THÔNG TIN TÀI LIỆU
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LÊ DUY TOÀN lu an Tên đề tài: n va NGHIÊN CỨU KẾT QUẢ BIẾN NẠP GEN CHỊU HẠN p ie gh tn to ZmNF-YB2 VÀO MỘT SỐ DỊNG NGƠ VIỆT NAM d oa nl w KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC nv a lu an ll fu : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Khoa : Cơng nghệ Sinh học - Cơng nghệ Thực phẩm Khóa học : 2010 - 2014 oi m Hệ đào tạo at nh z z gm @ l.c om an Lu Thái Nguyên, năm 2014 n va ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LÊ DUY TOÀN Tên đề tài: lu an NGHIÊN CỨU KẾT QUẢ BIẾN NẠP GEN CHỊU HẠN n va ZmNF-YB2 VÀO MỘT SỐ DỊNG NGƠ VIỆT NAM p ie gh tn to KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC d oa nl w Hệ đào tạo : Chính quy a lu : Công nghệ Sinh học Khoa : Công nghệ Sinh học - Công nghệ Thực phẩm an fu : 2010 - 2014 ll Khóa học nv Chuyên ngành oi m nh Giảng viên hướng dẫn: at PGS.TS Nguyễn Văn Đồng z z (Viện Di truyền Nông nghiệp) gm @ Th.S Lương Thị Thu Hường (Khoa CNSH&CNTP - Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên) l.c om an Lu Thái Nguyên, năm 2014 n va ac th si LỜI CẢM ƠN Được quan tâm, tận tình giảng dạy thầy giáo, cô giáo khoa CNSH&CNTP, Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên trang bị vốn kiến thức khoa học định để tham gia nghiên cứu thực đồ án tốt nghiệp Thời gian thực tập để thực đồ án tốt nghiệp thời gian vô quý giá để trau dồi thêm kiến thức thực tế, củng cố lý thuyết học ghế nhà trường, tiếp cận với công nghệ tiên tiến ngành theo học lu an n va p ie gh tn to Xuất phát từ kính trọng, cho phép gửi lời biết ơn sâu sắc đến thầy giáo PGS.TS Nguyễn Văn Đồng – Phó Giám đốc Viện Di truyền Nơng nghiệp Việt Nam Thầy ln tận tình bảo, dìu dắt tơi suốt q trình thực đề tài d oa nl w Tôi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành đến giáo ThS Lương Thị Thu Hường công tác Khoa CNSH&CNTP, Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên ln quan tâm, động viên, tận tình giảng dạy, củng cố kiến thức giúp tơi hồn thành khóa luận nv a lu Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến KS Nguyễn Hữu Kiên người dành nhiều thời gian quý báu để trực tiếp hướng dẫn thực nghiên cứu đề tài an Tôi xin gửi lời cảm ơn đến toàn thể giáo viên Khoa CNSH&CNTP, Trường Đại Học Nông Lâm Thái Nguyên dạy bảo tơi suốt q trình học tập ll fu oi m at nh Cuối cho phép gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè quan tâm, động viên, giúp đỡ suốt thời gian qua z z @ gm Thái Nguyên, ngày 24 tháng năm 2014 Sinh viên l.c om Lu an Lê Duy Toàn n va ac th si DANH MỤC CÁC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT lu an n va p ie gh tn to : Complementary DNA Cs : Cộng CTAB : Cetyl trimethyl ammonium bromide DNA : Deoxyribonucleic Acid EDTA : Ethylene diamine tetraacetate EtBr : Ethydium Bromide FAO : Food and Agriculture Organization NN&PTNT : Nông nghiệp phát triển nông thôn NTCB : Ngô tẻ Cao Bằng PEG : Polyethylene Glycol PCR : Polymerase Chain Reaction RNA : Axit ribonucleic RT-PCR Kĩ thuật Real Time PCR : Chỉ số đánh giá hàm lượng diệp lục : Saline-sodium citrate : Tris-acetate-EDTA SSC nv SPAD a lu d oa nl w cDNA : ll : Tris-EDTA oi m CCTB fu TE an TAE Chiều cao trung bình at nh z z gm @ l.c om an Lu n va ac th si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam MỤC LỤC Trang PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài 1.3 Yêu cầu đề tài 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU lu an n va p ie gh tn to 2.1 Sơ lược ngô 2.1.1 Nguồn gốc lan truyền ngô 2.1.2 Đặc điểm nông sinh học ngô 2.1.3 Giá trị dinh dưỡng hạt ngô 10 2.1.4 Vai trị ngơ 10 2.2 Tình hình sản xuất ngơ giới Việt Nam 11 2.2.1 Tình hình sản xuất ngô giới 11 2.2.2 Tình hình sản xuất ngơ Việt Nam 12 2.3 Các phương pháp chuyển gen thực vật 13 2.3.1 Phương pháp chuyển gen trực tiếp 13 2.3.2 Phương pháp chuyển gen gián tiếp 13 2.4 Tổng quan gen ZmNF-YB2 14 2.4.1 Tình hình nghiên cứu gen ZmNF-YB2 giới 14 2.4.2 Tình hình nghiên cứu gen ZmNF-YB2 nước 16 d oa nl w nv a lu an ll fu oi m PHẦN 3: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 at nh 3.1 Vật liệu nghiên cứu 18 3.1.1 Vật liệu thực vật 18 3.1.2 Hóa chất dụng cụ thí nghiệm 18 3.2 Phạm vi, địa điểm thời gian nghiên cứu 19 3.2.1 Phạm vi nghiên cứu 19 3.2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 19 3.3 Nội dung nghiên cứu 19 3.4 Phương pháp nghiên cứu 19 z z gm @ l.c om an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam 3.4.1 Kim tra s cú mặt gen ZmNF-YB2 ngô chuyển gen phương pháp PCR 19 3.4.2 Đánh giá khả chịu hạn ngô chuyển gen ZmNF-YB2 giai đoạn non hệ T1 22 3.4.3 Kiểm tra có mặt gen ZmNF-YB2 ngô chuyển gen hệ T1 phương pháp Southern Blot 24 3.5 Phương pháp xử lý số liệu 26 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 lu an n va p ie gh tn to 4.1 Kết xác định có mặt gen chuyển ZmNF-YB2 dịng ngơ chuyển gen hệ T0 phương pháp PCR 27 4.1.1 Kết tách chiết DNA tổng số 27 4.1.2 Kết phân tích PCR 28 4.2 Đánh giá khả chịu hạn dịng ngơ chuyển gen hệ T1 giai đoạn non 30 4.2.1 Kết đánh giá khả chịu hạn hệ T1 thông qua tiêu đo chiều cao 30 4.2.2 Kết PCR kiểm tra có mặt gen chuyển ZmNF-YB2 dịng ngô hệ T1 35 4.3 Kết phân tích, xác định có mặt gen ZmNF-YB2 dịng ngô chuyển gen hệ T1 phương pháp lai Southern Blot 37 d oa nl w a lu nv Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40 an ll fu 5.1 Kết luận 40 5.2 Kiến nghị 40 m oi TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 at nh PHỤ LỤC z z gm @ l.c om an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam DANH MC BNG BIU Trang lu an n va p ie gh tn to Bảng 2.1: Tình hình sản xuất ngô giới từ năm 2009 – 2012 11 Bảng 2.2:Tình hình sản xuất ngơ Việt Nam từ năm 2009 – 2012 12 Bảng 3.1: Danh sách dịng ngơ hệ T0 sử dụng để đánh giá khả chịu hạn hệ T1 18 Bảng 3.2: Trình tự mồi phân tích PCR 21 Bảng 4.1: Kết đo chiều cao trung bình dịng ngơ chuyển gen hệ T1 trước xử lý hạn đợt 30 Bảng 4.2: Kết đo chiều cao trung bình dịng sau đợt xử lý hạn 31 Bảng 4.3: Chiều cao trung bình dịng ngơ lơ tưới nước đầy đủ (lơ số 1) 34 Bảng 4.4: Các lựa chọn dịng để tiến hành phân tích Southern Blot 37 d oa nl w nv a lu an ll fu oi m at nh z z gm @ l.c om an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam DANH MC CC HèNH Trang lu an n va p ie gh tn to Hình 2.1: Hình ảnh ngô Hình 2.2: Hình ảnh rễ mầm, rễ đốt, rễ chân kiềng ngô Hình 2.3: Hình ảnh ngơ Hình 2.4: Cấu trúc vector biểu gen NTCB ZmNFY-B2 17 Hình 4.1: Kết điện di kiểm tra DNA tổng số gel agarose 1% 27 Hình 4.2: Kết điện di sản phẩm PCR kiểm tra có mặt gen ZmNF-YB2 hệ T0 28 Hình 4.3: A) Kết điện di sản phẩm PCR kiểm tra có mặt gen ZmNF-YB2 hệ T0; B) Marker 1kb plus 29 Hình 4.4: Biểu đồ so sánh chiều cao trung bình dịng ngơ chuyển gen 21NF.2 dịng đối chứng Vh1.2 32 Hình 4.5: Biểu đồ so sánh chiều cao trung bình dịng ngơ chuyển gen 3NF.2, 13NF.2, 15NF.2, 22NF.2 với dịng đối chứng C8H9.2 33 Hình 4.6: Kết điện di kiểm tra DNA tổng số gel agarose 1% 35 Hình 4.7: Kết điện di sản phẩm PCR kiểm tra có mặt gen chuyển ZmNF-YB2 hệ T1 36 Hình 4.8: Kết lai Southern Blot sản phẩm cắt gen ZmNF-YB2 với mẫu dị tương ứng từ dịng ngơ chuyển gen hệ T1 38 d oa nl w nv a lu an ll fu oi m at nh z z gm @ l.c om an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam PHN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề lu an n va p ie gh tn to Cây ngơ có tên khoa học Zea mays L., thuộc chi Maydeae, họ Graminaae Ngô ngũ cốc quan trọng cung cấp lương thực cho người, cung cấp nguyên liệu chế biến thức ăn chăn nuôi Ngô năm loại lương thực giới (ngơ, lúa nước, lúa mì, sắn khoai tây) [3] Năm 2010 tổng sản lượng ngơ tồn giới đạt 851173441 thu hoạch từ 164305102 (FAO,2014) [15] Ở Việt Nam ngô loại lương thực quan trọng thứ hai sau lúa, có phát triển rộng khắp, liên tục Hiện việc chọn tạo giống ngô tốt, bệnh, chất lượng cao, phẩm chất tốt, chống chịu điều kiện ngoại cảnh khắc nghiệt vấn đề quan tâm đặt hàng đầu Bên cạnh phương pháp chọn lọc truyền thống, với phát triển vượt bậc công nghệ sinh học đại tạo thực vật chuyển gen nói chung, dịng ngơ chuyển gen nói riêng mang đặc tính quý mà phương pháp truyền thống thường tốn nhiều thời gian thực Kĩ thuật chuyển gen vào ngô nghiên cứu trở thành công cụ quan trọng từ năm 1990 Hai phương pháp thường áp dụng vào chuyển gen ngô chuyển gen trực tiếp súng bắn gen chuyển gen gián tiếp vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens Một số tính trạng tập trung nghiên cứu chuyển gen vào ngơ năm qua nâng cao tính chịu mặn hay tính chịu hạn [1] Ở Việt Nam nguồn gen ngô bảo tồn Viện nghiên cứu ngô với khoảng 400 mẫu giống thụ phấn tự 3.000 dòng [9] Hạn hán yếu tố bất thuận làm giảm sinh khối thân, suất ngô giới Việt Nam, vùng trồng ngô dựa vào nguồn nước tự nhiên Theo Viện Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam diện tích trồng ngơ phụ thuộc vào nước mưa chiếm khoảng 70%, diện tích chủ động nước tưới chiếm khoảng gần 30% Ở nước ta lượng mưa hàng năm phổ biến từ 1700 – 2000 mm đủ cho nhu cầu d oa nl w nv a lu an ll fu oi m at nh z z gm @ l.c om an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam lu an n va p ie gh tn to phát triển ngô, nhiên lượng mưa tập trung theo mùa nên mùa khô ngô không đủ nước để phát triển Để cải thiện suất điều kiện hạn hán trồng nơng nghiệp nói chung ngơ nói riêng gặp phải nhiều khó khăn hiểu biết chế sinh học xảy điều kiện hạn hán hạn chế [12], [29] Hệ số di truyền tính trạng thấp, tính chất khơng thể đốn trước thời gian xảy hạn hán, mức độ hạn hán [11], [13], [18], [27] Do cần tiếp cận phát triển phương pháp nghiên cứu để cải thiện suất trồng điều kiện hạn hán Kỹ thuật chuyển gen vào ngô đạt thành cơng ban đầu q trình phát triển giống ngô chuyển gen chịu hạn Năm 2008, công ty Mosanto, công ty đầu tư mạnh công nghệ chuyển gen giới, chuyển gen chịu hạn vào ngô thành công [1] Ở Việt Nam vấn đề chuyển gen chịu hạn vào dịng ngơ tập trung tiến hành nghiên cứu [1] Tuy nhiên kết nghiên cứu kiêm tốn chưa có cơng bố thức [1] Với tiến khoa học kĩ thuật, Phịng Thí nghiệm Trọng điểm Cơng Nghệ Tế Bào Thực Vật – Viện Di truyền Nông nghiệp Việt Nam tạo số dịng ngơ chuyển gen chịu hạn ZmNF-YB2 phương pháp biến nạp thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens bước đầu thu kết Việc chuyển gen vào dịng ngơ thành cơng bước đầu, có ý nghĩa quan trọng việc chọn, tạo giống ngô biến đổi gen nước ta Các dịng ngơ chuyển gen tạo cần xác định có mặt xác định biểu gen chuyển với mục đích khẳng định khả chịu hạn so với giống ngô gốc Do nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu kết biến nạp gen chịu hạn ZmNF-YB2 vào số dịng ngơ Việt Nam“ d oa nl w nv a lu an ll fu oi m at nh z z 1.2 Mục đích đề tài @ gm Xác định có mặt biểu gen chuyển ZmNF-YB2 số dịng ngơ chuyển gen l.c om 1.3 Yêu cầu đề tài - Xác định có mặt hay khơng gen chịu hạn ZmNF-YB2 số dịng ngơ chuyển gen hệ T0 T1 kĩ thuật PCR an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam 30 dịng cho kết dương tính với gen chuyển ZmNF-YB2 Mẫu đối chứng âm không lên băng sản phẩm chứng tỏ kết PCR cơng nhận 4.2 Đánh giá khả chịu hạn dòng ngô chuyển gen hệ T1 giai đoạn non 4.2.1 Kết đánh giá khả chịu hạn hệ T thông qua tiêu đo chiều cao lu Chúng tiến hành gieo trồng dịng ngơ T1 từ hạt T0 thực đánh giá khả sinh trưởng, phát triển thông qua đo chiều cao Khi dịng ngơ hệ T1 có từ 4-6 thật tiến hành đo chiều cao lần thứ trước xử lý hạn đợt Kết lần đo thứ trình bày bảng 4.1 an n va p ie gh tn to Bảng 4.1: Kết đo chiều cao trung bình dịng ngơ chuyển gen hệ T1 trước xử lý hạn đợt Lơ Tên dịng d oa nl nv an Chiều cao TB lần đo thứ 13 13 12,75 12,1 12,45 11,85 12,1 ll fu oi m TT Tên dòng 10 11 12 13 14 Vh1.2 3NF.2 13NF.2 15NF.2 21NF.2 22NF.2 C8H9.2 at nh Vh1.1 3NF.1 13NF.1 15NF.1 21NF,1 22NF.1 C8H9.1 a lu Lô w TT (Đơn vị: Cm) Chiều cao TB lần đo thứ 12,2 12,3 12,5 12,5 12 12,5 11,7 z z @ gm Từ kết bảng 4.1 cho thấy chiều cao trung bình dịng thấp 11,7cm (C8H9) dịng có chiều cao trung bình lớn nhất 13cm (Vh1.1; 3NF.1) Chứng tỏ điều kiện tưới nước đầy đủ tất dịng ngơ hệ T1 phát triển tương tối đồng đủ điều kiện để tiến hành xử lý hạn lần l.c om an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam 31 Chỳng tụi tin hnh o chiu cao trung bình dịng ngơ sau xử lý hạn đợt xử lý hạn đợt 2, thu kết trình bày bảng 4.2 Bảng 4.2: Kết đo chiều cao trung bình dòng sau đợt xử lý hạn (Đơn vị:Cm) Chiều cao TB Chiều cao TB dòng sau xử lý hạn đợt dòng sau xử lý hạn đợt lu an Tên dòng Vh1.1 16,3 18,3 Vh1.2 14 15,1 3NF.1 15,8 18,7 3NF.2 14,75 16 13NF.1 15,7 18,7 13NF.2 14,6 16,2 15NF.1 14,85 17,95 15NF.2 14,2 15,8 15,65 18,35 14,4 15,8 15,4 18,16 14,4 15,95 n va TT p ie gh tn to d oa nl w a lu 21NF.1 10 21NF.2 11 22NF.1 12 22NF.2 13 C8H9.1 15,2 14 C8H9.2 13,7 nv an ll fu oi m at nh z 17,65 z @ gm 14,8 Dựa vào kết bảng 4.2 đưa biểu đồ so sánh chiều cao trung bình dịng chuyển gen dịng gốc tạo chúng (dòng đối chứng) để đánh giá khả sinh trưởng dòng chuyển gen điều kiện xử lý hạn hán (lô số 2) l.c om an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam 32 Dịng ngơ chuyển gen 21NF tạo từ dịng ngô gốc ban đầu Vh1 nên lựa chọn dịng 21NF.2 (dịng 21NF thuộc lơ số 2, kí kiệu 21NF.2) dòng Vh1.2 để so sánh chiều cao với (hình 4.4) Biể u đồ so s ánh chiề u cao trung bình dịng ngơ chuyể n gen 21NF.2 dòng đối chứng Vh1.2 18 16 14 12 Vh1.2 Cm 10 21NF.2 lu an va n p ie gh tn to Các giai đoạn xử lý hạn w Hình 4.4: Biểu đồ so sánh chiều cao trung bình dịng ngơ chuyển gen 21NF.2 dịng đối chứng Vh1.2 d oa nl Ghi chú: 1: Chiều cao trung bình trước xử lý hạn; 2: Chiều cao trung bình sau xử lý hạn đợt 1; 3: Chiều cao trung bình sau đợt xử lý hạn đợt a lu nv Từ hình 4.4 cho thấy: - Giai đoạn trước xử lý hạn đợt 1, chiều cao trung bình dịng 21NF.2 12cm, cịn dịng Vh1.2 12,2cm Ở giai đoạn dịng có phát triển tương đối đồng - Giai đoạn sau xử lý hạn đợt 1, chiều cao trung bình dòng 21NF.2 14.35cm cao 0,35cm so với dòng đối chứng Vh1.2 (14cm) - Giai đoạn sau xử lý hạn đợt 2, chiều cao trung bình dòng 21NF.2 15,8cm cao 0,7cm so với dòng đối chứng Vh1 (15,1cm) Kết phân tích cho thấy, trước xử lý hạn dòng chuyển gen 21NF.2 dịng đối chứng Vh1.2 có phát triển tương đối đồng Nhưng sau đợt xử lý hạn dịng 21NF.2 tỏ có khả phát triển tốt so với dòng đối chứng an ll fu oi m at nh z z gm @ l.c om an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam 33 Các dịng ngơ chuyển gen 3NF, 13NF, 15NF, 22NF tạo từ dịng ngơ gốc ban đầu C8H9, nên chúng tơi lựa chọn dịng gốc ban đầu C8H9.2 (lô số 2) để so sánh chiều cao trung bình với dịng 3NF.2, 13NF.2, 15NF.2, 22NF.2 (lơ số 2) So sánh trình bày hình 4.5 Cm Biểu đồ so sánh dịng ngơ chuyển gen dòng đối chứng lu an n va 18 16 14 12 10 3NF.2 13NF.2 15NF.2 22NF.2 C8H9.2 p ie gh tn to Các giai đoạn xử lý hạn w Hình 4.5: Biểu đồ so sánh chiều cao trung bình dịng ngơ chuyển gen 3NF.2, 13NF.2, 15NF.2, 22NF.2 với dịng đối chứng C8H9.2 d oa nl Ghi chú: 1: Chiều cao trung bình trước xử lý hạn; 2: Chiều cao trung bình sau xử lý hạn đợt 1; 3: Chiều cao trung bình sau đợt xử lý hạn đợt a lu nv Từ hình 4.5 cho thấy: - Giai đoạn trước xử lý hạn đợt 1, dịng ngơ chuyển gen có chiều cao trung bình từ 12,3-12,5cm chiều cao trung bình dịng đối chứng 12,85cm - Giai đoạn sau xử lý hạn đợt 1, dịng 15NF.2 có chiều cao 14,2cm dịng có chiều cao trung bình thấp số dịng chuyển gen Dịng 3NF.2 có chiều cao trung bình 14,75 cm dịng cao số dịng chuyển gen Chiều cao trung bình dòng chuyển gen 3NF.2, 13NF.2, 15NF.2 22NF.2 14,5cm cao 0,78cm so với chiều cao trung bình dòng đối chứng C8H9 (13,72cm) Sau đợt xử lý hạn cho thấy, điều kiện hạn hán dịng chuyển gen có phát triển tốt so với dòng đối chứng an ll fu oi m at nh z z gm @ l.c om an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam 34 lu - Giai đoạn sau xử lý hạn đợt 2, dịng 15NF.2 có chiều cao 15,8cm dịng có chiều cao trung bình thấp số dịng chuyển gen Dịng 13NF.2 có chiều cao trung bình 16,27cm dòng cao số dòng chuyển gen Chiều cao trung bình dịng chuyển gen 3NF.2, 13NF.2, 15NF.2 22NF.2 16,02cm cao 1,19cm so với chiều cao trung bình dịng đối chứng C8H9.2 (14,83cm) Sau đợt xử lý hạn thứ hai cho thấy, điều kiện hạn hán dòng chuyển gen có phát triển tốt so với dịng đối chứng Kết thút đợt xử lý hạn thứ 2, tiến hành đo chiều cao tất dịng ngơ lơ tưới nước đầy đủ (lơ số 1) để kiểm tra có khác hay khơng dịng chuyển gen dịng đối chứng điều kiện tưới nước đầy đủ (bảng 4.3) an va n Bảng 4.3: Chiều cao trung bình dịng ngơ lơ p ie gh tn to tưới nước đầy đủ (lơ số 1) TT Tên dịng 18,3 C8H9.1 (đối chứng) 17,65 3NF.1 18,7 22NF.1 18,35 18,16 at nh 21NF.1 oi 17,95 m 15NF.1 ll 18,7 fu 13NF.1 an nv a lu Vh1.1 (đối chứng) d oa nl w (Đơn vị: Cm) Chiều cao TB dòng lô tưới nước đầy đủ z Từ bảng 4.3 cho thấy sau kết thúc đợt xử lý hạn lần 2: z gm @ - Dịng Vh1.1 có chiều cao trung bình 18,3cm tương đương so với chiều cao trung bình dịng chuyển gen 21NF.1 l.c - Dịng 15NF.1 có chiều cao 17,95cm dịng có chiều cao trung bình thấp số dịng chuyển gen Dịng 3NF.1 dịng 13NF.1 có chiều cao trung bình 18,7cm dịng cao số dịng chuyển gen Chiều cao trung bình dòng chuyển gen 3NF.1, 13NF.1, 15NF.1 22NF.1 om an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam 35 18,3cm cao 0,65cm so với chiều cao trung bình dòng đối chứng C8H9.1 (17,65cm) Sau đợt xử lý hạn thứ cho thấy, điều kiện tưới nước đầy đủ dịng chuyển gen có phát triển tốt so với dòng đối chứng Do dòng chuyển gen hệ T0 có số lượng hạt ít, khơng đủ để chúng tơi tiến hành lặp lại thí nghiệm lần nên chưa thể đưa kết luận chắn dịng ngơ chuyển gen có khả sinh trưởng, phát triển tốt dịng đối chứng (dòng gốc) ban đầu 4.2.2 Kết PCR kiểm tra có mặt gen chuyển ZmNF-YB2 dịng ngơ hệ T lu an n va p ie gh tn to Khi T1 có từ 4-6 thật tiến hành thu mẫu tách chiết DNA tất dòng thuộc lô số (lô xử lý hạn) để xác định mang gen chuyển dòng trước xử lý hạn đợt Mẫu DNA thu sau tách chiết kiểm tra chất lượng cách lấy ngẫu nhiên mẫu dòng điện di agarose 1% Lượng DNA tổng số dùng điện di 4µl 1µl loadingdye, điện di 120V 30 phút (hình 4.6) d oa nl w nv a lu an ll fu Hình 4.6: Kết điện di kiểm tra DNA tổng số gel agarose 1% 1: 3NF.2.2 4: 13NF.2.6 7: 21NF.2.4 13: C8H9.2.7 2: 3NF.2.3 5: 15NF.2.1 8: 21NF.2.6 11: Vh1.2.1 14: C8H9.2.8 3: 13NF.2.3 6: 15NF.2.2 9: 22NF.2.1 12: Vh1.2.2 M: Marker oi 10 22NF.2.9 at m Ghi chú: nh z z @ gm Kết điện di hình 4.6 cho thấy DNA tổng số sau tách chiết bị đứt gãy, băng điện di rõ nét, RNase loại bỏ gần hoàn toàn, nồng độ DNA cao đủ điều kiện để sử dụng tiến hành thí nghiệm Sau tách chiết, DNA sử dụng để tiến hành PCR kiểm tra có mặt gen chuyển ZmNF-YB2 dịng ngơ chuyển gen hệ T1 l.c om an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam 36 Trong thí nghiệm tơi chọn ngẫu nhiên DNA dịng để tiến hành phân tích PCR Riêng dòng đối chứng Vh1 C8H9 dịng sử dụng mẫu để phân tích PCR làm đối chứng Kết phân tích PCR xác định có mặt gen chuyển ZmNF-YB2 hệ T1 trình bày hình 4.7 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nv Ghi chú: a lu Hình 4.7: Kết điện di sản phẩm PCR kiểm tra có mặt gen chuyển ZmNF-YB2 hệ T1 an 6: 13NF.2.2 11: 15NF.2.1 16: 21NF.2.1 21: 22NF.2.3 M: Marker 2: 3NF.2.2 7: 13NF.2.5 12: 15NF.2.3 17: 21NF.2.2 22: 22NF.2.4 (+: Plasmid 3: 3NF.2.3 8: 13NF.2.6 13: 15NF.2.6 18: 21NF.2.5 23: 22NF.2.6 (-): H2O 4: 3NF.2.4 9: 13NF.2.7 14: 15NF.2.8 19: 21NF.2.7 24: 22NF.2.7 N2:: Vh1.2.2 5: 3NF.2.5 10: 13NF.2.9 15: 15NF.2.9 25: 22NF.2.10 N2: C8H9.2.1 ll fu 1: 3NF.2.1 oi m at nh 20: 21NF.2.8 z z Mỗi dòng ngô lô thứ (lô xử lý hạn) tiến hành thí nghiệm phân tích PCR với Các @ 3NF.2.1 hiểu dịng 3NF, lơ số 2, số gm kí hiệu theo thứ tự tên dòng, tên lơ số thứ tự lơ Ví dụ: kí hiệu l.c om an Lu Kết điện di hình 4.7 cho thấy trừ 3NF.2.3 (giếng điện di số 3), tất giếng điện di cịn lại hiển thị băng rõ nét, có kích thước 238bp tương ứng với kích thước sản phẩm PCR ca DNA plasmid mang gen n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam 37 ZmNF-YB2 Sn phm PCR khụng c hỡnh thành sử dụng DNA khuôn từ đối chứng khơng chuyển gen (giếng kí hiệu N1 N2) Như kết phân tích PCR hệ T1 cho thấy dịng ngơ chuyển gen có dịng cho kết dương tính với gen chuyển ZmNF-YB2 sở để tiến hành phân tích để khẳng định có mặt gen dịng ngơ chuyển gen 4.3 Kết phân tích, xác định có mặt gen ZmNF-YB2 dịng ngơ chuyển gen hệ T1 phương pháp lai Southern Blot lu an n va p ie gh tn to Để tiếp tục khẳng định có mặt gen chuyển ZmNF-YB2 dịng ngơ chuyển gen 3NF, 13NF, 15NF, 21NF, 22NF mẫu DNA tổng số tách chiết từ dịng lơ số tiếp tục phân tích kĩ thuật lai Southern Blot với mẫu dị đánh dấu DIG có độ dài 720 bp Do dòng nhận số đoạn chèn nên lựa chọn 1-2 mẫu dịng T1 (các kí hiệu theo thứ tự tên dịng, lên lơ số thứ tự Ví dụ: Kí hiệu 3NF.2.2 dịng 3NF, lơ số 2, thứ 2) cho kết PCR dương tính với gen ZmNF-YB2 để tiến hành thí nghiệm lai Southern Blot (bảng 4.4) w Âm tính Vh1.2.1 (N) - nv Tên a lu TT d oa nl Bảng 4.4: Các lựa chọn dịng để tiến hành phân tích Southern Blot Dương tính an 3NF.2.2 13NF.2.5 13NF.2.6 15NF.2.6 15NF.2.9 21NF.2.7 22NF.2.4 22NF.2.6 + fu ll + m oi + nh at + z + z gm @ + + l.c + om Ghi chú: (N): Cây đối chứng; (-): Kết âm tính với PCR; (+): Kết dương tính với PCR an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam 38 DNA tổng số bảng 4.4 cắt enzyme giới hạn EcoRI Trong thiết kế vector chuyển gen, vector pZY10135S mang gen ZmNF-YB2 có vị trí cắt enzyme cắt giới hạn EcoRI trình tự gen ZmNF-YB2 khơng có vị trí nhận biết enzyme nên plasmid có băng lai Southern Blot Do đề tài nghiên cứu chúng tơi sử dụng enzyme EcoRI để cắt đoạn DNA mang gen ZmNF-YB2 từ DNA tổng số ngô Kết lai Southern Blot trình bày hình 4.8 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nv a lu Hình 4.8: Kết lai Southern Blot sản phẩm cắt gen ZmNF-YB2 với mẫu dò tương ứng từ dòng ngô chuyển gen hệ T1 an Ghi chú: fu 4: 15NF.2.6 2: 13NF.2.5 5: 15NF.2.9 3: 13NF.2.6 6: 21NF.2.7 ll 1: 3NF.2.2 oi m 7: 22NF.2.4 (+): plasmid 8: 22NF.2.6 N: Vh1.2.1 at nh M: Marker kb plus z z Kết lai Southern Blot (hình 4.8) cho thấy, tất chuyển gen phân tích xuất tín hiệu lai gen ZmNF-YB2 mẫu dị tương ứng nhìn thấy mắt thường, băng lai có kích thước khoảng 800bp Chứng tỏ tất mang gen chịu hạn ZmNF-YB2 Tuy nhiên trình lai chưa tối ưu nên làm phần băng có kích thước lớn 1000 bp khơng rõ ràng khơng thể kết luận có gm @ l.c om an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam 39 đoạn T-DNA mang gen chuyển chèn vào hệ gen Kết nghiên cứu hoàn toàn phù hợp với kết phân tích kĩ thuật PCR Như vậy, từ kết phân tích PCR dịng ngơ chuyển gen hệ T0 với kết phân tích PCR Southern Blot hệ T1, cho thấy dịng ngơ mang gen chuyển ZmNF-YB2 Khi phân tích chiều cao dịng ngô trước sau xử lý hạn đợt đợt cho thấy ngô chuyển gen hệ T1 phát triển tốt so với dòng đối chứng điều kiện hạn hán Điều chứng tỏ gen chịu hạn ZmNF-YB2 biểu thể khả chịu hạn dịng ngơ chuyển gen hệ T1 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nv a lu an ll fu oi m at nh z z gm @ l.c om an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam 40 Phn KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận lu an n va p ie gh tn to Từ kết nghiên cứu thu được, đưa kết luận sau: Phân tích 20 dịng ngơ chuyển gen 1NF, 2NF, 3NF, 4NF, 5NF, 6NF, 7NF, 6NFa, 6NFb, 11NF, 13NF, 14NF, 15NF, 16NF, 17NF, 18NF, 19NF, 21NF, 22NF, 35bNF hệ T0 phương pháp PCR cho thấy 10/20 dịng ngơ chuyển gen cho kết dương tính với gen chuyển ZmNF-YB2 Chứng tỏ 10 dịng ngơ chuyển gen cho kết PCR dương tính mang gen chuyển ZmNF-YB2 Chúng đánh giá đặc tính nơng sinh học dịng ngô chuyển gen chịu hạn ZmNF-YB2 hệ T1 cách đo chiều cao Kết cho thấy dịng ngơ chuyển gen ZmNF-YB2 điều kiện hạn hán có khả phát triển tốt dịng đối chứng Kiểm tra có mặt gen chuyển ZmNF-YB2 dịng ngơ hệ T1 phương pháp PCR cho thấy tất các dịng đem phân tích cho kết dương tính Tiến hành phân tích lai Southern Blot để khẳng định có mặt gen chuyển ZmNF-YB2 dịng ngơ chuyển gen hệ T1 Kết cho thấy dịng ngơ chuyển gen xuất tín hiệu lai gen ZmNF-YB2 mẫu dò Tuy nhiên quy trình Southern Blot chưa tối ưu nên khơng thể xác định số đoạn T-DNA chèn vào hệ gen dịng ngơ phân tích d oa nl w nv a lu an ll fu 5.2 Kiến nghị m oi Tiếp tục đánh giá lại dòng T1 chưa đánh giá có mặt gen ZmNF-YB2 phương pháp PCR để làm sở cho phân tích chuyển gen sau Không dừng lại đánh giá sinh trưởng phát triển dòng ngô chuyển gen thông qua tiêu đo chiều cao Cần mở rộng thêm phương pháp đánh giá đồng ruộng, phịng thí nghiệm để đánh giá khả sinh trưởng phát triển dịng ngơ chuyển gen Tiếp tục tiến hành tối ưu phương pháp phân tích Southern Blot để khẳng định mang gen ZmNF-YB2 xác định số đoạn chèn gen vào hệ gen dịng ngơ chuyển gen at nh z z gm @ l.c om an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam 41 TI LIU THAM KHO lu an n va p ie gh tn to I Tiếng Việt Báo cáo khoa học “Hội nghị khoa học Công nghệ sinh học tồn quốc (2013).Quyển hai Cơng nghệ sinh học Vi sinh, Công nghệ sinh học Thực vật” NXB Khoa học tự nhiên Công nghệ Bùi Mạnh Cường (2007), Công nghệ sinh học chọn tạo giống Ngô NXB Nông Nghiệp Đường Hồng Dật (2001), Cây ngô: kỹ thuật thâm canh tăng suất, Nxb Lao động – Xã hội Nguyễn Văn Đồng Nguyễn Hữu Kiên (2013), Thiết kế vector biểu gen chịu hạn NTCB ZmNF-YB2 ngơ Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nơng thơn No.7.2013.pp 31-37 Trương Văn Đích (2005), Kĩ Thuật trồng giống ngô xuất cao, Nxb Nơng nghiệp Hà Nội, tr.26 Nguyễn Hữu Hồng (2009) “Giá trị dinh dưỡng ngô”, Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam Lê Thị Ánh Hồng (2000) Cơ sở khoa học công nghệ chuyển gen thực vật, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Đức Lương, Dương Văn Sơn, Lương Văn Hinh (2000), Giáo trình ngơ, Nxb Nơng nghiệp Ngơ Hữu Tình, Trần Hồng Uy, Bùi Mạnh Cường, Võ Đình Long, Lê Quý Kha, Nguyễn Thế Hùng (1997) Cây ngô, nguồn gốc, đa dạng di truyền q trình phát triển NXB Nơng nghiệp 10 Ngơ Hữu Tình (2003), Giáo trình ngơ, Nxb Nghệ An 11 Phạm Văn Ty, Vũ Nguyên Thành (2007), Công nghệ sinh học tập công nghệ vi sinh môi trường, Nxb Giáo dục II Tiếng Anh 11 Bressan RA, Zhang C, Zhang H, Hasegawa PM, Bohnert HJ, Zhu JK (2001), “Learning from the Arabidopsis experience The next gene search paradigm” Plant Physiol 2001;127:1354–1360 d oa nl w nv a lu an ll fu oi m at nh z z gm @ l.c om an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam 42 lu an n va p ie gh tn to 12 Bruce WB, Edmeades GO, Barker TC (2002), “Molecular and physiological approaches to maize improvement for drought tolerance” 53:13–25 13 Cushman JC, Bohnert HJ (2000), “Genomic approaches to plant stress tolerance” Curr Opin Plant Biol;3:117–124 14 Edwards D, Murray JA, Smith AG (1998), “Multiple Genes Encoding the Conserved CCAAT-Box Transcription Factor Complex Are Expressed in Arabidopsis” Plant Physiol 1998;117:1015–1022 15 FAOSTAT (2014) http://faostat.fao.org/ 16 Gusmaroli G, Tonelli C, Mantovani R (2001), “Regulation of the CCAATBinding NF-Y subunits in Arabidopsis thaliana” Gene 2001;264:173– 185 17 Gusmaroli G, Tonelli C, Mantovani R (2002), “Regulation of novel members of the Arabidopsis thaliana CCAAT-binding nuclear factor Y subunits” Gen 283:41–48 18 Gutterson N, Zhang JZ (2004), “Genomics applications to biotech traits: a revolution in progress?” 55:2343–2351 19 Kazuo N., Kazuko Y.S (2005), Molecular studies on stress-responsive gene expression in Arabidopsis and improvement of stress tolerance in crop plants by regulon biotechnology 20 Lance Gibson, Garren Benson (2014), “Origin, history, and Uses of Corn”, Lowa State University, Department of Agronomy 21 Li W.X, Oono Y, Zhu J, He X.J, Wu J.M, Iida K, Lu X.Y, Cui X, Jin H, Zhu J.K (2008), The arabidopsis NFYA5 transcription factor is regulated transcriptionally and posttrancriptionally to promote drought resistance, The plant cell 22 Mantovani R (1999), “The molecular biology of the CCAAT-binding factor NF-Y”.239(1):15-27 23 Manuela M.C., João P.M., João S.P (2003) “Understanding plant response to drought from genes to the whole plant” Functional Plant Biology.30:239-264 24 Nelson D.E., Repetti P.P., Adams T.R., Creelman R.A., Wu J., Warney D.C., Anstrom D.C., Bensen R.J., Castiglioni P.P., Donnarummo M.G., HinChey B.S., Kumimoto R.W., Maszle D.R., Canales R.D., d oa nl w nv a lu an ll fu oi m at nh z z gm @ l.c om an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam 43 25 26 27 lu an n va 28 p ie gh tn to Krolikowski K.A., Dotson S.B., Gutterson N., Ratcliffe O.J., Heard J.E., (2007) Plant nucleare factor Y (NF-Y) B subunits confer drought tolerance and lead to improved corn yields on water-limted acres Saghai Maroof M,A,, et al (1984), “Ribosomal DNA spacer leght polymorphism in barley, Mendelian inheritance, chromosomal location DNA population dynamics”, proc Natl Acad, Sic, USA 81 Sharp RE, Poroyko V, Hejlek LG, Spollen WG, Springer GK, Bohnert HJ, Nguyen HT (2004), “Root growth maintenance during water deficits: physiology to functional genomics” Curr Opin Plant Biol 2004;7:226–230 Tuberosa R, Salvi S, Sanguineti MC, Landi P, Maccaferri M, Conti S (2002), “Mapping QTLs regulating morpho-physiological traits and yield: case studies, shortcomings and perspectives in drought-stressed maize” Vavilov N.I (1926), “Studies on the Conbining Ability of CIMMYT Germplasm” CIMMYT Research Highlights Pp 24-33 d oa nl w nv a lu an ll fu oi m at nh z z gm @ l.c om an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam si (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam (Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam(Luỏưn.vn).nghiên.cỏằâu.kỏt.quỏÊ.biỏn.nỏĂp.gen.chỏằu.hỏĂn.zmnf.yb2.vo.mỏằt.sỏằ.dng.ng.viỏằt.nam
Ngày đăng: 14/10/2023, 17:07
Xem thêm: