Nghiên cứu chuyển gen theo hướng nâng cao năng suất hạt ở cây đậu tương (glycine max (l ) merr )

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM - NGUYỄN TRỊNH HOÀNG ANH NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN THEO HƢỚNG NÂNG CAO NĂNG SUẤT HẠT Ở CÂY ĐẬU TƢƠNG (GLYCINE MAX (L.) Merr.) LUẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP Hà Nội - 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM - NGUYỄN TRỊNH HOÀNG ANH NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN THEO HƢỚNG NÂNG CAO NĂNG SUẤT HẠT Ở CÂY ĐẬU TƢƠNG (GLYCINE MAX (L.) Merr.) Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Mã số : 9420201 LUẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS Khuất Hữu Trung GS.TS Ngơ Xn Bình Hà Nội - 2023 i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan, cơng trình nghiên cứu cá nhân tôi, số liệu kết luận án trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị chưa công bố cơng trình nghiên cứu Tơi xin cam đoan r ng, gi p đ , hợp tác cho việc thực luận án đ cảm n thông tin tr ch d n luận án đ u ch d n r ngu n gốc Nghiên cứu sinh Nguyễn Trịnh Hoàng Anh ii LỜI CẢM ƠN ể hoàn thành luận án này, đ nhận quan tâm, gi p đ nhiệt tình Th y, giáo, tập thể, cá nhân, gia đình c ng b n b đ ng nghiệp Tơi xin bày tỏ lịng biết n sâu sắc đến PGS.TS Khuất Hữu Trung, GS.TS Ngô Xuân Bình - th y giáo hướng d n khoa học, đ tận tình gi p đ , truy n tải kiến thức kinh nghiệm suốt trình thực đ tài hồn thành luận án Tôi xin trân trọng cảm n Ban l nh đ o Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam; tập thể cán Ban Thông tin t o; tập thể L nh đ o cán viên chức Trung Tâm chuyển giao công nghệ khuyến nông đ giúp đ , hỗ trợ tận tình cho tơi q trình học tập thực đ tài Tơi xin chân thành cảm n Khoa phẩm, Trường i học Nông Lâm, ông nghệ sinh học ông nghệ thực i học Thái Nguyên n i triển khai thực đ tài, đ t o u kiện thuận lợi v tài liệu khoa học, c sở vật chất, thiết bị phục vụ nghiên cứu để hoàn thành luận án đến PGS.TS Nguyễn Tiến Dũng, Khoa ặc biệt, xin bày tỏ biết n ông nghệ sinh học ông nghệ thực phẩm đ chia sẻ kiến thức kinh nghiệm chuyên môn để hoàn thành nghiên cứu thời gian sớm uối cùng, xin chân thành cảm n b n b , đ ng nghiệp c quan người thân gia đình ln hết lịng động viên, kh ch lệ gi p đ suốt q trình thực hồn thành cơng trình trình nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm n! H N i, ng y th ng năm 2023 Nghiên cứu sinh Nguyễn Trịnh Hoàng Anh iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ix DANH MỤC BẢNG xi DANH MỤC HÌNH xiv MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu 2.1 Mục tiêu tổng quát 2.2 Mục tiêu cụ thể 3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn luận án 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn 4 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 4.1 Đối tượng nghiên cứu 4.2 Phạm vi, thời gian nghiên cứu Những đóng góp luận án CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU VÀ CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA ĐỀ TÀI 1.1 Tình hình sản xuất đậu tƣơng giới Việt Nam 1.1.1 Tình hình sản xuất đậu tương giới 1.1.2 Tình hình sản xuất đậu tương Việt Nam 1.2 Tổng quan nghiên cứu chuyển gen đậu tƣơng giới 1.2.1 Nghiên cứu tái sinh in vitro đậu tương iv 1.2.1.1 Vật liệu sử dụng t i sinh in vitro đậu tương 1.2.1.2 Phát sinh phôi soma tái sinh in vitro đậu tương 10 1.2.1.3 Ph t sinh quan thông qua mô sẹo t i sinh in vitro đậu tương 12 1.2.1.4 Ph t sinh quan trực tiếp từ mẫu ni (khơng qua việc hình th nh mô sẹo) 13 1.2.1.5 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy v điều kiện nuôi cấy đến khả t i sinh đậu tương 14 1.2.2 Kết nghiên cứu chuyển gen đậu tương giới 15 1.2.2.1 Chuyển gen thông qua vi khuẩn Agrobacterium 15 1.2.2.2 Nghiên cứu chuyển gen súng bắn gen 18 1.2.2.3 Nghiên cứu chuyển gen xung điện 19 1.2.2.4 Nghiên cứu chuyển gen qua ống phấn 19 1.2.3 Các tính trạng cải thiện thơng qua chuyển gen đậu tương 20 1.2.3.1 Đặc tính kh ng thuốc diệt cỏ 21 1.2.3.2 Đặc tính kh ng côn trùng 21 1.2.3.3 Chuyển gen nâng cao h m lượng dầu 25 1.2.3.4 Chuyển gen nâng cao tính chống chịu điều kiện ngoại cảnh 25 1.2.3.5 Chuyển gen nâng cao suất 26 1.2.3.6 Chuyển gen tạo trồng đa tính trạng 26 1.2.4 Thành tựu trồng chuyển gen giới 27 1.3 Tổng quan tình hình nghiên cứu nƣớc 31 1.3.1 Chọn tạo giống thông qua tuyển chọn vật liệu nhập nội địa phương 31 1.3.2 Chọn tạo giống đậu tương lai hữu tính 32 v 1.3.3 Chọn tạo giống phương pháp xử lý đột biến 32 1.3.4 Nghiên cứu chuyển gen đậu tương Việt Nam 33 1.3.4.1 Nghiên cứu t i sinh in vitro phục vụ chuyển gen đậu tương 33 1.3.4.2 Nghiên cứu chuyển gen đậu tương 34 1.4 Tổng quan tình hình nghiên cứu tính trạng gen có khả nâng cao suất hạt đậu tƣơng 35 1.4.1 Nghiên cứu vai trị gen kìm hãm già hóa 35 1.4.2 Nghiên cứu gen điều khiển trình tăng cường kích thước hạt đậu tương 38 1.5 Một số nhận xét rút từ tổng quan tài liệu 40 CHƢƠNG II VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 41 2.1 Vật liệu nghiên cứu 41 2.1.1 Vật liệu thực vật 41 2.1.2 Vật di truyền 42 2.1.3 Hóa chất, thiết bị sử dụng 42 2.2 Nội dung nghiên cứu 43 2.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 44 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 44 2.4.1 Nội dung 1: Nghiên cứu khả tái sinh kỹ thuật nuôi cấy in vitro khả tiếp nhận gen số giống đậu tương để chọn lọc nguồn vật liệu phục vụ cho chuyển gen 44 2.4.1.1 Nghiên cứu khả t i sinh kỹ thuật nuôi cấy in vitro c c giống đậu tương 44 2.4.1.2 Đ nh gi khả tiếp nhận gen c c giống đậu tương 48 vi 2.4.2 Nội dung 2: Tách dòng thiết kế vector chuyển gen mang gen kìm hãm già hóa Ore1 đánh giá biểu Arabidopsis 50 2.4.2.1 Nghiên cứu tách dòng gen kìm hãm già hóa Atore1 50 2.4.2.2 Thiết kế vector chuyển gen mang gen kìm hãm gi hóa l Atore1 51 2.4.2.3 Đ nh gi khả biểu gen kìm hãm gi hóa l Atore1 mơ hình Arabidopsis thaliana 52 2.4.3 Nội dung 3: Chuyển gen kìm hãm già hóa Ore1 vào đậu tương đánh giá dòng chuyển gen 55 2.4.3.1 Nghiên cứu chuyển gen Atore1 v o đậu tương thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens 55 2.4.3.2 Chọn lọc v đ nh gi biểu gen Atore1 đậu tương chuyển gen 57 2.4.3.3 Chọn lọc dòng đậu tương đồng hợp tử mang gen Atore1 v đ nh gi biểu gen 58 2.4.3.4 Đ nh gi khả sinh trưởng, ph t triển c c dòng đậu tương chuyển gen 59 2.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu 60 CHƢƠNG III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 61 3.1 Kết nghiên cứu khả tái sinh kỹ thuật nuôi cấy in vitro khả tiếp nhận gen số giống đậu tƣơng để chọn lọc nguồn vật liệu phục vụ cho chuyển gen 61 3.1.1 Kết nghiên cứu khả tái sinh kỹ thuật nuôi cấy in vitro giống đậu tương 61 3.1.1.1 Nghiên cứu tạo vật liệu vô trùng 61 3.1.1.2 Ảnh hưởng BAP đến khả t i sinh chồi từ nốt l mầm 62 vii 3.1.1.3 Ảnh hưởng kinetin đến khả t i sinh chồi từ nốt mầm 68 3.1.1.4 Kết ảnh hưởng h m lượng GA3 đến khả kéo d i chồi m t số giống đậu tương 76 3.1.1.5 T i sinh rễ tạo ho n chỉnh 77 3.1.2 Đánh giá khả tiếp nhận gen giống đậu tương 79 3.2 Kết tách dòng thiết kế vector chuyển gen mang gen kìm hãm già hóa Ore1 đánh giá biểu Arabidopsis 86 3.2.1 Tách dịng gen kìm hãm già hóa Atore1 86 3.2.2 Thiết kế vector chuyển gen mang gen kìm hãm già hóa Atore1 90 3.2.2.1 Gắn gen Atore1 vào vector chuyển gen 90 3.2.2.2 Tạo chủng vi khuẩn E.coli v Agrobacterium tumefaciens mang gen Atore1 92 3.2.3 Đánh giá khả biểu gen kìm hãm già hóa Atore1 mơ hình Arabidopsis thaliana 92 3.2.3.1 Chuyển gen Atore1 v o mơ hình Arabidopsis 92 3.2.3.2 Chọn lọc Arabidopsis chuyển gen T1 mang gen Atore1 93 3.2.3.3 Đ nh gi Arabidopsis chuyển gen Atore1 PCR hệ T1 94 3.2.3.4 Đ nh gi biểu gen thông qua hình th i Arabidopsis chuyển gen Atore1 hệ T1 95 3.2.3.5 Đ nh gi Arabidopsis chuyển gen Atore1 PCR hệ T2 96 3.2.3.6 Đ nh gi biểu gen thơng qua hình th i l Arabidopsis chuyển gen Atore1 hệ T2 97 3.3 Kết chuyển gen kìm hãm già hóa Atore1 vào đậu tƣơng đánh giá dòng chuyển gen 100 viii 3.3.1 Nghiên cứu chuyển gen Atore1 vào đậu tương thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens 100 3.3.1.1 Nuôi cấy hạt đậu tương nảy mầm chuẩn bị để biến nạp gen 100 3.3.1.2 Tạo dung dịch vi khuẩn biến nạp gen Atore1 101 3.3.1.3 Ảnh hưởng nồng đ vi khuẩn đến khả biến nạp 102 3.3.1.4 Ảnh hưởng thời gian đồng nuôi cấy đến khả biến nạp gen 105 3.3.1.5 Ảnh hưởng nồng đ Acetosyringon (AS) đến khả biến nạp gen 106 3.3.1.6 Ảnh hưởng kh ng sinh chọn lọc đến khả chọn lọc sau chuyển gen đậu tương 108 3.3.1.7 T i sinh v chọn lọc chồi chuyển gen Atore1 môi trường kháng sinh 110 3.3.1.8 Tạo đậu tương chuyển gen Atore1 ho n chỉnh 111 3.3.1.9 Kết đưa đậu tương chuyển gen trồng vườn thí nghiệm 112 3.3.2 Chọn lọc đánh giá biểu gen Atore1 đậu tương chuyển gen 113 3.3.2.1 Chọn lọc v đ nh gi biểu gen Atore1 đậu tương chuyển gen hệ T0 113 3.3.2.2 Chọn lọc v đ nh gi biểu gen Atore1 đậu tương chuyển gen hệ hệ T1 116 3.3.2.3 Chọn lọc đậu tương chuyển gen kìm hãm gi hóa l Atore1 hệ T2 121 3.3.3 Chọn lọc dòng đậu tương đồng hợp tử mang gen Atore1 đánh giá biểu gen 126 3.3.3.1 Chọn lọc dòng đậu tương đồng hợp tử mang gen Atore1 126 7201 tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt 7261 accgcctttg agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca 7321 gtgagcgagg aagcggaaga gcgcctgatg cggtattttc tccttacgca tctgtgcggt 7381 atttcacacc gcatatggtg cactctcagt acaatctgct ctgatgccgc atagttaagc 7441 cagtatacac tccgctatcg ctacgtgact gggtcatggc tgcgccccga cacccgccaa 7501 cacccgctga cgcgccctga cgggcttgtc tgctcccggc atccgcttac agacaagctg 7561 tgaccgtctc cgggagctgc atgtgtcaga ggttttcacc gtcatcaccg aaacgcgcga 7621 ggcagggtgc cttgatgtgg gcgccggcgg tcgagtggcg acggcgcggc ttgtccgcgc 7681 cctggtagat tgcctggccg taggccagcc atttttgagc ggccagcggc cgcgataggc 7741 cgacgcgaag cggcggggcg tagggagcgc agcgaccgaa gggtaggcgc tttttgcagc 7801 tcttcggctg tgcgctggcc agacagttat gcacaggcca ggcgggtttt aagagtttta 7861 ataagtttta aagagtttta ggcggaaaaa tcgccttttt tctcttttat atcagtcact 7921 tacatgtgtg accggttccc aatgtacggc tttgggttcc caatgtacgg gttccggttc 7981 ccaatgtacg gctttgggtt cccaatgtac gtgctatcca caggaaagag accttttcga 8041 cctttttccc ctgctagggc aatttgccct agcatctgct ccgtacatta ggaaccggcg 8101 gatgcttcgc cctcgatcag gttgcggtag cgcatgacta ggatcgggcc agcctgcccc 8161 gcctcctcct tcaaatcgta ctccggcagg tcatttgacc cgatcagctt gcgcacggtg 8221 aaacagaact tcttgaactc tccggcgctg ccactgcgtt cgtagatcgt cttgaacaac 8281 catctggctt ctgccttgcc tgcggcgcgg cgtgccaggc ggtagagaaa acggccgatg 8341 ccgggatcga tcaaaaagta atcggggtga accgtcagca cgtccgggtt cttgccttct 8401 gtgatctcgc ggtacatcca atcagctagc tcgatctcga tgtactccgg ccgcccggtt 8461 tcgctcttta cgatcttgta gcggctaatc aaggcttcac cctcggatac cgtcaccagg 8521 cggccgttct tggccttctt cgtacgctgc atggcaacgt gcgtggtgtt taaccgaatg 8581 caggtttcta ccaggtcgtc tttctgcttt ccgccatcgg ctcgccggca gaacttgagt 8641 acgtccgcaa cgtgtggacg gaacacgcgg ccgggcttgt ctcccttccc ttcccggtat 8701 cggttcatgg attcggttag atgggaaacc gccatcagta ccaggtcgta atcccacaca 8761 ctggccatgc cggccggccc tgcggaaacc tctacgtgcc cgtctggaag ctcgtagcgg 8821 atcacctcgc cagctcgtcg gtcacgcttc gacagacgga aaacggccac gtccatgatg 8881 ctgcgactat cgcgggtgcc cacgtcatag agcatcggaa cgaaaaaatc tggttgctcg 8941 tcgcccttgg gcggcttcct aatcgacggc gcaccggctg ccggcggttg ccgggattct 9001 ttgcggattc gatcagcggc cgcttgccac gattcaccgg ggcgtgcttc tgcctcgatg 9061 cgttgccgct gggcggcctg cgcggccttc aacttctcca ccaggtcatc acccagcgcc 9121 gcgccgattt gtaccgggcc ggatggtttg cgaccgtcac gccgattcct cgggcttggg 9181 ggttccagtg ccattgcagg gccggcagac aacccagccg cttacgcctg gccaaccgcc 9241 cgttcctcca cacatggggc attccacggc gtcggtgcct ggttgttctt gattttccat 9301 gccgcctcct ttagccgcta aaattcatct actcatttat tcatttgctc atttactctg 9361 gtagctgcgc gatgtattca gatagcagct cggtaatggt cttgccttgg cgtaccgcgt 9421 acatcttcag cttggtgtga tcctccgccg gcaactgaaa gttgacccgc ttcatggctg 9481 gcgtgtctgc caggctggcc aacgttgcag ccttgctgct gcgtgcgctc ggacggccgg 9541 cacttagcgt gtttgtgctt ttgctcattt tctctttacc tcattaactc aaatgagttt 9601 tgatttaatt tcagcggcca gcgcctggac ctcgcgggca gcgtcgccct cgggttctga 9661 ttcaagaacg gttgtgccgg cggcggcagt gcctgggtag ctcacgcgct gcgtgatacg 9721 ggactcaaga atgggcagct cgtacccggc cagcgcctcg gcaacctcac cgccgatgcg 9781 cgtgcctttg atcgcccgcg acacgacaaa ggccgcttgt agccttccat ccgtgacctc 9841 aatgcgctgc ttaaccagct ccaccaggtc ggcggtggcc catatgtcgt aagggcttgg 9901 ctgcaccgga atcagcacga agtcggctgc cttgatcgcg gacacagcca agtccgccgc 9961 ctggggcgct ccgtcgatca ctacgaagtc gcgccggccg atggccttca cgtcgcggtc 10021 aatcgtcggg cggtcgatgc cgacaacggt tagcggttga tcttcccgca cggccgccca 10081 atcgcgggca ctgccctggg gatcggaatc gactaacaga acatcggccc cggcgagttg 10141 cagggcgcgg gctagatggg ttgcgatggt cgtcttgcct gacccgcctt tctggttaag 10201 tacagcgata accttcatgc gttccccttg cgtatttgtt tatttactca tcgcatcata 10261 tacgcagcga ccgcatgacg caagctgttt tactcaaata cacatcacct ttttagacgg 10321 cggcgctcgg tttcttcagc ggccaagctg gccggccagg ccgccagctt ggcatcagac 10381 aaaccggcca ggatttcatg cagccgcacg gttgagacgt gcgcgggcgg ctcgaacacg 10441 tacccggccg cgatcatctc cgcctcgatc tcttcggtaa tgaaaaacgg ttcgtcctgg 10501 ccgtcctggt gcggtttcat gcttgttcct cttggcgttc attctcggcg gccgccaggg 10561 cgtcggcctc ggtcaatgcg tcctcacgga aggcaccgcg ccgcctggcc tcggtgggcg 10621 tcacttcctc gctgcgctca agtgcgcggt acagggtcga gcgatgcacg ccaagcagtg 10681 cagccgcctc tttcacggtg cggccttcct ggtcgatcag ctcgcgggcg tgcgcgatct 10741 gtgccggggt gagggtaggg cgggggccaa acttcacgcc tcgggccttg gcggcctcgc 10801 gcccgctccg ggtgcggtcg atgattaggg aacgctcgaa ctcggcaatg ccggcgaaca 10861 cggtcaacac catgcggccg gccggcgtgg tggtgtcggc ccacggctct gccaggctac 10921 gcaggcccgc gccggcctcc tggatgcgct cggcaatgtc cagtaggtcg cgggtgctgc 10981 gggccaggcg gtctagcctg gtcactgtca caacgtcgcc agggcgtagg tggtcaagca 11041 tcctggccag ctccgggcgg tcgcgcctgg tgccggtgat cttctcggaa aacagcttgg 11101 tgcagccggc cgcgtgcagt tcggcccgtt ggttggtcaa gtcctggtcg tcggtgctga 11161 cgcgggcata gcccagcagg ccagcggcgg cgctcttgtt catggcgtaa tgtctccggt 11221 tctagtcgca agtattctac tttatgcgac taaaacacgc gacaagaaaa cgccaggaaa 11281 agggcagggc ggcagcctgt cgcgtaactt aggacttgtg cgacatgtcg ttttcagaag 11341 acggctgcac tgaacgtcag aagccgactg cactatagca gcggaggggt tggatcaaag 11401 tactttgatc ccgaggggaa ccctgtggtt ggcatgcaca tacaaatgga cgaacggata 11461 aaccttttca cgccctttta aatatccgtt attctaataa acgctctttt ctcttag Vector chuyển gen pGreenII pGreen II 62-SK Plasmid sequence TTTTTATCCCCGGAAGCCTGTGGATAGAGGGTAGTTATCCACGTGAAAC CGCTAATGCCCCGCAAAGCCTTGATTCACGGGGCTTTCCGGCCCGCTCC AAAAACTATCCACGTGAAATCGCTAATCAGGGTACGTGAAATCGCTAAT CGGAGTACGTGAAATCGCTAATAAGGTCACGTGAAATCGCTAATCAAA AAGGCACGTGAGAACGCTAATAGCCCTTTCAGATCAACAGCTTGCAAA CACCCCTCGCTCCGGCAAGTAGTTACAGCAAGTAGTATGTTCAATTAGC TTTTCAATTATGAATATATATATCAATTATTGGTCGCCCTTGGCTTGTGG ACAATGCGCTACGCGCACCGGCTCCGCCCGTGGACAACCGCAAGCGGT TGCCCACCGTCGAGCGCCAGCGCCTTTGCCCACAACCCGGCGGCCGGCC GCAACAGATCGTTTTATAAATTTTTTTTTTTGAAAAAGAAAAAGCCCGA AAGGCGGCAACCTCTCGGGCTTCTGGATTTCCGATCCCCGGAATTAGAG ATCTTGGCAGGATATATTGTGGTGTAACGTTATCAGCTTGGTACGTACC CCCCTACTCCAAAAATGTCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGC TATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATTTCGGGAAACCTCCTCGGATTC CATTGCCCAGCTATCTGTCACTTCATCGAAAGGACAGTAGAAAAGGAA GGTGGCTCCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCTATCATTC AAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGA GGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAG TGGATTGATGTGACATCTCCACTGACGTAAGGGATGACGCACAATCCCA CTATCCTTCGCAAGACCCTTCCTCTATATAAGGAAGTCATTTCATTTGGA GAGGACAGCCCAAGCTGAGCTCCACCGCGGTGGCGGCCGCTCTAGAAC TAGTGGATCCCCCGGGCTGCAGGAATTCGATATCAAGCTTATCGATACC GTCGACCTCGAGGGGGGGCCCGGTACCAATTCGGTACGCTGAAATCAC CAGTCTCTCTCTACAAATCTATCTCTCTCTATTTTCTCCATAAATAATGT GTGAGTAGTTTCCCGATAAGGGAAATTAGGGTTCTTATAGGGTTTCGCT CATGTGTTGAGCATATAAGAAACCCTTAGTATGTATTTGTATTTGTAAA ATACTTCTATCAATAAAATTTCTAATTCCTAAAACCAAAATCCAGTACT AAAATCCAGATCCACTAGCCTTGACAGGATATATTGGCGGGTAAACTAA GTCGCTGTATGTGTTTGTTTGAGATCTCATGTGAGCAAAAGGCCAGCAA AAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGC TCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGT GGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAA GCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTG TCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTG TAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTG CACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATC GTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGC CACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGA GTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTT GGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAGAAGAGTTGGTA GCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGT TTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCC TTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGT TAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCC TTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGTGTA ACATTGGTCTAGTGATTAGAAAAACTCATCGAGCATCAAATGAAACTGC AATTTATTCATATCAGGATTATCAATACCATATTTTTGAAAAAGCCGTTT CTGTAATGAAGGAGAAAACTCACCGAGGCAGTTCCATAGGATGGCAAG ATCCTGGTATCGGTCTGCGATTCCGACTCGTCCACATCAATACAACCTA TTAATTTCCCCTCGTCAAAAATAAGGTTATCAAGTGAGAAATCACCATG AGTGACGACTGAATCCGGTGAGAATGGCAAAAGTTTATGCATTTCTTTC CAGACTTGTTCAACAGGCCAGCCATTAC GCTCGTCATCAAAATCACTCGCATCAACCAAACCGTTATTCATTCGTGA TTGCGCCTGAGCGAGACGAAATACGCGATCGCTGTTAAAAGGACAATT ACAAACAGGAATCGAATGCAACCGGCGCAGGAACACTGCCAGCGCATC AACAATATTTTCACCTGAATCAGGATATTCTTCTAATACCTGGAATGCT GTTTTCCCTGGGATCGCAGTGGTGAGTAACCATGCATCATCAGGAGTAC GGATAAAATGCTTGATGGTCGGAAGAGGCATAAATTCCGTCAGCCAGTT TAGTCTGACCATCTCATCTGTAACAACATTGGCAACGCTACCTTTGCCAT GTTTCAGAAACAACTCTGGCGCATCGGGCTTCCCATACAATCGGTAGAT TGTCGCACCTGATTGCCCGACATTATCGCGAGCCCATTTATACCCATAT AAATCAGCATCCATGTTGGAATTTAATCGCGGCCTTGAGCAAGACGTTT CCCGTTGAATATGGCTCATAACACCCCTTGTATTACTGTTTATGTAAGCA GACAGTTTTATTGTTCATGATGATATATTTTTATCTTGTGCAATGTAACA TCAGAGATTTTGAGACACAACGTGGCTTTGTTGAATAAATCGAACTTTT GCTGAGTTGAAGGATCAGATCACGCATCTTCCCGACAACGCAGACCGTT CCGTGGCAAAGCAAAAGTTCAAAATCACCAACTGGTCCACCTACAACA AAGCTCTCATCAACCGTGGCTCCCTCACTTTCTGGCTGGATGATGGGGC GATTCAGGCGATCCCCATCCAACAGCCCGCCGTCGAGCGGGCT Phụ lục 4: MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRIỂN KHAI THÍ NGHIỆM Phụ lục 5: CÂY CHUYỂN GEN KÌM HÃM GIÀ HĨA LÁ ATORE1 THẾ HỆ T2 STT Thế hệ T2 Atore1-1-1 Atore1-2-1 Cây đánh giá Thời gian từ trồng đến thu hoạch (ngày) Chênh lệnh so với đối chứng (ngày) Kiểm tra Basta Kiểm tra PCR 147 26,2 + + 150 29,2 + + 149 28,2 + + 134 13,2 + + 146 25,2 + + 146 25,2 + + 151 30,2 + + 151 30,2 + + 134 13,2 + + 10 125 4,2 + + 11 145 24,2 + + 12 151 30,2 + + 13 149 28,2 + + 14 148 27,2 + + 15 151 30,2 + + 148 27,2 + + 145 24,2 + + 148 27,2 + + 133 12,2 + + 145 24,2 + + 148 27,2 + + 145 24,2 + + 133 12,2 + + 148 27,2 + + STT Thế hệ T2 Atore1-3-1 Atore1-4-1 Cây đánh giá 10 Thời gian từ trồng đến thu hoạch (ngày) 148 Chênh lệnh so với đối chứng (ngày) 27,2 Kiểm tra Basta + Kiểm tra PCR + 11 148 27,2 + + 12 148 27,2 + + 13 148 27,2 + + 14 148 27,2 + + 15 145 24,2 + + 150 29,2 + + 150 29,2 + + 150 29,2 + + 150 29,2 + + 150 29,2 + + 150 29,2 + + 135 14,2 + + 150 29,2 + + 150 29,2 + + 10 135 14,2 + + 11 150 29,2 + + 12 150 29,2 + + 13 150 29,2 + + 14 132 11,2 + + 15 150 29,2 + + 144 23,2 + + 141 20,2 + + 144 23,2 + + 141 20,2 + + 141 20,2 + + STT Thế hệ T2 Atore1-5-1 Atore1-6-1 Cây đánh giá Thời gian từ trồng đến thu hoạch (ngày) 144 Chênh lệnh so với đối chứng (ngày) 23,2 Kiểm tra Basta + Kiểm tra PCR + 144 23,2 + + 144 23,2 + + 144 23,2 + + 10 144 23,2 + + 11 144 23,2 + + 12 144 23,2 + + 13 144 23,2 + + 14 144 23,2 + + 15 144 23,2 + + 137 16,2 + + 137 16,2 + + 137 16,2 + + 140 19,2 + + 137 16,2 + + 137 16,2 + + 137 16,2 + + 137 16,2 + + 140 19,2 + + 10 137 16,2 + + 11 137 16,2 + + 12 140 19,2 + + 13 137 16,2 + + 14 137 16,2 + + 15 137 16,2 + + 147 26,2 + + STT Thế hệ T2 Atore1-6-2 Cây đánh giá Thời gian từ trồng đến thu hoạch (ngày) 151 Chênh lệnh so với đối chứng (ngày) 30,2 Kiểm tra Basta + Kiểm tra PCR + 147 26,2 + + 151 30,2 + + 151 30,2 + + 147 26,2 + + 147 26,2 + + 147 26,2 + + 147 26,2 + + 10 141 20,2 + + 11 141 20,2 + + 12 151 30,2 + + 13 151 30,2 + + 14 147 26,2 + + 15 151 30,2 + + 144 23,2 + + 150 29,2 + + 150 29,2 + + 144 23,2 + + 144 23,2 + + 150 29,2 + + 150 29,2 + + 150 29,2 + + 141 20,2 + + 10 141 20,2 + + 11 141 20,2 + + 12 141 20,2 + + STT Thế hệ T2 Atore1-7-1 Đối chứng Cây đánh giá 13 Thời gian từ trồng đến thu hoạch (ngày) 141 Chênh lệnh so với đối chứng (ngày) 20,2 Kiểm tra Basta + Kiểm tra PCR + 14 141 20,2 + + 15 141 20,2 + + 135 14,2 + + 141 20,2 + + 135 14,2 + + 130 9,2 + + 135 14,2 + + 130 9,2 + + 141 20,2 + + 141 20,2 + + 135 14,2 + + 10 135 14,2 + + 11 141 20,2 + + 12 130 9,2 + + 13 130 9,2 + + 14 135 14,2 + + 15 141 20,2 + + 15 120,8 - - - Phụ lục 6: MỘT SỐ HÌNH ẢNH CÂY CHYỂN GEN CÂY CHUYỂN GEN KÌM HÃM GIÀ HĨA LÁ ATORE1 THẾ HỆ T2 Cây chuyển gen kìm hãm già hóa mang gen Atore1 hệ T2 Giai đo n thu ho ch Atore1-1 Atore1-2 Cây chuyển gen kìm hãm già hóa mang gen Atore1 hệ T2 Giai đo n thu ho ch Atore1-3 Atore1-4 Cây chuyển gen kìm hãm già hóa mang gen Atore1 hệ T2 Giai đo n thu ho ch Atore1-5 Atore1-6 Cây chuyển gen kìm hãm già hóa mang gen Atore1 hệ T2 Giai đo n thu ho ch Atore1-7 Atore1-8