TỔNG QUAN
Hội chứng sa sút trí tuệ (dementia) và suy giảm trí nhớ
Sa sút trí tuệ, theo Tổ chức Y tế thế giới (WHO), được định nghĩa là một hội chứng có tính chất mạn tính hoặc tiến triển, dẫn đến suy giảm chức năng nhận thức vượt qua quá trình lão hóa bình thường.
Có nhiều dạng sa sút trí tuệ khác nhau, bao gồm:
- Sa sút trí tuệ mạch máu (vascular dementia);
- Sa sút trí tuệ thể Lewy (dementia with Lewy bodies, tập hợp protein bất thường phát triển bên trong các tế bào thần kinh);
- Một nhóm bệnh (thoái hóa thùy trán của não) góp phần gây ra chứng sa sút trí tuệ sớm (frontotemporal dementia)
Ranh giới giữa các dạng sa sút trí tuệ thường không rõ ràng và có thể tồn tại dưới dạng hỗn hợp Sa sút trí tuệ ảnh hưởng đến nhiều lĩnh vực như trí nhớ, tư duy, định hướng, hiểu biết, tính toán, năng lực học tập, ngôn ngữ và khả năng phán đoán, nhưng không gây mất ý thức Triệu chứng suy giảm trí nhớ thường xuất hiện sớm nhất, trong khi suy giảm chức năng nhận thức thường đi kèm với giảm khả năng kiểm soát cảm xúc và hành vi xã hội.
1.1.2 Nguyên nhân và cơ chế bệnh sinh
Sa sút trí tuệ có nhiều nguyên nhân, trong đó bệnh Alzheimer, một bệnh lý thoái hóa thần kinh tiến triển, là nguyên nhân phổ biến nhất, chiếm từ 60 đến 70% trường hợp.
Bệnh Alzheimer thường có dấu hiệu tổn thương như đám rối sợi thần kinh (NFTs), mảng bám β-amyloid (Aβ) ở một số vùng não, teo não và thoái hóa hệ cholinergic Dù đã gần 120 năm từ khi phát hiện, nguyên nhân và cơ chế bệnh sinh của Alzheimer vẫn chưa được xác định rõ ràng, ngoại trừ 1% đến 5% trường hợp có sự khác biệt di truyền.
Các nhà khoa học đã đưa ra một số giả thuyết như sau:
1.1.2.1 Giả thuyết về hệ thống dẫn truyền thần kinh bằng acetylcholin (cholinergic) và những bất thường về các chất dẫn truyền thần kinh khác Đây là giả thuyết cổ điển nhất và là cơ sở cho đa số các loại thuốc điều trị hiện nay
Acetylcholin (ACh) đóng vai trò quan trọng trong hệ thống thần kinh ngoại biên và trung ương Enzym cholin acetyltransferase (ChAT) tổng hợp ACh từ acetyl-CoA và cholin trong tế bào chất, trong khi chất vận chuyển acetylcholin (VAChT) hấp thu dẫn truyền thần kinh vào túi synap Sau khi khử cực, ACh được xuất bào ở khe hở tiếp hợp, liên kết với các thụ thể muscarinic và nicotinic ACh tại khe hở tiếp hợp bị thủy phân bởi enzym acetylcholinesterase (AChE), tạo thành acetat và cholin, sau đó được tái hấp thu vào hệ thần kinh tiền synap nhờ chất vận chuyển ái lực cao với cholin (CHT1).
Rối loạn chức năng và thoái hóa tế bào lan tỏa gây ra nhiều khiếm khuyết trong dẫn truyền thần kinh, với các bất thường trên hệ cholinergic là nổi bật nhất Sự suy giảm hoạt động của hệ cholinergic có mối tương quan thuận với mức độ nghiêm trọng của bệnh Alzheimer Ở giai đoạn muộn của bệnh, số lượng tế bào thần kinh cholinergic và thụ thể nicotinic trong vùng hải mã và vỏ não giảm đáng kể.
Thụ thể nicotinic trước synap đóng vai trò quan trọng trong việc kiểm soát giải phóng acetylcholin và các chất dẫn truyền thần kinh thiết yếu cho bộ nhớ và tâm trạng như glutamat, serotonin và norepinephrin Ngược lại, việc kích thích quá mức các thụ thể glutamat, đặc biệt là thụ thể NMDA, có liên quan đến sự chết tế bào thần kinh cholinergic ở não trước Sử dụng thuốc đối kháng chọn lọc tại vị trí thụ thể NMDA có thể ngăn chặn sự chết tế bào thần kinh cholinergic do bệnh thần kinh mạn tính gây ra.
Sự suy giảm chức năng hệ cholinergic trong bệnh Alzheimer không chỉ gây ra các triệu chứng chính mà còn dẫn đến những hậu quả nghiêm trọng khác, như sự tích tụ của các mảng amyloid lớn, gây ra viêm thần kinh diện rộng.
Giả thuyết cholinergic cho rằng sự giảm tổng hợp acetylcholin là nguyên nhân gây suy giảm nhận thức trong bệnh Alzheimer, và việc tăng cường chức năng hệ cholinergic có thể cải thiện triệu chứng mất trí nhớ Các phương pháp điều trị liên quan đến giả thuyết này bao gồm ức chế enzym AChE, kích thích enzym ChAT, tăng sinh tế bào cholinergic, và chủ vận receptor cholinergic.
Giả thuyết về bệnh Alzheimer liên quan đến sự lắng đọng mảng β-amyloid (Aβ) trong não, trong đó β-amyloid peptid (βAP) là sản phẩm tự nhiên của quá trình chuyển hóa với 36-43 acid amin Sự mất cân bằng giữa sản xuất và thanh thải các peptid dẫn đến sự tích lũy độc hại cho tế bào Các mảng amyloid chủ yếu bao gồm peptid Aβ40 và Aβ42, được hình thành từ protein tiền chất amyloid (APP) sau khi bị phân tách bởi enzym β-secretase và γ-secretase Aβ42, mặc dù ít phổ biến hơn, lại khó hòa tan và có khả năng trùng hợp cao hơn, dễ hình thành các cụm tích tụ bên ngoài nơ-ron gọi là mảng lão hóa, trong khi Aβ40 là thành phần chính trong bệnh lý mạch máu amyloid não (CAA).
Một loại vaccin thử nghiệm đã cho thấy khả năng loại bỏ các mảng amyloid trong các thử nghiệm đầu tiên ở người, nhưng không có ảnh hưởng đáng kể đến chứng mất trí nhớ Điều này dẫn đến giả thuyết rằng các Aβ oligomer không tạo mảng, hay còn gọi là phối tử khuếch tán có nguồn gốc amyloid (ADDLs), có thể là dạng gây bệnh chủ yếu của Aβ Các ADDLs này liên kết với thụ thể bề mặt trên tế bào thần kinh, làm thay đổi cấu trúc của khớp thần kinh và gián đoạn tiếp xúc thần kinh.
Protein Tau (Tauopathy) đóng vai trò quan trọng trong việc ổn định cấu trúc vi ống, giúp duy trì chức năng nâng đỡ và vận chuyển của tế bào Trong bệnh Alzheimer, Tau bị thay đổi hóa học, dẫn đến tình trạng phosphoryl hóa quá mức Giả thuyết Tau cho rằng các bất thường trong protein Tau khởi đầu quá trình bệnh lý, khi Tau phosphoryl hóa bất thường kết hợp với các sợi Tau khác để hình thành đám rối sợi thần kinh (NFTs) Sự hình thành này gây tan rã vi ống, làm suy yếu hệ thống vận chuyển của tế bào thần kinh và dẫn đến chết tế bào.
NFTs thường xuất hiện trong các tế bào vùng hải mã và vỏ não của bệnh nhân Alzheimer, với mật độ của chúng tương quan với mức độ nghiêm trọng của bệnh mất trí nhớ.
Khoảng 0,1% trường hợp bệnh Alzheimer là do di truyền từ các gen đột biến như APP, PS1, PS2, Tau, APOE, β- và γ-secretase, thường khởi phát trước 65 tuổi, được gọi là bệnh Alzheimer khởi phát sớm Phần lớn các trường hợp còn lại không có biểu hiện di truyền trội nhiễm sắc thể và được xem là bệnh Alzheimer ngẫu nhiên, trong đó các yếu tố môi trường và di truyền có thể là yếu tố rủi ro.
1.1.2.5 Yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu
Bệnh trầm cảm
Theo Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), rối loạn tâm thần phổ biến chủ yếu bao gồm hai loại chẩn đoán: rối loạn trầm cảm và rối loạn lo âu Trong số đó, rối loạn trầm cảm được xem là một trong những bệnh tâm thần phổ biến nhất.
Theo Hiệp hội Tâm thần Hoa Kỳ (DSM-5), rối loạn trầm cảm được xác định bởi sự giảm khí sắc và/hoặc giảm hứng thú với các hoạt động hàng ngày (anhedonia), kèm theo ít nhất 4 triệu chứng khác Các triệu chứng này có thể bao gồm rối loạn giấc ngủ (mất ngủ hoặc ngủ li bì), thay đổi trong cảm giác ngon miệng hoặc cân nặng, mệt mỏi, sự kích thích hoặc suy giảm tâm thần vận động, cảm giác bất lực hoặc tội lỗi không rõ nguyên nhân, giảm khả năng tập trung hoặc thiếu quyết đoán, và suy nghĩ về cái chết hoặc ý định tự tử.
Trầm cảm có thể ảnh hưởng đến mọi người ở mọi lứa tuổi và tầng lớp, nhưng nguy cơ gia tăng do nghèo đói, thất nghiệp, sự kiện đau buồn như mất mát người thân, tan vỡ mối quan hệ, bệnh tật, cũng như việc sử dụng rượu và ma túy Đại dịch COVID-19 năm 2020 đã làm trầm trọng thêm tình trạng sức khỏe tâm thần, với hơn một nửa số người được khảo sát trải qua ít nhất một triệu chứng rõ nét của trầm cảm.
1.2.2 Nguyên nhân và cơ chế bệnh sinh
Các nghiên cứu gần đây chỉ ra rằng bệnh trầm cảm xuất phát từ những thay đổi trong mạng tín hiệu phức tạp, bao gồm hệ dẫn truyền thần kinh monoamin, hệ nội tiết, các yếu tố thần kinh, phát sinh thần kinh, và biến đổi ngoại di truyền do môi trường Yếu tố di truyền cũng đóng vai trò quan trọng trong cơ chế bệnh sinh của trầm cảm, trong khi sự tương tác giữa các gen nhạy cảm với stress là nguyên nhân chính dẫn đến rối loạn này.
Bệnh trầm cảm có cơ chế sinh học thần kinh phức tạp và không đồng nhất, đồng thời có mối liên hệ chặt chẽ với các rối loạn tâm thần khác Việc sử dụng mô ngoại biên như máu từ bệnh nhân để nghiên cứu bệnh trầm cảm không mang lại nhiều giá trị.
Mặc dù đã có nhiều nghiên cứu về chứng trầm cảm, nhưng vẫn chưa có một cơ chế thống nhất để giải thích quá trình sinh bệnh học của nó Hiện nay, hai giả thuyết phổ biến nhất về nguyên nhân gây trầm cảm là giả thuyết thiếu hụt monoamin và giả thuyết dinh dưỡng thần kinh, cung cấp những hiểu biết sâu sắc về cơ chế sinh bệnh học của chứng trầm cảm.
Giả thuyết monoamin, được hình thành từ năm 1960, cho rằng sự thiếu hụt chức năng của norepinephrin (NE), serotonin (5-HT) và/hoặc dopamin (DA) ở vỏ não và hệ viền dẫn đến triệu chứng trầm cảm, trong khi hưng cảm lại do sự dư thừa monoamin Bằng chứng cho giả thuyết này đến từ quan sát lâm sàng và thí nghiệm trên động vật, như bệnh nhân điều trị bằng reserpin gây cạn kiệt NE, 5-HT và DA, dẫn đến triệu chứng giống trầm cảm Ngược lại, iproniazid làm tăng nồng độ NE và 5-HT, gây ra hưng phấn và hành vi hiếu động Hầu hết các thuốc điều trị trầm cảm hiện nay tác động lên hệ monoaminergic, làm tăng nồng độ 5-HT, NE và DA tại khe synap, cho thấy giả thuyết monoamin vẫn có giá trị và phù hợp với thực tế lâm sàng.
1.2.2.2 Giả thuyết dinh dưỡng thần kinh
Giả thuyết dinh dưỡng thần kinh cho rằng trầm cảm do sự suy giảm dinh dưỡng thần kinh gây ra, dẫn đến teo tế bào thần kinh, giảm sinh tế bào thần kinh hồi hải mã và mất tế bào đệm Các yếu tố dinh dưỡng thần kinh như BDNF, NGF, NT-3 và NT-4/5 đóng vai trò quan trọng trong việc điều hòa hoạt động thần kinh, bao gồm quá trình biệt hóa và phát triển của synap Thụ thể TrkB, một thụ thể của BDNF, cho thấy sự suy giảm nồng độ BDNF và mức độ biểu hiện TrkB ở bệnh nhân trầm cảm Giả thuyết này cũng giải thích hiện tượng suy giảm thể tích hồi hải mã và các thay đổi cấu trúc não khác ở bệnh nhân trầm cảm.
1.2.2.3 Một số giả thuyết khác
Trầm cảm có thể liên quan đến các bất thường nội tiết, bao gồm thay đổi mức cortisol, quá mẫn yếu tố giải phóng corticotrophin (CRF), hormon tăng trưởng (GH) và hormon tuyến giáp, đặc biệt là rối loạn chức năng trục HPA Nghiên cứu cho thấy có sự liên quan giữa chức năng tuyến giáp và trầm cảm, với việc sử dụng triiodothyronin (T3) là liệu pháp bổ trợ hiệu quả Ngoài ra, steroid sinh dục cũng đóng vai trò trong cơ chế bệnh sinh trầm cảm, với sự thiếu hụt estrogen ở phụ nữ sau sinh và mãn kinh, cũng như thiếu hụt testosteron ở nam giới, có liên quan đến các triệu chứng trầm cảm.
Yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu (VEGF) có ảnh hưởng lớn đến tế bào thần kinh và ngày càng có nhiều bằng chứng cho thấy sự hình thành tế bào thần kinh mới ở vùng hồi hải mã có liên quan đến sự phát triển của rối loạn trầm cảm Nghiên cứu hiện đang tập trung vào việc xác định các tín hiệu phân tử, bao gồm các yếu tố thần kinh và các con đường tín hiệu có tác dụng chống trầm cảm, nhằm hiểu rõ hơn về vai trò của chúng trong việc điều chỉnh thần kinh tại hồi hải mã trưởng thành.
Trầm cảm có thể liên quan đến nhiều cơ chế bệnh sinh khác nhau, bao gồm thay đổi trong dẫn truyền thần kinh qua hệ glutamatergic, giảm hoạt động của hệ GABAergic, và giảm tổng hợp các steroid thần kinh Ngoài ra, chức năng opioid nội sinh cũng bị suy giảm, cùng với sự mất cân bằng giữa monoamin và acetylcholin Tuy nhiên, do sự giao thoa phức tạp giữa các hệ thống não bộ, những giả thuyết này có thể chỉ phản ánh những thay đổi thứ phát của trầm cảm mà chưa xác định được nguyên nhân gốc rễ của rối loạn này.
Hệ monoaminergic đóng vai trò quan trọng trong sinh lý bệnh trầm cảm, nhưng cần xem xét sự tương tác với các hệ thống khác và tính phức tạp trong chức năng của hệ thần kinh trung ương Mặc dù đã có nhiều tiến bộ trong nghiên cứu, vẫn còn nhiều vấn đề chưa được giải quyết trong việc hiểu và điều trị trầm cảm nặng cũng như trầm cảm kháng điều trị.
Các cơ chế phát triển thuốc điều trị trầm cảm chủ yếu dựa trên giả thuyết monoamin, với việc giảm nồng độ các chất dẫn truyền thần kinh monoamin đóng vai trò quan trọng Các thuốc chống trầm cảm tập trung vào việc tăng cường dẫn truyền serotonergic và/hoặc noradrenergic Kể từ khi imipramin được giới thiệu vào những năm 1950, số lượng và sự đa dạng của thuốc chống trầm cảm đã tăng lên đáng kể, cùng với nhiều cơ chế dược lý khác nhau liên quan đến tác dụng của chúng.
Bảng 1.1 Các thuốc chống trầm cảm hiện có STT Nhóm thuốc Cơ chế tác dụng Một số thuốc điển hình
Tác dụng không mong muốn
1 Chống trầm cảm ba vòng
(Tricyclic antidepressants, TCAs) tăng norepinephrin nhanh và ở một mức độ nào đó cả serotonin (5-HT) bằng việc chặn tái hấp thu ở khe synap amitriptylin, butriptylin, clomipramin
- nhiều tác dụng phụ do sự ức chế muscarinic, kháng histamin, kích thích α1- adrenergic và kháng cholinergic mạnh
2 Ức chế MAO (Monoamine oxydase inhibitors, MAOIs) ức chế sự phân huỷ amin oxy hóa của
(norepinephrin, dopamin, 5-HT) và các phenylethylamin khác
- không chọn lọc cả MAO-A và -B: phenelzin, isocarboxazid, tranylcypromin, moclobemid
- cơn tăng huyết áp cấp
- lo âu, buồn nôn, chóng mặt, mất ngủ, phù phổi và tăng cân
3 Ức chế chọn lọc thu hồi serotonin (Selective serotonin reuptake inhibitors,
- ngăn ngừa tái hấp thu 5-HT trước synap, làm tăng 5-
HT để kích thích thụ thể 5-HT hậu synap citalopram, escitalopram, fluoxetin, fluvoxamin, paroxetin, sertralin, và
- kích động, chán nản và lo lắng nhiều hơn trong vòng một tuần đầu điều trị
STT Nhóm thuốc Cơ chế tác dụng Một số thuốc điển hình
Tác dụng không mong muốn
SSRIs) - có chọn lọc với hệ 5-HT nhưng không đặc hiệu với các thụ thể 5-HT khác nhau vilazodon - rối loạn chức năng tình dục
- tăng cân hoặc chán ăn, tiêu chảy
4 Điều hòa serotonin - chẹn 5-HT2 (5-HT2 blockers) chẹn thụ thể 5-HT2, ức chế tái hấp thu
5-HT và norepinephrin trazodon mirtazapin
- gây giảm huyết áp tư thế đứng
- gây ngủ và tăng cân
5 Ức chế tái hấp thu kép
(Serotonine and noradrenaline reuptake inhibitors- SNRIs) ức chế tái hấp thu cả 5-HT và norepinephrin, cũng như thuốc chống trầm cảm ba vòng desvenlafaxin, duloxetin, levomilnacipran, venlafaxin, vortioxetin
- độc tính tương đương với các SSRIs
- buồn nôn phổ biến nhất trong 2 tuần đầu
6 Hoạt động đa thụ thể (Atypical antidepressants) tác động đến chức năng catecholaminergic, dopaminergic và noradrenergic, không ảnh hưởng đến hệ serotonergic mirtazepin, nefazodon, bupropion, trazodon
- có thể gây co giật
7 Thuốc chống trầm cảm melatonin chủ vận melatonin (MT1/MT2) và đối kháng thụ thể 5-
HT2C agomelatin ít có tác dụng phụ có thể gây đau đầu, buồn nôn và tiêu chảy, tăng enzym gan
Khi xem xét các loại thuốc chống trầm cảm, hệ noradrenergic và serotonergic đóng vai trò quan trọng trong sinh lý bệnh và điều trị trầm cảm, vì tất cả các thuốc đều tương tác với một hoặc cả hai hệ này, dẫn đến tăng dẫn truyền thần kinh 5-HT Tuy nhiên, chưa có nhóm thuốc nào hiệu quả với tất cả bệnh nhân, có khả năng dung nạp tốt và ít tác dụng không mong muốn Hơn nữa, hiện tượng đề kháng đối với thuốc điều trị trầm cảm và thời gian khởi phát tác dụng thường chậm cũng là những thách thức lớn Nhiều tài liệu đã chỉ ra rằng liệu pháp bổ sung và thay thế (CAM) có tầm quan trọng trong điều trị các bệnh tâm thần.
Thuốc thảo dược, đặc biệt là Panax ginseng (nhân sâm, họ Araliaceae), là liệu pháp phổ biến nhất và thu hút nhiều sự quan tâm từ các nhà khoa học.
Paeonia lactiflora Pall (hoa mẫu đơn, họ Ranunculaceae) [98]; Albizia julibrissin (hoa hợp hoan, họ Fabaceae) [99]; Butea superba (huyết đằng lông, họ Fabaceae) [100]…
Mối liên quan giữa sa sút trí tuệ và trầm cảm
Nhiều nghiên cứu đã chỉ ra rằng có mối liên hệ phức tạp giữa sa sút trí tuệ và trầm cảm, mặc dù việc xác định rõ ràng mối quan hệ này vẫn còn khó khăn.
Trầm cảm là một rối loạn phổ biến ở người lớn tuổi mắc sa sút trí tuệ, với tỷ lệ từ 30% đến 50% trường hợp có triệu chứng trầm cảm Mặc dù trầm cảm và sa sút trí tuệ có những biểu hiện lâm sàng khác nhau, chúng vẫn chia sẻ một số triệu chứng như suy giảm chức năng xã hội, thiếu chú ý và suy giảm trí nhớ làm việc Nghiên cứu cũng cho thấy trầm cảm không chỉ làm tăng tốc độ suy giảm nhận thức mà còn là yếu tố nguy cơ độc lập dẫn đến chứng sa sút trí tuệ.
Mối liên hệ giữa trầm cảm và sa sút trí tuệ được thể hiện qua các cơ chế sinh học sau: 1) bệnh mạch máu; 2) triệu chứng trầm cảm kích hoạt trục HPA, dẫn đến tăng glucocorticoid, giảm thể tích hồi hải mã và suy giảm nhận thức; 3) stress từ trầm cảm làm tăng glucocorticoid, sản xuất β-amyloid và protein tau, cùng với sự tích lũy β-amyloid do liên kết với hệ serotonergic; 4) phản ứng viêm với sự gia tăng cytokine gây suy giảm điều hòa chống viêm, tăng chất gây viêm trong thần kinh trung ương, giảm tính dẻo khớp thần kinh và hình thành thần kinh hồi hải mã, dẫn đến suy giảm nhận thức và trí nhớ; 5) giảm tín hiệu BDNF ở hồi hải mã, được ghi nhận ở bệnh nhân trầm cảm và Alzheimer Hồi hải mã đóng vai trò quan trọng trong cả hai bệnh lý này, với khoảng 700 tế bào thần kinh mới được tạo ra mỗi ngày, ảnh hưởng đến trí nhớ, chức năng nhận thức và điều hòa tâm trạng.
Hình 1.1 Các giai đoạn hình thành thần kinh hồi hải mã ở người trưởng thành và phân tích hóa mô miễn dịch trong trầm cảm và bệnh Alzheimer
Thế hệ tế bào thần kinh mới sinh trong vùng dưới hạt của hồi răng (DG) bao gồm các tế bào gốc thần kinh giống tế bào gốc hướng tâm loại I (RGL-NSCs) RGL-NSCs phân chia không thường xuyên và nhanh chóng phát triển thành tế bào tiền thân thần kinh loại II a/b Tiếp theo, chúng tiếp tục sinh sôi và phát triển thành các nguyên bào thần kinh loại III Khi rời khỏi chu trình tế bào, chúng hình thành các nơron chưa trưởng thành ở lớp hạt.
Trong giai đoạn đầu hậu kỳ, GABA dễ dàng kích thích sự trưởng thành của đuôi gai và tích hợp khớp thần kinh, cho đến khi đạt được sự trưởng thành đúng cách (màu xanh lá cây) và kết nối với mạng tín hiệu xung quanh (màu vàng).
Các chỉ dấu tế bào thần kinh trong các giai đoạn phát triển bao gồm Nestin, protein homeobox Prospero 1 (PROX1), protein có tính acid dạng sợi thần kinh đệm (GFAP), musashi-1 (Msi1) và yếu tố phiên mã.
The article discusses key markers and proteins involved in neural development and function, including SRY-box 2 (SOX2), NeuroD, and calretinin, as well as calbindin (CB) It highlights the significance of polysialic acid-neural cell adhesion molecule (PSA-NCAM) and neuronal nuclear antigen (NeuN) in neuronal identity Additionally, it mentions Ki67 and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) as indicators of cell proliferation, alongside βIII-tubulin and microtubule-associated proteins MAP2a/b, which are crucial for neuronal structure and function.
Trầm cảm gây giảm số lượng tế bào dương tính với Nestin và NeuN, biểu hiện cho tế bào gốc thần kinh và tế bào thần kinh trưởng thành, đồng thời giảm thể tích vùng hồi răng (DG), đặc biệt ở vùng trước và giữa DG Trong khi đó, bệnh Alzheimer có liên quan đến sự suy giảm tế bào dương tính với doublecortin (DCX), đại diện cho tiền nhân hoặc nguyên bào thần kinh, với số lượng nguyên bào thần kinh dương tính với DCX giảm khoảng 60-70% so với nhóm đối chứng trong giai đoạn sớm của bệnh (Braak giai đoạn I – II) Khi bệnh Alzheimer tiến triển, sự giảm sút này tiếp tục diễn ra.
Trong giai đoạn IV – VI, tỷ lệ DCX giảm xuống còn khoảng 30–40% Ở tất cả các tế bào dương tính với DCX, sự đồng biểu hiện của PSA-NCAM, PROX1, NeuN, βIII-tubulin và calbindin (CB) đều giảm, điều này cho thấy sự hình thành tế bào thần kinh bị suy giảm.
Nghiên cứu cho thấy điều trị trầm cảm bằng SSRI liên quan đến việc tăng số lượng tế bào dương tính với DCX ở bệnh nhân sa sút trí tuệ thể Lewy, điều này cho thấy hoạt động thần kinh gia tăng và ít suy giảm nhận thức hơn Mức độ DCX cao hơn tương quan với điểm nhận thức tốt hơn, ủng hộ giả thuyết rằng thuốc chống trầm cảm không chỉ cải thiện tâm trạng mà còn ngăn ngừa thoái hóa thần kinh và cải thiện trí nhớ.
Một chiến lược hiệu quả để cải thiện suy giảm nhận thức là kết hợp điều trị với các biện pháp chống trầm cảm Nghiên cứu đã chỉ ra rằng việc bổ sung chất ức chế cholinesterase sau khi điều trị bằng thuốc chống trầm cảm có thể cải thiện đáng kể trí nhớ ở bệnh nhân cao tuổi bị trầm cảm và suy giảm nhận thức Điều này mở ra hướng điều trị mới trên lâm sàng, sử dụng những thuốc và dược liệu có khả năng cải thiện trí nhớ và chống trầm cảm đồng thời.
Hương nhu tía
1.4.1 Tên khoa học và vùng phân bố
Hương nhu tía, hay còn gọi là é tía, é đỏ, é rừng (Ocimum sanctum L hoặc Ocimum tenuiflorum L.), là loài cây nổi bật trong chi Ocimum với nhiều tên gọi nước ngoài như Monk’s basil, sacred basil và holy basil Đây là cây cổ nhiệt đới có nguồn gốc từ Châu Á, được trồng rộng rãi ở Ấn Độ, Trung Quốc, Lào, Thái Lan, Malaysia, một số nước Ả Rập và Australia, cũng như ở một số nước Tây Phi để làm thuốc và gia vị Tại Việt Nam, hương nhu tía phân bố từ Hòa Bình, Bắc Giang, Hà Nội, Ninh Bình đến Khánh Hòa, Ninh Thuận, thành phố Hồ Chí Minh và An Giang, được trồng ở nhiều địa phương khác nhau.
Hương nhu tía là cây nhỏ cao từ 0,5 đến 1m, với thân thẳng và phủ lông trắng xanh hoặc tía, mang mùi thơm đặc trưng của tinh dầu Loài cây này có thể sống hàng năm hoặc nhiều năm Lá của hương nhu tía có hình mác hoặc thuôn dài, mép lá răng cưa, với hai mặt màu tím và lông mềm, mọc đối chéo chữ thập trên cuống dài.
Hình 1.2 Hương nhu tía (Ocimum sanctum L.) trồng ở Trung tâm nghiên cứu trồng và chế biến cây thuốc Hà Nội, Viện dược liệu 1.4.3 Bộ phận dùng
Hương nhu tía là một loại cây dược liệu quý, với tất cả các bộ phận như thân, cành, hoa và lá đều có thể được sử dụng Thời điểm thu hoạch tốt nhất là từ tháng 5 đến tháng 10 khi cây đang ra hoa Sau khi thu hái, các bộ phận của cây được rửa sạch, cắt thành đoạn khoảng 3 – 4cm và phơi khô dưới bóng râm để bảo quản tốt nhất.
Hương nhu tía, với các đặc tính dinh dưỡng và dược lý nổi bật, được sử dụng theo cách truyền thống nhờ vào sự tương tác hiệp đồng của nhiều hoạt chất khác nhau Tuy nhiên, do sự phức tạp trong thành phần hóa học, đặc điểm thực vật và sinh hóa, đến nay, khoa học hiện đại vẫn chưa thể tiêu chuẩn hóa hương nhu tía.
Tinh dầu dễ bay hơi, chủ yếu tập trung ở lá, là thành phần quý giá trong cây hương nhu tía Phần trên mặt đất của cây chứa tinh dầu với hàm lượng từ 1,08% đến 1,62% khi cây bắt đầu ra hoa Theo Dược điển Việt Nam V, hàm lượng tinh dầu tối thiểu phải đạt 0,5% tính theo dược liệu khô tuyệt đối.
The essential oil composition of Vietnamese purple basil primarily consists of phenols, terpenes, and aldehydes, with eugenol and euginal (also known as eugenic acid) making up 71% of the total Additionally, the oil contains approximately 20% methyleugenol, along with other compounds such as carvacrol, linalool, limatrol, caryophyllene, methyl carvicol, α-pinene, sabinene, β-pinene, myrcene, camphor, borneol, citral, and terpinen.
The following phenolic compounds have been identified for their antioxidant and anti-inflammatory activities: rosmarinic acid, apigenin, luteolin, apigenin-7-glucuronide, luteolin-7-glucuronide, cirsimaritin, isothymonin, gallic acid, methyl ester of gallic acid, ethyl ester of gallic acid, and protocatechuic acid.
Hương nhu tía là một loại dược liệu nổi bật giúp tăng cường sức chịu đựng về thể chất mà không chứa caffein hay các chất kích thích khác Thân và lá của hương nhu tía giàu saponin, flavonoid, triterpenoids, alcaloid, glycosid và tannin, mang lại nhiều lợi ích cho sức khỏe.
Hai flavonoid tan trong nước, orientin và vicenin, đã được chứng minh có khả năng bảo vệ tế bào lympho máu người khỏi tổn thương nhiễm sắc thể do bức xạ.
Acid ursolic và acid oleanolic là hai thành phần chính trong hương nhu tía, thuộc nhóm saponin triterpenoid, với hàm lượng cao Theo tiêu chuẩn USP 36, lá hương nhu tía phải chứa ít nhất 0,5% triterpen, bao gồm acid ursolic và acid oleanolic, trong khi các sản phẩm từ hương nhu tía cần đạt tối thiểu 2% triterpen.
Năm 2008, Silva và cộng sự đã sử dụng phương pháp phân tích sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) để định lượng acid ursolic trong lá của 8 loài thuộc chi Ocimum L., bao gồm O americanum, O basilicum, O basilicum var purpurascens, O basilicum var minimum, O grastissimum, O micranthum, O selloi và O sanctum Kết quả cho thấy O sanctum có hàm lượng acid ursolic cao nhất, đạt tới 2,02%.
1.4.5 Công dụng 1.4.5.1 Y học cổ truyền thế giới
Hương nhu tía, một loại thảo dược đã được sử dụng trong y học cổ truyền Ấn Độ hàng nghìn năm, nổi bật với nhiều đặc tính chữa bệnh Việc sử dụng hương nhu tía hàng ngày không chỉ giúp ngăn ngừa bệnh tật mà còn tăng cường sức khỏe và kéo dài tuổi thọ Ngoài ra, loại thảo dược này còn được cho là cải thiện nước da, mang lại giọng nói ngọt ngào, bồi dưỡng vẻ đẹp và trí thông minh, đồng thời hỗ trợ cân bằng các quá trình trong cơ thể Hương nhu tía cũng hữu ích trong việc thích nghi với stress, tăng sức chịu đựng và duy trì cảm xúc bình tĩnh Truyền thống sử dụng hương nhu tía bao gồm nhiều hình thức như trà thảo dược, lá phơi khô hoặc tươi.
Dịch chiết hương nhu tía được sử dụng trong các phương thuốc Ayurvedic để điều trị cảm lạnh, đau đầu, rối loạn dạ dày, viêm, bệnh tim, ngộ độc và sốt rét Trong nhiều thế kỷ, lá khô của hương nhu tía đã được trộn với ngũ cốc để xua đuổi côn trùng Nước hãm từ lá hương nhu tía giúp chữa đau dạ dày ở trẻ em và sốt rét Dịch ép từ lá có tác dụng chữa nôn mửa và giun móc nhờ chứa thymol, kết hợp với mật ong gừng và dịch ép tỏi để làm thuốc lợi đờm, chữa viêm phế quản và ho ở trẻ em Ngoài ra, dịch ép từ lá còn có khả năng chữa rắn độc cắn Tại Myanma, nước hãm lá hương nhu tía được dùng để điều trị đầy hơi, tiêu chảy ở trẻ em, viêm đường hô hấp và rối loạn kinh nguyệt, trong khi hạt của cây này hỗ trợ điều trị bệnh thận.
1.4.5.2 Y học cổ truyền Việt Nam Tính vị, công năng
Hương nhu tía có vị cay và mùi thơm đặc trưng, tính ấm, tác động vào hai kinh phế và vị Loại thảo dược này có tác dụng phát hãn, giúp làm ra mồ hôi, thanh nhiệt, tán thấp, hành thủy và giảm đau hiệu quả.
Hương nhu tía là một loại thảo dược quý, được sử dụng trong y học dân gian để hạ sốt, chữa cảm, đặc biệt là cảm nắng và say nắng, cũng như điều trị nhức đầu, đau bụng, tiêu chảy, nôn mửa và phù thũng Liều dùng khuyến nghị là từ 6-12g mỗi ngày, có thể chế biến dưới dạng thuốc sắc hoặc thuốc hãm Ngoài ra, eugenol chiết xuất từ hương nhu tía còn được ứng dụng trong nha khoa và là nguyên liệu quan trọng để tổng hợp vanillin.
Bài thuốc có hương nhu [135]
NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Nguyên liệu, phương tiện nghiên cứu, địa điểm nghiên cứu
Dược liệu nghiên cứu được thu hái từ phần trên mặt đất của cây Hương nhu tía (Ocimum sanctum L.) tại Hà Nội vào tháng 6/2016, trong mùa hoa quả Tên khoa học của cây đã được xác định bởi Khoa Tài nguyên Dược liệu, Viện Dược liệu Mẫu dược liệu đã được sấy khô và kiểm tra độ ẩm, hiện lưu giữ tại Khoa Tài nguyên Dược liệu với số tiêu bản NIMM-16474B.
Chuột nhắt trắng Swiss albino có độ tuổi 7-8 tuần với trọng lượng trung bình từ 28-30g, và 5-6 tuần với trọng lượng trung bình 23-25g, được nuôi trong các mô hình nghiên cứu khác nhau như loại bỏ thùy khứu giác và mô hình gây stress nhẹ trường diễn không dự đoán trước Giống chuột này là đực, khỏe mạnh và được cung cấp bởi Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương.
Chuột được làm quen với môi trường nuôi dưỡng ít nhất 1 tuần trước khi tiến hành thí nghiệm, trong điều kiện nhiệt độ ổn định 25 ± 1 o C, độ ẩm từ 65-75%, cùng với độ thông khí và ánh sáng phù hợp Chu kỳ sáng tối được duy trì 12 giờ (sáng từ 7:00 đến 19:00), chuột được nuôi bằng thức ăn tiêu chuẩn từ Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương, với thức ăn và nước uống được cung cấp tự do theo nhu cầu Các thử nghiệm hành vi được thực hiện trong khoảng thời gian từ 9:00 đến 18:00.
Tất cả các thí nghiệm được thực hiện theo Hướng dẫn Chăm sóc và Sử dụng Động vật (NIH xuất bản số 85–23, sửa đổi năm 1985) và đã được Ủy ban Chăm sóc và Sử dụng Động vật của Viện Dược liệu phê duyệt.
2.1.3 Hóa chất, thuốc thử Một số hóa chất, thuốc thử chính sử dụng trong luận án được trình bày ở Bảng 2.1
Bảng 2.1 Một số hóa chất, thuốc thử chính sử dụng trong luận án
STT Hóa chất Nguồn gốc
1 Imipramin Sigma St.louis, MO, USA
2 Donepezil Tokyo C Industry Co., Ltd, Japan
3 Acid ursolic (độ tinh khiết > 98%) Chengdu Biopurify
4 Acid oleanolic (độ tinh khiết > 98%) Chengdu Biopurify
5 α-methyl-p-tyrosin (AMPT) Sigma St.louis, MO, USA
6 ρ-chlorophenylalanin (PCPA) Sigma St.louis, MO, USA
7 dimethyl sulfoxid (DMSO) Wako, Nhật Bản
8 acid 5,5´-dithiobis-2-nitrobenzoic Sigma, St Louis, MO, USA
9 acetylthiocholin iodid Nacalai Tesque, Kyoto, Nhật Bản
10 Natri pentobarbital Wako, Nhật Bản
11 Dung dịch hoạt hóa kháng nguyên (Target retrieval solution)
12 Kháng thể anti- DCX rabbit Abcam, Anh
13 Kháng thể gắn HRP anti-rabbit IgG Cell Signaling Technology, Mỹ
14 Kháng thể anti-ChAT goat Millipore, CA, USA
15 Kháng thể bovin anti-goat IgG Santa Cruz Bio Inc., Dallas, TX
16 Kháng thể anti-VEGF rabbit Santa Cruz Bio Inc., Dallas, TX
17 Kháng thể anti β-actin rabbit Thermo scientific
18 Target Retrieval Solution Dako, Japan
19 Sepazol Nacalai Tesque, Nhật Bản
21 Triton-X-100 Sigma, St Louis, MO, USA
22 Các dung môi chiết xuất đạt tiêu chuẩn công nghiệp
23 Các dung môi, hệ đệm đạt tiêu chuẩn phân tích
24 Các hóa chất, dung môi khác đạt tiêu chuẩn dược dụng
2.1.4 Trang thiết bị, dụng cụ Một số trang thiết bị, dụng cụ chính sử dụng trong luận án được trình bày ở Bảng 2.2
Bảng 2.2 Một số trang thiết bị, dụng cụ chính sử dụng trong luận án
STT Thiết bị Nguồn gốc
1 Hệ thống định vị hộp sọ chuột Muromachi, Kilai Co., Ltd,
2 Vật thể O1, O2, O3 Tự thiết kế theo cấu trúc của hãng Ugo Basile (Ý)
3 Mê lộ chữ Y cải tiến
4 Mệ lộ nước Morris Tự thiết kế
5 Bể nước hình trụ Tự thiết kế
6 Thanh treo đuôi chuột Tự thiết kế
7 Môi trường mở Plexiglas gắn tế bào quang điện Digiscan
8 Phần mềm phân tích kết quả ANY MAZE, Stoeling, Mỹ
9 Phần mềm Image J phiên bản 1.41; NIH, MD,
10 Hệ thống StepOne Real-time PCR System® Applied BioSystem, USA
11 Tủ âm 80 o C Sanyo Nhật Bản
12 Máy đọc ELISA Thermo Labsystem Thermo, Đức
13 Kính hiển vi Olympus PROVIS® Olympus Inc., Tokyo, Nhật
14 Máy Amersham ™ ECL ™ Prime GE Healthcare,
15 Máy quang phổ UV-VIS HumaReader HS; Human
16 Bộ điện di omniPAGE Cleaver Scientific – Anh
17 Bộ chuyển màng Cleaver Scientific – Anh
18 Máy li tâm lạnh Satorius
19 Thiết bị nghiền đồng thể IKA
20 Máy siêu âm Power sonic 405 Human lab – Hàn Quốc
STT Thiết bị Nguồn gốc
21 Cân phân tích Precisab XT 220A, độ chính xác 0,0001g
22 Máy cắt tiêu bản chuyên dụng Nhật Bản
23 Màng PVDF Bio-rad, CA, Hoa Kỳ
24 Giấy lọc Whatnam® qualitative filter paper, Grade 93, 580×580 cm
25 Các máy móc, dụng cụ khác: dụng cụ thủy tinh, micropipet tự động, lam kính, kim tiêm các cỡ…
- Khoa Dược lý – Sinh hóa, Viện Dược liệu.
Phương pháp nghiên cứu
2.2.1 Sơ đồ nghiên cứu tổng thể
Nghiên cứu được tiến hành theo sơ đồ tổng thể sau (Hình 2.1.):
2.2.2 Phương pháp chiết xuất dược liệu
Cao chiết cồn (OS) và các cao chiết phân đoạn như n-hexan (OS-H), ethyl acetat (OS-E), n-butanol (OS-B) được cung cấp bởi Khoa Hóa Thực vật, Viện Dược liệu để phục vụ cho thí nghiệm Quá trình chuẩn bị mẫu được thực hiện theo các bước cụ thể nhằm đảm bảo chất lượng và độ chính xác của kết quả nghiên cứu.
2.2.2.1 Cao chiết cồn toàn phần
Cao OS được chuẩn bị như sau: cắt nhỏ phần trên mặt đất của hương nhu tía
Bột dược liệu 356 g được làm khô ở 50°C và nghiền mịn, sau đó được chiết hồi lưu với ethanol 70% theo tỷ lệ 1:7 trong 2 giờ, lặp lại 3 lần Dịch chiết gộp được lọc và cô đặc ở 50°C trong chân không, thu được cao khô 58,74 g, được bảo quản ở 4°C cho đến khi sử dụng Hiệu suất chiết đạt 16,5% so với khối lượng dược liệu khô ban đầu.
2.2.2.2 Các cao chiết phân đoạn
Cao chiết phân đoạn hương nhu tía được chuẩn bị bằng cách chiết xuất 4kg phần trên mặt đất của cây hương nhu tía bằng ethanol 70% trong điều kiện hồi lưu trong hai giờ, thực hiện ba lần Dịch chiết sau đó được lọc và cô đặc ở nhiệt độ 50°C trong môi trường chân không, thu được 2 lít dịch chiết.
Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu tổng thể luan an tien si TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat
Sau khi lắc phân đoạn dịch chiết với các dung môi có độ phân cực tăng dần như n-hexan, ethyl acetat, n-butanol và H2O, dung môi được cất quay dưới áp suất giảm Kết quả thu được cao khô với khối lượng tương ứng là OS-H (67 g), OS-E (173 g) và OS-B.
(68 g), và pha nước còn lại (289 g) (Hình 2.2.)
Sau khi điều chế, các loại cao chiết tổng và cao phân đoạn (dạng cao khô, độ ẩm 3-5%) được chia nhỏ thành từng ống nghiệm riêng, được nút kín và bảo quản ở nhiệt độ 4°C cho đến khi sử dụng.
Hình 2.2 Sơ đồ chiết xuất dược liệu
2.2.3 Gây mô hình dược lý 2.2.3.1 Mô hình chuột nhắt bị loại bỏ thùy khứu giác (Olfactory bulbectomy - OBX)
Mô hình chuột nhắt bị loại bỏ thùy khứu giác (OBX) được sử dụng để nghiên cứu tác dụng cải thiện trí nhớ và chống trầm cảm của hương nhu tía, theo công bố của Xoan Le và cộng sự cũng như Mizuki và cộng sự.
Chuột được gây mê bằng sodium pentobarbital (60 mg/kg, i.p) và hộp sọ được cố định bằng dụng cụ chuyên dụng Sau đó, một đường cắt được thực hiện để bộc lộ phần hộp sọ bao bên ngoài của thùy khứu giác, từ đó sử dụng máy khoan để tạo một lỗ đường kính 1mm Tiếp theo, kim được dùng để phá hủy thùy khứu giác và xi lanh để hút toàn bộ phần não này ra khỏi hộp sọ Cầm máu cho chuột bằng bọt gelatin Sau khi hoàn tất các thử nghiệm hành vi, não chuột được thu thập để kiểm tra thương tổn ở vùng thùy khứu giác Những con chuột có thùy khứu giác bị lấy đi dưới 70% sẽ bị loại bỏ khi phân tích kết quả để tránh ảnh hưởng đến hành vi Đối chứng sinh lý (sham operation) được thực hiện tương tự nhưng không tiến hành loại bỏ thùy khứu giác.
Hình 2.3 Phẫu thuật loại bỏ thùy khứu giác (OBX)
Quy trình thực hiện thí nghiệm bao gồm các bước: cố định hộp sọ chuột, khoan và dùng kim để loại bỏ thùy khứu giác, hút sạch các mảnh não, và cầm máu bằng bọt gelatin Hình ảnh so sánh giữa não chuột sinh lý và não chuột sau khi đã loại bỏ thùy khứu giác cho thấy sự khác biệt rõ rệt trong cấu trúc.
2.2.3.2 Mô hình chuột nhắt bị gây stress nhẹ trường diễn không dự đoán trước (unpredictable chronic mild stress - UCMS)
Mô hình gây trầm cảm bằng stress nhẹ trường diễn không dự đoán trước (UCMS) được sử dụng để nghiên cứu tác dụng và cơ chế chống trầm cảm của cao phân đoạn hương nhu tía Nghiên cứu này dựa trên công bố của Daishu Mizuki và cộng sự với những cải tiến nhỏ Trong mô hình UCMS, chuột sẽ chịu đựng các tác nhân gây stress nhẹ không thể đoán trước, nhằm đánh giá hiệu quả của liệu pháp điều trị.
- Gò bó chuột vào lọ nhỏ trong 3 giờ, 1 lần/tuần (Hình 2.4.);
- Nghiêng chuồng 45° trong 24 giờ, 2 lần/tuần;
- Bình không có nước trong 24 giờ, 2 lần/tuần;
- Ướt chuồng (200ml nước/50g trấu) trong 24 giờ, 1 lần/tuần;
- Chiếu sáng liên tục 36 giờ, 2 lần/tuần;
- Tiếng chuột cống kêu 3 giờ liên tục (phát băng ghi âm sẵn có), 3 lần/tuần;
- Nhồi 2 chuồng với nhau trong 24 giờ, 2 lần/tuần;
- Cô lập chuột và bỏ thức ăn, nước uống trong 18 giờ, 1 lần/tuần (để chuẩn bị cho thử nghiệm tiêu thụ saccharose)
Hai tác nhân gây stress được áp dụng hàng ngày theo lịch trình bán ngẫu nhiên trong 6 tuần trước khi kiểm tra hành vi Trong suốt giai đoạn thử nghiệm hành vi, các tác nhân gây stress vẫn tiếp tục được áp dụng, ngoại trừ những ngày thử nghiệm để không ảnh hưởng đến kết quả Lô chứng sinh lý được nuôi trong điều kiện bình thường.
Gò bó chuột vào lọ nhỏ là một trong những tác nhân gây stress trong mô hình gây stress nhẹ trường diễn không dự đoán trước (UCMS) Các thử nghiệm hành vi được thực hiện để đánh giá ảnh hưởng của tình trạng stress này đến hành vi của chuột.
Trong nghiên cứu này, các thử nghiệm hành vi được phân tích bằng phần mềm ANY MAZE (ver 4.99, Stoelting Co., IL, Mỹ), một hệ thống theo dõi video trực tiếp hiện đại, sử dụng camera kết nối với máy tính để thực hiện phân tích hành vi tự động một cách tiên tiến nhất.
2.2.4.1 Thử nghiệm hành vi đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ
(1) Thử nghiệm nhận diện vật thể (object recognition test - ORT)
Thử nghiệm nhận diện vật thể (ORT) dựa vào sự tò mò tự nhiên của loài gặm nhấm, nhằm kiểm tra trí nhớ ngắn hạn không liên quan đến không gian, được thực hiện vào ngày thứ 17 của thí nghiệm, theo nghiên cứu của Xoan Le và cộng sự cũng như Yamada và cộng sự.
Hình 2.5 Thử nghiệm nhận diện vật thể
Hệ thống ORT bao gồm một hình hộp kích thước 35 x 35 x 50 cm với các vật thể O1, O2 giống hệt nhau và O3 có hình dạng và kích thước khác biệt Trước khi thử nghiệm ORT, chuột được đặt vào hộp để tự do khám phá không gian mở trong 10 phút Ngày thử nghiệm chia thành hai giai đoạn: luyện tập và kiểm tra Trong giai đoạn luyện tập, chuột được cho vào hộp hình trụ cùng với hai đồ vật O1 và O2 để khám phá trong 5 phút Giai đoạn kiểm tra diễn ra 30 phút sau khi luyện tập, trong đó O1 được giữ nguyên và O2 được thay bằng O3.
Chuột được phép tự do khám phá các đồ vật trong vòng 5 phút, tương tự như giai đoạn luyện tập Sau mỗi lần nhấc chuột ra, các đồ vật và không gian trong hộp sẽ được làm sạch bằng ethanol 70% để loại bỏ mọi mùi hương.
Thiết kế nghiên cứu
2.3.1 Nghiên cứu tác dụng và cơ chế tác dụng cải thiện trí nhớ của hương nhu tía 2.3.1.1 Nghiên cứu tác dụng cải thiện trí nhớ của cao chiết cồn hương nhu tía (OS) trên mô hình chuột nhắt loại bỏ thùy khứu giác (Olfactory bulbectomy - OBX)
Chuột nhắt trắng được nuôi ổn định ít nhất một tuần trong phòng chăn nuôi với điều kiện nghiên cứu, chia ngẫu nhiên thành 5 lô:
+ Lô chứng sinh lý: uống nước cất
+ Lô chứng bệnh lý (OBX): gây mô hình OBX không được điều trị, uống nước cất
Các lô thử bao gồm mô hình OBX, với cao toàn phần (OS) được phân tán đồng nhất trong nước cất Hai mức liều thử được sử dụng là 200 mg/kg (OS 200) và 400 mg/kg (OS 400).
+ Lô chứng dương (DNP): gây mô hình OBX, tiêm phúc mạc donepezil hòa tan trong NaCl 0,9% với liều 1,5 mg/kg
Chuột được điều trị bằng thuốc với liều lượng 0,1 ml/10 g thể trọng một lần mỗi ngày, bắt đầu từ 7 ngày trước phẫu thuật OBX và tiếp tục cho đến khi kết thúc thí nghiệm Sau phẫu thuật OBX, chuột sẽ tạm ngừng thuốc trong 3 ngày Các thử nghiệm hành vi nhằm đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ bao gồm thử nghiệm nhận diện vật thể và mê lộ chữ.
Cải tiến được thực hiện vào ngày thứ 17 và 24 sau phẫu thuật Sau khi hoàn tất thử nghiệm hành vi, não chuột được thu thập để đánh giá mô bệnh học và hóa học thần kinh.
Hình 2.13 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu tác dụng cải thiện trí nhớ của OS
2.3.1.2 Đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ của các cao chiết phân đoạn hương nhu tía trên mô hình OBX
Tương tự, thí nghiệm đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ của các cao chiết phân đoạn hương nhu tía được thiết kế theo sơ đồ sau (Hình 2.14.):
Hình 2.14 Sơ đồ thiết kế thí nghiệm đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ của các cao chiết phân đoạn hương nhu tía
- Đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ của cao OS và các cao chiết phân đoạn n-hexan (OS-H), ethyl acetat (OS-E) và n-butanol (OS-B) của hương nhu tía
Thí nghiệm được thực hiện với mẫu cao OS và các cao chiết phân đoạn (OS-H, OS-E, OS-B), được phân tán đồng nhất trong nước cất Chuột được cho uống liều 400 mg/kg để đánh giá hiệu quả.
Từ đó, tìm được phân đoạn cao chiết có tác dụng cải thiện trí nhớ rõ nhất
- Đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ với 2 mức liều của cao OS-E (phân đoạn có tác dụng rõ nhất)
Thí nghiệm được thực hiện với mẫu cao OS-E được phân tán đồng nhất trong nước, cho chuột uống với hai mức liều là 200 mg/kg (OS-E 200) và 400 mg/kg (OS-E 400).
2.3.1.3 Nghiên cứu tác dụng cải thiện trí nhớ của các hoạt chất tiềm năng trong hương nhu tía (acid ursolic và acid oleanolic) trên mô hình OBX
Các hoạt chất tiềm năng, với hàm lượng cao trong phân đoạn có tác dụng rõ rệt nhất, đang được nghiên cứu để cải thiện trí nhớ Thí nghiệm được thiết kế theo hình thức cụ thể như trong Hình 2.15.
Hình 2.15 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu tác dụng cải thiện trí nhớ của các hoạt chất tiềm năng trong hương nhu tía
- Nghiên cứu tác dụng cải thiện trí nhớ của acid ursolic
Mẫu thử là acid ursolic được phân tán đồng nhất trong nước cất chứa 0,1%
(tt/tt) Tween 80, cho chuột uống với 2 mức liều 6 mg/kg (UA 6) và 12 mg/kg (UA 12)
- Nghiên cứu tác dụng cải thiện trí nhớ của acid oleanolic
Mẫu thử acid oleanolic được pha loãng đồng nhất trong nước cất với 0,1% Tween 80 và được cho chuột uống ở ba mức liều khác nhau: 6 mg/kg (OA 6), 12 mg/kg (OA 12).
2.3.2 Nghiên cứu tác dụng và cơ chế tác dụng chống trầm cảm của hương nhu tía 2.3.2.1 Đánh giá tác dụng chống trầm cảm của cao OS và các cao chiết phân đoạn (n-hexan, OS-H; ethyl acetat, OS-E; n-butanol, OS-B) của hương nhu tía trên mô hình chuột nhắt loại bỏ thùy khứu giác (OBX)
Mô hình OBX sẽ được áp dụng để tiến hành thí nghiệm đánh giá tác dụng chống trầm cảm của cao OS và các cao chiết phân đoạn, theo sơ đồ thiết kế được trình bày trong Hình 2.16.
Hình 2.16 Sơ đồ thiết kế thí nghiệm đánh giá tác dụng chống trầm cảm của các cao chiết phân đoạn hương nhu tía trên mô hình OBX
Chuột nhắt trắng được chia ngẫu nhiên thành 7 lô như sau:
+ Lô chứng sinh lý + Lô chứng bệnh lý (OBX) + Các lô thử: gây mô hình OBX, uống cao OS và các cao chiết phân đoạn (OS-
H, OS-E, OS-B), được phân tán đồng nhất trong nước cất, với liều 400 mg/kg
+ Lô chứng dương (IMP): gây mô hình OBX, tiêm phúc mạc imipramin hòa tan trong NaCl 0,9%, với liều 8,0 mg/kg
Lượng thuốc dùng cho chuột là 0,1 ml/10 g thể trọng
2.3.2.2 Nghiên cứu tác dụng chống trầm cảm của cao chiết phân đoạn tiềm năng (OS-B) trên mô hình gây stress nhẹ trường diễn không dự đoán trước (UCMS)
Mô hình UCMS được sử dụng để nghiên cứu tác dụng và cơ chế tác dụng chống trầm cảm của cao OS-B ở hai mức liều thấp hơn Cao OS-B, với khả năng tác động rõ rệt, là một phân đoạn chiết xuất quan trọng trong nghiên cứu này.
Thí nghiệm được thiết kế theo sơ đồ sau (Hình 2.17.):
Hình 2.17 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu tác dụng chống trầm cảm của cao OS-B trên mô hình UCMS
Mẫu thử cao OS-B được pha loãng đều trong nước cất và cho chuột uống với hai mức liều khác nhau là 50 mg/kg (OS-B 50) và 100 mg/kg (OS-B 100).
100) Thử nghiệm tiêu thụ saccharose được tiến hành hàng tuần từ tuần 0 đến tuần 4; tuần 9 và tuần 11 thực hiện thử nghiệm dược lý sử dụng chất đối kháng.
Xử lý số liệu
Số liệu từ các thử nghiệm nhận diện vật thể được phân tích bằng phương pháp kiểm định t Student ghép đôi Dữ liệu từ các thử nghiệm hành vi, bao gồm mê lộ chữ Y cải tiến, treo đuôi, bơi cưỡng bức, môi trường mở, tiêu thụ saccharose và các thí nghiệm mô, hóa thần kinh, được phân tích bằng phương pháp phân tích phương sai một nhân tố (one-way ANOVA) và kiểm định hậu nghiệm bằng phương pháp Student-Newman-Keul Dữ liệu từ thử nghiệm mê lộ nước Morris được phân tích bằng phương pháp phân tích phương sai hai nhân tố (two-way ANOVA) và kiểm định hậu nghiệm bằng phương pháp Student-Newman-Keul.
Giá trị p < 0,05 thì sự khác biệt giữa các mẫu so sánh được coi là đạt ý nghĩa thống kê
Các phép phân tích thống kê này được thực hiện trên phần mềm phân tích chuyên dụng Sigma Plot 14.0.
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
Tác dụng và cơ chế tác dụng cải thiện trí nhớ của hương nhu tía
3.1.1 Tác dụng và cơ chế tác dụng cải thiện trí nhớ của cao chiết cồn toàn phần hương nhu tía (OS) trên mô hình chuột nhắt bị loại bỏ thùy khứu giác (OBX) 3.1.1.1 Tác dụng của cao OS lên trí nhớ nhận diện vật thể của chuột OBX
Thử nghiệm nhận diện đồ vật (ORT) đã được áp dụng để nghiên cứu tác động của OS lên trí nhớ nhận diện vật thể, một dạng trí nhớ làm việc không liên quan đến không gian, trên chuột OBX.
Hình 3.1 Ảnh hưởng của cao OS lên trí nhớ làm việc của chuột OBX trong thử nghiệm nhận diện vật thể ORT
Sơ đồ thử nghiệm ORT cho thấy thời gian khám phá vật thể O1 và O2 trong giai đoạn luyện tập không có sự khác biệt đáng kể giữa các lô chuột sinh lý, bệnh lý và các lô chuột điều trị bằng cao OS và DNP (p > 0,05) Tuy nhiên, trong giai đoạn kiểm tra, thời gian khám phá vật thể mới O3 so với vật thể tương tự O1 có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (*p < 0,05), với n = 9-12, được phân tích bằng kiểm định paired Student’s t-test (Hình 3.1C).
- Lô chứng sinh lý có thời gian khám phá vật thể mới O3 dài hơn đáng kể so với thời gian khám phá vật thể tương tự O1 (p = 0,011 < 0,05)
Lô chuột OBX không được điều trị cho thấy thời gian khám phá các vật thể mới và tương tự không có sự khác biệt đáng kể, với giá trị p = 0,291 (p > 0,05), chứng minh rằng chuột OBX đã bị suy giảm khả năng nhận diện vật thể.
Chuột OBX được điều trị bằng DNP với liều 1,5 mg/kg/ngày qua đường tiêm đã cho thấy thời gian khám phá đối tượng mới O3 nhiều hơn đáng kể so với đối tượng quen thuộc O1 (p 0,016 < 0,05) Kết quả này chứng tỏ rằng DNP có tác dụng cải thiện tình trạng suy giảm trí nhớ nhận diện vật thể ở chuột OBX.
Điều trị hàng ngày bằng OS với liều 200 và 400 mg/kg/ngày qua đường uống cho thấy tác dụng cải thiện trí nhớ nhận diện vật thể trên chuột OBX phụ thuộc vào liều lượng Cụ thể, liều 200 mg/kg không tạo ra sự khác biệt có ý nghĩa thống kê trong thời gian khám phá vật thể mới (p = 0,507 > 0,05), trong khi liều 400 mg/kg đã làm tăng rõ rệt thời gian khám phá vật thể mới O3 so với vật thể tương tự O1 (p = 0,013 < 0,05).
Kết quả nghiên cứu cho thấy liều OS 400 mg/kg/ngày có khả năng cải thiện suy giảm trí nhớ làm việc không gian do OBX gây ra, tương tự như tác dụng của DNP ở liều 1,5 mg/kg/ngày.
3.1.1.2 Tác dụng của OS lên trí nhớ không gian ngắn hạn của chuột OBX
Thử nghiệm mê lộ chữ Y được thực hiện nhằm đánh giá tác dụng của cao OS đối với trí nhớ làm việc không gian trên chuột OBX Kết quả của nghiên cứu này được trình bày dưới dạng biểu đồ cột trong Hình 3.2.
Trong giai đoạn kiểm tra, kết quả thể hiện ở Hình 3.2B như sau:
Tỷ lệ thời gian mà lô sinh lý dành cho việc khám phá cánh mới B trong giai đoạn kiểm tra đạt khoảng 50%, cao hơn mức cơ hội là 33,3% khi chuột có khả năng vào một trong ba cánh ngẫu nhiên Điều này cho thấy loài gặm nhấm có xu hướng ưa thích sự mới lạ hơn là những cánh quen thuộc A và C.
Chuột OBX không được điều trị cho thấy tỷ lệ thời gian khám phá cánh mới chỉ đạt mức cơ hội, ngắn hơn đáng kể so với lô sinh lý (p = 0,013 < 0,05) Điều này cho thấy việc mất thùy khứu giác đã dẫn đến suy giảm trí nhớ làm việc liên quan đến không gian ở chuột.
Điều trị bằng DNP (1,5 mg/kg/ngày) đã làm tăng đáng kể thời gian khám phá cánh mới của chuột OBX so với nhóm bệnh lý không được điều trị (p = 0,034 < 0,05), cho thấy DNP có khả năng ngăn chặn sự suy giảm trí nhớ không gian ngắn hạn ở chuột OBX.
Điều trị hàng ngày bằng OS với liều 200 và 400 mg/kg/ngày qua đường uống đã cho thấy tác dụng cải thiện trí nhớ không gian ngắn hạn trên chuột OBX phụ thuộc vào liều lượng Thời gian khám phá cánh mới của chuột được điều trị bằng OS liều 200 mg/kg có xu hướng kéo dài hơn so với nhóm bệnh lý, mặc dù chưa đạt ý nghĩa thống kê (p = 0,085 > 0,05) Ngược lại, OS liều 400 mg/kg đã làm tăng rõ rệt thời gian khám phá cánh mới trên chuột OBX so với nhóm bệnh lý (p = 0,038 < 0,05).
Nghiên cứu cho thấy liều OS 400 mg/kg/ngày có khả năng cải thiện trí nhớ không gian ở chuột OBX, tương tự như tác dụng của DNP với liều 1,5 mg/kg/ngày.
Hình 3.2 Ảnh hưởng của cao OS lên trí nhớ không gian ngắn hạn của chuột OBX trong thử nghiệm mê lộ chữ Y cải tiến
Sơ đồ thử nghiệm mê lộ chữ Y cải tiến cho thấy tỷ lệ phần trăm khám phá cánh mới B của các lô trong giai đoạn kiểm tra có ý nghĩa thống kê, với *p < 0,05 khi so sánh lô sinh lý với lô bệnh lý và #p < 0,05 khi so sánh các lô thuốc với lô bệnh lý OBX, n = 9-12.
(one-way ANOVA, hậu kiểm Student-Newman-Keul’s)
3.1.1.3 Ảnh hưởng của cao OS lên sự giãn não thất bên của chuột OBX
Nghiên cứu khảo sát tác động của OBX đến tình trạng giãn não thất bên và ảnh hưởng của việc sử dụng lâu dài OS cùng với chất ức chế cholinesterase DNP trên chuột OBX Kết quả được trình bày trong Hình 3.3.
Hình 3.3 Tỷ lệ mở rộng não thất bên của các lô
Tác dụng chống trầm cảm của hương nhu tía
3.2.1 Tác dụng chống trầm cảm của cao chiết cồn và các cao chiết phân đoạn hương nhu tía trên mô hình chuột OBX
3.2.1.1 Ảnh hưởng của OS và các cao chiết phân đoạn lên biểu hiện trầm cảm của chuột OBX trong thử nghiệm treo đuôi chuột (TST)
Khi chuột bị treo đuôi với khoảng cách 40 cm từ mặt sàn, chúng sẽ rơi vào trạng thái tuyệt vọng và dần chuyển sang bất động Thời gian bất động kéo dài càng cho thấy rõ dấu hiệu trầm cảm ở chuột Kết quả này được thể hiện trong Hình 3.19.
Chuột OBX cho thấy thời gian bất động tăng đáng kể (89,8 ± 12,7 giây) so với nhóm chứng sinh lý (55,7 ± 7,6 giây) với giá trị p = 0,015 < 0,05, cho thấy chuột OBX có xu hướng thể hiện hành vi tuyệt vọng cao hơn trong thử nghiệm treo đuôi chuột.
Chuột OBX được điều trị bằng imipramin cho thấy thời gian bất động trung bình là 32,6 ± 8,0 giây, thấp hơn gần 3 lần so với lô bệnh lý (p = 0,006 < 0,01) Kết quả này chứng tỏ imipramin có tác dụng chống trầm cảm rõ rệt trên mô hình OBX.
- Chuột OBX được điều trị bằng cao chiết cồn OS (400 mg/kg) làm giảm có ý nghĩa thống kê thời gian bất động so với lô bệnh lý (p = 0,027 < 0,05)
Chuột OBX được điều trị bằng cao OS-B (400 mg/kg) cho thấy tác dụng chống trầm cảm rõ rệt với thời gian bất động là 51,6 ± 9,7 giây (p = 0,019 < 0,05) Ngược lại, thời gian bất động của chuột OBX điều trị bằng cao OS-H và OS-E không có sự khác biệt đáng kể so với nhóm bệnh lý (p > 0,05).
Hình 3.19 Ảnh hưởng của OS và các cao chiết phân đoạn lên thời gian bất động của chuột OBX trong thử nghiệm treo đuôi (TST)
(*p < 0,05 khi so sánh lô sinh lý với lô bệnh lý, ##p < 0,01, #p < 0,05 khi so sánh các lô thuốc với lô bệnh lý OBX, n = 12).(one-way ANOVA, hậu kiểm Student-Newman-Keul’s)
OS và OS-B với liều 400 mg/kg/ngày có khả năng giảm hành vi tuyệt vọng ở chuột OBX trong thử nghiệm TST, trong khi các cao OS-H và OS-E ở liều tương tự không cho thấy tác dụng này.
3.2.1.2 Ảnh hưởng của OS và các cao chiết phân đoạn lên biểu hiện trầm cảm của chuột OBX trong thử nghiệm chuột bơi cưỡng bức (FST)
Trong thử nghiệm chuột bơi cưỡng bức (FST), trạng thái bất động của chuột thể hiện hành vi tuyệt vọng, một dấu hiệu quan trọng của trầm cảm.
Hành vi trèo của chuột được xem như một phản ứng có mục đích nhằm trốn thoát khỏi tình trạng căng thẳng, chẳng hạn như khi chúng bị thả vào bể nước.
Kết quả đánh giá thời gian bất động của chuột OBX trong thử nghiệm FST ở
- Thời gian bất động của chuột ở lô OBX không được điều trị có xu hướng thấp hơn lô sinh lý, sự khác biệt này chưa đạt ý nghĩa thống kê (p > 0,05)
Khi so sánh thời gian bất động giữa lô chuột bệnh lý OBX và lô OBX được điều trị bằng imipramin, không có sự khác biệt có ý nghĩa nào được ghi nhận Điều này cũng áp dụng cho cả bốn loại cao chiết được nghiên cứu.
OS, OS-H, OS-E và OS-B (p > 0,05)
Kết quả đánh giá thời gian bất động thực tế đã cho thấy sự khác biệt so với dự đoán ban đầu của tác giả về tác động của OBX đối với trạng thái bất động của chuột trong thí nghiệm FST.
Tiếp tục đánh giá thời gian trèo của các lô chuột trong thử nghiệm này thu được kết quả trình bày ở Hình 3.20B, như sau:
Chuột OBX không được điều trị cho thấy thời gian trèo giảm đáng kể so với lô sinh lý, cho thấy sự loại bỏ thùy khứu giác dẫn đến triệu chứng trầm cảm rõ rệt (p = 0,011 < 0,05).
Chuột OBX được điều trị bằng imipramin với liều 8,0 mg/kg/ngày cho thấy thời gian trèo có xu hướng tăng so với nhóm chuột bệnh lý, tuy nhiên sự khác biệt này chưa đạt ý nghĩa thống kê (p > 0,05).
Chuột OBX được điều trị bằng OS và cao chiết phân đoạn OS-B cho thấy thời gian trèo tăng lên đáng kể, lần lượt là 35,8 ± 6,1 giây và 48,2 ± 7,9 giây, gấp 2-3 lần so với lô bệnh lý chỉ đạt 15,2 ± 3,7 giây Kết quả thống kê cho thấy sự khác biệt có ý nghĩa với p lần lượt là 0,021 và 0,007, đều nhỏ hơn 0,05 và 0,01.
Chuột OBX được điều trị bằng OS-H và OS-E cho thấy không có sự khác biệt đáng kể về thời gian trèo so với lô bệnh lý (p > 0,05).
Mặc dù mô hình chuột OBX có một số nhược điểm khi đánh giá tác dụng chống trầm cảm của thuốc, nhưng kết quả từ thử nghiệm TST và thời gian trèo trong thử nghiệm FST cho thấy OS, đặc biệt là OS-B, có khả năng giảm biểu hiện trầm cảm trên chuột OBX.
Hình 3.20 Ảnh hưởng của OS và các cao chiết phân đoạn lên biểu hiện trầm cảm của chuột OBX trong thử nghiệm bơi cưỡng bức (FST)
(A) Thời gian bất động; (B) Thời gian trèo (*p < 0,05 khi so sánh lô sinh lý với lô bệnh lý, ##p < 0,01,
#p < 0,05 khi so sánh các lô thuốc với lô bệnh lý OBX, n )
(one-way ANOVA, hậu kiểm Student-Newman-Keul’s)
3.2.2 Tác dụng và cơ chế tác dụng chống trầm cảm của cao chiết phân đoạn n- butanol (OS-B) trên mô hình chuột bị gây stress nhẹ trường diễn không dự đoán trước (UCMS)
BÀN LUẬN
Nguyên liệu nghiên cứu
Cao chiết cồn toàn phần hương nhu tía được thực hiện bằng cách sử dụng dung môi ethanol 70%, cho phép thu được cao chiết cồn toàn phần OS phục vụ cho các thí nghiệm Dung môi này có khả năng hòa tan chọn lọc và hiệu quả các nhóm hoạt chất trong OS, bao gồm tinh dầu, flavonoid, terpenoid, polyphenol và tannin.
Cao chiết cồn từ hương nhu tía, với tác dụng và cơ chế đã được chứng minh, cho phép phân lập hiệu quả các hoạt chất quan trọng Nghiên cứu sâu hơn trên in vivo đã xác định các thành phần hóa học góp phần vào tác dụng của OS, đồng thời cho thấy rằng nó ít độc hơn methanol.
Cao chiết phân đoạn hương nhu tía được thực hiện bằng cách sử dụng các dung môi có độ phân cực tăng dần như n-hexan, ethyl acetat và n-butanol Mục đích của quá trình này là phân nhóm các hợp chất theo độ phân cực, từ đó thu được các cao chiết phân đoạn n-hexan (OS-H), ethyl acetat (OS-E) và n-butanol (OS-B) Qua đó, có thể xác định các hợp chất chính có tác dụng trong cao chiết, tập trung vào những phân đoạn có hoạt tính rõ rệt nhất.
Cách sử dụng và liều lượng của OS cùng với các cao chiết phân đoạn được xác định dựa trên việc thuốc được thiết kế để sử dụng cho người qua đường uống, do đó, phương thức đưa thuốc trong nghiên cứu này là đường uống.
Theo y học cổ truyền, hương nhu tía có nhiều công dụng và liều dùng dao động từ 8g đến 20g dược liệu khô mỗi lần cho mỗi người Hiệu suất chiết OS từ dược liệu khô đạt 16,5%, và với hệ số ngoại suy liều dùng từ người sang chuột nhắt trắng là 12, có thể dự đoán được mức liều có tác dụng hiệu quả.
Nghiên cứu cho thấy cao chiết cồn hương nhu tía có hiệu quả chống trầm cảm ở liều 400 mg/kg, với tác động giảm lo âu trong thử nghiệm không gian mở (OFT) và giảm thời gian bất động trong thử nghiệm treo đuôi trên chuột OBX Điều này chỉ ra rằng nồng độ OS không được thấp hơn 320 mg/kg là cần thiết để đạt được hiệu quả điều trị.
Nghiên cứu đã sử dụng hai mức liều 400 mg/kg và 200 mg/kg của OS để xác định phân đoạn cao chiết chứa hoạt chất chính có tác dụng Mức liều 400 mg/kg, được chọn vì đã thể hiện hiệu quả tốt, được áp dụng cho ba loại cao OS-H, OS-E và OS-B nhằm đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ và chống trầm cảm của các chiết xuất này.
4.1.2 Lựa chọn động vật thí nghiệm Động vật được dùng cho tất cả các nghiên cứu trong luận án đều là chuột nhắt trắng chủng Swiss albino, giống đực và cùng tuổi để các thông số thu được tương đối đồng đều, hạn chế tối đa các sai sót có thể gặp phải Có thể dùng chuột nhắt hoặc chuột cống cho các nghiên cứu về thần kinh Tuy nhiên, ở đây chuột nhắt đã được ưu tiên lựa chọn do dễ thực hiện các thao tác kỹ thuật hơn, đồng thời phù hợp với các thiết kế thí nghiệm sẵn có tại Khoa Dược lý – Sinh hóa, Viện dược liệu và phù hợp với nguyên tắc đạo đức trong sử dụng động vật thí nghiệm
Trong các nghiên cứu sử dụng mô hình OBX, động vật được bắt đầu thí nghiệm ở độ tuổi 7-8 tuần, thời điểm chuột bắt đầu trưởng thành và có khả năng thích nghi tốt với điều kiện nghiên cứu Sau một tuần làm quen với môi trường và chế độ nuôi dưỡng, chuột sẽ đạt khối lượng tối ưu trên 30 g, giúp quá trình gây mê và phẫu thuật diễn ra thuận lợi, đồng thời giảm thiểu tỷ lệ tử vong trong quá trình phẫu thuật.
Với nghiên cứu trên mô hình UCMS, tuổi của động vật khi bắt đầu thí nghiệm là
Chuột ở độ tuổi 5-6 tuần bắt đầu trưởng thành và có khả năng thích nghi cao với điều kiện nghiên cứu Để thực hiện mô hình UCMS và các thử nghiệm kéo dài nhiều tuần, chuột được chọn phải trẻ hơn so với chuột trong nghiên cứu mô hình OBX, nhằm đảm bảo rằng chúng vẫn ở độ tuổi trưởng thành và chưa bị già hóa trong suốt quá trình thí nghiệm.
4.1.3 Lựa chọn thuốc chứng dương 4.1.3.1 Thuốc chứng dương cho nghiên cứu tác dụng cải thiện trí nhớ của hương nhu tía
Donepezil (DNP) là một trong năm thuốc điều trị Alzheimer được FDA phê duyệt và là thuốc chứng dương được lựa chọn trong nghiên cứu này Các thuốc ức chế enzym acetylcholinesterase, bao gồm donepezil, vẫn giữ vai trò quan trọng trong điều trị Alzheimer, với donepezil là thuốc duy nhất được chỉ định cho điều trị chứng mất trí tiến triển Tacrin cũng là một thuốc chứng dương phổ biến trong các nghiên cứu về trí nhớ thực nghiệm, thường được sử dụng với liều 2,5 mg/kg qua đường tiêm phúc mạc.
[76, 77, 171]), tuy nhiên, donepezil có liều dùng thấp hơn và an toàn hơn nhiều so với tacrin [172]
Liều dùng donepezil tinh khiết trong nghiên cứu này là 1,5 mg/kg, được tiêm qua đường phúc mạc Liều 1,5 mg/kg donepezil tiêm phúc mạc đã được áp dụng làm thuốc chứng dương trong các nghiên cứu trước đây.
4.1.3.2 Thuốc chứng dương cho nghiên cứu tác dụng chống trầm cảm của hương nhu tía
Trong nghiên cứu này, imipramin (IMP) – một thuốc chống trầm cảm ba vòng, được chọn làm thuốc chứng dương Các nghiên cứu về khả năng chống trầm cảm của một đối tượng mới thường bắt đầu bằng việc quan sát hoạt động của các thuốc hiện có, cụ thể là việc tăng cường dẫn truyền tại các khớp thần kinh monoaminergic thông qua việc ngăn chặn tái hấp thu serotonin và norepinephrin Imipramin đã thể hiện tác dụng giảm biểu hiện hành vi trầm cảm trong nhiều thử nghiệm trên mô hình động vật Liều dùng cho lô chứng dương là IMP tiêm phúc mạc với liều 8,0 mg/kg, tương tự với liều hiệu quả đã được chứng minh trên chuột Swiss Hầu hết các nghiên cứu đều sử dụng IMP tiêm phúc mạc, và việc sử dụng chất có độ tinh khiết cao giúp hạn chế lượng thuốc cần dùng và tiết kiệm chi phí.
Mô hình dược lý
4.2.1 Mô hình loại bỏ thùy khứu giác (OBX)
Hiện nay, nhiều mô hình thực nghiệm đã được phát triển để nghiên cứu tác dụng của các chất điều trị sa sút trí tuệ, cải thiện trí nhớ và chống trầm cảm Trong số đó, mô hình OBX nổi bật với tính hữu ích và được sử dụng rộng rãi trong các nghiên cứu dược lý thần kinh Mô hình này không chỉ phù hợp cho nghiên cứu suy giảm trí nhớ mà còn cho trầm cảm, làm cho nó trở thành lựa chọn lý tưởng cho luận án Tuy nhiên, tại Việt Nam, mô hình OBX vẫn còn ít được biết đến Nghiên cứu hiện tại khẳng định tính phù hợp của mô hình OBX và tạo nền tảng khoa học vững chắc để áp dụng vào nghiên cứu và phát triển sản phẩm dược liệu phục vụ chăm sóc sức khỏe cộng đồng tại Việt Nam.
Mô hình OBX trong nghiên cứu hiện tại đã tái hiện thành công cả ba khía cạnh của bệnh Alzheimer và bệnh trầm cảm Đối với bệnh Alzheimer, OBX mô phỏng các đặc điểm sinh lý bệnh như suy giảm trí nhớ làm việc, thoái hóa tế bào cholinergic, và giảm hình thành tế bào thần kinh mới trong hồi hải mã, cùng với dấu hiệu teo não và giảm biểu hiện VEGF, mở ra những đóng góp mới cho luận án Mô hình này cũng cho thấy tính dự đoán điều trị khả quan khi phản ứng với thuốc ức chế AChE – donepezil tương tự như ở bệnh nhân OBX tái thiết lập sự mất tín hiệu khứu giác ở động vật, tương đồng với suy giảm khứu giác ở bệnh nhân Alzheimer giai đoạn đầu và những người có rối loạn nhận thức nhẹ Đối với bệnh trầm cảm, OBX mô phỏng hành vi tuyệt vọng và suy giảm trí nhớ, tương tự như những thay đổi ở bệnh nhân trầm cảm, đồng thời có đáp ứng tốt với thuốc chống trầm cảm như imipramin Sự suy giảm khứu giác cũng được ghi nhận ở bệnh nhân trầm cảm, cho thấy mối liên hệ giữa cấu trúc bệnh và việc loại bỏ thùy khứu giác trên động vật Mô hình OBX có thời gian thực hiện ngắn, giúp giảm sai số và tiết kiệm chi phí chăm sóc động vật.
Trong suốt quá trình thí nghiệm, quy trình phẫu thuật cho thấy sự ổn định cao và tỷ lệ tử vong ở chuột được kiểm soát dưới 7% Tuy nhiên, mô hình OBX cũng tồn tại một số nhược điểm cần lưu ý khi thực hiện.
Kỹ thuật thực hiện trên động vật cần được tiến hành sau khi gây mê, sử dụng thuốc mê với liều lượng phù hợp, như pentobarbital 60 mg/kg, tương tự như các nghiên cứu trước đây Việc theo dõi tình trạng của chuột một cách chặt chẽ trước, trong và sau khi gây mê là rất quan trọng để giảm thiểu tỷ lệ tử vong do gây mê.
Phẫu thuật can thiệp trên chuột có nguy cơ gây biến chứng do nhiễm trùng, vì vậy cần phải đảm bảo hạn chế tối đa nhiễm khuẩn trong suốt quá trình phẫu thuật bằng cách khử trùng dụng cụ Sau phẫu thuật, việc sát khuẩn vết thương hàng ngày bằng iod trong 3 ngày là rất quan trọng để ngăn ngừa nhiễm trùng.
Mô hình gây bệnh Alzheimer không phản ánh đúng cơ chế bệnh sinh tự nhiên ở người, chủ yếu do quá trình lão hóa và một phần nhỏ liên quan đến di truyền Hơn nữa, mô hình này cũng không tương đồng với nguyên nhân và cơ chế bệnh sinh của bệnh trầm cảm ở con người, chỉ có thể tái hiện một phần hạn chế các triệu chứng của bệnh nhân trầm cảm.
Sự tác động đến cảm xúc của động vật có thể làm tăng mức độ vận động tự nhiên và tính hung hăng, từ đó ảnh hưởng đến kết quả thí nghiệm, đặc biệt là trong các chỉ số thời gian bất động trong thử nghiệm FST.
4.2.2 Mô hình gây stress nhẹ trường diễn không dự đoán trước (UCMS)
Mô hình UCMS là một trong những mô hình thực nghiệm quan trọng trong nghiên cứu trầm cảm, đặc biệt trong việc phát triển các chất chống trầm cảm Tuy nhiên, tại Việt Nam, mô hình này chưa được áp dụng rộng rãi trong nghiên cứu dược lý thần kinh để đánh giá tác dụng của thuốc và dược liệu, mặc dù đã có nghiên cứu được thực hiện tại Trường Đại học Dược Hà Nội Việc triển khai mô hình UCMS có sự khác biệt giữa các tác giả và phòng thí nghiệm trên thế giới, do yêu cầu cao về công sức và tính nhất quán trong quy trình chăm sóc và gây stress cho động vật, cần thực hiện đều đặn trong thời gian dài.
Mô hình UCMS đã được thiết lập thành công trong nghiên cứu hiện tại, thể hiện tính toàn diện trên ba khía cạnh của trầm cảm Đầu tiên, mô hình này tái hiện một số triệu chứng điển hình của rối loạn trầm cảm như hành vi tuyệt vọng, giảm khả năng trốn thoát có định hướng và anhedonia Thứ hai, UCMS đáp ứng tốt với các thuốc điều trị trầm cảm hiệu quả hiện nay, bao gồm IMP và nhiều loại thuốc chống trầm cảm mạn tính khác như escitalopram, venlafaxin và agomelatin Cuối cùng, mô hình UCMS cho thấy sự tương đồng cao về nguyên nhân và cơ chế bệnh sinh của trầm cảm ở con người, nhờ vào việc gây tích lũy stress nhẹ trong thời gian dài, khắc phục được một số nhược điểm của mô hình OBX trước đó.
Việc áp dụng mô hình UCMS tại Viện Dược liệu mang lại nhiều lợi ích, bao gồm việc tạo ra các yếu tố gây stress thông qua các kỹ thuật đơn giản và dễ thực hiện, cùng với trang thiết bị sẵn có và dễ thay thế Tuy nhiên, trong quá trình thực hiện, cần lưu ý một số điểm quan trọng để đảm bảo hiệu quả nghiên cứu.
Thời gian gây mô hình trong nghiên cứu trầm cảm được xác định thông qua thử nghiệm tiêu thụ saccharose (SPT), một công cụ quan trọng để phát hiện hành vi trầm cảm ở động vật thí nghiệm SPT được thực hiện hàng tuần trong suốt quá trình trước và trong giai đoạn tiếp xúc với stress nhằm xác lập thời gian mô hình phát huy hiệu lực gây trầm cảm Trong các nghiên cứu, natri saccharin và saccharose thường được sử dụng với nồng độ khác nhau, và nghiên cứu hiện tại đã chọn saccharose với nồng độ cụ thể.
Nghiên cứu của Daodee và cộng sự (2019) đã sử dụng dung dịch saccharose 2% để xác định chỉ số tiêu thụ saccharose, nhằm đảm bảo rằng sự gia tăng tiêu thụ này không phải do giảm mức tiêu thụ nước Phương pháp tính lượng saccharose tiêu thụ được đề xuất là tỷ lệ tiêu thụ trên trọng lượng cơ thể chuột Kết quả cho thấy, chuột tiếp xúc với stress có xu hướng giảm nhu cầu tiêu thụ saccharose qua các tuần, đặc biệt rõ rệt ở tuần thứ 4, chứng minh tính hiệu quả của mô hình nghiên cứu Các phát hiện này phù hợp với các nghiên cứu toàn cầu, cho thấy chuột tiếp xúc với UCMS giảm đáng kể mức tiêu thụ dung dịch saccharin hoặc saccharose từ tuần thứ 4 đến tuần thứ 9.
Các tác nhân gây stress trong mô hình UCMS đóng vai trò quyết định cho sự thành công của nó Qua nhiều khảo sát, nghiên cứu đã chọn ra 8 loại tác nhân gây stress đa dạng, với lịch thực hiện được sắp xếp ngẫu nhiên để tránh sự thích nghi của chuột Các tác nhân này chỉ gây căng thẳng ở mức độ nhẹ, nằm trong quy trình tổng thể với một dải căng thẳng vừa phải, kết hợp 2 tác nhân trong cùng một ngày, mà không bao gồm các yếu tố căng thẳng nghiêm trọng như gây cú sốc mạnh, ngâm nước lạnh, hay bỏ thức ăn và nước uống kéo dài.
Trong quá trình gây mô hình, cần kiểm soát tốt một số vấn đề có thể phát sinh như chai nước rò rỉ, thiếu thức ăn và nước uống, đèn phòng chăn nuôi gặp trục trặc trong chu kỳ sáng-tối, hoặc môi trường ồn ào ảnh hưởng đến kết quả thí nghiệm Các con chuột trong cùng một lô được nuôi trong một chuồng lớn và chỉ được tách riêng ra từng chuồng nhỏ ngay trước khi thực hiện SPT.
4.3 Tác dụng và cơ chế tác dụng cải thiện trí nhớ của hương nhu tía
Nghiên cứu trên mô hình OBX đã lần đầu tiên chứng minh tác dụng và cơ chế cải thiện trí nhớ của cao chiết cồn hương nhu tía Nghiên cứu cũng xác định phân đoạn cao chiết có tác dụng rõ rệt nhất và chỉ ra một số hoạt chất chính đóng vai trò quan trọng trong hiệu quả của hương nhu tía.
Tác dụng và cơ chế tác dụng chống trầm cảm của hương nhu tía
Nghiên cứu lần đầu tiên xác định cao chiết phân đoạn có tác dụng chống trầm cảm rõ rệt nhất trong ba phân đoạn hương nhu tía (OS-H, OS-E, OS-B) thông qua mô hình OBX, với thử nghiệm hành vi treo đuôi và bơi cưỡng bức Kết quả cho thấy tác dụng và cơ chế chống trầm cảm của phân đoạn này ở liều thấp hơn bằng mô hình UCMS, đồng thời dự đoán một số hoạt chất chính có vai trò quan trọng trong tác dụng chống trầm cảm của hương nhu tía.
4.4.1 Tác dụng chống trầm cảm của các cao chiết phân đoạn hương nhu tía trên mô hình OBX Để xác định được cao chiết phân đoạn giàu thành phần hoạt chất chính tham gia vào tác dụng chống trầm cảm của OS, nghiên cứu tiến hành sàng lọc tác dụng của các cao chiết phân đoạn OS-H, OS-B, OS-E trên mô hình OBX với 2 thử nghiệm hành vi (treo đuôi và bơi cưỡng bức), tìm ra phân đoạn có tác dụng rõ nhất
4.4.1.1 Tác dụng chống trầm cảm của các cao chiết phân đoạn hương nhu tía trên mô hình OBX trong thử nghiệm treo đuôi (TST)
Thử nghiệm TST được thực hiện dựa trên nguyên tắc rằng khi động vật bị phơi nhiễm với stress cấp tính, như bị treo đuôi, chúng có xu hướng rơi vào trạng thái bất động, biểu hiện của hành vi tuyệt vọng Thời gian bất động gia tăng là triệu chứng điển hình của rối loạn trầm cảm Các chất chống trầm cảm có khả năng thúc đẩy hành vi tìm cách trốn thoát và giảm thời gian bất động của động vật trong thí nghiệm.
Nghiên cứu hiện tại cho thấy thời gian bất động của chuột OBX không có sự khác biệt rõ rệt so với lô chứng sinh lý, điều này phù hợp với các báo cáo trước đây về đặc điểm trầm cảm và lo âu ở động vật OBX.
Imipramin, một loại thuốc điều trị trầm cảm, lo âu và kích động thông qua cơ chế ức chế tái thu hồi serotonin và norepinephrin, đã cho thấy hiệu quả trong việc giảm xu hướng bất động ở chuột OBX Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng OS có khả năng chống trầm cảm, với liều 400 mg/kg giúp giảm thời gian bất động của chuột OBX Kết quả này chứng minh rằng động vật OBX có phản ứng tích cực khi được điều trị lâu dài bằng các chất chống trầm cảm hiện tại.
Nghiên cứu cho thấy phân đoạn OS-B có tác dụng chống trầm cảm rõ rệt, làm giảm đáng kể thời gian bất động của chuột OBX trong TST, gần tương đương với IMP Trong khi đó, hai phân đoạn OS-H và OS-E với liều 400 mg/kg không ghi nhận tác dụng này Điều này chứng tỏ cao OS-B là phân đoạn có hiệu quả chống trầm cảm tốt nhất, có thể chứa nhiều thành phần hoạt chất quan trọng cho tác dụng này.
4.4.1.2 Tác dụng chống trầm cảm của các cao chiết phân đoạn hương nhu tía trên mô hình OBX trong thử nghiệm bơi cưỡng bức (FST)
Thử nghiệm FST (Forced Swim Test) tương tự như thử nghiệm treo đuôi, trong đó chuột bị buộc phải bơi trong một không gian hạn chế không có lối thoát Sau một thời gian bị kích động, chuột sẽ ngừng cố gắng trốn thoát và trở nên bất động, điều này biểu hiện cho hành vi tuyệt vọng Thời gian bất động kéo dài cho thấy trạng thái tương tự như trầm cảm ở con người.
Kết quả nghiên cứu cho thấy thời gian bất động của chuột OBX không khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng sinh lý, điều này trái ngược với mô hình động vật bị trầm cảm Mặc dù hành vi giảm thời gian bất động ở chuột OBX đã được ghi nhận trong các báo cáo trước đây, nhưng nguyên nhân có thể là do sự tăng cường vận động trong các tình huống căng thẳng, không phải do hành vi trốn thoát có mục đích Ngược lại, thời gian bất động của chuột ddY và chuột cống bị loại bỏ thùy khứu giác lại tăng lên so với chuột sinh lý, cho thấy sự khác biệt trong hành vi bất động giữa các loài Thêm vào đó, chuột OBX được điều trị bằng OS-B và imipramin có xu hướng giảm thời gian bất động hơn so với lô bệnh lý, mặc dù chưa đạt ý nghĩa thống kê.
Trong nghiên cứu này, thời gian trèo của chuột OBX không được điều trị cho thấy sự suy giảm rõ rệt so với nhóm chứng sinh lý, điều này phản ánh hành vi tuyệt vọng và mất khả năng đối phó với stress, biểu hiện triệu chứng của trầm cảm Sự khác biệt về hành vi giữa các thử nghiệm có thể liên quan đến chất dẫn truyền thần kinh, với khả năng bơi lội gắn liền với hệ serotonergic và hành vi trèo liên quan đến hệ noradrenergic Việc loại bỏ thùy khứu giác đã được ghi nhận làm giảm norepinephrine và acid 5-hydroxyindolacetic (5-HIAA) trong vỏ não trước, đồng thời làm tăng serotonin trong hạch hạnh nhân.
Cao OS 400 mg/kg cải thiện rõ rệt thời gian trèo của chuột OBX, cho thấy khả năng đáp ứng với chất chống trầm cảm qua chỉ số này trong FST Nghiên cứu của Cryan và cộng sự chỉ ra rằng thuốc chống trầm cảm ức chế tái thu hồi chọn lọc serotonin làm tăng thời gian bơi, trong khi thuốc ức chế norepinephrine làm tăng thời gian trèo Cao OS-B thể hiện tác dụng tăng thời gian trèo rõ rệt, trong khi hai phân đoạn OS-E và OS-H ở liều 400 mg/kg không có tác dụng tương tự Điều này gợi ý rằng các hoạt chất trong phân đoạn OS-B có thể đóng vai trò chính trong tác dụng chống trầm cảm của OS, một phần thông qua hệ noradrenergic Nghiên cứu cũng đề xuất rằng thông số hành vi trèo trong FST là công cụ hữu ích để đánh giá tác dụng của các chất chống trầm cảm trên mô hình OBX.
Mô hình OBX kết hợp với hai thử nghiệm TST và FST đã phát hiện rằng cao OS-B chứa các thành phần hóa học quan trọng cho tác dụng chống trầm cảm của OS, với hiệu quả rõ rệt chỉ ở phân đoạn này, trong khi hai phân đoạn còn lại không thể hiện tác dụng tương tự Kết quả thử nghiệm cũng dự đoán cơ chế chống trầm cảm của OS và OS-B, có thể liên quan đến hệ mononergic, đặc biệt là hệ noradrenergic.
Liều dùng của OS-B trong nghiên cứu hiện tại là 400 mg/kg, tương đương với liều cao của OS toàn phần Từ 4kg dược liệu khô, thu được 68g OS-B, cho thấy liều có tác dụng của OS-B không thấp hơn 42 mg/kg Điều này định hướng cho việc nghiên cứu sâu hơn về tác dụng và cơ chế chống trầm cảm của OS-B với liều thấp hơn (50 mg/kg và 100 mg/kg) Mô hình chuột nhắt gây stress nhẹ trường diễn không dự đoán trước (UCMS) đã được áp dụng, vì không có mô hình nào hoàn hảo để mô phỏng bệnh trầm cảm ở người Việc sử dụng đồng thời hai mô hình với những ưu nhược điểm riêng giúp cải thiện độ tin cậy của kết quả nghiên cứu.
4.4.2 Tác dụng và cơ chế tác dụng chống trầm cảm của cao OS-B trên mô hình UCMS
4.4.2.1 Tác dụng chống trầm cảm của OS-B thông qua các thử nghiệm hành vi a, Thử nghiệm tiêu thụ saccharose (SPT)
Hành vi giảm hứng thú (anhedonia) là một trong hai triệu chứng chính của trầm cảm, đóng vai trò quan trọng trong việc đánh giá tình trạng này Ở loài gặm nhấm, anhedonia thể hiện qua việc giảm đáp ứng với phần thưởng, với lượng saccharose tiêu thụ là chỉ số phổ biến nhất để đo lường hành vi này Thông số này có độ tin cậy cao, vì nó không bị ảnh hưởng bởi sự thay đổi cân nặng hay nhu cầu nước uống của động vật thí nghiệm Do đó, thử nghiệm SPT đã được áp dụng để đánh giá hành vi giảm hứng thú ở động vật trong nghiên cứu.
Kết quả nghiên cứu cho thấy chuột UCMS biểu hiện hành vi giảm hứng thú với phần thưởng, thể hiện qua việc giảm dần lượng saccharose tiêu thụ theo thời gian so với lô sinh lý Điều này chứng tỏ mô hình UCMS đã thành công trong việc tái hiện hành vi anhedonia, một triệu chứng điển hình của bệnh trầm cảm Hành vi này liên quan đến rối loạn chức năng trong các quá trình đáp ứng với phần thưởng của não bộ, trong đó hệ dopaminergic đóng vai trò quan trọng trong việc hình thành dự đoán phần thưởng, kích thích động lực và phản ứng với khuyến khích có điều kiện Hơn nữa, sự suy giảm của hệ dopaminergic đã được ghi nhận ở động vật bị stress mạn tính nhẹ và ở bệnh nhân trầm cảm.
Việc điều trị lâu dài bằng imipramin đã giảm đáng kể hành vi giảm hứng thú với đồ ngọt ở chuột UCMS, khẳng định giá trị dự đoán của mô hình này trong việc đáp ứng với thuốc chống trầm cảm Đồng thời, OS-B (50 và 100 mg/kg) cũng cho thấy tác dụng phụ thuộc liều, cải thiện hành vi giảm hứng thú ở chuột UCMS.
Bàn luận chung
Hương nhu tía là dược liệu quen thuộc trong y học cổ truyền, được chứng minh có tác dụng tích cực đối với tâm thần và thần kinh Luận án này lần đầu tiên nghiên cứu hương nhu tía theo phương pháp dược lý thực nghiệm một cách hệ thống và toàn diện, mang lại nhiều kết quả có ý nghĩa, góp phần vào khoa học và có tính ứng dụng cao trong thực tiễn.
Nghiên cứu này là một trong số ít công trình tại Việt Nam triển khai thành công hai mô hình chuột nhắt: loại bỏ thùy khứu giác và gây stress nhẹ trường diễn không dự đoán trước Mặc dù không phải là mô hình mới trên thế giới, nghiên cứu đã phát hiện một số điểm mới có giá trị trong quá trình thực hiện.
Mô hình OBX đã được chứng minh đáp ứng đủ ba khía cạnh của một mô hình gây suy giảm trí nhớ và trầm cảm, bao gồm sự tương đồng về hành vi và sinh lý bệnh, giá trị dự đoán và cấu trúc bệnh Nghiên cứu chỉ ra rằng chuột OBX có đặc điểm giãn não thất bên và suy giảm VEGF trong hồi hải mã, cùng với sự suy giảm chức năng của hệ cholinergic, tương ứng với đặc điểm sinh lý bệnh của bệnh nhân Alzheimer trong lâm sàng.
Mô hình UCMS đã chứng minh khả năng đáp ứng đầy đủ ba khía cạnh của một mô hình gây trầm cảm hiệu quả, bao gồm tương đồng về hành vi, giá trị dự đoán và tương đồng về nguyên nhân cũng như cơ chế bệnh sinh Nghiên cứu dựa trên các phương pháp kinh điển toàn cầu để khảo sát và điều chỉnh các điều kiện thí nghiệm, nhằm đảm bảo thành công của mô hình trong thực tế, bao gồm các yếu tố như tác nhân gây stress, tần suất, mức độ gây stress và thời gian mô hình hóa, đồng thời kiểm soát các yếu tố liên quan Ngoài ra, nghiên cứu cũng đề xuất công cụ đánh giá hành vi trong thử nghiệm FST thông qua thời gian trèo và trong thử nghiệm OFT bằng thời gian chải lông.
Nghiên cứu đã chỉ ra rằng hương nhu tía là một ứng viên tiềm năng trong việc phòng ngừa và điều trị chứng sa sút trí tuệ, suy giảm trí nhớ và rối loạn trầm cảm Các cơ chế tác dụng của cao chiết cồn hương nhu tía đã được đề xuất, cho thấy khả năng hỗ trợ sức khỏe tâm thần của loại thảo dược này.
Tác dụng cải thiện trí nhớ được thể hiện qua việc tăng cường hệ cholinergic, bao gồm ức chế enzyme AChE và tăng số lượng tế bào ChAT tại vách ngăn giữa Điều này giúp giảm tình trạng giãn não thất bên, kích thích sự sinh sản tế bào thần kinh mới trong hồi hải mã, đồng thời nâng cao biểu hiện gen và protein VEGF.
- Với tác dụng chống trầm cảm: tăng cường các chất dẫn truyền thần kinh monoamin của hệ noradrenergic, dopaminergic và serotonergic
Cơ chế cải thiện tình trạng giãn não thất bên và tăng sinh tế bào thần kinh mới hồi hải mã không chỉ liên quan đến việc cải thiện trí nhớ mà còn có mối liên hệ mật thiết với tác dụng chống trầm cảm của hương nhu tía Suy giảm thể tích hồi hải mã, giãn rộng não thất bên và teo cục bộ thùy trán đã được ghi nhận ở bệnh nhân trầm cảm, cho thấy tiềm năng lớn của hương nhu tía trong điều trị lâm sàng Trầm cảm và suy giảm trí nhớ thường đi kèm với nhau, đặc biệt ở người lớn tuổi, nơi trầm cảm có thể là tình trạng bệnh đi kèm với sa sút trí tuệ, xảy ra ở 50% bệnh nhân Alzheimer do suy giảm norepinephrin và serotonin Nhiều bằng chứng cho thấy rối loạn chức năng nhận thức cũng xuất hiện trong các rối loạn trầm cảm và lo âu Thể tích hồi hải mã có vai trò điều chỉnh mối liên hệ giữa triệu chứng trầm cảm và nhận thức, góp phần vào các con đường liên quan như thoái hóa thần kinh và phản ứng viêm Việc sử dụng hương nhu tía hàng ngày có thể mang lại lợi ích cho bệnh nhân sa sút trí tuệ có triệu chứng trầm cảm và ngược lại.
Nghiên cứu cho thấy các hợp chất trong phân đoạn ethyl acetat có tác dụng cải thiện trí nhớ, trong khi phân đoạn n-butanol có tác dụng chống trầm cảm Cụ thể, acid ursolic và acid oleanolic trong OS-E đã được chứng minh có khả năng cải thiện trí nhớ, với acid ursolic hoạt động hiệu quả ở liều thấp (6-12 mg/kg) thông qua việc tăng cường hoạt động của hệ cholinergic và biểu hiện protein VEGF ở hồi hải mã Đồng thời, luteolin, apigenin và apigenin-7-O-β-D-glucuronid trong cao OS-B được dự đoán có vai trò quan trọng trong tác dụng chống trầm cảm Nghiên cứu này cung cấp cơ sở vững chắc cho việc tiêu chuẩn hóa thành phần hoạt chất trong các chế phẩm cải thiện trí nhớ và chống trầm cảm Ngoài ra, tinh dầu trong hương nhu tía, như eugenol, đã được chứng minh có tác dụng chống viêm và chống oxy hóa, có thể góp phần bảo vệ thần kinh, làm chậm tiến triển và hạn chế mất tế bào thần kinh trong các rối loạn thoái hóa thần kinh.
Có thể sơ đồ hóa tác dụng và cơ chế tác dụng của hương nhu tía như Hình 4.1 và Hình 4.2
Hình 4.1 Tác dụng và cơ chế tác dụng cải thiện suy giảm trí nhớ của hương nhu tía
(Mũi tên chỉ sự gia tăng, mũi tên chỉ sự giảm các yếu tố trong não) luan an tien si TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat
Hình 4.2 Tác dụng và cơ chế tác dụng chống trầm cảm của hương nhu tía
Mũi tên màu đỏ biểu thị sự gia tăng của các chất dẫn truyền thần kinh như serotonin, norepinephrin và dopamin trong não Để tải luận án tiến sĩ mới nhất, vui lòng liên hệ qua email: skknchat123@gmail.com.
Luận án đã đóng góp vào việc xây dựng cơ sở khoa học vững chắc cho việc sử dụng hương nhu tía, một dược liệu phổ biến tại Việt Nam, trong phòng ngừa và điều trị sa sút trí tuệ và trầm cảm Bên cạnh đó, nghiên cứu cũng cung cấp một phương pháp tiếp cận khoa học chặt chẽ, áp dụng vào nghiên cứu dược lý thực nghiệm nhằm điều trị các bệnh lý rối loạn tâm thần – thần kinh.