Luận án tiến sĩ phân tích trình tự orf2 của pcv2 từ heo nuôi ở một số tỉnh phía nam và nghiên cứu vắc xin phòng bệnh liên quan pcv2 trên heo sau cai sữa

i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH LÊ THỊ THU PHƯƠNG PHÂN TÍCH TRÌNH TỰ ORF2 CỦA PCV2 TỪ HEO NI Ở MỘT SỐ TỈNH PHÍA NAM VÀ NGHIÊN CỨU VẮC-XIN PHÒNG BỆNH LIÊN QUAN PCV2 TRÊN HEO SAU CAI SỮA Chuyên ngành: Bệnh lý học Chữa bệnh vật nuôi Mã số: 9.64.01.02 LUẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Ngọc Hải TS Nguyễn Thị Thu Hồng TP Hồ Chí Minh – tháng 11 năm 2019 ii LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan công bố luận án trung thực, phần liệu cơng trình nghiên cứu chưa công bố cơng trình khác, phần liệu luận án thuộc đề tài độc lập chương trình nhiệm vụ nghiên cứu đặc thù, Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn đặt hàng theo công văn số 2151/BNN-KHCN ngày 21/4/2011 theo hợp đồng số 23 HĐ/TCKHCN Văn phòng Bộ NN-PTNN Trung Tâm Nghiên Cứu Thú Y – Công ty TNHHMTV Thuốc Thú Y Trung Ương – NAVETCO ngày 07/6/2011 TS Nguyễn Thị Thu Hồng làm chủ nhiệm Những số liệu luận án phép công bố với đồng ý chủ nhiệm đề tài quan chủ trì Tác giả Lê Thị Thu Phương iii LỜI CẢM ƠN Xin thành kính biết ơn công lao sinh thành dưỡng dục đến Ba Má Xin thành kính ghi ơn PGS TS Nguyễn Ngọc Hải TS Nguyễn Thị Thu Hồng hết lòng hướng dẫn, động viên giúp đỡ suốt q trình cơng tác, học tập, thực hồn thành luận án Xin chân thành cảm ơn PGS TS Nguyễn Tất Toàn, PGS.TS Lâm Thị Thu Hương, PGS TS Nguyễn Văn Khanh, TS Hồ Thị Kim Hoa, PGS.TS Lê Thanh Hiền, PGS.TS Trần Thị Dân, PGS.TS Nguyễn Ngọc Tn động viên tận tình giúp đỡ tơi suốt trình học tập Xin gởi lời cảm ơn sâu sắc đến Ban Lãnh Đạo Công ty Cổ phần Thuốc Thú Y Trung Ương NAVETCO, BLĐ Trung Tâm Nghiên Cứu Thú Y đồng ý tạo điều kiện thời gian, sở vật chất để học tập, nghiên cứu thực hoàn thành luận án Xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu Trường đại học Nơng Lâm thành phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm quý Thầy Cô giáo Khoa Chăn ni Thú y, Phịng đạo tạo sau đại học giảng dạy, truyền đạt kinh nghiệm, kiến thức tạo điều kiện thuận lợi hỗ trợ khác để tơi hồn thành khóa học Xin chân thành cảm ơn Ông Chris J Morrissy Ông Darren Schafer thuộc phịng thí nghiệm Australian Animal Health Laboratory – CSIRO, cung cấp số sinh phẩm nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn Anh Đặng Hùng, Chị Lam Hương bạn đồng nghiệp Ngọc Ánh, Nhị Hà, Vô Ngôn, Hồng Phúc, Tấn Liêm, Hào Quang, Thu Lâm, Minh Hải Trung Tâm Nghiên Cứu, bạn Kim Phúc anh Hải, Chị Thu Hà, Chị Diệu Thúy, Em Thanh Phong đồng hành động viên suốt trình học tập, nghiên cứu thực đề tài Xin gởi lời cảm ơn lời yêu thương chân thành đến đại gia đình ủng hộ, động viên công tác, học tập hồn thành luận án iv TĨM TẮT Đề tài “Phân tích trình tự ORF2 PCV2 từ heo ni số tỉnh phía Nam nghiên cứu vắc-xin phòng bệnh liên quan PCV2 heo sau cai sữa” thực nhằm xác định genotype đánh giá tương đồng di truyền PCV2 lưu hành số tỉnh phía Nam Việt Nam nghiên cứu thử nghiệm vắcxin phòng hội chứng còi, giảm lượng vi-rút huyết mơ bệnh tích liên quan PCV2 heo dựa chủng phân lập nghiên cứu Kết đạt sau: Phân tích phát sinh chủng loại dựa toàn ORF2 48 mẫu PCV2 thu thập từ năm 2007 đến 2016 từ 44 trại heo 13 tỉnh thành Việt Nam (gồm 12 tỉnh phía Nam tỉnh Bắc Trung Bộ) cho thấy, có lưu hành đồng thời PCV2b, PCV2d PCV2-Re (2h) (trước xếp vào nhóm PCV2 tái tổ hợp, theo cách phân loại xếp vào genotype PCV2h), phổ biến PCV2b (24/48) Sự xuất ngày trở nên phổ biến genotype PCV2d, đặc biệt PCV2d2 (15/16 mẫu thuộc PCV2d) từ năm 2012 trở Mức độ tương đồng nucleotide genotype tương ứng 98,7% - 100% PCV2b, 98,5 - 100% PCV2d2 PCV2-Re (2h) 98,7 - 100% Khoảng cách di truyền (p - distance) genotype cao, từ 0,0595  0,0096 đến 0,0663  0,0102, cao nhiều so với ngưỡng p = 0,035 Đã phân lập 18 chủng PCV2 thuộc genotype PCV2b (9 chủng), PCV2d (6 chủng) PCV2-Re (2h) (3 chủng) từ 21 mẫu bệnh phẩm dương tính PCV2 - thu nhận từ heo có biểu triệu chứng bệnh tích bệnh circovirus Hiệu giá vi-rút đạt môi trường tế bào PK15A dao động từ 1,67 đến 5,50log10 TCID50/ml lần tiếp đời thứ Ba chủng thuộc genotype khác có hiệu giá cao ổn định qua lần tiếp đời (≥ 5,0log10 TCID50/ml): NAVET-DongNai2/2009 (PCV2b), NAVET-LongAn2/2012 (PCV2d) NAVET-vietnam3/2004 (PCV2-Re (2h)) sử dụng để lựa chọn làm giống gốc nghiên cứu sản xuất vắc-xin phòng bệnh circovirus heo Đánh giá tương đồng kháng nguyên chủng PCV2 thuộc genotype khác phản ứng trung hòa chéo Kết cho thấy chủng NAVET- v DongNai2/2009 NAVET-vietnam3/2004 tương đồng hoàn toàn kháng nguyên với hệ số R 104,20% Hệ số R chủng NAVET-DongNai2/2009 chủng NAVETLongAn2/2012; NAVET-LongAn2/2012 NAVET-vietnam3/2004 tương ứng 91,60% 91,30%, tất > 70% Qua cho thấy, chủng khác genotype tương đồng với kháng nguyên Từ kết nghiên cứu đặc tính di truyền, ni cấy tế bào, tương đồng kháng nguyên cho thấy, chủng NAVET-DongNai2/2009 (PCV2b) đáp ứng đầy đủ tiêu chí để chọn làm giống gốc nghiên cứu sản xuất vắc-xin Sử dụng binary ethylenimine (BEI) để bất hoạt vi-rút chế tạo kháng nguyên PCV2, với nồng độ BEI mM, nhiệt độ 370C, sau 24 vơ hoạt hoàn toàn vi-rút thuộc chủng NAVET-vietnam3/2004, NAVET-DongNai2/2009 NAVET-LongAn2/2012, với tốc độ bất hoạt tương ứng với chủng 0,71; 0,86 1,33log10 TCID50/giờ Đánh giá hiệu lực vắc-xin PCV2 vô hoạt nhũ dầu thử nghiệm từ chủng NAVET-DongNai2/2009 (PCV2b) Thí nghiệm 3: lúc tuần tuổi, heo lơ thí nghiệm (n = 6) tiêm vắc-xin thử nghiệm (2 ml/ liều, chứa lượng kháng nguyên 106,0TCID50) sử dụng dịch chiết tế bào PK15A lô đối chứng (n = 4) Sau tiêm vắc-xin 28 ngày, tất heo công cường độc cách nhỏ mũi ml tiêm bắp ml với vi-rút chủng NAVET-DongNai2/2009 tiếp đời thứ với hiệu giá 5,33log10TCID50/ml Ở lơ thí nghiệm, heo có chuyển đổi kháng thể 14 - 21 ngày sau tiêm vắc-xin Heo sau tiêm vắc-xin công cường độc khỏe mạnh, tăng trọng bình thường, có thời gian vi-rút huyết ngắn, thải vi-rút qua phân dịch tiết mũi với tỉ lệ thấp so với heo đối chứng Tỉ lệ heo mắc PMWS lô vắc-xin 0/6 lô đối chứng 1/4 Kết cho thấy vắc-xin vô hoạt nhũ dầu có khả kích thích đáp ứng miễn dịch bảo hộ heo mặt lâm sàng chống lại PCV2b, giảm tỉ lệ heo có vi-rút huyết giảm hiệu giá vi-rút mô lúc 28 ngày sau công cường độc vi SUMMARY The study “Genetic analysis of PCV2-ORF2 from pigs in Southern Vietnam and study on vaccine against porcine circovirus diseases in post-weaning pigs” was carried out from June 2012 to June 2018, in Veterinary Research Center – NAVETCO National Veterinary Joint Stock Company, Nong Lam University Ho Chi Minh City The aims were to determine the prevalence of PCV2 genotypes, genetic homology of PCV2 isolates circulating in Southern of Vietnam and research on vaccine against porcine circovirus in post-weaning pigs based on PCV2 isolates in this study Full-length ORF2 of 48 PCV2 isolates from 44 pig farms in 13 provinces in Vietnam (including 12 Southern and North Central Coast provinces) between 2007 and 2016 was analysed nucleotide sequence The results showed that genotype PCV2b, PCV2d and PCV2-Re (2h) (formerly classified as recombinant cluster) coexisted, of which the most prevalent genotype was PCV2b (24/48) PCV2d genotype was emergent and predominant, especially PCV2d-2 (15/16) from 2012 onwards Nucleotide homology for each genotype was 98.7% - 100% for PCV2b, 98.5 - 100% for PCV2d-2 and 98.7 - 100% for PCV2-Re (2h) p - distance among genotypes were quite high and range from 0.0595  0.0096 to 0.0663  0.0102 Eighteen PCV2 strains were isolated from the PCV2 PCR positive samples, belonged to genotype PCV2b (9 strains), PCV2d (6 strains) and PCV2-Re (2h) (3 strains) The viral titer of PCV2 isolates at the third passages in PK15A cells was in the ranges from 1.67 to 5.50log10 TCID50/ml Three PCV2 field strains, which the viral titers were stably high (≥ 5.0log10 TCID50/ml) through passages, belonged to different genotypes, namely NAVET-DongNai2/2009 (PCV2b), NAVET- LongAn2/2012 (PCV2d) and NAVET-vietnam3/2004 (PCV2-Re (2h)), were selected as master seed for studying of PCV2 vaccines Applying cross neutralization test and R value (cross-reactivity value) to determine antigenic diversity of PCV2 strains The R value obtained by cross neutralization test between NAVET-DongNai2/2009 and NAVET-vietnam3/2004 was 104.20%; NAVET-DongNai2/2009 and NAVET-LongAn2/2012; NAVET- vii LongAn2/2012 and NAVET-vietnam3/2004 were 91.60% and 91.30%, respectively These results indicated that no antigenic differences were found among these strains (R > 70%) Using binary ethylenimine (BEI) to inactivate virus for producing PCV2 antigen, BEI at mM, 370C after 24 hours was able to inactivate completely NAVETvietnam3/2004, NAVET-DongNai2/2009 and NAVET-LongAn2/2012 strains with inactivation rates 0.71; 0.86 and 1.33log10 TCID50 per hour, respectively Efficacy of experimental inactivated oil emulsion PCV2 vaccine based on NAVET-DongNai2/2009 (PCV2b) strain: Experiment 3: at weeks of age, vaccine group (n = 6) were vaccinated with the experimental PCV2 vaccine (2 ml/dose, contains 106.0TCID50) by intramuscular route, and control group (n = 4) were injected with ml of PK15A cell extract After weeks post-vaccination, the vaccinated together with unvaccinated controls were challenged intranasally and intramuscularly with 4x105,33TCID50 of NAVET-DongNai2/2009 strain, and observed for 28 days post challenge The seroconversion started at 14 - 21 dpv in vaccinated pigs The vaccinated pigs had no increase in body temperature, without any clinical signs during the experiment The obtained results indicated that this vaccine induced immunological responses in vaccinated pigs that appeared to provide clinically protective against PCV2b infection Viremia, shedding and viral load in tissues were reduced in vaccinated pigs compared to controls viii MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa .i Lời cam đoan .ii Lời cảm ơn iii Tóm tắt/Summary .iv Mục lục viii Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt xii Danh mục bảng xv Danh mục hình, biểu đồ sơ đồ xvii Mở đầu Chương Tổng quan 1.1 Giới thiệu PCV2 1.1.1 Phân loại PCV2 1.1.2 Đặc điểm hình thái sức đề kháng PCV2 1.1.3 Đặc điểm nuôi cấy PCV2 1.2 Các bệnh circovirus heo 1.2.1 Tên gọi 1.2.2 Đặc điểm dịch tễ 1.2.3 Cơ chế sinh bệnh 11 1.2.4 Đáp ứng miễn dịch chống PCV2 13 1.2.5 Triệu chứng bệnh tích 17 1.2.6 Các biện pháp phịng kiểm sốt PMWS 18 1.3 Các nghiên cứu di truyền PCV2 18 1.3.1 Các nghiên cứu biến đổi di truyền PCV2 giới 18 1.3.2 Các nghiên cứu biến đổi di truyền PCV2 Việt Nam 21 1.4 Các nghiên cứu vắc-xin PCV2 22 1.4.1 Các loại vắc-xin PCV2 22 1.4.1.1 Vắc-xin cổ điển 22 1.4.1.2 Vắc-xin hệ 23 1.4.2 Các nghiên cứu vắc-xin PCV2 Việt Nam 26 ix 1.4.3 Hiệu việc tiêm phòng vắc-xin PCV2 27 1.4.3.1 Lâm sàng 27 1.4.4.2 Cận lâm sàng 28 1.4.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu tiêm phòng vắc-xin PCV2 30 1.4.5.1 Kháng thể thụ động 30 1.4.5.2 Quy trình tiêm phịng 31 1.4.5.3 Các tác nhân đồng nhiễm 33 1.4.5.4 Sự biến đổi di truyền PCV2 34 1.4.6 Thất bại sau tiêm phòng vắc-xin PCV2 34 1.5 Cơ sở khoa học nghiên cứu sản xuất vắc-xin PCV2 35 1.5.1 Cơ sở chọn thể loại vắc-xin để nghiên cứu 35 1.5.2 Cơ sở chọn chủng vi-rút vắc-xin 36 1.5.3 Cơ sở lựa chọn chất vô hoạt PCV2 36 1.5.4 Cơ sở lựa chọn chất bổ trợ 38 1.5.5 Tiêu chuẩn đánh giá vắc-xin 39 1.5.5.1 An toàn 39 1.5.5.2 Hiệu lực 39 Chương Nội dung phương pháp nghiên cứu 43 2.1 Phạm vi đối tượng nghiên cứu 43 2.1.1 Địa điểm 43 2.1.2 Thời gian 43 2.1.3 Đối tượng 43 2.2 Nội dung nghiên cứu 43 2.3 Vật liệu, hóa chất 43 2.3.1 Vật liệu thí nghiệm 43 2.3.2 Hóa chất sinh phẩm 44 2.3.3 Dụng cụ trang thiết bị 45 2.4 Phương pháp nghiên cứu 45 2.4.1 Phân tích di truyền PCV2 số tỉnh thành Việt Nam 45 2.4.2 Khảo sát đặc tính sinh học chủng PCV2 phân lập 47 2.4.2.1 Phân lập PCV2 môi trường tế bào PK15A 47 2.4.2.2 Xác định liều lượng vi-rút gây nhiễm 48 x 2.4.2.3 Xác định thời gian thu hoạch tối ưu chủng phân lập 49 2.4.2.4 So sánh tương đồng kháng nguyên chủng PCV2 phân lập thuộc genotype khác 50 2.4.2.5 Thí nghiệm Đánh giá khả gây bệnh tính sinh miễn dịch chủng NAVET-DongNai2/2009 52 2.4.3 Nghiên cứu chế tạo vắc-xin PCV2 vô hoạt nhũ dầu 55 2.4.3.1 Quy trình vơ hoạt PCV2 55 2.4.3.2 Chế tạo vắc-xin PCV2 vô hoạt nhũ dầu 56 2.4.3.3 Tính an tồn hiệu lực vắc-xin vô hoạt nhũ dầu thử nghiệm 56 2.5 Các kỹ thuật dùng nghiên cứu 59 2.5.1 Phương pháp ly trích ADN 59 2.5.2 Kỹ thuật PCR phát PCV2 59 2.5.3 Các phương pháp huyết học 60 2.5.3.1 Phương pháp miễn dịch peroxidase tế bào lớp định lượng kháng thể 60 2.5.3.2 Phương pháp ELISA phát IgG 60 2.5.3.3 Phương pháp trung hòa 60 2.5.4 Phương pháp phân lập PCV2 tế bào PK15A 61 2.5.5 Phương pháp chuẩn độ PCV2 62 2.6 Xử lý thống kê 62 Chương Kết thảo luận 63 3.1 Phân tích di truyền mẫu PCV2 số tỉnh thànhViệt Nam 63 3.1.1 Phân tích phát sinh chủng loại dựa ORF2 PCV2 63 3.1.2 Phân tích đa dạng di truyền PCV2 dựa vào ORF2 67 3.1.3 Đặc điểm ORF2 chủng PCV2 Việt Nam 68 3.1.4 Phân tích tái tổ hợp 72 3.2 Kết phân lập PCV2 đặc tính ni cấy số phân lập PCV2 .78 3.2.1 Kết phân lập PCV2 từ mẫu thực địa 78 3.2.2 Xác định liều lượng gây nhiễm chủng NAVET-DongNai2/2009 tế bào PK15A 82 3.2.3 Khả gây bệnh tích tế bào 83 3.2.4 Khả nhân lên PCV2 môi trường tế bào PK15A 85 3.2.5 Tính ổn định 86 168 Phụ lục So sánh trình tự chuỗi a-xít a-min protein capsid PCV2 AF055392/1010Stoon/Canada/1998 HM038034/LG/China/2008 AF055394/48285/France/1998 FJ598044/WuHan/China/2008 AAHL-strain vietnam5/2007 CaMau/2007 KhanhHoa/2007 BinhDuong1/2009 NAVET-BinhDuong2/2009 BinhDuong3/2009 BinhDuong4/2009 BinhDuong5/2010 DongNai1/2009 NAVET-DongNai2/2009 TpHCM1/2010 TpHCM3/2010 TpHCM6/2010 TpHCM7/2010 DongNai3/2012 DongNai4/2013 BinhDinh5/2013 BinhDinh6/2013 BinhDuong7/2013 LamDong2/2013 DongNai5/2014 DongNai6/2014 PhuYen/2014 BinhDuong11/2015 NAVET-TpHCM8/2016 EU148503/DK1980/Danmark/1980 KJ094599/PM163/Brazil/2010 AY181946/strain TJ/China/2002 AY686763/strain SH/China/2004 HM038017/strain BDH/China/2008 JX535296/22625-33/USA/2012 KJ133547/SNUVR130689/Korea2013 NAVET-BenTre/2014 DongNai8/2016 LongAn1/2012 NAVET-LongAn2/2012 LongAn3/2012 BinhDinh1/2013 BinhDuong8/2013 LamDong1/2013 LamDong3/2013 BinhDuong9/2014 BinhDuong10/2014 TayNinh/2014 BinhDuong12/2016 DongNai7/2016 NAVET-NgheAn1/2015 NAVET-NgheAn2/2015 HM776443/HUN-11/China/2009 JQ181599/Han6-13/Vietnam/2011 vietnam1/2002 NAVET-vietnam3/2004 vietnam2/2006 CanTho/2008 TpHCM2/2010 TpHCM4/2010 TpHCM5/2010 BinhDuong6/2012 BinhDinh3/2013 BinhDinh2/2013 BinhDinh4/2013 KT795287/strain MEX/41238/2014 KT795290/strain USA/45358/2015 50 40 30 20 10 | | | | | | | | | | MTYPRRRYRRRRHRPRSHLGQILRRRPWLVHPRHRYRWRRKNGIFNTRLS .F L F H H .A H .A .L .F F F F F F F F F F F F F C F L F Y .F F F F F F F F F F H .F F F F F A A 169 AF055392/1010Stoon/Canada/1998 HM038034/LG/China/2008 AF055394/48285/France/1998 FJ598044/WuHan/China/2008 AAHL-strain vietnam5/2007 CaMau/2007 KhanhHoa/2007 BinhDuong1/2009 NAVET-BinhDuong2/2009 BinhDuong3/2009 BinhDuong4/2009 BinhDuong5/2010 DongNai1/2009 NAVET-DongNai2/2009 TpHCM1/2010 TpHCM3/2010 TpHCM6/2010 TpHCM7/2010 DongNai3/2012 DongNai4/2013 BinhDinh5/2013 BinhDinh6/2013 BinhDuong7/2013 LamDong2/2013 DongNai5/2014 DongNai6/2014 PhuYen/2014 BinhDuong11/2015 NAVET-TpHCM8/2016 EU148503/DK1980/Danmark/1980 KJ094599/PM163/Brazil/2010 AY181946/strain TJ/China/2002 AY686763/strain SH/China/2004 HM038017/strain BDH/China/2008 JX535296/22625-33/USA/2012 KJ133547/SNUVR130689/Korea2013 NAVET-BenTre/2014 DongNai8/2016 LongAn1/2012 NAVET-LongAn2/2012 LongAn3/2012 BinhDinh1/2013 BinhDuong8/2013 LamDong1/2013 LamDong3/2013 BinhDuong9/2014 BinhDuong10/2014 TayNinh/2014 BinhDuong12/2016 DongNai7/2016 NAVET-NgheAn1/2015 NAVET-NgheAn2/2015 HM776443/HUN-11/China/2009 JQ181599/Han6-13/Vietnam/2011 vietnam1/2002 NAVET-vietnam3/2004 vietnam2/2006 CanTho/2008 TpHCM2/2010 TpHCM4/2010 TpHCM5/2010 BinhDuong6/2012 BinhDinh3/2013 BinhDinh2/2013 BinhDinh4/2013 KT795287/strain MEX/41238/2014 KT795290/strain USA/45358/2015 60 70 80 90 100 | | | | | | | | | | RTFGYTVKRTTVTTPSWAVDMMRFKIDDFVPPGGGTNKISIPFEYYRIRK C .A R N.N E K N.N L S.PR.V I K N.N L S.PR.V I K N.N L S.PR.V I K N.N L S.PR.V I R N.N L S.PR.V I R N.N L S.PR.V I R N.N L S.PR.V I K N.N L S.PR.V I R N.N L S.PR.V I K N.N L S.PR.V I K N.N L S.PR.V I K N.N L S.PR.V I R N.N L S.PR.V I K N.N L S.PR.V I R N.N L S.PR.V I K N.N L S.PR.V I K N.N L S.PR.V I K N.N L S.PR.V I K N.N L S.PR.V I K N.N L S.PR.V I R N.N L S.PR.V I R N.N L S.PR.V I R N.N L S.PR.V I K N.N L S.PR.V I K N.N L S.PR.V I R N.N L S.PR.V I R N.N L S.PR.V I R N.N L S.PR.V .S.V NASQ.SP N.NQ.L S.PLTV .S.V NASQ.SP N.NQ.L S.PLTV I A R N.N L S.PLTV I A R N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV I K R N N.N L S.PLTV K R N.N L S.PLTV K R N.N L S.PLTV K R N.N L S.PLTV K R N.N L S.PLTV K R N.N L S.PLTV K R N.N L S.PLTV K R N.N L S.PLTV K R N.N L S.PLTV K R N.N.YL S.PLTV K R N.N L S.PLTV K R N.N L S.PLTV K R N.N L S.PLTV K R N.N L S.PLTV .SYV VTS P N.G L .PL.V .S.V VTS P N.G L .PL.V 170 AF055392/1010Stoon/Canada/1998 HM038034/LG/China/2008 AF055394/48285/France/1998 FJ598044/WuHan/China/2008 AAHL-strain vietnam5/2007 CaMau/2007 KhanhHoa/2007 BinhDuong1/2009 NAVET-BinhDuong2/2009 BinhDuong3/2009 BinhDuong4/2009 BinhDuong5/2010 DongNai1/2009 NAVET-DongNai2/2009 TpHCM1/2010 TpHCM3/2010 TpHCM6/2010 TpHCM7/2010 DongNai3/2012 DongNai4/2013 BinhDinh5/2013 BinhDinh6/2013 BinhDuong7/2013 LamDong2/2013 DongNai5/2014 DongNai6/2014 PhuYen/2014 BinhDuong11/2015 NAVET-TpHCM8/2016 EU148503/DK1980/Danmark/1980 KJ094599/PM163/Brazil/2010 AY181946/strain TJ/China/2002 AY686763/strain SH/China/2004 HM038017/strain BDH/China/2008 JX535296/22625-33/USA/2012 KJ133547/SNUVR130689/Korea2013 NAVET-BenTre/2014 DongNai8/2016 LongAn1/2012 NAVET-LongAn2/2012 LongAn3/2012 BinhDinh1/2013 BinhDuong8/2013 LamDong1/2013 LamDong3/2013 BinhDuong9/2014 BinhDuong10/2014 TayNinh/2014 BinhDuong12/2016 DongNai7/2016 NAVET-NgheAn1/2015 NAVET-NgheAn2/2015 HM776443/HUN-11/China/2009 JQ181599/Han6-13/Vietnam/2011 vietnam1/2002 NAVET-vietnam3/2004 vietnam2/2006 CanTho/2008 TpHCM2/2010 TpHCM4/2010 TpHCM5/2010 BinhDuong6/2012 BinhDinh3/2013 BinhDinh2/2013 BinhDinh4/2013 KT795287/strain MEX/41238/2014 KT795290/strain USA/45358/2015 110 120 130 140 150 | | | | | | | | | | VKVEFWPCSPITQGDRGVGSTAVILDDNFVTKATALTYDPYVNYSSRHTI .R G S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S .FAR .N .FAR .N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N P P P P I P P P P P P P P P .FAR E S .N.TNN.S .FAR E S .N.TNN.S 171 AF055392/1010Stoon/Canada/1998 HM038034/LG/China/2008 AF055394/48285/France/1998 FJ598044/WuHan/China/2008 AAHL-strain vietnam5/2007 CaMau/2007 KhanhHoa/2007 BinhDuong1/2009 NAVET-BinhDuong2/2009 BinhDuong3/2009 BinhDuong4/2009 BinhDuong5/2010 DongNai1/2009 NAVET-DongNai2/2009 TpHCM1/2010 TpHCM3/2010 TpHCM6/2010 TpHCM7/2010 DongNai3/2012 DongNai4/2013 BinhDinh5/2013 BinhDinh6/2013 BinhDuong7/2013 LamDong2/2013 DongNai5/2014 DongNai6/2014 PhuYen/2014 BinhDuong11/2015 NAVET-TpHCM8/2016 EU148503/DK1980/Danmark/1980 KJ094599/PM163/Brazil/2010 AY181946/strain TJ/China/2002 AY686763/strain SH/China/2004 HM038017/strain BDH/China/2008 JX535296/22625-33/USA/2012 KJ133547/SNUVR130689/Korea2013 NAVET-BenTre/2014 DongNai8/2016 LongAn1/2012 NAVET-LongAn2/2012 LongAn3/2012 BinhDinh1/2013 BinhDuong8/2013 LamDong1/2013 LamDong3/2013 BinhDuong9/2014 BinhDuong10/2014 TayNinh/2014 BinhDuong12/2016 DongNai7/2016 NAVET-NgheAn1/2015 NAVET-NgheAn2/2015 HM776443/HUN-11/China/2009 JQ181599/Han6-13/Vietnam/2011 vietnam1/2002 NAVET-vietnam3/2004 vietnam2/2006 CanTho/2008 TpHCM2/2010 TpHCM4/2010 TpHCM5/2010 BinhDuong6/2012 BinhDinh3/2013 BinhDinh2/2013 BinhDinh4/2013 KT795287/strain MEX/41238/2014 KT795290/strain USA/45358/2015 160 170 180 190 200 | | | | | | | | | | PQPFSYHSRYFTPKPVLDSTIDYFQPNNKRNQLWLRLQTSGNVDHVGLGA A I T T .T T S A .T T A .I T A .I T A .T T A .T T A .T T T .T T A .T T A .T T A .I T A .I T A .T T A .T T T .T T T .T T A .T T A .T T A .I T A .I T A .T T A .T T A .T T A .T T A .T T A .T T A .T T A .T T .M T .H T .M T .H R T .T R T .T T .R T .T T .R T .T T .R T .T G T .T T .G T .T T .G T .T T .G T .T T .G T .T T .G T .T T .R T .T T .G T .T T .G T .T T .G T .T T .G T .T T .G T .T T .R T .T T .G T .T T .R T .T T .R T .T T .A T T .A T T .A T T .A T T .A T T .A T T .A T T .A T T .A T T .A T T .A T T .A T T .A T T .RI .T T T .RI .T T 172 AF055392/1010Stoon/Canada/1998 HM038034/LG/China/2008 AF055394/48285/France/1998 FJ598044/WuHan/China/2008 AAHL-strain vietnam5/2007 CaMau/2007 KhanhHoa/2007 BinhDuong1/2009 NAVET-BinhDuong2/2009 BinhDuong3/2009 BinhDuong4/2009 BinhDuong5/2010 DongNai1/2009 NAVET-DongNai2/2009 TpHCM1/2010 TpHCM3/2010 TpHCM6/2010 TpHCM7/2010 DongNai3/2012 DongNai4/2013 BinhDinh5/2013 BinhDinh6/2013 BinhDuong7/2013 LamDong2/2013 DongNai5/2014 DongNai6/2014 PhuYen/2014 BinhDuong11/2015 NAVET-TpHCM8/2016 EU148503/DK1980/Danmark/1980 KJ094599/PM163/Brazil/2010 AY181946/strain TJ/China/2002 AY686763/strain SH/China/2004 HM038017/strain BDH/China/2008 JX535296/22625-33/USA/2012 KJ133547/SNUVR130689/Korea2013 NAVET-BenTre/2014 DongNai8/2016 LongAn1/2012 NAVET-LongAn2/2012 LongAn3/2012 BinhDinh1/2013 BinhDuong8/2013 LamDong1/2013 LamDong3/2013 BinhDuong9/2014 BinhDuong10/2014 TayNinh/2014 BinhDuong12/2016 DongNai7/2016 NAVET-NgheAn1/2015 NAVET-NgheAn2/2015 HM776443/HUN-11/China/2009 JQ181599/Han6-13/Vietnam/2011 vietnam1/2002 NAVET-vietnam3/2004 vietnam2/2006 CanTho/2008 TpHCM2/2010 TpHCM4/2010 TpHCM5/2010 BinhDuong6/2012 BinhDinh3/2013 BinhDinh2/2013 BinhDinh4/2013 KT795287/strain MEX/41238/2014 KT795290/strain USA/45358/2015 230 220 210 | | | | | | | AFENSKYDQDYNIRVTMYVQFREFNLKDPPLKP* - T * - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - I E N.* - Q TNA.A V N.K* Q TNA.A V K* I .N.K* I N.K* I I N.K* I I N.K* I I N.K* I I N.K* I I N.K* I I N.K* I I N.K* I I N.K* I I N.K* I I N.K* I I N.K* I I N.K* I I N.K* I I N.K* I I N.K* I I N.K* I I N.K* I I N.K* I I N.K* I .H.K* I .H.K* I .H.K* I .H.K* I .H.K* I .N.K* I .H.K* I .N.K* I .H.K* I .H.K* I .H.K* I .H.K* I .H.K* QH.TTA.A V.I.L M PSPLSYM QH.TTA.A V L M PSPLSYM So sánh trình tự chuỗi a-xít a-min (suy từ trình tự chuỗi nucleotide) protein capsid mẫu PCV2 nghiên cứu với chủng PCV2 tham khảo 173 Phụ lục 10 Khối lượng (kg) heo thí nghiệm Lơ TN2 (tiêm vắcxin) ĐC2 (đối chứng) KH Trước tiêm heo vắc-xin 5TN2 14,6 9TN2 15,5 11TN2 15,7 15,3 𝐱̅ SD 0,6 14ĐC2 15,2 15ĐC2 15,7 𝐱̅ Sau tiêm vắc-xin lần 21 ngày 21,4 22,8 20,6 21,6 1,1 21,9 21,5 Sau tiêm vắc-xin lần hai 28 ngày 21,7 0,3 40,5 0,7 15,5 0,4 SD 41,5 40,5 40,0 40,7 0,8 41,0 40,0 Phụ lục 11 Hiệu giá kháng thể IPMA (log2) heo thí nghiệm Tuổi heo Lơ KH heo TN2 (tiêm vắcxin) 5TN2 9TN2 11TN2 ĐC2 (đối chứng) 𝐱̅ SD 14ĐC2 15ĐC2 𝐱̅ SD tuần tuần tuần (tiêm vắc-xin lần đầu) 8,64 8,64 9,64 8,98 0,58 10,64 11,64 11,14 0,71 7,64 7,64 8,64 7,98 0,58 9,64 10,64 10,14 0,71 6,64 6,64 6,64 6,64 0,00 9,64 9,64 9,64 0,00 174 Phụ lục 12 Xử lý thống kê Xử lý thống kê MOI khác Two-way ANOVA: TITER versus MOI, TIME Source MOI TIME Interaction Error Total MOI TIME DF 45 59 SS 18.5222 0.3419 0.9400 3.0016 22.8057 MS 4.63056 0.17095 0.11750 0.06670 F 69.42 2.56 1.76 P 0.000 0.088 0.110 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( * ) ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -4.50 5.00 5.50 6.00 Mean 4.49917 4.66750 5.45833 5.72250 5.86167 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( * -) ( -* ) ( -* ) -+ -+ -+ -+ -5.04 5.16 5.28 5.40 Mean 5.2590 5.3245 5.1420 Xử lý thống kê đường cong phát triển chủng PCV2 Two-way ANOVA: TITRATION versus ISOLATION, TIME Source ISOLATION TIME Interaction Error Total ISOLATION TIME DF 14 24 47 SS 6.4981 8.2520 3.4310 3.2003 21.3814 Mean 4.29688 4.75063 5.19813 Mean 3.73833 4.55667 4.80500 4.88833 5.00000 5.05500 5.11000 4.83500 MS 3.24906 1.17886 0.24507 0.13334 F 24.37 8.84 1.84 P 0.000 0.000 0.092 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* ) ( -* ) ( -* ) -+ -+ -+ -+ -4.20 4.55 4.90 5.25 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) -+ -+ -+ -+ -3.50 4.00 4.50 5.00 175 So sánh hiệu giá chủng qua lần tiếp đời One-way ANOVA: TITER versus STRAIN Source STRAIN Error Total Level DF 36 38 N 13 13 13 SS 1.203 7.864 9.066 Mean 5.2300 5.5900 5.2062 MS 0.601 0.218 F 2.75 P 0.077 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev StDev + -+ -+ -+ 0.4432 ( -* ) 0.4343 ( * -) 0.5199 ( -* ) + -+ -+ -+ 5.00 5.25 5.50 5.75 Xử lý thống kê thí nghiệm One-way ANOVA: TL 0DPV versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 0.228 3.176 3.404 Mean 8.0167 8.3250 MS 0.228 0.397 F 0.57 P 0.470 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev StDev + -+ -+ -+ 0.4792 ( -* -) 0.8221 ( -* ) + -+ -+ -+ 7.50 8.00 8.50 9.00 One-way ANOVA: TL 28DPV versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 0.60 35.50 36.10 Mean 20.500 21.000 MS 0.60 4.44 F 0.14 P 0.723 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev StDev -+ -+ -+ -+-1.761 ( -* ) 2.582 ( -* -) -+ -+ -+ -+-19.5 21.0 22.5 24.0 One-way ANOVA: TL 28DPC versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 33.8 464.3 498.0 Mean 40.500 36.750 MS 33.8 58.0 F 0.58 P 0.468 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev StDev + -+ -+ -+ 5.612 ( -* -) 10.112 ( -* ) + -+ -+ -+ 30.0 35.0 40.0 45.0 One-way ANOVA: ADG 28DPV versus LO Source LO Error Total DF SS 112 30071 30184 MS 112 3759 F 0.03 P 0.867 176 Level N Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev StDev -+ -+ -+ -+ -49.87 ( -* ) 76.67 ( -* -) -+ -+ -+ -+ -400 440 480 520 Mean 445.83 452.68 One-way ANOVA: ADG 28DPC versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 55293 373406 428699 Mean 714.3 562.5 MS 55293 46676 StDev 162.9 283.3 F 1.18 P 0.308 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * -) ( * -) + -+ -+ -+ 320 480 640 800 One-way ANOVA: IPMA 0DPV versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 0.067 0.833 0.900 MS 0.067 0.104 F 0.64 P 0.447 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev StDev -+ -+ -+ -+ -0.4082 ( -* -) 0.0000 ( * ) -+ -+ -+ -+ -6.25 6.50 6.75 7.00 Mean 6.4772 6.6439 One-way ANOVA: IPMA 7DPV versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 0.017 1.583 1.600 Mean 6.4772 6.3939 MS 0.017 0.198 StDev 0.4082 0.5000 F 0.08 P 0.779 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* -) ( * ) + -+ -+ -+ 6.00 6.30 6.60 6.90 One-way ANOVA: IPMA 14DPV versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 22.817 4.083 26.900 Mean 8.9772 5.8939 MS 22.817 0.510 StDev 0.8165 0.5000 F 44.70 P 0.000 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+( -* ) ( * ) + -+ -+ -+6.0 7.2 8.4 9.6 One-way ANOVA: IPMA 21DPV versus LO Source LO Error Total DF SS 36.82 8.08 44.90 MS 36.82 1.01 F 36.44 P 0.000 177 Level N Mean 9.311 5.394 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* ) + -+ -+ -+ 4.8 6.4 8.0 9.6 StDev 1.033 0.957 One-way ANOVA: IPMA 28DPV versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 64.067 2.333 66.400 Mean 10.311 5.144 MS 64.067 0.292 StDev 0.516 0.577 F 219.66 P 0.000 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * -) ( -* -) + -+ -+ -+ 4.8 6.4 8.0 9.6 One-way ANOVA: IPMA 7DPC versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 141.067 5.833 146.900 Mean 12.811 5.144 MS 141.067 0.729 StDev 0.983 0.577 F 193.46 P 0.000 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( * ) ( -* -) -+ -+ -+ -+ -5.0 7.5 10.0 12.5 One-way ANOVA: IPMA 14DPC versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 93.75 12.75 106.50 Mean 14.644 8.394 MS 93.75 1.59 StDev 1.095 1.500 F 58.82 P 0.000 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * -) ( -* ) + -+ -+ -+ 7.5 10.0 12.5 15.0 One-way ANOVA: IPMA 21DPC versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 74.82 14.08 88.90 Mean 14.977 9.394 MS 74.82 1.76 StDev 1.211 1.500 F 42.50 P 0.000 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * -) -+ -+ -+ -+ 10.0 12.5 15.0 17.5 One-way ANOVA: IPMA 28DPC versus LO Source LO Error Total DF SS 50.42 9.58 60.00 MS 50.42 1.20 F 42.09 P 0.000 178 Level N Mean 15.477 10.894 StDev 0.408 1.708 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * -) ( -* ) + -+ -+ -+ 10.0 12.0 14.0 16.0 One-way ANOVA: OD 0DPV versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 0.00434 0.05526 0.05959 MS 0.00434 0.00691 F 0.63 P 0.451 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev StDev + -+ -+ -+ 0.06505 ( * ) 0.10662 ( -* -) + -+ -+ -+ 0.240 0.300 0.360 0.420 Mean 0.35369 0.31118 One-way ANOVA: OD 7DPV versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 0.3527 0.5549 0.9076 Mean 0.6241 0.2407 MS 0.3527 0.0694 StDev 0.3305 0.0544 F 5.08 P 0.054 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* -) ( * -) -+ -+ -+ -+ -0.00 0.25 0.50 0.75 One-way ANOVA: OD 14DPV versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 2.300 1.300 3.599 Mean 1.1775 0.1987 MS 2.300 0.162 StDev 0.5081 0.0539 F 14.15 P 0.006 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -0.00 0.50 1.00 1.50 One-way ANOVA: OD 21DPV versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 2.449 1.116 3.564 Mean 1.2053 0.1952 MS 2.449 0.139 StDev 0.4705 0.0549 F 17.56 P 0.003 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -0.00 0.50 1.00 1.50 One-way ANOVA: OD 28DPV versus LO Source LO Error Total DF SS 2.288 0.910 3.198 MS 2.288 0.114 F 20.12 P 0.002 179 Level N Mean 1.1412 0.1649 StDev 0.4255 0.0394 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * -) ( * -) + -+ -+ -+ 0.00 0.50 1.00 1.50 One-way ANOVA: OD 7DPC versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 7.881 0.952 8.833 Mean 1.9962 0.1841 MS 7.881 0.119 StDev 0.4351 0.0401 F 66.26 P 0.000 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( * -) ( -* ) -+ -+ -+ -+ -0.00 0.70 1.40 2.10 One-way ANOVA: OD 14DPC versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 4.2157 0.5862 4.8019 Mean 1.9876 0.6623 MS 4.2157 0.0733 StDev 0.2835 0.2479 F 57.53 P 0.000 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( * ) ( -* -) -+ -+ -+ -+ -0.50 1.00 1.50 2.00 One-way ANOVA: OD 21DPC versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 2.582 0.865 3.447 Mean 1.8992 0.8620 MS 2.582 0.108 StDev 0.3377 0.3134 F 23.88 P 0.001 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* -) ( * -) + -+ -+ -+ 0.50 1.00 1.50 2.00 One-way ANOVA: OD 28DPC versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 0.906 0.805 1.712 Mean 1.8894 1.2748 MS 0.906 0.101 StDev 0.3159 0.3196 F 9.00 P 0.017 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * ) ( -* ) + -+ -+ -+ 1.05 1.40 1.75 2.10 One-way ANOVA: VNT 0DPV versus LO Source LO Error Total DF SS 2.82 11.58 14.40 MS 2.82 1.45 F 1.95 P 0.201 180 Level N Mean 3.833 2.750 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * -) ( * -) + -+ -+ -+ 2.0 3.0 4.0 5.0 StDev 0.408 1.893 One-way ANOVA: VNT 7DPV versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 6.017 7.583 13.600 Mean 3.8333 2.2500 MS 6.017 0.948 StDev 0.4082 1.5000 F 6.35 P 0.036 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( * ) ( -* ) -+ -+ -+ -+ 2.0 3.0 4.0 5.0 One-way ANOVA: VNT 14DPV versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 21.600 6.000 27.600 Mean 4.0000 1.0000 MS 21.600 0.750 F 28.80 P 0.001 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* ) ( * -) + -+ -+ -+ 0.0 1.5 3.0 4.5 StDev 0.6325 1.1547 One-way ANOVA: VNT 21DPV versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 72.600 1.500 74.100 Mean 5.5000 0.0000 MS 72.600 0.187 StDev 0.5477 0.0000 F 387.20 P 0.000 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( *-) (-*-) + -+ -+ -+ 0.0 2.0 4.0 6.0 One-way ANOVA: VNT 28DPV versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 117.600 4.000 121.600 Mean 7.0000 0.0000 MS 117.600 0.500 StDev 0.8944 0.0000 F 235.20 P 0.000 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -0.0 2.5 5.0 7.5 One-way ANOVA: VNT 7DPC versus LO Source LO Error Total DF SS 180.267 5.333 185.600 MS 180.267 0.667 F 270.40 P 0.000 181 Level N Mean 8.6667 0.0000 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( *-) ( * ) -+ -+ -+ -+ -0.0 3.0 6.0 9.0 StDev 1.0328 0.0000 One-way ANOVA: VNT 14DPC versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 66.15 28.25 94.40 Mean 9.500 4.250 MS 66.15 3.53 F 18.73 P 0.003 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * ) ( * ) + -+ -+ -+ 2.5 5.0 7.5 10.0 StDev 0.837 2.872 One-way ANOVA: VNT 21DPC versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 40.02 31.58 71.60 Mean 9.833 5.750 MS 40.02 3.95 F 10.14 P 0.013 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * -) ( * ) + -+ -+ -+ 5.0 7.5 10.0 12.5 StDev 1.169 2.872 One-way ANOVA: VNT 28DPC versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 18.15 42.25 60.40 Mean 10.500 7.750 MS 18.15 5.28 StDev 1.225 3.403 F 3.44 P 0.101 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * -) ( * ) + -+ -+ -+ 6.0 8.0 10.0 12.0 One-way ANOVA: BC-0 dpc versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 3626042 145580208 149206250 Mean 19167 17938 StDev 3763 4993 MS 3626042 18197526 F 0.20 P 0.667 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+-( * ) ( * -) -+ -+ -+ -+-15000 18000 21000 24000 182 One-way ANOVA: BC-7 dpc versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 2128167 84915833 87044000 Mean 16867 15925 StDev 1652 4874 MS 2128167 10614479 F 0.20 P 0.666 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( * -) ( * -) -+ -+ -+ -+ 14000 16000 18000 20000 One-way ANOVA: BC-14 dpc versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 33450667 219079583 252530250 Mean 17358 13625 StDev 5249 5207 MS 33450667 27384948 F 1.22 P 0.301 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -8000 12000 16000 20000 One-way ANOVA: BC-21 dpc versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 140454000 51171250 191625250 Mean 18775 11125 StDev 2689 2238 MS 140454000 6396406 F 21.96 P 0.002 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+-( * -) ( * -) -+ -+ -+ -+-10500 14000 17500 21000 One-way ANOVA: BC-28 dpc versus LO Source LO Error Total Level DF N SS 147894000 87695000 235589000 Mean 19000 11150 StDev 3319 3298 MS 147894000 10961875 F 13.49 P 0.006 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* ) ( -* ) + -+ -+ -+ 8000 12000 16000 20000