VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Nội dung nghiên cứu
Các loài nấm Phytophthora gây bệnh trên cây ăn quả có múi tại Cao Bằng
Một số vi sinh vật đối kháng với nấm Phytophthora
Các giống cây ăn quả có múi tại Cao Bằng (Cam Trưng Vương, Quýt Hà Trì, Quýt Trà Lĩnh và bưởi Phục Hòa)
2.2.1 Điều tra hiện trạng bệnh do nấm Phytophthora spp gây hại trên cây ăn quả có múi tại Cao Bằng Điều tra hiện trạng sản xuất CĂQCM và bệnh thối rễ, chảy gôm ở Cao Bằng
Thu thập, phân lập, xác định nấm Phytophthora gây bệnh thối rễ, chảy gôm trên
2.2.2 Nghiên cứu đặc điểm sinh học, quy luật phát sinh gây hại của nấm Phytophthora spp gây hại trên cây ăn quả có múi tại Cao Bằng
Xác định các loài nấm Phytopthora gây bệnh thối rễ, chảy gôm trên CĂQCM bằng đặc điểm hình thái và kỹ thuật phân tử
Nghiên cứu ảnh hưởng của các yếu tố môi trường, nhiệt độ, pH, đến sinh trưởng của nấm các loài nấm Phytophthora gây bệnh trên CĂQCM tại Cao Bằng
Nghiên cứu quy luật phát sinh, gây hại của nấm Phytophthora trên CĂQCM tại Cao Bằng
2.2.3 Phân lập, tuyển chọn vi sinh vật đối kháng nấm Phytophthora spp gây bệnh thối rễ, chảy gôm trên cây ăn quả có múi tại Cao Bằng
Thu thập và phân lập các vi sinh vật có khả năng kháng lại nấm Phytophthora gây hại trên cây có múi, đồng thời định danh và đánh giá mức độ an toàn sinh học của chúng Nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và phát triển của các vi sinh vật đối kháng, cũng như khả năng nuôi cấy sinh khối và phát triển sản phẩm Cuối cùng, đánh giá hiệu quả phòng trừ của chế phẩm vi sinh vật đối kháng đối với nấm Phytophthora gây bệnh thối rễ.
Địa điểm và thời gian nghiên cứu
Nghiên cứu khả năng hạn chế bệnh thối rễ và chảy gôm thông qua các biện pháp canh tác như giống, đốn tỉa, bón phân và tưới nước, cùng với việc sử dụng vi sinh vật đối kháng, là rất quan trọng để nâng cao hiệu quả sản xuất nông nghiệp Các biện pháp này không chỉ giúp cải thiện sức khỏe cây trồng mà còn giảm thiểu thiệt hại do bệnh tật, từ đó tăng cường năng suất và chất lượng nông sản.
Nghiên cứu khả năng hạn chế bệnh thối rễ chảy gôm của các thuốc trừ nấm sinh học và vi sinh vật đối kháng
Nghiên cứu khả năng hạn chế bệnh thối rễ do nấm Phytophthora spp gây ra bằng các thuốc trừ nấm hóa học và vi sinh vật đối kháng Đề xuất quy trình sử dụng vi sinh vật đối kháng trong quản lý tổng hợp bệnh tại Cao Bằng nhằm nâng cao hiệu quả bảo vệ cây trồng.
2.3 Địa điểm và thời gian nghiên cứu
Cao Bằng nổi bật với các vùng trồng cây ăn quả có múi, nơi có sự hỗ trợ từ nhà lưới và phòng thí nghiệm của Bộ môn Bệnh cây và Miễn dịch Thực vật thuộc Viện Bảo vệ thực vật Những điều kiện này giúp nâng cao chất lượng sản phẩm và đảm bảo an toàn cho cây trồng.
- Các nguồn nấm Phytophthora phân lập trên cây ăn quả có múi (cam, bưởi, quýt) tại Cao Bằng
- Các nguồn vi sinh vật đối kháng (Tichoderma spp., Bacillus app., Streptomyces spp )
+ Môi trường: PDA, PSA, PCA, PGA, CMA, CRA, PSM - Phytophthora
Selective, Medium); Môi trường Hugh& Leifson, Môi trường LB – vi khuẩn, môi trường Gauze – xạ khuẩn
Hóa chất sử dụng trong phương pháp PCR: Các Cặp mồi ITS4 và ITS5; Cặp mồi Phy1F và Phy1R
Các chế phẩm sinh học SH-BV1, Phyto-M của Viện Bảo vệ thực vật
Máy PCR, máy điện di, kính hiển vi quang học, kính lúp soi nổi, máy đo pH, tủ sấy, nồi hấp cùng với các dụng cụ và vật liệu thí nghiệm khác là những thiết bị cần thiết trong nghiên cứu và phân tích khoa học.
2.5.1 Phương pháp điều tra, thu thập mẫu: Điều tra thu thâp mẫu bênh thối rễ, chảy gôm, thối quả tại vùng sản xuất cây có múi ở các huyện Hòa An, Trà Lĩnh, Thạch An, Nguyên Bình và Phục Hòa theo theo phương pháp nghiên cứu Bảo vệ thực vật, 1997, Quy chuẩn kỹ thuật Quốc gia (QCVN 01 - 119:
Chọn tuyến điều tra đại diện cho các tuổi cây trên giống, điều kiện canh tác khác nhau
Mẫu đất và mẫu rễ được thu thập từ các cây bị bệnh ở độ sâu 20 cm, sau khi loại bỏ khoảng 5-7 cm lớp đất mặt Tại mỗi cây, bốn điểm mẫu được thu thập tại bốn hướng theo hình chiếu tán của cây, cách mép khoảng 30-50 cm, và sau đó được trộn đều để đảm bảo tính đại diện và chính xác của mẫu.
Thu thập mẫu, thân, quả bị bênh, ghi rõ ngày tháng, tên giống, bảo quản trong túi polyethylen, lưu giữ trong phòng thí nghiệm
2.5.2 Phương pháp xác định tác nhân gây bệnh
Xác định tác nhân gây bệnh theo chu trình Koch kết hợp với kỹ thuật sinh học phân tử để xác định tên nấm
Để phân lập nấm từ mẫu bệnh, trước tiên, mẫu bệnh cần được rửa sạch dưới vòi nước chảy và để khô trong phòng thí nghiệm Sau đó, cắt mẫu thành các miếng nhỏ kích thước 5 x 5 mm, bao gồm cả mô bệnh và mô khỏe Tiếp theo, ngâm mẫu trong nước javen trong 2 phút, rồi rửa bằng cồn 70° trong 1 phút Cuối cùng, rửa sạch bằng nước cất vô trùng, làm khô bằng giấy thấm vô trùng và đặt vào môi trường PSM.
Khi tản nấm đã phát triển với kích thước 1 – 2 cm, lấy phần đầu sợi nấm cấy truyền sang môi trường PDA
Theo dõi sự phát triển của tản nấm, thời gian hình thành bọc bào tử, mô tả hình thái bọc bào tử, sợi nấm
- Phân lập nấm từ mẫu đất: Sử dụng phương pháp mồi bẫy cánh hoa hồng của
+ Cho đất vào 1/3 cốc, thêm nước cất vô trùng vào tới khi đạt 3/4 cốc chiều cao
Khuấy nhẹ đất trong cốc bằng đũa thuỷ tinh, để lắng trong 2 giờ (tốt nhất để qua đêm)
+ Cắt cánh hoa hồng có kích thước 0,5 x 0,5 cm (1 mồi bẫy) và thả nhẹ vào cốc nước làm mồi bẫy, để cốc qua đêm ở nhiệt độ 20-25°C
+ Sau 1, 2 và 3 ngày, khi cánh hoa bị mất màu, quan sát bào tử nang của nấm
Phytophthora dưới kính hiển vi
+ Phân lập và làm thuần nấm như phương pháp phân lập từ mẫu mô cây bị bệnh
2.5.2.2 Phương pháp lây bệnh nhân tạo
* Lây bệnh nhân tạo trên quả:
Quả cam Trưng Vương chín sinh lý được sử dụng để lây bệnh Để đảm bảo an toàn, bề mặt quả được khử trùng bằng dung dịch NaClO 1%, sau đó được rửa sạch bằng nước cất vô trùng và làm khô bằng giấy thấm vô trùng.
Dung dịch nấm có mật độ 2 x 10^5 cfu/ml được sử dụng để nhúng miếng vải màn kích thước 1x1cm, sau đó áp lên bề mặt quả, với 1 miếng cho mỗi quả Miếng vải được cố định bằng băng dính trên bề mặt vỏ quả, trong khi quả đối chứng sử dụng nước cất vô trùng Cả hai nhóm quả đã lây nhiễm và đối chứng được đặt trong điều kiện ẩm độ và nhiệt độ 25-28 độ C, hoàn toàn trong bóng tối trong khoảng thời gian từ 5 đến 7 ngày Quá trình quan sát hàng ngày được thực hiện để ghi nhận và mô tả sự phát triển của bệnh.
* Lây bệnh trên cây con:
Lây bệnh cho cây con bằng cách lây trên thân và tưới vào gốc cây Cây cam Trưng Vương 12 tháng tuổi ghép trên gốc chấp được trồng trong chậu với hỗn hợp đất phù sa, mùn và trấu khử trùng ở nhiệt độ 25-28°C, nấm được nhân nuôi trên môi trường PDA Thân cây được khử trùng bằng cồn 70°, lật phần vỏ cây đường kính 5mm, và áp miếng thạch chứa nấm 5 ngày tuổi lên phần vỏ (Alvarez và cs 2008) Nhỏ 1 giọt nước cất vô trùng và quấn kín bằng giấy parafilm, bao bằng giấy thiếc để hạn chế thoát hơi nước Dung dịch nấm Phytophthora được tưới vào các cây thí nghiệm, chăm sóc và tưới ẩm hàng ngày bằng máy phun sương, trong khi cây đối chứng sử dụng miếng thạch (PDA) không có nấm.
Thí nghiệm được thực hiện với 10 mẫu nấm mỗi mẫu lây bệnh cho 10 cây Quan sát, ghi nhận và mô tả vết bệnh sau 30 ngày lây nhiễm
- Phân lập nấm từ các cây lây bệnh Quả và cây sau khi xuất hiện vết bệnh sẽ được mô tả triệu chứng, tái phân lập nấm
So sánh triệu chứng của cây bị bệnh tự nhiên và cây nhiễm bệnh nhân tạo cho thấy sự khác biệt rõ rệt trong hình thái nấm Cây bị bệnh tự nhiên thường có dấu hiệu như lá héo úa, thân cây bị thối, trong khi cây lây bệnh nhân tạo có triệu chứng như vết nấm rõ ràng và phát triển nhanh chóng Hình thái nấm từ vết bệnh tự nhiên thường có cấu trúc phức tạp hơn, trong khi mẫu nấm qua lây bệnh nhân tạo thường đơn giản và dễ nhận diện hơn Việc hiểu rõ sự khác biệt này giúp nâng cao hiệu quả trong công tác phòng trừ bệnh cho cây trồng.
2.5.2.3 Phương pháp xác định loài nấm Phytophthora
Việc xác định loài Phytophthora có thể thực hiện thông qua các đặc điểm hình thái học như bọc bào tử (sporang), núm (papilla), và các cấu trúc sinh sản hữu tính như bao đực, bao trứng, cùng với bào tử trứng (oospore) Quy trình này được dựa trên các khóa phân loại do Drenth, Sendall (2001) và Erwin và Ribeiro (1996) phát triển.
- Xác định loài Phyophthora bằng phương pháp PCR + PCR và giải trình tự
Mẫu nấm được nuôi trên môi trường PDA trong 5 ngày, sau đó DNA được tách chiết bằng phương pháp CTAB (Cetyltrimethyl ammonium bromide) theo Doyle & Doyle (1987) Để thực hiện, lấy 0,1 g đến 0,2 g sinh khối nấm cho vào ống eppendorf 1,5ml chứa 700 μl dung dịch đệm CTAB 2%.
Để chiết xuất DNA, chuẩn bị dung dịch với 0,1 M Tris-HCl pH 8, 10 mM EDTA, 2% CTAB, 100 µg protease K và 0,4% β-mercaptoethanol trước khi sử dụng Ủ dịch ở 65°C trong 45 phút, lắc nhẹ sau mỗi 15 phút Thêm 500 µl hỗn hợp Clorofom: Isoamyl alcohol (24:1) vào ống và lắc nhẹ trong 1 phút, sau đó ly tâm ở 12000 vòng/phút trong 10 phút, lấy 600 µl phần dịch nổi chuyển sang ống Eppendorf mới và lặp lại bước này 2 lần Thêm 500 µl Clorofom: Isoamyl alcohol (24:1) vào dịch nổi, sau đó chuyển 500 µl dịch nổi sang ống mới chứa 700 µl isopropanol lạnh (-20°C); lắc nhẹ và ly tâm ở 12000 vòng/phút trong 10 phút Loại bỏ phần chất lỏng bên trên, rửa kết tủa DNA bằng 700 µl ethanol 70% Sau đó, làm khô cặn DNA trong 30 phút và hòa tan cặn DNA với 100 µl đệm TE (10 mM Tris-HCl pH 8,0; 1 mM EDTA pH 8,0), bổ sung 5 µl ribonuclease (RNAse 10 mg/ml) vào mỗi ống, và ủ ở 37°C trong 1 giờ trước khi lưu giữ ở -20°C.
Phản ứng PCR đã được thực hiện với hai mồi ITS4 và ITS5 (White và cộng sự, 1990) để nhân vùng ITS từ các mẫu nấm Trình tự của mồi ITS5 và ITS4 được sử dụng trong nghiên cứu này.
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
Hiện trạng sản xuất cây ăn quả có múi và bệnh thối rễ, chảy gôm trên cây ăn quả có múi tại Cao Bằng
3.1.1 Hiện trạng sản xuất cây ăn quả có múi tại Cao B ằng
Các huyện Hòa An, Trà Lĩnh, Nguyên Bình, Thạch An và Phục Hòa của Cao Bằng là những vùng trồng cây ăn quả có múi chủ yếu, với tổng diện tích trồng đạt 208 ha và 6 loài đặc sản tính đến năm 2014 Trong số đó, Cam Trưng Vương và quýt Hà Trì được trồng tại Hòa An, quýt Trà Lĩnh tại Trà Lĩnh, quýt Hoa Thám tại Nguyên Bình, quýt Trọng Con tại Thạch An, và bưởi Phục Hòa tại Phục Hòa Đặc biệt, Trà Lĩnh là vùng trồng quýt lớn nhất tỉnh, với diện tích đạt 164,5 ha vào năm 2019, chiếm 62,5% tổng diện tích cây có múi của Cao Bằng Hòa An được xác định là vùng đất phù hợp cho sự phát triển của cả cam và quýt.
2019 diện tích trồng cây cây ăn quả có múi của tỉnh Cao Bằng đã đạt 263, (bảng 3.1)
Bảng 3 1 Diện tích trồng cây ăn quả có múi tại Cao Bằng (Năm 2019)
TT Loại cây Địa điểm Năm theo dõi (ha)
Việc trồng cây giống mới ở các vùng cây có múi tại Cao Bằng phụ thuộc vào tập quán của người dân, với các phương pháp như trồng từ hạt, cành chiết, hoặc cây giống ghép trên gốc ghép bưởi Trong những năm gần đây, cây giống ghép trên gốc ghép chấp đã trở nên phổ biến hơn trong việc trồng mới.
Tại Hòa An, người dân chủ yếu trồng cây mới bằng hạt (50%), tiếp theo là trồng bằng cành chiết (23,3%) Ngoài ra, 10% số hộ trồng cây ghép trên gốc bưởi và 16,7% trồng cây giống ghép trên gốc ghép chấp Cây giống ghép trên gốc ghép chấp được cung cấp bởi dự án phát triển cây ăn quả có múi, hợp tác giữa tỉnh Cao Bằng và viện BVTV, nhằm hỗ trợ các hộ dân tham gia mô hình trồng mới của dự án.
Tại Trà Lĩnh, trước đây, người dân chủ yếu trồng quýt bằng hạt và cành chiết Tuy nhiên, trong những năm gần đây, nhiều hộ gia đình đã chuyển sang phương pháp ghép quýt trên gốc bưởi, với tỷ lệ vườn quýt trồng từ cây giống ghép đạt 53,3%.
Tại Phục Hòa tỷ lệ các hộ trồng bằng cành chiết cao hơn (66,7%) so với các hộ trồng bằng cây ghép trên gốc bưởi (33,3%)
Tại Nguyên Bình và Thạch An, người dân chủ yếu trồng cây ăn quả có múi bằng hạt, trong khi một số ít áp dụng phương pháp chiết cành Các hộ trồng cây giống ghép trên gốc ghép đều tham gia vào dự án phát triển cây ăn quả có múi, hợp tác giữa tỉnh Cao Bằng và Viện Bảo vệ Thực vật.
Bảng 3 2 Tình hình sử dụng cây giống để trồng mới (Năm 2015)
TT Địa điểm Số vườn điều tra
Giống ghép (%) Gốc Bưởi Gốc chấp
Các vườn cây ăn quả có múi tại Cao Bằng chủ yếu nằm trong độ tuổi từ 5 đến 15 năm Cụ thể, vườn cây dưới 5 năm tuổi chiếm từ 6,7% đến 33,3%, trong khi cây từ 5 đến 10 năm tuổi chiếm tỷ lệ cao nhất, từ 33,3% đến 66,6%, đặc biệt phổ biến ở các vùng Hòa An, Phục Hòa, Nguyên Bình và Thạch An Ngoài ra, có khoảng 40% số vườn cây từ 10 đến 15 năm tuổi tập trung tại vùng Quýt Trà Lĩnh.
Vườn cây bưởi Phục Hòa trên 15 năm tuổi chỉ đạt tỷ lệ cao nhất 13,3%, trong khi các vùng Hòa An và Trà Lĩnh có rất ít vườn cây ăn quả có múi trên 15 năm tuổi Nguyên nhân chính là do sâu bệnh gây hại nghiêm trọng, buộc người dân phải chặt bỏ và trồng lại nhiều lần.
Bảng 3 3 Hiện trạng tuổi cây tại các vùng trồng cây ăn quả có múi tại Cao Bằng
TT Địa điểm Số vườn điều tra
Tuổi cây (%) Dưới 5 tuổi 5 - 10 năm 10-15 năm Trên 15 năm
Tình hình áp dụng các biện pháp kỹ thuật chăm sóc cây có múi:
Tại Trà Lĩnh, 100% hộ gia đình sử dụng phân bón cho cây ăn quả có múi, trong khi Hòa An là 86,7%, và các huyện Phục Hòa, Thạch An, Nguyên Bình chỉ đạt 13,3 – 26,7% Phần lớn các hộ sử dụng phân hữu cơ từ nguồn sẵn có trong gia đình với lượng ít và bón không đúng cách, trung bình khoảng 1-1,2 kg phân chuồng/cây/năm, chỉ bón một lần sau thu hoạch Việc bổ sung phân hóa học rất hạn chế hoặc không có, dẫn đến tình trạng dinh dưỡng không đầy đủ, khiến nhiều vườn cây sinh trưởng kém, dễ nhiễm sâu bệnh và tỷ lệ chết cây cao.
Tại Trà Lĩnh, tỷ lệ hộ áp dụng kỹ thuật cắt tỉa cao nhất đạt 53,3%, trong khi các huyện Hòa An, Nguyên Bình và Thạch An chỉ đạt từ 26,7% đến 33,3% Đặc biệt, 100% hộ tại Phục Hòa không thực hiện cắt tỉa cho cây Hầu hết các vườn cây được khảo sát có bộ tán không cân đối, với nhiều cành tăm, cành sâu bệnh và cành vượt, tạo điều kiện thuận lợi cho sự phát triển của sâu bệnh, đặc biệt trong thời kỳ ra hoa và đậu quả.
Kết quả điều tra cho thấy 66,7% hộ trồng quýt tại Trà Lĩnh thực hiện tưới nước bổ sung cho cây trong mùa khô, trong khi các vùng trồng cây có múi khác gặp khó khăn về nguồn nước và thiếu quan tâm đến việc tưới nước trong thời gian khô hạn Điều này góp phần làm giảm năng suất và chất lượng vườn cây.
Tại Trà Lĩnh, tỷ lệ hộ sử dụng thuốc bảo vệ thực vật (BVTV) để phòng trừ sâu bệnh đạt 100%, trong khi Hòa An là 66,7% Nguyên Bình và Thạch An có tỷ lệ thấp hơn, chỉ khoảng 6,7% đến 20,0% Đặc biệt, tại Phục Hòa, 100% hộ không sử dụng thuốc BVTV Hầu hết các hộ sử dụng thuốc từ 3 đến 4 lần mỗi năm để kiểm soát sâu hại và bệnh vàng lá Tuy nhiên, việc không sử dụng đúng loại thuốc và phương pháp khiến cho công tác phòng trừ sâu bệnh không hiệu quả, dẫn đến nhiều vườn cây bị sâu bệnh nghiêm trọng.
Bảng 3 4 Tình hình áp dụng các biện pháp kỹ thuật chăm sóc
TT Địa điểm Số hộ bón phân (%)
Số hộ phòng trừ sâu bệnh (%)
Quýt Trà Lĩnh, cam Trưng Vương, Quýt Hà Trì và bưởi Phục Hòa là những cây ăn quả có múi phổ biến ở Cao Bằng Người dân chủ yếu trồng cây có múi bằng hạt và cành chiết, tuy nhiên, việc sử dụng phân bón vẫn còn hạn chế, chỉ sử dụng phân hữu cơ với số lượng ít Hầu hết các vùng trồng phụ thuộc vào nước mưa, chỉ có một số hộ ở Trà Lĩnh chủ động tưới nước trong mùa khô hạn Kỹ thuật cắt tỉa và phòng trừ sâu bệnh chưa được thực hiện đúng cách và kịp thời, dẫn đến tình trạng suy thoái vườn cây, sâu bệnh phát triển mạnh, làm giảm tuổi thọ của cây.
3.1.2 Thành phần bệnh hại trên cây ăn quả có múi tại Cao Bằng
Từ tháng 12 năm 2014 đến tháng 12 năm 2015, tại Cao Bằng, đã phát hiện 13 loại sinh vật gây hại trên cây ăn quả có múi, bao gồm 1 loài virus và 2 loài vi khuẩn.
9 loài nấm và 1 loài tảo (Bảng 3.5)
Bảng 3 5 Thành phần bệnh hại trên cây ăn quả có múi tại Cao Bằng
Nam Tên khoa học Bộ phận bị hại
1 Tristeza Citrus tristeza virus Toàn cây Cả năm + Cam, quýt
Toàn cây Cả năm + Cam, quýt, bưởi
3 Bệnh loét Xanthomonas campestris Dowson
4 Thối rễ, chảy gôm, thối quả
Phytophthora spp Rễ, thân, lá ,quả
Cành, lá non, quả non
Cành, quả 4 – 7 +++ Cam quýt bưởi
10 Thối quả Geotrichum candidum Link
Fusarium sp.; Rễ 5-10 +++ Cam quýt bưởi
Corticium sp Cành 5 - 9 + Cam quýt bưởi
13 Đốm tảo Cephaleuros virescens Kunz
Ghi chú: +: Số cây (số lá) bị bệnh : < 10% ++: Số cây (số lá) bị bệnh : 11% - 25%
Kết quả cho thấy, trong 13 loại bệnh, bệnh thối rễ, chảy gôm, thối quả
Phytophthora và bệnh thán thư Collectotrichum gloeosporioides là hai bệnh gây hại nghiêm trọng, ảnh hưởng đến 25-50% cây trồng trong các vườn điều tra Bệnh thán thư dẫn đến hiện tượng chết cành và rụng quả, trong khi nấm Phytophthora khiến cây còi cọc, lá vàng và có thể gây nứt vỏ, chảy gôm trên thân cành, cùng với hiện tượng thối rụng quả Bệnh mốc xanh quả và đốm dầu chỉ gây hại ở mức độ thấp Ngoài ra, bệnh thối quả do nấm Geotrichum candidum và các bệnh nấm hồng, phấn trắng, muội đen có tỷ lệ nhiễm dưới 10% Bệnh vàng lá Greening và Tristeza cũng xuất hiện với mức độ thấp.
Bệnh thối gốc chảy gôm Phytophthora đã gây thiệt hại nghiêm trọng về năng suất và chất lượng sản phẩm trong vùng sản xuất cây có múi tại Cao Bằng, theo kết quả điều tra.
Nghiên cứu các đặc điểm sinh học, nuôi cấy của nấm Phytophthora
Kết quả nghiên cứu về tác nhân gây bệnh thối rễ và chảy gôm trên cây ăn quả có múi tại Cao Bằng tương đồng với các điều tra trước đó của Viện Bảo vệ thực vật vào các năm 1967-1968 và 1997.
Nghiên cứu của Đặng Vũ Thị Thanh và cộng sự (2010) chỉ ra rằng tác nhân gây bệnh thối rễ và chảy gôm ở cây ăn quả có múi tại Việt Nam chủ yếu là do nấm P nicotianae và P citrophthora Thêm vào đó, kết quả nghiên cứu tại Cao Bằng đã xác nhận sự xuất hiện của nấm P palmivora, một loại nấm gây hại cho nhiều loại cây trồng, trong danh sách các tác nhân gây hại cho cây ăn quả có múi.
3.2 Nghiên cứu các đặc điểm sinh học, nuôi cấy của nấm Phytophthora
Các loài nấm P palmivora (mẫu Phyt-01), P nicotianae (mẫu Phyt-03) và P citrophthora (mẫu M2) đã được nghiên cứu để xác định các đặc điểm sinh học và khả năng nuôi cấy của chúng trong các điều kiện nhiệt độ, pH và môi trường dinh dưỡng khác nhau.
3.2.1 Nghiên cứu đặc điểm sinh học của nấm Phytophthora 3.2.1.1 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến sinh trưởng, phát triển của nấm Phytophthora
Các loài nấm Phytophthora đã được nuôi cấy trong các mức nhiệt độ 5, 10, 15, 20,
25, 30, 35 và 40 0 C trên môi trường PDA Thí nghiệm được thực hiện tại phòng thí nghiệm bệnh cây, Viện Bảo vệ thực vật
Nấm P palmivora có thể sinh trưởng và phát triển trong khoảng nhiệt độ từ 10 đến
Nhiệt độ tối ưu cho sự phát triển của nấm nằm trong khoảng 25 - 30 độ C, với đường kính tản nấm đạt từ 6,87 đến 7,24 cm sau 6 ngày nuôi cấy Kết quả này phù hợp với nghiên cứu của Whaterhouse (1974).
Bảng 3 15 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến sinh trưởng của nấm P palmivora Phyt-01
TT Điều kiện nhiệt độ ( o C) Đường kính tản nấm (cm)
Ghi chú: Các giá trị trong cùng một cột biểu hiện các chữ cái giống nhau không sai khác có ý nghĩa ở mức xác xuất P≤0.05 theo phân tích Duncan
Bảng 3 16 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến sinh trưởng của nấm P nicotianae
TT Điều kiện nhiệt độ ( o C) Đường kính tản nấm (cm)
Ghi chú: Các giá trị trong cùng một cột biểu hiện các chữ cái giống nhau không sai khác có ý
Nấm P nicotianae có thể sinh trưởng trong khoảng nhiệt độ từ 10 0 C đến 35 0 C
Cũng tương tự như nấm P palmivora khoảng nhiệt độ thích hợp cho nấm sinh trưởng từ
Nấm phát triển tối ưu nhất ở nhiệt độ 30°C, với đường kính tản đạt 7,12cm sau 6 ngày Ở nhiệt độ 5°C và 40°C, nấm không có sự sinh trưởng và phát triển nào được ghi nhận.
Hình 3 14 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến sự phát triển của nấm P nicotianae
Nấm P citrophthora phát triển hiệu quả nhất trong khoảng nhiệt độ từ 20°C đến 25°C, với nhiệt độ tối ưu là 20°C, cho đường kính tản nấm đạt 6,84 sau 6 ngày nuôi cấy Mặc dù nấm vẫn có thể phát triển ở nhiệt độ 10°C và 30°C, tốc độ phát triển sẽ chậm hơn Kết quả này phù hợp với các nghiên cứu trước đây của Graham và cộng sự (1998) cũng như Sativa và cộng sự (2012).
Bảng 3 17 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến sinh trưởng của nấm P citrophthora
TT Điều kiện nhiệt độ ( o C) Đường kính tản nấm (cm)
Ghi chú: Các giá trị trong cùng một cột biểu hiện các chữ cái giống nhau không sai khác có ý nghĩa ở mức xác xuất P≤0.05 theo phân tích Duncan
3.2.1.2 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến khả năng hình thành bọc bào tử của 03 loài nấm Phytophthora
Bọc động bào tử là cơ quan duy trì khả năng lan truyền và tồn tại của nấm
Phytophthora trong tự nhiên chịu ảnh hưởng mạnh mẽ từ các yếu tố môi trường, đặc biệt là nhiệt độ Nghiên cứu về tác động của nhiệt độ đến khả năng hình thành cơ quan sinh sản bọc động bào tử đã được thực hiện trên ba loài nấm P.palmivora, P.nicotianae và P.citrophthora.
Nấm được nuôi cấy trên môi trường V8A ở 25 0 C sau 24 giờ tản nấm được rửa bằng nước cất khử trùng và đưa vào các mức nhiệt độ thí nghiệm 10, 15, 20, 25, 30 và 35 0 C
Sau 48 giờ chuyển nấm vào ống nghiệm chứa nước cất lắc đều và đếm số lượng bọc bào tử bằng buồng đếm hồng cầu
Bảng 3 18 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến khả năng hình thành bọc bào tử của nấm
TT Điều kiện nhiệt độ
Bọc Bào tử/đĩa petri (x 10 4 )
Ghi chú: Các giá trị trong cùng một cột biểu hiện các chữ cái giống nhau không sai khác có ý nghĩa ở mức xác xuất P≤0.05 theo phân tích Duncan
Cả ba loài nấm đều có khả năng sinh bọc bào tử tương đồng với khả năng phát triển của tản nấm, và chúng có thể hình thành bọc bào tử ở nhiệt độ từ 10 độ C.
Nấm P palmivora phát triển bọc bào tử trong khoảng nhiệt độ từ 10 đến 30 độ C, với mức tối ưu là 25 độ C Số lượng bọc bào tử đạt cao nhất là 5,37 x 10^4 bọc bào tử trên mỗi đĩa petri, đặc biệt trong khoảng nhiệt độ từ 20 đến 25 độ C (bảng 3.18).
Nấm P nicotianae có khả năng hình thành bọc bào tử ở tất cả các mức nhiệt độ thí nghiệm Nhiệt độ lý tưởng cho sự phát triển của nấm P nicotianae nằm trong khoảng từ 20 đến 30 độ C.
(Phyt-03) sản sinh bọc bào tử, trong đó nhiệt độ 30 0 C là thích hợp nhất với lượng bọc bào tử là 5,84 x 10 4 bọc bào tử/đĩa (bảng 3.18)
Nấm P citrophthora phát triển tốt nhất trong khoảng nhiệt độ từ 15-25°C, với nhiệt độ lý tưởng để hình thành bọc bào tử là 20°C Ở nhiệt độ này, số lượng bọc bào tử sản sinh đạt 5,86 x 10^4 bọc bào tử trên mỗi đĩa petri.
Kết quả nghiên cứu đã chỉ ra sự khác biêt vể yêu cầu nhiệt độ của các nấm
3 loài nấm P.nicotianae là loài có yêu cầu về nhiệt độ cao hơn để phát triển so với các loài
P palmivora và P citrophthora Nhiệt độ thích hợp nhất để nấm P nicotianae phát triển tản nấm và bọc bào tử là 30 0 C, của nấm P palmivora là 25 0 C nhưng của nấm P citrophthora chỉ có 20 0 C Kết quả nghiên cứu cũng sẽ góp phần để xác định được vùng phân bố, thời gian gây hại nặng của từng loài nấm trên đồng ruộng Nấm P.nicotianae sẽ phát triển gây hại nặng cho cây trong các tháng mùa hè nóng ẩm, nấm P citrophthora sẽ gây hại nặng cho cây trong mùa xuân mưa phùn ẩm ướt
Nghiên cứu cho thấy nhiệt độ có ảnh hưởng đáng kể đến sự sinh trưởng của các nấm P palmivora, P nicotianae và P citrophthora, với kết quả tương tự như các nghiên cứu trước đây.
Waterhouse (1974) Francis và cs (2015), Timmer và cs., (1993); Timmer and Broadbent (2003); Alvarez và cs (2008)
3.2.1.3 Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng của nấm Phytophthora
Các loài nấm P palmivora, P nicotianae và P citrophthora đã được nhân nuôi trên các môi trường PDA, PCA, PSA, CMA, CRA và V8A Kết quả được trình bày tại bảng 3.19
Bảng 3 19 Ảnh hưởng của môi trường dinh đưỡng đến sự phát triển của 03 loài nấm
TT Môi trường nuôi cấy
Phyt-03 P citrophthora M2 ĐKTN sau 3 ngày ĐKTN sau 6 ngày ĐKTN sau 3 ngày ĐKTN sau 6 ngày ĐKTN sau 3 ngày ĐKTN sau 6 ngày
Ghi chú: ĐKTN là viết tắt của đường kính tản nấm Các giá trị trong cùng một cột thể hiện các chữ cái giống nhau không có sự khác biệt có ý nghĩa ở mức xác suất P≤0.05 theo phân tích Duncan.
Cả 3 loài P palmivora, P nicotianae và P citrophthora đều phát triển trên 6 loại môi trường, sau nuôi cấy 6 ngày đường kính tản nấm đạt từ 6,28 – 7,82cm Cả 3 loài nấm đều phát triển kém hơn trên môi trường PSA đường kính tản nấm sau 6 ngày chỉ đạt từ 6,28 - 6,57cm Môi trường V8A là môi trường thích hợp nhất cho nấm phát triển, đường kính tản nấm đạt từ 7,54 – 7,82 cm sau 6 ngày Tuy nhiên, mỗi một loài nấm có nhu cầu dinh dưỡng khác nhau, nấm P palmivora có đương kính tản nấm lớn hơn 7cm trên 5 loại môi trường PDA, PCA, CMA, CRA và V8A, nấm P nicotianae trên 4 môi trường PDA, CMA, CRA và V8A và nấm P citrophthora chỉ có đường kính tản nấm lớn hơn 7cm trên
3 loại môi trường PDA, CRA và V8A
Các loại môi trường PDA, CRA và V8A thích hợp cho cả ba loài nấm phát triển
Phân lập, tuyển chọn vi sinh vật đối kháng nấm Phytophthora từ đất trồng cây ăn quả có múi ở Cao Bằng
3.3 Phân lập, tuyển chọn vi sinh vật đối kháng nấm Phytophthora từ đất trồng cây ăn quả có múi ở Cao Bằng Để có các vi sinh vật đối kháng nấm Phytophthora có khả năng phòng chống hiệu quả bệnh thối rễ, chảy gôm trên cây có múi tại Cao Bằng công tác tuyển chọn các dòng vi sinh vật đối kháng bản địa đã được tiến hành
Các mẫu đất để phân lập và tuyển chọn vi sinh vật đối kháng đã được thu thập từ các vườn cây có múi khỏe mạnh hoặc chỉ bị bệnh nhẹ.
3.3.1 Phân lập, tuyển chọn vi sinh vật đối kháng nấm Phytophthora
Từ 60 mẫu đất thu thập được ở Cao Bằng đã phân lập được 112 mẫu VSV có khả năng đối kháng nấm Phytophthora, trong đó 6 mẫu có khả năng đối kháng rất cao, 31 mẫu khả năng đối kháng cao, 30 mẫu khả năng đối kháng trung bình và 35 mẫu khả năng đối kháng yếu (bảng 3.24) 6 mẫu có khả năng đối kháng rất cao là BHA12.2, BHA6.5, STL2.7, SHA2.4 và SNB3.8, BNB9.8 được phân lập từ các vùng trồng cây có múi khác nhau của Cao Bằng
Bảng 3 24 Phân lập và đánh giá khả năng đối kháng của vi sinh vật đối với nấm
TT Địa điểm Số mẫu
Số chủng VSV phân lập được
Ghi chú: Thang tính hiệu quả ức chế:
Bảng 3 25 Khả năng ức chế của các nguồn vi sinh vật có triển vọng với nấm
(PNB5.8) ĐK vòng vô khuẩn (mm)
HQƯC (%) ĐK vòng vô khuẩn (mm)
HQƯC (%) ĐK vòng vô khuẩn (mm)
Các giá trị trong cùng một cột biểu thị bằng các chữ giống nhau sai khác không có ý nghĩa ở xác suất P ≤ 0,05 theo phân tích Duncan’s
Hình 3 17 Khả năng ức chế của vi khuẩn BHA12.2 với nấm P citrophthora
Hình 3 18 Khả năng ức chế của xạ khuẩn STL2.7 đối với nấm P Citrophthora
Kết quả thí nghiệm cho thấy, sáu nguồn vi sinh vật (VSV) triển vọng đều có khả năng ức chế mạnh mẽ đối với các loại nấm, chứng tỏ tiềm năng ứng dụng của chúng trong việc kiểm soát nấm gây hại.
Phytophthora thu thập ở các vùng khác nhau Nguồn STL2.7 có khả năng ức chế cao đường kính vòng vô khuẩn hình thành với 3 nguồn nấm Phytophthora lần lượt là 28,4,
27,8 và 26,5 mm và nguồn BNB3.8 có đường kính vòng vô khuẩn là 27,8, 28,6, và 27,2 mm Hiệu quả ức chế trung bình với 3 nguồn nấm Phytophthora của 3 mẫu BNB3.8,
STL2.7 và BHA12.2 lần lượt là 85,7; 84,8 và 82,2% (Bảng 3.25)
Nghiên cứu đã đánh giá khả năng đối kháng của nấm Trichoderma harzianum, được lưu giữ tại phòng thí nghiệm Bộ môn Bệnh cây và Miễn dịch thực vật, Viện Bảo vệ thực vật, đối với các loài nấm Phytophthora phân lập từ đất trồng cây ăn quả có múi ở tỉnh Cao Bằng.
Nguồn Trichoderma 01 được chọn lựa do thời gian hình thành vòng đối kháng nhanh chóng và đường kính vòng đối kháng lớn nhất Chỉ sau 2 ngày, cả nấm Trichoderma và
Phytophthora spp phát triển và lan nhanh trong môi trường Từ ngày thứ 4, nấm Trichoderma bắt đầu tiếp cận và ký sinh vào sợi nấm Phytophthora, dẫn đến việc tản nấm Phytophthora không còn phát triển và bị khô sau 7 ngày.
Ba nguồn VSV đối kháng BNB3.8, STL2.7 và BHA12.2 và mẫu Trichoderma 01 được lựa chọn cho các nghiên cứu tiếp theo
3.3.2 Xác định các vi sinh vật đối kháng và mức độ an toàn sinh học
Các nguồn vi sinh vật có hoạt tính cao BHA12.2, BNB 3.8 và STL2.7 đã được xác định thông qua phương pháp truyền thống, dựa trên đặc điểm tế bào, khuẩn lạc và các phản ứng sinh hóa theo tài liệu của Bergey, cùng với các phương pháp sinh học phân tử.
Phương pháp PCR sử dụng cặp mồi Phy1F và Phy1R (Hà Viết Cường và cộng sự,
3.3.2.1 Định danh các vi sinh vật đối kháng theo đặc điểm sinh hóa hoc
Kết quả nghiên cứu về đặc điểm sinh học của ba nguồn vi sinh vật đối kháng BHA12.2, STL2.7 và BNB 3.8 được trình bày trong bảng 3.26 Qua việc phân tích hình thái khuẩn lạc, hình thái tế bào, phản ứng Gram và nhu cầu oxy, các mẫu BHA12.2 và BNB 3.8 được xác định là vi khuẩn hiếu khí, sinh bào tử, trong khi mẫu STL2.7 được xác định là xạ khuẩn.
Nghiên cứu cho thấy, ba nguồn vi sinh vật BHA12.2, BNB 3.8 và STL2.7 có khả năng đồng hóa các nguồn carbon như D-glucose, Saccarose, tinh bột, Xenlulose, Glycerol và Maltose, làm cho màu sắc môi trường chuyển từ xanh (màu của đối chứng) sang màu da cam và vàng nhạt.
Bảng 3 26 Một số Đặc điểm sinh học của các nguồn vi sinh vật có triển vọng
VSV Hình thái khuẩn lạc, tế bào Phản ứng
Trên môi trường King’s B khuẩn lạc tròn màu trắng đục, mép khuẩn lạc nhăn, tế bào hình gậy, sinh bào tử
Trên môi trường YS khuẩn lạc màu màu nâu xám, bào tử hình bầu dục, chuỗi bào tử đơn hoặc phân nhánh dạng xoắn
Trên môi trường PDA khuẩn lạc tròn, có màu trắng đục, bề mặt khuẩn lạc nhăn, tế bào hình gậy, sinh bào tử
Bảng 3 27 Khả năng đồng hóa nguồn Các bon của các nguồn vi sinh vật đối kháng
TT Mẫu VSV D- glucose Saccarose Tinh bột Xenlulose Glycerol Maltose
Các nghiên cứu về hình thái khuẩn lạc, tế bào, nhuộm Gram, cùng khả năng sử dụng oxy và các nguồn carbon đã xác định được hai mẫu vi sinh vật BHA12.2 và BNB3.8 thuộc giống.
3.3.2.2 Định danh các vi sinh vật đối kháng bằng phương pháp PCR
Cặp mồi Phy1F và Phy1R đã được Sử dụng để xác định các nguồn BHA12.2, BNB 3.8 và STL2.7
Trình tự gen của ba nguồn BHA12.2, STL2.7 và BNB3.8 đã được so sánh với các nguồn gen trong ngân hàng gen quốc tế Đặc biệt, trình tự gen của nguồn BHA12.2 cho thấy sự tương đồng lên tới 99,62% với loài Bacillus amyloliquefaciens, được đăng ký với mã số Genbank.
FN597644, mẫu BNB3.8 tương đồng 99,72 với loài Bacillus methylotrophicus được đăng ký với mã số Genbank AB184285 và nguồn STL2.7 tương đồng 100% với loài
Streptomyces misionensis được đăng ký với mã số Genbank AB184285
Bảng 3 28 Kết quả định danh các chủng VSV đối kháng nấm Phytophthora gây bệnh trên cây ăn quả có múi (Năm 2017)
Mẫu VSV Mã trình tự
Kích thước sản phẩm sau khi lắp ráp (bp)
Phần trăm đồng nhất trình tự
Kết quả từ các phản ứng sinh hóa và kỹ thuật sinh học phân tử cho thấy nguồn BHA12.2 thuộc về vi khuẩn Bacillus amyloliquefaciens, trong khi nguồn BNB 3.8 cũng xác định thuộc về một loại vi khuẩn khác.
Bacillus methylotrophicus and the STL2.7 strain are classified within the actinobacteria group, specifically Streptomyces misionensis This section focuses on assessing the biosafety levels of the bacterial species Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus methylotrophicus, and the actinobacterium Streptomyces misionensis.
Theo quy định của Cộng đồng châu Âu, các tác nhân sinh học như vi khuẩn, vi rút, nấm và ký sinh trùng được phân loại thành 4 cấp độ an toàn Mỗi cấp độ an toàn có những tiêu chí và quy định cụ thể nhằm đảm bảo an toàn trong nghiên cứu và ứng dụng sinh học.
- Tác nhân sinh học có mức an toàn sinh học 1 là các tác nhân sinh học không có
Đánh giá khả năng sử dụng vi sinh vật đối kháng phòng trừ bệnh Phytophthora trên cây ăn quả có múi tại Cao Bằng trong hệ thống quản lý tổng hợp cây trồng
Chế phẩm sinh học CB-1, được phát triển bởi Bộ môn Bệnh cây và Miễn dịch thực vật, đã thành công trong việc sản xuất nhờ vào việc kế thừa và ứng dụng công nghệ chế phẩm sinh học Phyto-M Sản phẩm này sử dụng ba nguồn vi sinh vật đối kháng được tuyển chọn từ Cao Bằng.
Các nguồn vật liệu để sản xuất chế phẩm CB-1 bao gồm B amyloliquefaciens
(BHA12.2)+B.methylotrophicus (BNB3.8) + S misionensis ( STL2.7) + Trichoderma hazianum +Saponin với tỷ lệ phối trộn
Nguồn vật liệu Tỷ lệ (%)
Chế phẩm sinh học CB-1 được sản xuất từ các nguồn vi sinh vật có mật độ 1 x 10^8 cfu/g, đã được chứng minh hiệu quả trong việc phòng chống nấm.
Phytophthora gây bệnh thối rễ, chay gôm trên cây ăn quả có múi
3.4.1 Khả năng trừ nấm Phytophthora của chế phẩm CB-1 ở các liều lượng khác nhau
Trong điều kiện nhà lưới chế phẩm CB-1 có tác dụng hạn chế sự phát triển của nấm
Phytophthora ở tất cả các liều lượng sử dụng (Bảng 3.34)
Bảng 3 34 Khả năng trừ nấm Phytophthora của chế phẩm CB-1 ở các liều lượng khác nhau trong nhà lưới (Năm 2018)
Tỷ lệ cánh hoa hồng bị nhiễm nấm Phytophthora spp (%) Hiệu lực trừ nấm
1 tháng 3 tháng 1 tháng 3 tháng 1 tháng 3 tháng 2,5 28,7 20,2 c 29,6 22,5 b 28,2 23,1 b 75,85 5,0 20,6 16,4 b 21,8 15,7 c 22,6 16,5 c 82,19
Sau 1 tháng ở liều lượng sử dụng chế phẩm CB-1 thấp nhất (2,5g/chậu) tỷ lệ cánh hoa bị nhiễm các loài nấm Phytophthora đạt từ 28,2- 29,6%, trong khi đó ở các công thức đối chứng tỷ lệ cánh hoa bị nhiếm nấm đạt từ 89,8-92,8% (bảng 3.35) Công thức sử dụng liều lượng 10 g/chậu tỷ lệ cánh hoa bị nhiễm nấm là thấp nhất (lần lượt là 19,7, 18,4 và 21,7% đối với P palmivora, P nicotianae và P citrophthora) Sau 3 tháng, tỷ lệ cánh hoa bị nhiễm nấm ở các công thức thí nghiệm giảm đáng kể và hiệu lực trừ nấm trung bình của các liều lượng sử dụng 2,5, 5 và 10 g/chậu lần lượt là 75,85; 82,19 và 83,18% (bảng 3.34)
3.4.2 Khả năng trừ nấm bệnh thối rễ chảy gôm Phytophthora của chế phẩm CB-1 trên cây ăn quả có múi
Nghiên cứu về hiệu lực trừ bệnh của các chế phẩm và thuốc trừ nấm sinh học đối với bệnh thối rễ và chảy gôm do Phytophthora gây ra đã được thực hiện trên vườn cam 7 – 8 năm tuổi tại xã Trưng Vương, huyện Hòa An vào năm 2019 Sau 6 tháng áp dụng, chế phẩm CB-1 cho thấy hiệu quả trừ bệnh đạt 57,9%, tương đương với các chế phẩm sinh học hiện đang được sử dụng như Bio-VAAS.1, SH-BV 1, và Phyto-M Năng suất quả trung bình đạt 64,3 kg/cây, cao hơn 2,9 kg/cây so với nhóm đối chứng.
Bảng 3 35 Hiệu lực phòng trừ bệnh thối rễ, chảy gôm Phytophthora trên cam Trưng
Vương của chế phẩm và thuốc trừ nấm sinh học (Năm 2019)
Tỷ lệ bệnh (%) Hiệu lực
Bảng 3 36 Hiệu quả trừ nấm Phytophthora trên đất vườn cam của các thuốc trừ nấm và chế phẩm sinh học (Năm 2019)
Tỷ lệ cánh hoa hồng bị nhiễm nấm Phytophthora spp (%)
Hiệu lực PT sau 6 tháng
Trước xử lý SXLCP 3 tháng SXLCP 6 tháng (%)
Ghi chú: Các giá trị trong cùng một cột biểu thị bằng các chữ giống nhau sai khác không có ý nghĩa ở xác
Nghiên cứu tại Cao Bằng đã đánh giá khả năng ức chế nấm Phytophthora trong đất vườn cam của các chế phẩm và thuốc trừ nấm sinh học Phương pháp bẫy nấm bằng cánh hoa hồng được sử dụng để xác định mật độ nấm Phytophthora trong đất Sau 6 tháng xử lý, chế phẩm CB-1 cho hiệu quả kiểm soát nấm Phytophthora đạt 73,1%, tương đương với chế phẩm Bio-VAAS.1, Phyto-M, và cao hơn so với thuốc trừ nấm sinh học Actinovate 1SP cùng các chế phẩm sinh học Trico ĐHCT và SH-BV 1.
Chế phẩm CB-1 đã được so sánh hiệu quả trừ bệnh với các thuốc trừ nấm hóa học tại địa phương trên vườn quýt 7 năm tuổi bị nhiễm bệnh thối rễ chảy gôm nhẹ Sau 6 tháng sử dụng, CB-1 đạt hiệu quả phòng trừ bệnh 71,8%, cao hơn so với Aliette 80WP, Rhidomil gold 68 WP và Vidoc 80WP Hiệu lực trừ bệnh của CB-1 gần tương đương với Bio-VAAS.1, nhưng thấp hơn so với Agri-fos 400, mặc dù CB-1 an toàn hơn cho cây trồng.
Bảng 3.37 trình bày hiệu lực của một số loại thuốc trừ nấm hóa học và chế phẩm sinh học CB-1, Bio-VASS.1 trong việc phòng trừ bệnh thối rễ chảy gôm trên cây quýt Trà Lĩnh trong năm 2020 Nghiên cứu này nhằm đánh giá hiệu quả của các sản phẩm này trong việc bảo vệ cây trồng khỏi bệnh tật, góp phần nâng cao năng suất và chất lượng quả quýt.
BVTV Phương pháp xử lý
Tưới vùng rễ + phun lên cây 3,72 5,46 56,15 8,57 55,77
3 Vidoc 80WP Quét gốc + Tưới vùng rễ 3,56 7,08 40,58 10,14 45,32
4 Agri-fos 400 Tiêm thân cây, phun lên lá 3,85 3,86 70,04 1,53 92,37
6 Bio-VAAS.1 Hòa nước tưới 3,71 6,53 45,7 5,21 75,42
Ghi chú: TLB(%): Tỷ lệ bệnh, CSB(%): Chỉ số bệnh, HQPT(%): hiệu quả phòng trừ
Hình 3 20 Thử nghiệm 1 số thuốc hóa học phòng trừ bệnh thối rễ chảy gôm trên cây quýt Trà Lĩnh
A – Tiêm thuốc Agri-fos 400; B – tưới thuốc Aliette 800WG; C – Tưới Boocđo; D – Bộ rễ phục hồi sau 9 tháng sử lý chế phẩm CB-1
Hiệu quả trực tiếp phòng chống bệnh thối rễ, chảy gôm Phytophthora trên cây cam Trưng Vương đạt 57,9% và cây quýt Trà Lĩnh là 71,8% hiệu quả hạn chế nấm
Phytophthora trên đất vườn cây có múi đạt tỷ lệ 73,1% Chế phẩm CB-1 cho hiệu lực tương đương với các chế phẩm Bio-VAAS.1 và Phyto-M, đã được khuyến cáo trong việc phòng trừ nấm Phytophthora gây bệnh trên cây có múi.
Nghiên cứu về chế phẩm CB-1 đã mở ra cơ hội mới trong việc phòng trừ bệnh thối rễ và chảy gôm trên cây có múi tại Cao Bằng Kết quả này khuyến khích tiếp tục tìm hiểu và phát triển các phương pháp ứng dụng hiệu quả hơn trong việc bảo vệ cây trồng.
3.4.3 Nghiên cứu sử dụng chế phẩm CB-1 3.4.3.1 Nghiên cứu phương pháp sử dụng chế phẩm CB-1 Để xác định phương pháp sử dụng chế phẩm CB-1 phòng trừ bệnh thối rễ, chảy
Để bón cho cây, có thể kết hợp chế phẩm với phân hữu cơ, bón trực tiếp xung quanh tán cây hoặc hòa chế phẩm vào nước để tưới Lượng chế phẩm được khuyến nghị sử dụng là 80g cho mỗi cây.
Phytophthora trong đất vườn cây có múi đã được xác đinh theo phương pháp bẫy cánh hoa hồng
Bảng 3 38 Hiệu quả của các phương pháp sử dụng CB-1 để trừ nấm Phytophthora trong đất vườn cây ăn quả có múi (Năm 2019)
TT Phương pháp sử dụng
Tỷ lệ cánh hoa hồng bị mất mầu do nhiễm nấm Phytophthora spp
HQPT (%) TXL 1 tháng 3 tháng 6 tháng
1 Ủ cùng phân chuồng bón cho cây 46,3 39,5 23,5 17,3 78,3
2 Bón trực tiếp quanh tán cây 45,4 43,7 26,2 19,3 75,2
3 Hòa chế phẩm và tưới cho cây 46,2 41,5 28,1 20,6 74,1
Ghi chú: TXL – Trước xử lý, HQPT – Hiệu quả phòng trừ Các phương pháp sử dụng CB-1 đều phát huy được hiệu quả hạn chế nấm
Phytophthora trong vườn cây có múi và không có sự sai khác nhiều Sau 6 tháng hiệu quả hạn chế nấm đạt từ 74,1-78,3% (bảng 3.38)
3.4.3.2 Xác định số lần và thời điểm sử dụng chế phẩm CB-1
Sử dụng chế phẩm CB-1 trên vườn cây có múi giúp hạn chế nấm Phytophthora hiệu quả Đặc biệt, hiệu quả cao nhất đạt được khi áp dụng 3 lần trong năm, cụ thể là sau thu hoạch, trước mùa mưa và cuối mùa mưa Công thức này có khả năng hạn chế nấm Phytophthora lên đến 79,3%.
Bảng 3.39 trình bày hiệu quả của việc sử dụng chế phẩm CB-1 trong việc kiểm soát nấm Phytophthora trên đất vườn cây ăn quả có múi tại Cao Bằng vào năm 2019 Nghiên cứu cho thấy số lần và thời gian sử dụng chế phẩm này có ảnh hưởng đáng kể đến khả năng kiểm soát nấm gây hại, từ đó nâng cao năng suất và chất lượng cây trồng Kết quả cho thấy việc áp dụng đúng liều lượng và tần suất sử dụng chế phẩm CB-1 có thể mang lại hiệu quả tích cực trong việc bảo vệ cây ăn quả khỏi các bệnh do nấm.
Tỷ lệ miếng hoa hồng bị mất mầu do nhiễm nấm Phytophthora spp (%) HLPT TSL 1 tháng 3 tháng 6 tháng (%)
1 Xử lý 1 lần Sau thu 52,3 37,6 24,3 28,7 66,3
2 Xử lý 2 lần Sau thu hoạch + trước mùa mưa 40,7 21,3 13,4 19,1 71,1
3 Xử lý 3 lần Sau thu hoạch + trước + cuối mùa mưa 52,3 19,0 11,3 17,6 79,3
3.4.3.3 Sử dụng chế phẩm CB-1 và phân bón
Bảng 3 40 Ảnh hưởng của phân bón và chế phẩm CB-1 tới bệnh thối rễ, chảy gôm
Trước xử lý Sau xử lý 3 tháng Sau xử lý 6 tháng Năng suất (kg/cây)
Ghi chú: NS Không sai khác TLB Tỉ lệ bệnh CSB Chỉ số bệnh CT1: 50 kg phân chuồng + nền nông dân (2,0 kg NPK/cây)
Bón phân theo năng suất của vụ trước, tương đương với 30 kg quả trên mỗi cây, cần sử dụng 50 kg phân chuồng, 1,1 kg Urê, 1,4 kg lân supe, 0,6 kg kaliclorua và 2 kg vôi bột cho mỗi cây Công thức CT3 bao gồm tất cả các thành phần của CT2 cộng với chế phẩm CB-1 để nâng cao hiệu quả bón phân.
Thí nghiệm được thực hiện tại vườn cam Trưng Vương 8 tuổi ở Hòa An, nơi có tỷ lệ bệnh cao trên 10% Sau 6 tháng, mặc dù có sự khác biệt về mức độ bệnh giữa các công thức, phân bón không có tác dụng hạn chế bệnh mà chủ yếu cung cấp dinh dưỡng cho cây Các công thức được cung cấp dinh dưỡng đầy đủ cho thấy năng suất cam cao hơn so với công thức bón 2,0 kg NPK theo cách làm của nông dân Đặc biệt, công thức 3, tính toán lượng phân bón dựa trên năng suất cam vụ trước kết hợp với chế phẩm CB-1, đã giúp cây cam đạt năng suất cao nhất.
3.4.3.4 Sử dụng chế phẩm CB-1 kết hợp với tỉa cành, tạo tán và vệ sinh đồng ruộng