Nghiên cứu ứng dụng ghép tế bào giữ đông lạnh trong nitơ lỏng điều trị bệnh máu ác tính

ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ SỞ Y TẾ BỆNH VIỆN TRUYỀN MÁU HUYẾT HỌC BÁO CÁO NGHIỆM THU NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG GHÉP TẾ BÀO GIỮ ĐÔNG LẠNH TRONG NITƠ LỎNG ĐIỀU TRỊ BỆNH MÁU ÁC TÍNH CHỦ NHIỆM: PGS.TS.BS.NGUYỄN TẤN BỈNH ĐỒNG CHỦ NHIỆM: PGS.TS.BS HUỲNH NGHĨA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 02/ 2016 ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ SỞ Y TẾ BỆNH VIỆN TRUYỀN MÁU HUYẾT HỌC BÁO CÁO NGHIỆM THU NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG GHÉP TẾ BÀO GIỮ ĐÔNG LẠNH TRONG NITƠ LỎNG ĐIỀU TRỊ BỆNH MÁU ÁC TÍNH CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI PGS.TS.BS NGUYỄN TẤN BỈNH CƠ QUAN QUẢN LÝ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) PGS.TS BS HUỲNH NGHĨA CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 02/ 2016 TÓM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Bệnh máu ác tính bao gốm nhóm bệnh lý ung thƣ hệ thống tạo máu, bệnh diễn tiến nặng phức tạp, không trị liệu sớm kịp thời bệnh nhân dẫn đến tử vong nhanh chóng Cho đến nay, phƣơng pháp trị liệu nhóm bệnh lý kết hợp nhiều kỹ thuật phƣơng thức khác với mục tiêu nhằm kiểm sốt đƣợc bệnh, trì nâng cao chất lƣợng sống cho bệnh nhân, có số bệnh nhân có hy vọng chữa khỏi.Các phƣơng pháp trị liêu bệnh lý máu ác tính bao gồm hóa trị liệu chuẩn hóa trị liều cao nhằm đạt đƣợc kiểm soát lui bệnh cho bệnh nhân bệnh máu ác tính, xạ trị đƣợc sử dụng hổ trợ giai đoạn khác cùa bệnh góp phần nhằm kiểm sốt đạt lui bệnh Ghép tế bào gốc tạo máu phƣơng pháp có khả điều trị cho bệnh nhân với bệnh máu ác tính có tình trạng ổn định lâu dài số nhóm bệnh điều trị chửa khỏi Tại Việt Nam, từ năm 1995; PGS Trần Văn Bé cs tiến hành thực hiên trƣờng hợp ghép tế bào gốc đồng loại đầu tiên, nguồn tế bào gốc từ tủy xƣơng anh chị em ruột cho Sau đó, PGS Nguyễn Tấn Bỉnh, thực trƣờng hợp ghép tế bào gốc máu ngoại vi tự thân khơng giữ đơng lạnh cho nhóm bệnh lý máu ác tính với kết khả quan Tuy nhiên, phƣơng pháp có bất lợi nhƣ sau (1) khó chủ động việc tạo nguồn tế bào gốc sẵn có để ghép điều kiện bệnh nhân thích hợp, (2) Khơng thể áp dụng điều kiện hóa diệt tủy kéo dài nhiều ngày để đạt đƣợc hiệu tối đa diệt tủy Do dó, với mục tiêu hƣớng đến phát triển áp dụng công nghệ tế bào gốc ghép tế bào gốc Việt Nam, đề tài định hƣớng nội dung nghiên cứu nhƣ sau : Chuẩn hóa thực lựa chọn ngƣời cho phù hợp để ghép đồng loại, lựa chọn bệnh nhân đạt tiêu chuẩn để thực ghép tự thân Chuẩn hóa thực quy trình huy động tế bào gốc máu ngoại vi cho đối tƣợng lựa chọn Chuẩn hóa thực thu thập tế bào gốc máu ngoại vi với hệ thống máy chiết tách tự động Chuẩn hóa thực kỹ thuật xử lý bảo quản đông lạnh tế bào gốc máu ngoại vi đạt tiêu chuẩn để ghép Chuẩn hóa thực cấy ghép lâm sàng điều trị bệnh lý máu ác tính SUMMARY OF RESEARCH CONTENT Malignant blood diseases including cancer disease groups of the hematopoietic system, progress very severe and complicated, without an early and timely treatment, it will lead to rapid death Until now, treatments for this pathology group is to combine several techniques and different methods with the aim to control the disease, maintain and improve the quality of life for patients, some of whom can hopefully be cured of the disease The therapies in malignant blood diseases consist of standard chemotherapy or high-dose chemotherapy to gain control and remission for patient with malignant blood diseases The radiation therapy used to support different stages of the disease also contributes to controlling and achieving remission Hematopoietic stem cell transplantation is one of the methods capable of treating patients with malignant blood disease status of long-term stability and a group of diseases can be treated curabale In Vietnam, from 1995; Professor Tran Van Be et al have carried out the first allogenic stem cell transplant case by using the stem cells from the bone marrow of a sibling with full matching HLA Then, Professor Nguyen Tan Binh, performed the transplant case of autologous peripheral blood stem cells wich were not frozen for the blood group of malignant diseases with very satisfactory results However, this method has some drawbacks as follow (1) cannot be active in the creation of stem cell source for transplantation available to patients with appropriate conditions, (2) is not applicable to the conditions which destroy chemical pulp and stretches over several days to achieve the maximum efficiency when myeloablastive regiment Therefore, with an aim to develop the application of stem cell technology and stem cell transplantation in Vietnam, the subject offer orentation to research contents: Standardizing and implementing choosing the aprroriate donor for allogeneic transplant and patient standardezed for autologous transplantation Standardizing and implementing the processes of mobilized peripheral blood stem cells for the selected object Standardizing and implementing the collection of peripheral blood stem cells with automatic extraction esystem Standardizing and technical implementing the process of handling and storing peripheral blood stem cells for transplant standards Standardizing and implementing clinical transplantation in the treatment of malignant blood diseases MỤC LỤC Trang ĐẶT VẤN ĐỀ - CHƢƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU - Lịch sữ ghép tế bào gốc tạo máu: - Phƣơng pháp ghép tế bào gốc tạo máu - 2.1 Lựa chọn ngƣời cho [3][7][12][24]: - 2.2.Thu thập tế bào gốc [1] [2] [14] - - 2.2.1 Tế bào gốc tạo máu từ tủy xƣơng: - 2.2.2 Tế bào gốc máu ngoại vi [1] [2] [9]: - 2.2.3 Máu cuống rốn [4] [5] [12]: - - 10 2.3 Điều kiện hóa (hay diệt tủy) trƣớc ghép - - 11 2.4 Ngƣỡng tối thiểu tế bào gốc đƣợc thu thập - 12 2.5 Phòng ngừa điều trị nhiễm trùng sau ghép - - 13 2.5.1 Các phƣơng pháp làm giảm nhiễm trùng từ môi trƣờng bên ngồi - 13 2.5.2 Phƣơng pháp phịng ngừa thuốc - - 14 2.5.3 Các phƣơng pháp chẩn đoán nhiễm trùng - 15 2.5.4 Điều trị kháng sinh theo kinh nghiệm - - 15 Kết ghép tế bào gốc bệnh lý máu ác tính - - 17 3.1 Bạch cầu cấp dòng tủy [18] [32] [40]: - - 17 3.2.Bạch cầu cấp dòng lympho [20] [27]: - 19 3.3.Bạch cầu mạn dòng tủy [28] [34]: - - 21 3.4.Loạn sinh tủy: - Error! Bookmark not defined 3.5 U Lympho không Hodgkin U lympho Hodgkin [20] [56]: - - 22 3.6.Đa u tủy [45] [65]: - 24 Các nguy biến chứng ghép tế bào gốc tạo máu - 28CHƢƠNG II: PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU - 30 - 2.1 Phƣơng pháp nghiên cứu: Thực nghiệm lâm sàng, tiến cứu - - 30 2.2 Đối tƣợng nghiên cứu: - 30 - 2.2.1 Tiêu chuẩn chọn mẫu: - 30 2.2.2 Tiêu chuẩn loại trừ: - 31 2.3 Các phƣơng pháp quy trình kỹ thuật sau đƣợc sử dụng trình thực đề tài nghiên cứu: - 31 2.3.1 Quy trình chọn lựa bệnh nhân ghép TBG tạo máu - 31 2.3.2 Quy trình huy động tế bào gốc tạo máu đạt tiêu chuẩn - - 32 2.3.3 Quy trình thu thập tế bào gốc máu ngoại vi: - 33 2.3.4 Quy trình xử lí lƣu trữ đơng lạnh TBGMNV đƣợc thu thập - - 34 2.3.5 Quy trình ghép TBGMNV giữ đơng lạnh (-1960C) - - 35 2.4 Phân tích số liệu: - - 36 2.5 Vấn đề đạo đức nghiên cứu - 36 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ - BÀN LUẬN - 37 3.1 Kết chung mẫu nghiên cứu : - - 37 3.2Nội dung 1: Thực lựa chọn ngƣời cho phù hợp HLA (ghép đồng loại) bệnh nhân ghép tự thân - - 38 3.2.1 Thực chọn lựa ngƣời cho phù hợp để ghép đồng loại: - 38 - 3.2.2 Thực chọn lựa bệnh nhân (tự ghép): 35 BN - - 39 - 3.3 Nội dung 2: Chuẩn hóa thực quy trình huy động tế bào gốc - - 40 - 3.3.1 Kết huy động TBGMNV ngƣời cho với G-CSF (ghép đồng loại): - 40 3.3.2 Kết huy động TBG ghép tự thân với G-CSF: - 41 - 3.3.3 Bàn luận quy trình huy động tế bào gốc máu ngoại vi : - - 41 - 3.4 Nội dung 3: Chuẩn hóa thực thu thập TBG máu ngoại máy chiết tách tự đồng (COBE-PECTRA) - 42 3.4.1 Kết trình chiết tách thu thập TBG máu ngoại vi - 42 - 3.4.2 Bàn luận quy trình chiết tách thu thập TBG máu ngoại vi - 45 - 3.5 Nội dung 4: Chuẩn hóa thực kỹ thuật xử lý bảo quản đông lạnh TBGMNV - 47 - 3.5.1 Kết thực kỹ thuật xử lý bảo quản đông lạnh TBGMNV sau thu thập - 47 - 3.5.2 3.6 Bàn luận vể kỹ thuật xử lý lƣu trữ đông lạnh - - 47 - Nội dung 5: Chuẩn hóa thực ghép TBG máu ngoại vi giữ đông lạnh - 48 - 3.6.1 Kết ghép TBG máu ngoại vi giữ đông lạnh - 48 - CHƢƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ - 67 4.1 Kết luận : - - 67 4.2 Đề nghị : Với kết đạt đƣợc thời gian thực hiên nghiên cứu đề tài, nhóm nghiên cứu có đề nghị sau - 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Phụ lục : Danh sách bệnh nhân nghiên cứu Phụ lục : Các báo cáo khoa học Phụ lục : Đào tạo học viên Phụ lục : Các quy trình Quy trình lựa chọn đánh giá khả thu thập tế bào gốc máu ngoại vi ngƣời cho bệnh nhân Quy trình huy động tế bào gốc máu ngoại vi Quy trình kỹ thuật thu thập TBGMNV máy chiết tách tự động Quy trình kỹ thuật xử lý bảo quản đơng lạnh TBGMNV sau thu thập Quy trình ghép TBGMNV giữ đông lạnh -1960C Phụ lục : Báo cáo chuyên đề Chuyên đề 1: Các biến chứng sau ghép tế bào gốc tạo máu Chuyên đề 2: Các phƣơng pháp điều kiện hóa diệt tủy trƣớc ghép tế bào gốc tạo máu Chuyên đề 3: Các kỹ thuật huy động, xử lý bảo quản đông lạnh tế bào gốc tạo máu Phụ lục 6: Hình ảnh phƣơng tiện nghiên cứu Phụ lục 7: Phụ lục quản lý KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ALL AML AML1 BCCDL BCCDT BCHTT Bu/Cy CD CD34 CFU-GM CIBMTR CML CR1 DLI ĐUTX G-CSF GVHD GvT HLA IPSS LBHT LBMP LBMPRT LFS MCR MDS MRD NHK NST Ph OS PCR PML TBGMNV TBGTM TBGTT Acute Lymphoid Leukemia Acute Lymphoid Leukemia Acute myeloid leukemia Bạch cầu cấp dòng lympho Bạch cầu cấp dịng tủy Bạch cầu hạt trung tính Busulphan/ Cyclophosphamid Cluster of differentiation Cluster of differentiation 34 Colony Formula Unit- Granulocyte Macrophage Center for International Blood and Marrow Transplant Research Chronic Myeloid Leukemia Complete Remission Donor Lymphocyte Infusion Đáp ứng tủy xƣơng Granulocyte- Colony Stimulating Factor Graft versus host Disease Graft versus tumor Human Leucocyte Antigen International prognostic scoring system Lui bệnh hoàn toàn Lui bệnh phần Lui bệnh phần tốt Long Free Survival Máu cuống rốn Myelodysplasia Syndrome Minimal Residual cell Disease Non-Hodgkin Lymphoma Nhiễm sắc thể Philadenphia Overall Survival Polymerase chain reaction Promyelocytic leukaemia Tế bào gốc máu ngoại vi Tế bào gốc tạo máu Tế bào TRM ULKHK Treatment Related Mortality U lympho không Hodgkin DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1 : Đặc điểm tế bào nguồn tế bào gốc: - 10 Bảng 2: Đặc điểm lâm sàng nguồn tế bào gốc: - 11 Bảng : Nhóm bạch cầu cấp dịng tủy: (1990 -2000) [12] [20] - 18 Bảng 4: So sánh kết tự ghép ghép đồng loại bệnh lý BCCDT [ 33] - 19 Bảng 5: ghép TBGTM nhóm bạch cầu cấp dòng lympho (1990 -2000) - 20 Bảng 1.6 : So sánh kết tự ghép ghép đồng loại bệnh lý BCCDT [ 35] - 20 Bảng Mối tƣơng quan số yếu tố với SLTBGCD34+ huy động máu ngoại vi - 40 Bảng 2Mối tƣơng quan số yếu tố với SLTBG CD34+ huy động máu ngoại vi - 41 Bảng 3Kết chiết tách thu thập TBG máu ngoại vi nhóm ngƣời cho - 43 Bảng Kết chiết tách thu thập TBG MGV nhóm bệnh nhân ĐUTX ULKHK - 43 Bảng Mối tƣơng quan số lƣợng TBG CD34+ thu thập với số ngƣời đƣợc thu thập - 44 Bảng Những thay đổi số bạch cầu , tiểu cầu trƣớc sau chiết tách TBG CD34+ máu ngoại vi - 45 Bảng Đặc điểm chung 62 bệnh nhân ghép TBGTM - 48 Bảng Đặc điểm phác đồ điều kiện hóa cho ghép đồng loại ghép tự thân - 50 Bảng Đặc điểm tế bào gốc máu ngoại vi sử dụng phƣơng pháp ghép - 51 Bảng 10 Thời gian mọc mảnh ghép 62 bệnh nhân theo phƣơng pháp ghép - 52 Bảng 11 Biến chứng ghép chống ký chủ cấp mạn - 54 Bảng 12 Kết ghép tế bào gốc tạo máu theo nhóm bệnh lý - 54 Bảng 13 Kết ghép tự thân TBG máu ngoại vi - 56 Bảng 14Thời gian mọc mảnh ghép số nghiên cứu - 60 Bảng 15 So sánh kết ghép tự thân tế bào gốc nhóm ĐUTX - 65 - DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ Trang Biểu đồ 1 : So sánh tỉ lệ tái phát tử vong sau đạt lui bệnh hoàn tồn nhóm bệnh BCCDT phƣơng ghép tự thân ghép đồng loại - 19 Biểu đồ 2: So sánh kết phƣơng pháp tự ghép ghép đồng loại BCCDL (c) thời gian sống toàn (p