Định lượng đồng thời paracetamol, chlorpheniramine maleate và phenylephrine hydrochloride trong thuốc decolgen forte bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao và phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGUYỄN HỮU TRUNG ĐINH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PARACETAMOL, ̣ CHLORPHENIRAMINE MALEATE VÀ PHENYLEPHRINE HYDROCHLORIDE TRONG THUỐC DECOLGEN FORTE BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VÀ PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ HẤP THỤ PHÂN TỬ Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã số: 60.44.01.18 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC VẬT CHẤT Hướng dẫn khoa học: PGS.TS MAI XUÂN TRƯỜNG THÁI NGUYÊN - NĂM 2016 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN Tai ngay!!! Ban co the xoa dong chu nay!!! http://www.lrc.tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng bấ t cứ mô ̣t công trình nào Tôi xin cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Thái Nguyên, tháng 06 năm 2016 Tác giả luận văn NGUYỄN HỮU TRUNG Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN i http://www.lrc.tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập thực luận văn tác giả nhận nhiều quan tâm, động viên giúp đỡ thầy giáo, giáo, bạn bè gia đình Tác giả bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: Khoa Hóa ho ̣c, Phòng Đào tạo Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên, thầy cô giáo tham gia giảng dạy cung cấp kiến thức giúp tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tác giả xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo PGS.TS Mai Xuân Trường người tận tình hướng dẫn bảo giúp đỡ tơi suốt q trình nghiên cứu, thực hồn thành luận văn Cuối tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè đồng nghiệp người bên tôi, động viên khuyến khích tơi q trình thực đề tài nghiên cứu Với khối lượng cơng việc lớn, thời gian nghiên cứu có hạn, khả nghiên cứu còn ̣n chế, chắn luận văn tránh khỏi thiếu sót Tác giả mong nhận ý kiến đóng góp từ thầy giáo, cô giáo bạn đọc Xin chân thành cảm ơn ! Thái Nguyên, tháng năm 2016 Tác giả Nguyễn Hữu Trung Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ii http://www.lrc.tnu.edu.vn MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục từ viết tắt luận văn iv Danh mục bảng luận văn v Danh mục hình luận văn vi MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 1.1.1 Khái niệm nguyên tắc phương pháp HPLC 1.1.2 Một số đại lượng đặc trưng phân tích sắc ký 1.1.3 Hệ thống máy HPLC 1.1.4 Pha tĩnh 1.1.5 Pha động 1.2 Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử 1.2.1 Định luật Bughe - Lămbe – Bia 1.2.2 Định luật cộng tính 1.2.3 Phương pháp lọc Kalman ……………………………………… 10 1.3 Tổng quan chất phân tích thuốc Decolgen forte 11 1.3.1 Paracetamol 11 1.3.2 Phenylephrine hydrochloride 12 1.3.3 Chlorpheniramine maleate 12 1.4 Kết xác định số chất theo phương pháp HPLC theo phương pháp UV-Vis 13 1.4.1 Một số kết xác định thành phần theo phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử 13 1.4.2 Một số kết xác định thành phần theo phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 16 Chương THỰC NGHIỆM 23 2.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.2 Phương pháp nghiên cứu 23 2.2.1 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 23 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN iii http://www.lrc.tnu.edu.vn 2.2.2 Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử 24 2.3 Phương pháp xử lý số liệu 25 2.3.1 Các phương pháp để xử lý kết phân tích 25 2.3.2 Các đại lượng đặc trưng để xử lý kết phân tích 25 2.4 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 27 2.4.1 Thiết bị 27 2.4.2 Dụng cụ 27 2.4.3 Hóa chất 27 2.4.4 Chế phẩm thuốc Decolgen forte 28 2.5 Chuẩn bị dung môi để hò a tan mẫu 28 2.6 Chuẩn bị dung dịch chuẩn cho phương pháp HPLC 28 2.7 Chuẩn bị dung dịch thuốc Decolgen forte cho phương pháp HPLC 30 2.8 Chuẩn bị dung dịch chuẩn cho phương pháp UV-Vis 30 2.9 Chuẩn bị dung dịch thuốc Decolgen forte cho phương pháp UV-Vis 31 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 Phương pháp HPLC 32 3.1.1 Xây dựng điều kiện để xác định đồng thời chất PRC, CPM PNH 32 3.1.2 Đánh giá phương pháp định lượng 36 3.2 Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử 43 3.2.1 Khảo sát phổ hấp thụ phân tử paracetamol, chlorpheniramine maleate phenylephrine Hydrochloride .44 3.2.2 Khảo sát phụ thuộc độ hấp thụ quang PRC, CPM PNH vào môi trường axit ở giá tri pH ̣ khác nhau……………………………………… 46 3.2.3 Khảo sát phụ thuộc độ hấp thụ quang PRC, CPM PNH theo thời gian 47 3.2.4 Khảo sát phụ thuộc độ hấp thụ quang PRC, CPM PNH theo nhiệt độ 48 3.2.5 Khảo sát khoảng tuyến tính tuân theo định luật Bughe – Lambe – Bia PRC, CPM PNH Xác định số LOD LOQ 50 3.2.6 Khảo sát đánh giá độ tin cậy phương pháp nghiên cứu mẫu tự pha 57 3.2.7 Xác định hàm lượng PRC, CPM PNH thuốc Decolgen forte đánh giá độ của phép phân tích theo phương pháp thêm chuẩn 64 KẾT LUẬN 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT CỦA LUẬN VĂN Tiếng việt Tiếng Anh Viết tắt Paraxetamon Paracetamol PRC Clopheninamin maleat Chlorpheniramine maleate CPM Phenylephin hidrocloric Phenylephrine hydrochloride PNH Giới hạn phát Limit Of Detection LOD Giới hạn định lượng Limit Of Quantity LOQ Độ thu hồi Recovery Rev Sai số tương đối Relative Error RE Độ lệch chuẩn Standard Deviation SD Sắc ký lỏng hiệu cao High Performance Liquid Chromatography Độ hấp thụ quang Absorption iv Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn HPLC Abs DANH MỤC CÁC BẢNG CỦA LUẬN VĂN Bảng 3.1 Giá trị đại lượng đặc trưng 36 Bảng 3.2 Kết khảo sát thời gian lưu 36 Bảng 3.3 Kết khảo sát diện tích pic 37 Bảng 3.4 Mối tương quan nồng độ diện tích pic PRC, CPM PNH 38 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ lặp lại 41 Bảng 3.6 Kết phân tích thuốc Decolgen forte 43 Bảng 3.7 Kết khảo sát độ 42 Bảng 3.8 Kế t quả đô ̣ hấ p thu ̣ quang thời điể m 30 phút sau pha của PRC, CPM PNH ở các giá tri ̣pH 46 Bảng 3.9 Sự phu ̣ thuô ̣c độ hấp thụ quang theo thời gian 47 Bảng 3.10 Sự phu ̣ thuô ̣c độ hấp thụ quang theo nhiệt độ 49 Bảng 3.11 Đô ̣ hấ p thu ̣ quang của dung dịch PRC ở các giá tri ̣nồng độ 50 Bảng 3.12 Kết xác đinh ̣ LOD LOQ PRC 52 Bảng 3.13 Sự phu ̣ thuô ̣c đô ̣ hấ p thu ̣ quang của CPM theo nồng độ 53 Bảng 3.14 Kết tính LOD LOQ CPM 54 Bảng 3.15 Sự phu ̣ thuô ̣c đô ̣ hấ p thu ̣ quang của PNH theo nồ ng độ 55 Bảng 3.16 Kết tính LOD LOQ PNH 57 Bảng 3.17 Pha chế các dung dich ̣ hỗn hơ ̣p PRC và CPM 57 Bảng 3.18 Kế t quả tin ́ h nồ ng đô ̣, sai số của PRC và CPM hỗn hơ ̣p 58 Bảng 3.19 Pha chế các dung dich ̣ hỗn hơ ̣p PRC và PNH 59 Bảng 3.20 Kế t quả tin ́ h nồ ng đô ̣, sai số của PRC và PNH hỗn hơ ̣p 60 Bảng 3.21 Pha chế các dung dich ̣ hỗn hơ ̣p CPM PNH 61 Bảng 3.22 Kế t quả tính nồ ng đô ̣, sai số của CPM PNH hỗn hơ ̣p 62 Bảng 3.23 Pha dung dịch chuẩ n PRC, CPM, PNH và hỗn hơ ̣p 63 Bảng 3.24 Kế t quả tính nồ ng đô ̣, sai số của PRC, CPM PNH 63 Bảng 3.25 Kết tính nồng độ, sai số PRC, CPM PNH mẫu thuốc Decolgen forte 65 Bảng 3.26 Kết xác định độ thu hồi PRC, CPM PNH mẫu thuốc Decolgen forte 66 v Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC HÌNH CỦA LUẬN VĂN Hình 1.1.Thờig ian lưu cấu tử phân tích Hình 1.2 Sơ đồ hệ thống máy HPLC Hình 1.3 Hình ảnh máy HPLC phịng thí nghiệm Hình 1.4 Mơ hình hoạt động lọc Kalman 10 Hình 2.1 Chế phẩm thuốc Decolgen forte 28 Hình 3.1 Sắc kí đồ PRC (500 µg/mL) 34 Hình 3.2 Sắc kí đồ CPM (4 µg/mL) 34 Hình 3.3 Sắc kí đồ PNH (10 µg/mL) 35 Hình 3.4 Sắc kí đồ PRC (3), CPM (2) PNH (1) 35 Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích pic PRC 39 Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích pic CPM 39 Hình 3.7 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích pic PNH 40 Hình 3.8 Phổ hấp thụ quang dung dịch chuẩn PRC(1), CPM(2) PNH(3) 45 Hình 3.9 Sự phụ thuộc độ hấp thụ quang theo thời gian 48 Hình 3.10 Sự phu ̣ thuô ̣c đô ̣ hấ p thu ̣ quang theo nhiê ̣t 49 ̣ Hình 3.11 Phổ hấp thụ quang PRC nồng độ 1,0 50,0 g/mL 50 Hình 3.12 Đường hồ i quy tuyế n tính biể u diễn sự phu ̣ thuô ̣c của đô ̣ hấ p thu ̣ quang vào nồ ng đô ̣ PRC 51 Hình 3.13 Phổ hấp thụ quang CPM nồng độ 150 g/mL 52 Hình 3.14 Đường hồi quy tuyến tính biểu diễn phụ thuộc độ hấp thụ quang vào nồng độ CPM 53 Hình 3.15 Phổ hấp thụ quang PNH nồng độ 1,0 50,0 g/mL 55 Hình 3.16 Đường hồ i quy tuyế n tính biể u diễn sự phu ̣ thuô ̣c của đô ̣ hấ p thu ̣ quang vào nồ ng đô ̣ PNH 56 vi Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Ngày nay, với phát triển mạnh mẽ khoa học kỹ thuật, ngành công nghệ dược phẩm phát triển cách nhanh chóng Các nhà sản xuất dược phẩm áp dụng nhiều phương thức sản xuất chế biến tiên tiến để tổng hợp nhiều loại dược phẩm có tính vượt trội Nhiều loại thuốc hỗn hợp cảm cúm, hạ sốt, nhức đầu, ho… Với thành phần khác ngày sản xuất sử dụng rộng rãi nước ta Việc định lượng hoạt chất loại thuốc hỗn hợp theo tiêu chuẩn nhà sản xuất quan trọng cần thay đổi lượng nhỏ thành phần hoạt tính thuốc ảnh hưởng đến sức khỏe hàng nghìn, hàng triệu người Do để đánh giá chất lượng sản phẩm cách nhanh chóng, xác, an tồn hiệu cơng tác kiểm nghiệm để xác định thành phần thuốc phương pháp đại có độ xác cao ngày quan tâm Nhiều phương pháp có độ lặp độ xác cao ứng dụng Sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao, phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử dùng phổ toàn phần kết hợp với kỹ thuật tính tốn ứng dụng phần mềm máy tính nghiên cứu cho nhiều ưu điểm độ nhạy, độ lặp, độ xác, độ tin cậy phép phân tích cao, phân tích nhanh, tiện lợi Xuấ t phát từ những lý chọn đề tài: "Định lượng đồng thời paracetamol, Chlorpheniramine maleate Phenylephrine hydrochloride thuốc Decolgen forte phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử " Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC chữ viết tắt 04 chữ đầu tiếng Anh phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) trước gọi phương pháp sắc ký lỏng cao áp (High Pressure Liquid Chromatography) Phương pháp đời từ năm 1967-1968 sở phát triển cải tiến từ phương pháp sắc ký cột cổ điển Hiện phương pháp HPLC ngày phát triển đại hố cao nhờ phát triển nhanh chóng ngành chế tạo máy phân tích Hiện áp dụng lớn nhiều ngành kiểm nghiệm đặc biệt ứng dụng cho ngành kiểm nghiệm thuốc Máy HPLC công cụ đắc lực phân tích thuốc đa thành phần cho phép định tính định lượng 1.1.1 Khái niệm nguyên tắc phương pháp HPLC 1.1.1.1 Khái niệm Sắc ký lỏng hiệu cao phương pháp chia tách pha động chất lỏng pha tĩnh chứa cột chất rắn phân chia dạng tiểu phân chất lỏng phủ lên chất mang rắn, hay chất mang biến đổi liên kết hố học với nhóm chức hữu Quá trình sắc ký lỏng dựa chế hấp phụ, phân bố, trao đổi ion hay phân loại theo kích cỡ (Rây phân tử) 1.1.1.2 Nguyên tắc Sắc ký lỏng hiệu cao phương pháp tách hỗn hợp chất lỏng dựa phân bố chúng hai pha, pha đứng yên gọi pha tĩnh, pha di chuyển gọi pha động Do lực hấp thu giải hấp thu khác hợp phần có mẫu phân tích với pha tĩnh pha động mà chúng di chuyển dọc theo pha tĩnh (cột sắc ký) tốc độ khác nên khỏi cột Pha tĩnh yếu tố quan trọng định chất trình sắc ký loại sắc ký Nếu pha tĩnh chất hấp phụ ta có sắc ký hấp phụ pha thuận pha đảo Nếu pha tĩnh chất trao đổi ion ta có sắc ký trao đổi ion Nếu pha tĩnh chất lỏng ta có sắc ký phân bố Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Bảng 3.16 Kết tính LOD LOQ PNH B SD LOD LOQ 0,008 7,1.10-4 0,266 (g/mL) 0,89 (g/mL) Nhận xét: Khoảng tuyế n tính của PNH dung môi HCl 0,1M là 1,050,0 g/mL, giá trị LOD 0,266 (g/mL) LOQ 0,89(g/mL) 3.2.6 Khảo sát đánh giá độ tin cậy phương pháp nghiên cứu mẫu tự pha 3.2.6.1 Xác đinh ̣ hàm lượng PRC và CPM hỗn hợp tự pha Tiế n hành pha các dung dịch hỗn hợp PRC và CPM HCl 0,1M theo tỷ lê ̣ CPRC /CCPM từ 1/1 đế n 1/100, thể tích VPRC VCPM lấy bảng 3.17 định mức dung dịch HCl 0,1M bình định mức 25 mL Bảng 3.17 Pha chế các dung dich ̣ hỗn hơ ̣p PRC và CPM Mẫu CPRC/CCPM CPRC CCPM VPRC(1) VPRC(2) VPRC(3) VCPM 1/1 10,0 10,0 - - - 10,0 1/10 10,0 - - 10,0 10,0 1/20 0,5 10,0 - - 6,0 10,0 1/40 0,3 12,0 - - 6,0 12,0 1/50 0,4 20,0 - 5,0 - 20,0 1/60 0,2 12,0 - 3,0 - 12,0 1/80 0,2 16,0 - 3,0 - 16,0 1/100 0,2 20,0 3,0 - - 20,0 57 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn bảng 3.17 thì: VPRC(1), VPRC(2), VPRC(3) thể tích dung dịch PRC tương ứng với nồng độ µg/mL, µg/mL, µg/mL VCPM thể tích dung dịch CPM có nồng độ 20 µg/mL Thực hiêṇ phép đo ̣ hấ p thu ̣ quang hỗn hợp khoảng bước sóng 200  300 nm; 0,5 nm lấy giá trị Từ số liệu đo quang tiến hành tính hàm lượng PRC, CPM theo chương trình lọc Kalman [13] Kết xác đinh ̣ hàm lươ ̣ng PRC và CPM trình bày bảng 3.18 Bảng 3.18 Kế t quả tính nồ ng đô ̣, sai số của PRC và CPM hỗn hơ ̣p RE% RE% CPRC CCPM 10,01 -0,2 0,1 1,01 10,01 1,0 0,1 10,0 0,499 9,99 -0,2 -0,1 0,3 12,0 0,31 11,99 3,3 -0,1 1/50 0,4 20,0 0,38 20,03 -5,0 0,15 1/60 0,2 12,0 0,18 11,98 -10,0 -0,17 1/80 0,2 16,0 0,23 15,96 15,0 -0,25 1/100 0,2 20,0 0,162 19,8 -19,0 -1,0 Mẫu CPRC/CCPM CPRC CCPM CPRC CCPM 1/1 10,0 10,0 9,98 1/10 1,0 10,0 1/20 0,5 1/40 Nhận xét: Kết thu bảng 3.18 cho thấy hàm lượng PRC lớn CPM 60 lần thì phương pháp lo ̣c Kalman [13] mắ c sai số lớn (hơn 10%) đố i với cấ u tử có nồ ng đô ̣ nhỏ cấu tử có nồng độ lớn mắc sai số nhỏ (nhỏ 1%) 58 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 3.2.6.2 Xác đinh ̣ hàm lượng PRC và PNH hỗn hợp tự pha Tiế n hành pha các dung dịch hỗn hợp PRC và PNH HCl 0,1M theo tỷ lê ̣ CPRC/CPNH từ 1/1 đế n 1/100, thể tích VPRC VPNH lấy bảng 3.19 sau định mức dung dịch HCl 0,1M bình định mức 25 mL Bảng 3.19 Pha chế các dung dich ̣ hỗn hơ ̣p PRC và PNH Mẫu CPRC/ CPNH CPRC CPNH VPRC(1) VPRC(2) VPNH 1/1 10,0 10,0 - - 10,0 1/10 1,0 10,0 - - 10,0 1/20 1,0 20,0 - 20,0 20,0 1/40 0,5 20,0 - 1,0 20,0 1/50 0,4 20.0 2,5 - 20,0 1/60 0,2 12,0 2,5 - 12,0 1/80 0,2 16,0 2,5 - 16,0 1/100 0,2 20.0 2,5 - 20,0 bảng 3.19 thì: VPRC(1), VPRC(2) thể tích dung dịch PRC tương ứng với nồng độ µg/mL, 5µg/mL VPNH thể tích dung dịch PNH nồng độ 20 µg/mL Thực hiêṇ phép đo độ hấ p thu ̣ quang hỗn hợp khoảng bước sóng 200 – 300 nm; 0,5 nm lấy giá trị Từ số liệu đo quang tiến hành tính hàm lượng PRC và PNH theo chương trình lọc Kalman [13] Kết trình bày bảng 3.20 59 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Bảng 3.20 Kế t quả tính nồ ng đô ̣, sai số của PRC và PNH hỗn hơ ̣p Mẫu CPRC/ CPNH C0 PRC C0PNH CPRC CPNH RE% RE% CPRC CPNH 1/1 10,0 10,0 9,98 10,01 -0,2 0,10 1/10 1,0 10,0 0,99 10,01 -1,0 0,10 1/20 1,0 20,0 1,02 19,99 2,0 -0,05 1/40 0,5 20,0 0,48 19,9 -4,0 -0,50 1/50 0,4 20.0 0,36 20,14 -10,0 0,70 1/60 0,2 12,0 0,179 11,91 -10,5 -0,75 1/80 0,2 16,0 0,234 15,89 17,0 -0,69 1/100 0,2 20.0 0,16 19,79 -20,0 -1,05 bảng 3.20 thì: C0PRC C0PNH (μg/mL) hàm lượng PRC, PNH tự pha hỗn hợp CPRC CPNH (μg/mL) hàm lượng PRC, PNH xác định theo phương pháp lọc kalman [13] RE% CPRC RE% CPNH sai số phép xác định hàm lượng Nhận xét: Kết thu bảng 3.20 cho thấy hàm lượng PRC lớn PNH 50 lần thì phương phá p lọc Kalman [13] mắc sai số lớ n (hơn 10%) đố i vớ i cấu tử có nờ ng ̣ nhỏ , cấu tử có nồng độ lớn mắc sai số nhỏ (nhỏ 1%) 3.2.6.3 Xá c nh ̣ hàm lượng CPM PNH hỗ n hợp tự pha Tiế n hà nh pha cá c dung dịch hỗn hợp CPM và PNH HCl 0,1M theo tỷ lê ̣ CCPM/ CPNH từ 1/1 đế n 1/50, thể tích V CPM VPNH lấy bảng 3.21 sau định mức dung dịch HCl 0,1M bình định mức 25 mL 60 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Bảng 3.21 Pha chế các dung dich ̣ hỗn hơ ̣p CPM PNH Mẫu CCPM/ CPNH CCPM CPNH VCPM VPNH 1/1 10,0 10,0 10,0 1,0 1/5 4,0 20,0 10,0 2,0 1/10 1,0 10,0 10,0 3,0 1/15 1,0 15,0 10,0 4,0 1/20 1,0 20,0 8,0 5,0 1/30 0,6 18,0 5,0 8,0 1/40 0,5 20,0 5,0 10,0 1/50 0,4 20,0 5,0 10,0 bảng 3.22 thì: VCPM thể tích dung dịch CPM với nồng độ 20 µg/mL VPNH thể tích dung dịch PNH với nồng độ 20 µg/mL Thực hiêṇ phép đo ̣ hấ p thu ̣ quang hỗn hợp khoảng bước sóng 200 – 300 nm, 0,5 nm lấy giá trị Từ số liệu đo quang tiến hành tính hàm lượng CPM PNH theo chương trình lọc Kalman [13] kết trình bày bảng 3.22 61 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Bảng 3.22 Kế t quả tính nồ ng đô ̣, sai số của CPM PNH hỗn hơ ̣p RE% RE% CCPM CPNH 10,01 -0,2 0,10 3,98 20,01 -0,5 0,10 10,0 0,99 10,03 -1,0 0,30 1,0 15,0 1,02 14,95 2,0 -0,33 1/20 1,0 20,0 0,98 20,09 -2,0 0.45 1/30 0,6 18,0 0,63 18,30 5,0 1,60 1/40 0,5 20,0 0,47 20,5 -6,0 2,50 1/50 0,4 20,0 0,43 20,7 7,5 3,50 Mẫu CPM/PNH CoCPM CoPNH CCPM CPNH 1/1 10,0 10,0 9,98 1/5 4,0 20,0 1/10 1,0 1/15 bảng 3.22 thì: CoPNH CoCPM (μg/mL) hàm lượng CPM PNH tự pha hỗn hợp CPNH CCPM (μg/mL) hàm lượng CPM PNH xác định theo phương pháp lọc kalman [13] RE% CPNH RE% CCPM sai số phép xác định hàm lượng Nhận xét: Kết thu bảng 3.22 cho thấy hàm lượng CPM/PNH từ 1/1 đến 1/20 lần phương pháp lọc Kalman [13] mắc sai số (10%) cấ u tử có nồ ng đô ̣ lớn mắ c sai số nhỏ (