điển chất kích thích sinh trưởng BAP, Kinetin, α – NAA, IAA, IBA, đường saccharose, thạch agar, than hoạt tính, ethanol, NaOH, petroleum ether *Thiết bị Thiết bị dùng ni cấy mơ tế bào: Bình tam giác 250ml, pipet, cốc thuỷ tinh định mức, bông, giấy làm nút, giấy thấm Bộ đồ cấy: dao cấy, pank cấy, đĩa cấy, Box cấy vô trùng, nồi khử trùng, tủ sấy, máy đo pH, giàn nuôi 2.4.3 Phương pháp nghiên cứu khử trùng mẫu củ Hoàng tinh trắng HgCl2 để tạo vật liệu vô trùng phục vụ việc tái sinh in vitro Vật liệu nghiên cứu mẫu củ Hoàng tinh trắng thu thâp Hà Giang phân tích, lựa chọn trồng vườn giống gốc Viện Nghiên cứu Phát triển Lâm Ngiệp Các củ chọn củ bánh tẻ, có nhiều mắt ngủ khơng bị sâu bệnh Hồng tinh trắng tự nhiên sinh sản củ nên tác giả luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib chọn củ Hoàng tinh trắng làm vật liệu vào mẫu để tăng khả nhân giống Hoàng tinh trắng Mẫu sau lấy làm sơ cách: Rửa mẫu vòi nước Ngâm dung dịch chất tẩy nhẹ (xà phòng nước rửa chén) phút Sau dùng chổi cọ nhẹ nhàng rửa Cuối tráng lại nước cất vô trùng -5 lần Khử trùng tủ cấy: Mẫu củ sau làm sơ bộ, đưa vào tủ cấy vô trùng khử trùng bề mặt cồn 70 60 giây, sau tráng nước cất vô trùng (4-5 lần) Tiếp theo khử trùng HgCl với nồng độ 0,1 % khoảng thời gian khác : 0, 3, 5, 8, 10 phút Thí nghiệm bố trí gồm cơng thức, cơng thức lần nhắc lại, lần nhắc lại 15 mẫu Mẫu cấy vào môi trường MS, sau 14 ngày theo dõi tiêu: - Tỉ lệ mẫu sống không nhiễm (%) = (Tổng số mẫu sống không nhiễm / Tổng số mẫu cấy) x 100% - Tỉ lệ mẫu sống bị nhiễm (%) = (Tổng số mẫu sống bị nhiễm/ Tổng số mẫu cấy) x 100% - Tỉ lệ mẫu chết (%) = (Tổng số mẫu chết / Tổng số mẫu cấy) x 100% Các mẫu sống sử dụng để tiến hành thí nghiệm 2.4.4 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ GA3 đến khả tái sinh chồi Hoàng tinh trắng Các mẫu sau khử trùng cấy vào môi trường MS sau 14 ngày không bị nhiễm nấm vi khuẩn tiến hành cấy sang môi trường tái sinh Thí nghiệm bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hồn tồn với cơng thức, cơng thức lần nhắc lại, lần nhắc lại 15 mẫu Mơi trường tái sinh mơi trường MS có bổ sung GA3 với nồng độ khác nhau: (mg/l), 0,3 (mg/l), 0,5 (mg/l), 1,0 (mg/l), 2,0 (mg/l) Dùng pank khử trùng lửa đèn cồn, chờ nguội gắp mẫu đưa vào môi trường tái sinh chuẩn bị trước sau đưa vào phịng ni Tiến hành theo dõi sau 30 ngày cấy chuyển luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib Các tiêu theo dõi: - Thời gian bật chồi: Khoảng thời gian từ cấy chuyển đến lúc bật chồi - Tỉ lệ mẫu tái sinh (%) = (Số mẫu tái sinh/Tổng số mẫu nuôi cấy) x 100% - Đánh giá chất lượng chồi: Chồi tốt : Chồi mập, xanh đậm Chồi trung bình : Chồi nhỏ, xanh Chồi : Chồi nhỏ, vàng nhạt 2.4.5 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng BAP, BAP kết hợp với Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Hoàng tinh trắng Các mẫu sống tái sinh không bị nhiễm khuẩn sau 30 ngày cấy chuyển sang môi trường nhân nhanh để tạo số lượng chồi lớn * Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh chồi Hoàng tinh trắng Các thí nghiệm bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hồn tồn với cơng thức, cơng thức lần nhắc lại, lần nhắc lại cấy 15 mẫu Mơi trường nhân nhanh có bổ sung BAP nồng độ khác nhau: (mg/l), 0,5 (mg/l), 1,0 (mg/l), 2,0 (mg/l), 3,0 (mg/l) Theo dõi mẫu sau 30 ngày nuôi cấy Các tiêu theo dõi: - Số chồi tạo thành (chồi), - Chất lượng chồi - Hệ số nhân chồi (lần) = Số chồi tạo thành/ Số chồi đưa vào * Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp BAP, Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Hồng tinh trắng Các chồi tạo thành có chiều cao từ 1,5 - cm sau 30 ngày nuôi cấy cấy chuyển sang môi trường nhân nhanh bao gồm: Nồng độ BAP tốt thí nghiệm kết hợp với nồng độ Kinetin khác nhau: (mg/l), 0,2 (mg/l), 0,5 (mg/l), 1,0 (mg/l), 1,5 (mg/l) Các thí nghiệm bố trí ngẫu nhiên hồn tồn, cơng thức lặp lại lần, lần 15 mẫu theo dõi sau 30 ngày Các tiêu theo dõi: - Số chồi tạo thành (chồi) luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib - Chất lượng chồi - Hệ số nhân chồi (lần) = Số chồi tạo thành/Số chồi đưa vào 2.4.6 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng IAA, NAA, IBA đến khả rễ Hoàng tinh trắng Những chồi tạo môi trường nhân nhanh khuẩn có từ 1-2 cấy chuyển sang mơi trường tạo rễ bổ sung chất kích thích sinh trưởng khác nhau: IAA, NAA IBA tương ứng với nồng độ khác Các thí nghiệm bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hồn tồn với công thức, công thức lần nhắc lại, lần nhắc lại cấy 15 mẫu Tiến hành theo dõi đánh giá sau 30 ngày nuôi cấy Bảng 2.2 Nghiên cứu Ảnh hưởng IAA, NAA, IBA đến khả rễ Hồng tinh trắng Cơng thức IAA (mg/l) NAA (mg/l) IBA(mg/l) CT1 (ĐC) 0 CT 0,3 0,3 0,3 CT 0,5 0,5 0,5 CT 1 CT 2 (CT) Các tiêu theo dõi: - Tỉ lệ mẫu rễ (%) = (Tổng số mẫu rễ/Tổng số mẫu nuôi cấy) x 100% - Chiều dài rễ trung bình (cm) = (Tổng chiều dài rễ/Tổng số rễ) - Số rễ trung bình (cái) = (Tổng số rễ/tổng số mẫu theo dõi) - Chỉ số rễ = Số rễ trung bình x Chiều dài rễ trung bình - Thời gian rễ: Thời gian tính từ cấy mẫu sang môi trường rễ đến mẫu rễ - Chất lượng rễ: + Rễ tốt: rễ trắng, mập + Rễ trung bình: rễ trắng, nhỏ + Rễ kém: rễ nhỏ màu vàng nâu luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib 2.4.7 Điều kiện thí nghiệm Các thí nghiệm in vitro tiến hành điều kiện nhân tạo, yếu tố vật lí ánh sáng, nhiệt độ, độ ẩm ln trì ổn định - Nhiệt độ từ 25 - 270C - Ánh sáng: Các mẫu nuôi cấy ánh đèn Neon với cường độ chiếu sáng 2000 lux, thời gian chiếu sáng 10 – 12 giờ/ngày - Mơi trường MS bổ sung chất kích thích sinh trưởng sinh trưởng (GA3, BAP, kinetin, IAA, NAA, IBA); đường saccarose 30g/l; agar 6,0g/l; pH môi trường 5,6 5,8 - Môi trường nuôi cấy hấp khử trùng 121°C 20 phút áp suất 1atm 2.4.8 Phương pháp phân tích xử lý số liệu Thu thập xử lý số liệu theo phương pháp thống kê sinh học phần mềm IRRISTAT 5.0, Excel,… Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết nghiên cứu khử trùng mẫu củ Hoàng tinh trắng HgCl2 để tạo vật liệu vô trùng phục vụ việc tái sinh in vitro Giai đoạn khử trùng vật liệu nuôi cấy giai đoạn trình ni cấy in vitro Mục đích giai đoạn tạo vật liệu vô trùng bệnh Gốc Hg2+ có hoạt tính khử trùng mạnh Hg2+ gây thối hóa tổ chức, tạo thành hợp chất protein dễ tan làm tê liệt chức nhóm thiol (-SH), hệ thống men oxi hóa khử tế bào; Hg2+ liên kết với protein máu mô, làm tê liệt phá hủy tế bào nấm, khuẩn nhanh chóng Trong thí nghiệm chúng tơi tiến hành khử trùng mẫu dung dịch HgCl2 với nồng độ 0,1 % khoảng thời gian khác nhau: phút, phút, phút 10 phút Mẫu đối chứng khử trùng nước cất vô trùng Kết khử trùng thể bảng 3.1 luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib 10 Biểu đồ 3.1 Sự khác thời gian khử trùng đến khả tạo vật liệu vơ trùng Nhìn vào biểu đồ 3.1 ta thấy tiêu theo dõi khác thời gian khử trùng lên hiệu tạo mẫu vô trùng tiêu tỉ lệ mẫu sống khơng nhiễm quan trọng vè tiêu định Như vậy, khử trùng mẫu củ Hoàng tinh trắng với HgCl2 0,1 % thời gian phút cho kết mẫu vô trùng tốt với tỷ lệ mẫu sống không nhiễm đạt 88,89 %, tỉ lệ mẫu sống bị nhiễm 8,89 % tỷ lệ mẫu chết 2,22 % Hình 3.1 Hình ảnh mẫu Hồng tinh trắng sống không bị nhiễm sau khử trùng HgCl2 0,1 % phút luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib 11 3.2 Sự khác nồng độ GA3 đến khả tái sinh chồi Hoàng tinh trắng Trong ni cấy mơ tế bào (in vitro) nhóm cytokinin nhóm chất kích thích phân chia tế bào mạnh mẽ, đặc biệt phân hóa chồi, chúng có tác dụng phá ngủ nghỉ hạt, củ, chồi, thuộc nhóm cytokinin có chất thường dùng nuôi cấy mô tế bào thực vật Kinetin, Zeatin GA3 Trong GA3 chất thường sử dụng mang lại hiệu tái sinh cao chọn GA3 để nghiên cứu khả tái sinh chồi in vitro mẫu Hoàng tinh trắng Các mẫu sống không bị nhiễm sau khử trùng 14 ngày cấy chuyển sang môi trường MS có bổ sung 30g/l saccarose, 6g/l Agar GA3 nồng độ khác Theo dõi sau 30 ngày nuôi cấy, kết nghiên cứu thể bảng 3.2 Bảng 3.2 Sự khác nồng độ GA3 đến khả tái sinh chồi Hoàng tinh trắng Công Nồng độ GA3 thức (mg/l) CT (ĐC) Số mẫu Thời gian Tỷ lệ mẫu nuôi cấy bật chồi tái sinh Chất lượng chồi (mẫu) (ngày) (%) 45 28 42,22 CT 0,3 45 25 55,55 Chồi nhỏ, xanh CT 0,5 45 22 82,22 Chồi nhỏ, xanh CT 1,0 45 20 95,55 CT 2,0 45 23 64,45 LSD0,05 7,6 CV% 5,9 Chồi nhỏ, vàng nhạt Chồi mập, xanh đậm Chồi nhỏ, xanh Kết bảng 3.2 cho thấy nồng độ GA3 khác cho tỷ lệ mẫu tái sinh khác với mức tin cậy 95 % Khi bổ sung GA3 cho kết tỷ lệ mẫu tái sinh cao công thức đối chứng không bổ sung GA3 Tỷ lệ mẫu tái sinh tăng dần tăng nồng độ GA3 từ 0,3 mg/l đến 1,0mg/l cho kết 55,55 %; 82,22 % 95,55 % thời gian bật chồi tương ứng 25 ngày, 22 ngày 20 ngày Tuy nhiên tăng nồng độ GA3 lên 2mg/l tỷ lệ tái sinh chồi lại bị giảm xuống luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib 12 64,45 % Công thức đối chứng không bổ sung GA3 cho tỉ lệ mẫu tái sinh đạt 42,22 % thời gian bật chồi 23 ngày Kết giải thích sau: GA3 có vai trị việc hoạt hóa q trình phân bào, nhờ có tác dụng tái sinh phân hóa chồi cho Khi tăng dần nồng độ GA3 từ 0,3 đến 1,0mg/l mơi trường ni cấy tỷ lệ mẫu tái sinh tăng cao đạt 95,55 % Tuy nhiên tiếp tục tăng nồng độ GA3 lên mg/l không cho kết cao mà lại giảm xuống hàm lượng GA3 cao gây độc cho mẫu, từ gây ức chế khả tái sinh chồi Nồng độ GA3 ảnh hưởng đến chất lượng chồi Công thức bổ sung GA3 nồng độ 1,0 (mg/l) cho chất lượng chồi tốt nhất: Chồi mập xanh đậm Các cơng thức cịn lại chồi nhỏ, xanh công thức đối chứng chồi nhỏ, vàng nhạt Biểu đồ 3.2 Sự khác nồng độ GA3 đến khả tái sinh chồi Hoàng tinh trắng Nhìn vào biểu đồ 3.2 ta thấy yếu tố nghiên cứu khác nồng độ GA3 đến khả tái sinh chồi Hoàng tinh trắng tiêu theo dõi tỉ lệ mẫu tái sinh quan trọng đóng vai trị định hiệu nồng độ GA3 đến tái sinh chồi Hoàng tinh trắng GA3 nồng độ 1,0 mg/l công thức nồng độ tốt cho tái sinh chồi Hoàng tinh trắng với tỉ lệ mẫu tái sinh 95,55 %; thời gian bật chồi 20 ngày, chồi mập xanh luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib 13 Hình 3.2 Hình ảnh tái sinh chồi mẫu Hồng tinh trắng mơi trường có bổ sung GA3 1,0 mg/l 3.3 Kết nghiên cứu khác nồng độ chất BAP, BAP kết hợp với Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Hoàng tinh trắng 3.3.1 Kết nghiên cứu khác nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi chồi Hoàng tinh trắng Sau giai đoạn tái sinh chồi mẫu cấy chuyển sang môi trường nhân nhanh chồi có bổ sung BAP với nồng độ khác Kết thể bảng 3.3 Bảng 3.3 Sự khác nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi Hồng tinh trắng Cơng thức Nồng Số mẫu độ BAP nuôi cấy Số chồi tạo thành Hệ số nhân (mg/l) (mẫu) 45 54 1,20 CT 0,5 45 104 2,31 CT 1,0 45 132 2,93 CT (ĐC) (chồi) Chất lượng chồi chồi (lần) Chồi nhỏ, vàng nhạt Chồi nhỏ, xanh Chồi mập, xanh đậm luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib 14 CT 2,0 45 91 2,02 CT 3,0 45 63 1,40 LSD0,05 0,17 CV% 4,7 Chồi nhỏ, xanh Chồi nhỏ, vàng nhạt Kết bảng 3.3 cho thấy công thức có bổ sung thêm BAP cho hệ số nhân chồi cao công thức đối chứng (CT1) không bổ sung BAP Kết sau 30 ngày nuôi cấy cho thấy: Công thức đối chứng cho hệ số nhân chồi 1,20 lần, chồi nhỏ, màu vàng nhạt Ở CT2 có bổ sung BAP 0,5 mg/l cho hệ số nhân chồi 2,31 lần, chồi nhỏ, xanh CT3 có bổ sung BAP 1,0 mg/l cho hệ số nhân chồi 2,93 lần, chồi khỏe, mập, xanh CT4 có bổ sung BAP 2,0 mg/l cho hệ số nhân chồi 2,02 lần, chồi nhỏ, xanh CT5 có bổ sung BAP 3,0 mg/l cho hệ số nhân chồi 1,4 lần, chồi nhỏ, vàng nhạt Như bổ sung thêm BAP có nồng độ từ 0,5 mg/l đến 1,0 mg/l vào môi trường nuôi cấy cho hệ số nhân chồi tăng dần đạt kết cao nồng độ 1,0 mg/l 2,93 lần Tuy nhiên tiếp tục tăng nồng độ BAP lên 2,0 mg/l đến 3,0 mg/l hệ số nhân chồi khơng tăng lên mà giảm xuống 2,02 lần 1,40 lần Như bổ xung chất kích thích sinh trưởng BAP nồng độ thích hợp cho kết nhân nhanh chồi tốt nhất, nồng độ cao hay thấp ảnh hưởng đến hệ số nhân chồi Nồng độ cao ức chế trình sinh trưởng tế bào dẫn đến khả nhân chồi Trong thí nghiệm này, nồng độ BAP tốt cho khả nhân nhanh chồi Hoàng tinh trắng 1,0 mg/l với số chồi tạo thành 132 chồi hệ số nhân chồi 2,93 lần, chồi mập xanh đậm luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib 15 Hình 3.3 Mẫu Hồng tinh trắng cấy mơi trường nhân nhanh chồi có bổ sung BAP 1,0mg/l 3.3.2 Sự khác nồng độ BAP kết hợp với Kinein đến khả nhân nhanh chồi Hoàng tinh trắng Từ kết thí nghiệm lựa chọn nồng độ BAP 1,0 mg/l thích hợp cho khả nhân nhanh chồi, kết hợp nồng độ BAP với nồng độ Kinetin khác để nghiên cứu ảnh hướng tổ hợp BAP Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Hoàng tinh trắng, kết thể bảng 3.4 Bảng 3.4 Sự khác tổ hợp nồng độ BAP Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Hồng tinh trắng Số Cơng thức Nồng độ Nồng độ mẫu Hệ số Kinetin nuôi tạo (mg/l) (mg/l) cấy thành (mẫu) (chồi) 45 132 2,93 0,2 45 177 3,93 0,5 45 191 4,24 (ĐC) CT BAP CT CT Số chồi 1,0 nhân chồi Chất lượng chồi (lần) Chồi nhỏ, vàng nhạt Chồi nhỏ, xanh Chồi mập, xanh đậm luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib 16 CT 1,0 45 164 3,64 CT 1,5 45 153 3,40 LSD0,05 0,18 CV% 2,7 Chồi nhỏ, xanh Chồi nhỏ, xanh nhạt Kết bảng 3.4 cho thấy cơng thức có bổ sung thêm Kinetin cho hệ số nhân chồi cao công thức đối chứng (CT1) bổ sung BAP Kết sau 30 ngày nuôi cấy cho thấy: Công thức Đối chứng (BAP 1,0 mg/l) cho hệ số nhân chồi 2,93 lần, chồi nhỏ, màu vàng nhạt Ở CT2 (BAP 1,0 mg/l + Kinetin 0,2 mg/l) cho hệ số nhân chồi 3,93 lần, chồi nhỏ, xanh CT3 (BAP 1,0 mg/l + Kinetin 0,5 mg/l) cho hệ số nhân chồi 4,24 lần, chồi mập, xanh đậm CT4 (BAP 1,0 mg/l + Kinetin 1,0 mg/l) cho hệ số nhân chồi 3,64 lần, chồi nhỏ, xanh CT5 (BAP 1,0 mg/l + Kinetin 1,5 mg/l) cho hệ số nhân chồi 3,40 lần, chồi nhỏ, xanh nhạt Như bổ sung thêm Kinetin có nồng độ từ 0,2 mg/l đến 0,5 mg/l cho hệ số nhân chồi tăng dần đạt kết cao nồng độ 0,5 mg/l 4,24 lần Khi tiếp tục tăng nồng độ Kinetin lên 1,0 mg/l đến 1,5 mg/l hệ số nhân chồi khơng tăng mà lại giảm xuống cịn 3,64 lần 3,40 lần Như nồng độ Kinetin tốt để kết hợp với BAP 1,0 mg/l cho nhân nhanh in vitro Hoàng tinh trắng 0,5 mg/l Hình 3.4 Mẫu Hồng tinh trắng cấy mơi trường nhân nhanh chồi có bổ sung BAP 1,0 mg/l + Kinetin 0,5 mg/l luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib 17 3.4 Sự khác nồng độ IAA, NAA, IBA đến khả rễ Hoàng tinh trắng Các mẫu chồi sau nhân nhanh đạt tiêu chuẩn chiều cao (5 – cm) số (3 - lá) cấy chuyển sang môi trường tạo rễ để tạo thành hồn chỉnh Mơi trường rễ mơi trường MS có bổ sung 30g/l saccarose, g/l Agar chất kích thích rễ (IAA, NAA, IBA) nồng độ khác theo dõi sau 30 ngày nuôi cấy * Kết nghiên cứu khác nồng độ IAA đến khả rễ Hoàng tinh trắng Bảng 3.5 Sự khác nồng độ IAA đến khả rễ Hồng tinh trắng Nồng Số mẫu Cơng độ nuôi thức IAA cấy (mg/l) (mẫu) CT (ĐC) Tỷ lễ mẫu rễ (%) Số rễ trung bình/mẫu (cái) Chiều dài rễ trung bình (cm) Thời gian rễ (ngày) Chỉ số rễ Chất lượng rễ Rễ nhỏ 45 31,11 2,55 2,08 27,00 5,30 màu vàng nâu CT 0,3 45 42,22 4,20 2,32 26,00 9,74 CT 0,5 45 75,55 5,00 2,65 24,00 13,25 CT 1,0 45 62,22 4,54 2,48 25,00 11,26 CT 2,0 45 51,11 3,70 2,19 26,00 8,10 LSD0,05 7,94 0,3 0,1 CV% 8,0 4,0 2,2 Rễ nhỏ, trắng Rễ mập, trắng Rễ nhỏ, trắng Rễ nhỏ, trắng Kết bảng 3.5 cho thấy: Các nồng độ IAA khác cho kết tạo rễ khác với độ tin cậy 95 % Khi bổ sung IAA vào môi trường cho tỷ lệ rễ luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib 18 chồi cao công thức đối chứng không bổ sung IAA Khi tăng nồng độ IAA từ 0,3 mg/l đến 0,5 mg/l tỷ lệ chồi rễ tăng từ 42,22 % lên 75,55 %; Tương tự số rễ trung bình/chồi tăng lên từ 4,20 rễ lên 5,00 rễ chiều dài trung bình rễ tăng từ 2,32 cm lên 2,65 cm; Chỉ số rễ từ 9,74 lên 13,25 Nhưng tăng nồng độ IAA từ 1,0 mg/l - 2,0 mg/l tỷ lệ rễ giảm xuống tương ứng 62,22 % 51,11 %; số rễ trung bình/chồi giảm xuống từ 4,54 rễ xuống 3,70 rễ chiều dài rễ trung bình từ 2,48 cm xuống 2,19 cm; số rễ 11,26 xuống 8,10 Công thức đối chứng không bổ sung chất kích thích rễ IAA cho tỉ lệ mẫu rễ 31,11 %; số rễ trung bình/chồi 2,55 rễ chiều dài rễ trung bình 2,08 cm; số 5,30, rễ nhỏ màu vàng nâu Công thức cho chất lượng rễ tốt nhất: rễ mập trắng, công thức khác cho chất lượng rễ hơn, rễ nhỏ, trắng Môi trường rễ tương tự môi trường nhân nhanh bổ sung chất điều hòa sinh trưởng với nồng độ cao hay thấp ảnh hưởng đến trình rễ chồi, nồng độ cao gây ức chế trình sinh trưởng phát triển tế bào, hạn chế khả rễ chồi Ở công thức thời gian rễ sớm 24,00 ngày, tiếp đến công thức với 25,00 ngày rễ chậm công thức đối chứng với 27,00 ngày Như vậy, công thức với IAA nồng độ 0,5 mg/l cho kết tỉ lệ rễ chồi Hoàng tinh trắng tốt với cho tỉ lệ mẫu rễ 75,55 %; số rễ trung bình/chồi 5,00 rễ chiều dài rễ trung bình 2,65 cm; số rễ 13,25, rễ nhỏ mập trắng * Sự khác nồng độ NAA đến khả rễ Hoàng tinh trắng Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến khả rễ chồi Hoàng tinh trắng thể bảng 3.6 Bảng 3.6 Sự khác nồng độ NAA đến khả rễ Hoàng tinh trắng Công thức Số mẫu Tỷ lễ Nồng độ NAA (mg/l) Số rễ ni mẫu cấy rễ bình/chồi (mẫu) (%) trung (cái) Chiều dài rễ trung bình (cm) Thời gian Chỉ số rễ rễ (ngày) Chất lượng rễ luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib 19 Rễ nhỏ CT (ĐC) 45 31,11 2,55 2,08 29,00 5,30 màu vàng nâu CT 0,3 45 88,89 5,03 2,83 25,00 14,23 CT 0,5 45 77,78 4,58 2,67 26,00 12,23 CT 1,0 45 55,55 3,69 2,55 28,00 9,41 CT 2,0 45 42,22 3,15 2,27 28,00 7,15 LSD0,05 6,87 0,4 0,11 CV% 6,2 5,6 2,4 Rễ mập, trắng Rễ nhỏ, trắng Rễ nhỏ, trắng Rễ nhỏ, trắng Kết xử lý số liệu với độ tin cậy 95 % ta thấy nồng độ NAA khác cho kết rễ chồi Hoàng tinh trắng khác Trong cơng thức thí nghiệm cơng thức đối chứng khơng sử dụng chất điều hịa sinh trưởng NAA công thức cho kết rễ thấp với tỉ lệ mẫu rễ 31,11 %; số rễ trung bình/chồi 2,55 rễ chiều dài rễ trung bình 2,08 cm; số rễ 5,30; rễ nhỏ màu vàng nâu Khi bổ sung NAA nồng độ từ 0,3 (mg/l) tăng dần đến 2,0 (mg/l) vào môi trường rễ kết cho thấy công thức bổ sung NAA với nồng độ 0,3 (mg/l) cho hiệu rễ cao với tỉ lệ mẫu rễ 88,89 %; số rễ trung bình/chồi 5,03 rễ chiều dài rễ trung bình 2,83 cm; số rễ 14,23; rễ mập trắng Tăng nồng độ NAA từ 0,5 (mg/l) lên đến 2,0 (mg/l) hiệu rễ giảm dần tương ứng với tỷ lễ mẫu rễ giảm từ 77,78 % xuống 42,22 %; Số rễ trung bình/chồi từ 4,58 rễ xuống 3,15 rễ; Chiều dài rễ trung bình từ 2,67 xuống 2,27 cm số rễ 12,23 xuống 7,15; rễ nhỏ trắng luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib 20 Cơng thức có thời gian rễ sớm 25,00 ngày, tiếp đến công thức với 26,00 ngày, công thức 4,5 với 28,00 ngày lâu công thức đối chứng với 29,00 ngày Như vậy, công thức với nồng độ NAA 0,3 mg/l công thức tốt cho khả rễ chồi Hoàng tinh trắng in vitro * Kết nghiên cứu khác nồng độ IBA đến khả rễ Hoàng tinh trắng Kết nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến khả rễ chồi Hoàng tinh trắng thể bảng 3.7 Bảng 3.7 Sự khác nồng độ IBA đến khả rễ Hồng tinh trắng Cơng thức CT (ĐC) Số mẫu Tỷ lễ Nồng độ IBA (mg/l) Số rễ ni mẫu cấy rễ bình/chồi (mẫu) (%) trung (cái) Chiều Thời dài rễ gian Chỉ trung rễ số bình (ngày) rễ Chất lượng rễ (cm) Rễ nhỏ 45 31,11 2,55 2,08 27,00 5,30 màu vàng nâu CT 0,3 45 55,55 3,44 2,21 25,00 7,60 CT 0,5 45 84,45 4,47 2,92 25,00 13,05 CT 1,0 45 97,78 5,09 3,10 24,00 15,77 CT 2,0 45 71,11 4,16 2,57 26,00 10,69 LSD0,05 7,60 0,24 0,08 CV% 5,9 3,2 1,7 Rễ nhỏ, trắng Rễ nhỏ, trắng Rễ mập, trắng Rễ nhỏ, trắng Kết xử lý số liệu cho thấy bổ sung IBA vào môi trường rễ cho kết rễ cao công thức đối chứng không bổ sung IBA luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib 21 Khi bổ sung chất điều hòa sinh trưởng IBA với nồng độ tăng lên từ 0,3 mg/l đến 1,0 mg/l tỷ lệ mẫu rễ tăng lên từ 55,55 % - 97,78 %; số rễ trung bình/chồi tăng lên từ 3,44 - 5,09 rễ chiều dài rễ trung bình tăng lên từ 2,21 - 3,10 cm; Chỉ số rễ từ 7,60 – 15,77 nồng độ IBA tiếp tục tăng lên đến 2,0 mg/l tỷ lệ mẫu rễ giảm xuống 71,11%; Số rễ trung bình/chồi 4,16 rễ; chiều dài rễ trung bình giảm xuống cịn 2,57cm Cơng thức có thời gian rễ sơm với 24,00 ngày, tiếp đến công thức công thức với 25,00 ngày thấp công thức đối chứng với 17,00 ngày Như vậy, nồng độ IBA tốt cho khả rễ in vitro Hoàng tinh trắng 1,0 mg/l (công tức 4) với với tỉ lệ mẫu rễ 97,78 %; Số rễ trung bình/chồi 5,09 rễ chiều dài rễ trung bình 3,10 cm; số rễ 15,77; Rễ mập trắng Hình 3.5 Mẫu Hồng tinh trắng cấy mơi trường có bổ sung IBA 1,0mg/l sau 30 ngày theo dõi * So sánh chất điều hòa sinh trưởng IAA, NAA, IBA đến khả rễ Hoàng tinh trắng Kết so sánh chất điều hòa sinh trưởng IAA, NAA, IBA đến khả rễ Hoàng tinh trắng thể qua biểu đồ 3.3 Biểu đồ 3.3 Biểu đồ so sánh kết rễ chất điều hòa sinh trưởng IAA, NAA, IBA luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib 22 Dựa vào kết bảng 3.5, 3.6 3.7 biểu đồ 3.3 cho thấy bổ sung chất điều hòa sinh trưởng IBA với nồng độ 1,0 mg/l vào môi trường cho kết rễ chồi Hoàng tinh trắng tốt so với chất điều hòa sinh trưởng IAA (0,5 mg/l) , NAA (0,3 mg/l) với tỷ lệ mẫu rễ đạt 97,78 %; số rễ trung bình/chồi 5,09 rễ chiều dài rễ trung bình 3,10 cm, số rễ 15,77, thời gian rễ 24,00 ngày, rễ mập trắng Hình 3.6 Hình ảnh chồi Hồng tinh trắng rễ bổ sung chất kích thích rễ khác 3.5 Đề xuất số giải pháp bảo tồn, phát triển loài Hoàng tinh trắng từ kết nghiên cứu Hoàng tinh trắng loài dược liệu quý cần bảo tồn phát triển Đặc điểm sinh thái loài Hoàng tinh trắng thường mọc rải rác vùng núi, ven rừng tự nhiên dọc khe suối nên người dân thường thu hái khai thác cách luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib 23 bừa bãi triệt để (nhổ cụm củ) nên muốn bảo tồn loài Hoàng tinh trắng quan chức cần kết hợp với người dân địa phương xây dựng đồ phân bố lồi Hồng tinh trắng có sách khai thác hợp lý Cần kết hợp song song việc bảo tồn phát triển loài Hoàng tinh trắng cách mở rộng nghiên cứu đặc điểm sinh thái, đặc điểm phân bố, đặc điểm sinh học sở lựa chọn nguồn gen tốt để xây dựng vườn giống gốc cung cấp nguồn nghuyên liệu phục vu cho công tác nghiên cứu chọn lọc giống Phương pháp nhân giống đại tạo giống với số lượng lớn, nguồn gen đảm bảo, độ đồng cao bệnh áp dụng phương pháp nhân giống nuôi cấy mô tế bào (in vitro) Kết nghiên cứu đề tài sở khoa học áp dụng vào thực tiễn cơng tác nhân giống in vitro lồi Hồng tinh trắng để tạo số lượng giống lớn, chất lượng giống tốt cung cấp cho người dân địa phương mở rộng sản xuất tăng thu nhập, nâng cao đời sống người dân Kết nghiên cứu đề tài nhân giống in vitro Hồng tinh trắng nói riêng lồi dược liệu nói chung định hướng tiên tiến đại nên áp dụng công tác bảo tồn phát triển loài dược liệu Hiện chi phí để tạo giống từ phương pháp ni cấy mơ tế bào (in vitro) cịn cao, với đề tài nghiên cứu tác giả mong muốn có nhiều nhà khoa học khác nghiên cứu biện pháp nhân giống nuôi cấy mô tế bào để áp dụng vào thực tế sản xuất giảm chi phí sản xuất giống đảm bảo người dân vùng núi hay đồng mua trồng nguồn giống tốt đem lại hiệu cao Qua tác giả mong muốn nhà nước, quan, tổ chức đồn thể có nhiều chương trình, dự án, sách hỗ trợ người dân giống để người dân tiếp cận với khoa học kỹ thuật, sử dụng nguồn giống tốt đảm bảo chất lượng đưa vào trồng trọt để thu hiệu kinh tế cao, nâng cao đời sống vật chất tinh thần luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib download by : skknchat@gmail.com luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib luan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craibluan.van.thac.si.nghien.cuu.nhan.giong.in.vitro.loai.hoang.tinh.trang.disporopsis.longifolia.craib