(Luận văn) đánh giá hoạt tính sinh học của một số hợp chất phân lập từ loài trung quân ancistrocladus cochinchinensis ở việt nam

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC NGÔ THỊ HUỆ lu an va ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA n MỘT SỐ HỢP CHẤT PHÂN LẬP TỪ LOÀI TRUNG QUÂN tn to p ie gh Ancistrocladus cochinchinensis Ở VIỆT NAM d oa nl w va an lu ll u nf LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG oi m z at nh z m co l gm @ n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN an Lu THÁI NGUYÊN - 2016 ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC NGÔ THỊ HUỆ lu an va ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA n MỘT SỐ HỢP CHẤT PHÂN LẬP TỪ LOÀI TRUNG QUÂN tn to p ie gh Ancistrocladus cochinchinensis Ở VIỆT NAM w Chuyên ngành: Công nghệ sinh học d oa nl Mã số: 60.42.02.01 va an lu ll u nf LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG oi m z at nh Người hướng dẫn khoa học: TS Lê Quỳnh Liên z m co l gm @ n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN an Lu THÁI NGUYÊN - 2016 ac th si i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Luận văn tốt nghiệp với đề tài “Đánh giá hoạt tính sinh học số hợp chất phân lập từ loài Trung quân Ancistrocladus cochinchinensis Việt Nam” cơng trình nghiên cứu cá nhân hướng dẫn TS Lê Quỳnh Liên hỗ trợ đề tài nghiên cứu “Nghiên cứu đa dạng loài thuộc chi Trung quân (Ancistrocladus) Việt Nam dựa vào phân tích hóa sinh di truyền”, mã số: 104.01-2013.53, tiến sĩ Lê Quỳnh Liên chủ nhiệm đề tài, không chép lu Tôi xin chịu trách nhiệm cơng trình nghiên cứu an va Thái Nguyên, ngày tháng năm 2016 n Người cam đoan p ie gh tn to w d oa nl Ngô Thị Huệ ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si ii LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn sâu sắc mình, tơi xin cảm ơn TS Lê Quỳnh Liên Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam anh/chị làm việc Phịng Tài Ngun sinh vật tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tơi q trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn đề tài Nghiên cứu bản: “Nghiên cứu đa dạng loài thuộc chi Trung quân (Ancistrocladus) Việt Nam dựa vào phân tích hóa sinh di truyền”, mã số: 104.01-2013.53, TS Lê Quỳnh Liên chủ nhiệm lu an đề tài hỗ trợ tơi q trình thực luận văn n va Tôi xin cảm ơn thầy cô khoa Khoa học sống, thầy cô tn to giảng dạy trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên thầy cô gh công tác Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam truyền đạt p ie kiến thức cho năm học tập trường w Trong suốt trình học tập thực luận văn nhận oa nl động viên bạn bè, đồng nghiệp người thân gia đình d Thái Nguyên, ngày tháng năm 2016 an lu ll u nf va Người cam đoan oi m z at nh z Ngô Thị Huệ m co l gm @ an Lu n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH, BIỂU ĐỒ vii MỞ ĐẦU lu Lý chọn đề tài an va Mục tiêu đề tài n Nội dung nghiên cứu gh tn to Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU p ie 1.1 Hợp chất thứ cấp có hoạt tính sinh học từ thực vật 1.1.1 Khái niệm oa nl w 1.1.2 Phân loại d 1.1.3 Những nghiên cứu hợp chất thiên nhiên từ thực vật giới an lu 1.1.4 Tình hình nghiên cứu hợp chất thiên nhiên từ thực vật Việt Nam u nf va 1.2 Một số hoạt tính sinh học thực vật 1.2.1 Hoạt tính kháng vi sinh vật ll oi m 1.2.2 Hoạt tính chống oxy hóa 10 z at nh 1.2.3 Hoạt tính gây độc tế bào 11 1.3 Tổng quan tình hình nghiên cứu Chi Trung quân (Ancistrocladus) 13 z gm @ 1.3.1 Đặc điểm, phân bố 13 1.3.2 Tình hình nghiên cứu giới 14 l m co 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 16 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 an Lu 2.1 Vật liệu nghiên cứu 19 http://www.lrc.tnu.edu.vn n Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN va 2.2 Phạm vi nghiên cứu 21 ac th si iv 2.2.1 Phạm vi 21 2.2.2 Địa điểm nghiên cứu 21 2.2.3 Thời gian: Nghiên cứu tiến hành từ tháng 09/2015-09/2016 22 2.3 Đối tượng, thiết bị nghiên cứu 22 2.3.1 Các hóa chất, thiết bị chuyên dùng 22 2.4 Phương pháp nghiên cứu 24 2.4.1 Phương pháp thử hoạt tính kháng sinh: 24 2.4.2 Phương pháp thử hoạt tính chống oxy hóa thu dọn gốc tự DPPH 25 2.4.3 Phương pháp thử độc tính tế bào 26 lu an 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 28 n va Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 tn to 3.1 Kết đánh giá hoạt tính sinh học Trung quân (Ancistrocladus gh cochinchinensis) 29 p ie 3.1.1 Đánh giá hoạt tính kháng sinh hợp chất phân lập từ loài Trung quân Ancistrocladus cochinchinensis 29 w oa nl 3.1.2 Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa hợp chất phân lập từ loài d Trung quân Ancistrocladus cochinchinensis 37 lu va an 3.1.3 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập từ loài u nf Trung quân Ancistrocladus cochinchinensis 38 ll KẾT LUẬN, KIẾN NGHỊ 45 m oi Kết luận 45 z at nh Kiến nghị 46 z TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 m co l gm @ an Lu n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Ký hiệu Thuật ngữ ADN Axit Deoxyribo Nucleotit lu an n va DMSO Dimethylsulfoxide DPPH 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl LU Human lung carcinoma Ung thư phổi IC50 Inhibitory concentration 50% Nồng độ ức chế 50% cá thể SRB Sulforhodamine B OD Optical Density SA Scavenging Activities SC Scavenging Concentration at 50% Mật độ quang học Khả trung hịa gốc p ie gh tn to oxy hóa tự Tế bào ung thư da oa nl SK-MEL-2 Human skin caner Trichloroacetic acid d TCA 50% gốc tự Tế bào ung thư bạch cầu Human promyelocytic leukima w HL-60 Nồng độ trung hòa ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si vi DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Một số lồi thực vật có hoạt tính kháng vi sinh vật Bảng 1.2 Một số hợp chất chống oxy hóa từ thực vật 11 Bảng 1.3 Một số hợp chất có khả gây độc tế bào từ thực vật 13 Bảng 2.1 Tên gọi, ký hiệu hợp chất nghiên cứu 20 Bảng 2.2 Danh sách đặc điểm lồi vi sinh vật thử nghiệm 23 Bảng 3.1 Khả ức chế vi khuẩn E.coli hợp chất phân lập 30 Bảng 3.2 Khả ức chế vi khuẩn Staphylococcus aureus 31 lu Bảng 3.3 Khả ức chế vi khuẩn Salmonella tiphymurium 32 an n va Bảng 3.4 Khả ức chế nấm Candida albicans 35 tn to Bảng 3.5 Khả ức chế nấm A fumigatus 36 gh Bảng 3.6 Khả chống oxy hóa hợp chất thử nghiệm 37 p ie Bảng 3.7 Hoạt tính ức chế dịng tế bào ung thư LU-1 39 w Bảng 3.8 Hoạt tính ức chế dịng tế bào ung thư HL-60 40 d oa nl Bảng 3.9 Hoạt tính ức chế dịng tế bào ung thư SK-MEL-2 41 ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si vii DANH MỤC HÌNH, BIỂU ĐỒ HÌNH Hình 1.1 Cây trung quân (Ancistrocladus cochinchinensis) 14 Hình 1.2 Cấu trúc hóa học số naphthylisoquinonline alkaloids tách từ Ancistrocladus 15 Hình 1.3 Các Napthylisoquinoline alkaloid tách chiết từ Cây Trung quân Ancistrocladus cochinchinensis 18 Hình 2.1 Mẫu dùng để phân lập hợp chất nghiên cứu 19 lu Hình 2.2 Mơ hình cấu trúc hóa học hợp chất nghiên cứu 21 an Hình 3.1 Hoạt tính ức chế hợp chất AC1 (M1), AC4 (M4) loài va n vi khuẩn 33 tn to ie gh BIỂU ĐỒ p Biểu đồ 3.1 Giá trị SC50 hợp chất thử nghiệm đối chứng 38 nl w Biểu đồ 3.2: Phần trăm tế bào khối u bị ức chế nồng độ: 20µg/ml d oa chất thử 10µg/ml đối chứng dương Ellipticine 41 ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Từ xa xưa người biết sử dụng số loại thực vật để làm thực phẩm làm thuốc chữa trị bệnh tật, vết thương Ngày nay, với phát triển kỹ thuật tách chiết hợp chất thiên nhiên, người có xu hướng sử dụng sản phẩm từ thiên nhiên lĩnh vực chăm sóc sức khỏe Việt Nam nước có hệ thực vật phong phú đa dạng Tổng số lu loài thực vật ghi nhận Việt Nam khoảng 10.500 loài tổng số 12.000 an loài theo ước tính Trong số đó, nguồn tài ngun làm thuốc chiếm va n khoảng 30% Kết điều tra nguồn tài nguyên thuốc Viện Dược liệu gh tn to (2006) cho biết Việt Nam có 3.948 loài thực vật bậc cao, bậc thấp nấm ie lớn dùng làm thuốc Trong thời gian qua, nước ta có 3.000 loại p thuốc có nguồn gốc từ thảo dược cấp số đăng ký, chiếm gần 1/3 nl w tổng số thuốc cấp số đăng ký lưu hành hàng năm Như vậy, nhu cầu d oa sử dụng dược liệu chế xuất thuốc nước lớn Không vậy, an lu việc sử dụng dược phẩm có nguồn gốc thiên nhiên nước u nf va giới quan tâm Trong có lồi thuộc chi Trung qn (Ancistrocladus) nhiều nhà nghiên cứu giới quan tâm ll oi m thành phần hóa học đặc trưng tác dụng sinh học chúng Chi Trung z at nh quân phân bố phổ biến vùng nhiệt đới châu Á Tây Phi, người ta tìm thấy loài thực vật số hợp chất có alkaloid giá trị naphthoquinon z có độc tính tế bào, tác dụng số tế bào ung thư, kháng vi khuẩn @ l gm kháng nấm Theo y học cổ truyền, Trung quân có vị đắng, chát, tính bình, khơng độc, có cơng hành huyết, hóa ứ, trừ phong thấp, mạnh gân xương, m co giải nhiệt, trục ứ huyết, trừ đờm, giải độc Thường dùng trị đau lưng, an Lu đau xương khớp, phong thấp, chân tay tê mỏi; trường hợp phụ nữ sau http://www.lrc.tnu.edu.vn n Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN va đẻ, người mệt mỏi, đau nhức toàn thân, yếu sức [1] Ngoài ra, Trung quân ac th si 39 Tiến hành sàng lọc hoạt tính gây độc tế bào hợp chất tách chiết từ Ancistrocladus cochinchinensis theo phương pháp mô tả thu kết sau: 3.1.3.1 Hoạt tính gây độc tế bào LU-1 Khả ức chế dòng tế bào LU-1 hợp chất thể bảng 3.7 Bảng 3.7 Hoạt tính ức chế dịng tế bào ung thư LU-1 Dòng tế bào LU-1 (% ức chế) lu Nồng độ Ellipticine an (µg/ml) AC1 AC2 AC3 AC4 AC6 Nồng độ % ức AC5 n va chế 12,62 18,60 15,80 21,82 101,32 19,08 10 98,22 -8,62 8,12 4,52 11,48 95,68 -0,04 75,77 -8,20 0,48 -2,32 0,02 24,76 -5,40 0.4 49,36 -10,52 -2,56 -2,98 -3,94 8,80 -8,14 0.08 23,88 >100 >100 >100 6.52 ± 1.60 >100 gh tn to 100 µg/ml 20 p ie IC50 oa nl w 0.8 >100 0.43 ± 0.08 d lu an Trong số hợp chất, hợp chất AC1 biểu hoạt tính ức chế yếu, u nf va nồng độ thử nghiệm cao 100µg/ml ức chế 12% tế bào ung thư ll LU-1 Các hợp chất AC2, AC3, AC4, AC6 biểu khả tương tự m oi Đáng ý số có hợp chất AC5, bắt đầu có hoạt tính ức chế tế z at nh bào LU-1 nồng độ thấp 0,8µg/ml hoạt động ức chế tỷ lệ thuận với z nồng độ dịch thử Tức nồng độ cao khả ức chế tốt @ gm Biểu đồ 3.1 minh họa khả ức chế tế bào ung thư nồng độ dịch thử m co l 100µg/ml Ở nồng độ hợp chất biểu hoạt tính, hợp chất AC1, AC6 không ức chế tế bào LU-1 nồng độ thấp hơn, chí an Lu tế bào tiếp tục phát triển sử dụng nồng độ thử nghiệm đến http://www.lrc.tnu.edu.vn n Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN va 20µg/ml ac th si 40 3.1.3.2 Hoạt tính gây độc tế bào HL-60 Khả gây độc tế bào ung thư máu HL-60 hợp chất thể bảng 3.8 Bảng 3.8 Hoạt tính ức chế dịng tế bào ung thư HL-60 Dòng tế bào HL-60 (% ức chế) Nồng độ Ellipticine (µg/ml) AC1 AC2 AC3 AC4 AC6 Nồng độ % ức AC5 lu µg/ml chế n va 28,62 44,76 21,71 100,36 41,47 10 98,22 20 27,30 10,92 19,11 11,65 99,04 14,57 75,77 5,90 3,27 -6,54 -0,68 33,09 8,53 0.4 49,36 4,11 -2,71 -8,51 -9,29 15,28 7,21 0.08 23,88 IC50 >100 >100 >100 >100 5.02 ± 1.22 >100 gh tn to 31,25 ie an 100 0.8 p nl w 0.33 ± 0.03 d oa Theo Viện nghiên cứu ung thư quốc gia Hoa Kỳ, chất có IC50 an lu < 20 µg/ml xem có độc tính tế bào Kết IC50 giúp u nf va so sánh cách đầy đủ hoạt tính gây độc tế bào mẫu với Nếu mẫu thử có giá trị IC50 thấp hơn, tức nồng độ ức chế 50% số tế ll oi m bào đích thấp chất có hoạt tính gây độc tế bào mạnh Ở z at nh đây, có tổng số mẫu có IC50 >100 µg/mL cho thấy mẫu hợp chất có hoạt tính gây độc dịng tế bào HL-60 tương đối yếu z 3.1.3.3 Hoạt tính gây độc dòng tế bào SK-MEL-2 m co l giá trị IC50 5,02±1,22 gm @ Đáng ý có hợp chất AC5 biểu hoạt tính gây độc tế bào tốt, an Lu Đối với dòng tế bào SK-MEL-2 hợp chất có biểu gây độc http://www.lrc.tnu.edu.vn n Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN va tế bào ac th si 41 Bảng 3.9 Hoạt tính ức chế dịng tế bào ung thư SK-MEL-2 Dòng tế bào SK-MEL-2 (% ức chế) Nồng độ Ellipticine (µg/ml) AC1 AC2 AC3 AC4 AC5 AC6 Nồng độ % ức µg/ml chế 100 30,74 19,41 28,08 37,75 97,29 31,47 10 98,22 20 12,86 2,66 10,69 22,19 96,39 3,06 75,77 8,66 0,04 6,98 12,72 21,32 1,98 0.4 49,36 0.8 1,82 -0,32 3,18 2,23 10,44 -2,77 0.08 23,88 IC50 >100 >100 >100 >100 6.79 ± 2.01 >100 0.47 ± 0.09 lu Tỷ lệ tế bào sống sót phụ thuộc vào nồng độ dịch thử AC2 AC6 an va không gây độc tế bào nồng độ 0,8µg/ml, tế bào ung thư phát triển bình n thường Đến nồng độ 4µg/ml bắt đầu có tế bào bị tiêu diệt với tỷ lệ thấp gh tn to tương ứng 4,04% 1,98% Các hợp chất AC1, AC3, AC4 biểu ie hoạt tính ức chế tế bào ung thư từ nồng độ thử nghiệm 0,8µg/ml p tỷ lệ ức chế thấp, giá trị IC50 > 100 Đáng ý số nl w hợp chất hợp chất AC5 biểu hoạt tính ức chế tế bào ung thư tốt nhất, d oa nồng độ 8µg/ml tỷ lệ ức chế 10,44% Nồng độ dịch thử tăng phần an lu trăm tế bào ức chế cao Giá trị IC50 AC5 tương đối thấp 6,79 ±2,01 ll u nf va tương ứng với khả tiêu diệt tế bào ung thư SK-MEL-2 tốt oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Biểu đồ 3.2: Phần trăm tế bào khối u bị ức chế nồng độ: 20µg/ml chất thử 10µg/ml đối chứng dương Ellipticine n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si 42 Nhìn vào biểu đồ 3.2 nhận thấy hợp chất AC5 có hoạt tính ức chế tốt dòng tế bào ung thư thử nghiệm Hoạt tính dịch thử nồng độ 20µg/ml tương đương với hoạt động chất đối chứng dương 10µg/ml Như vậy, kết đánh giá hoạt tính gây độc hợp chất thử nghiệm dòng tế bào ung thư nghiên cứu cho thấy hợp chất AC5 có hoạt tính tốt Hoạt tính thể tất dịng tế bào ung thư sử dụng thí nghiệm, cho thấy hoạt chất có khả ức chế phát triển tế bào ung thư nói chung, khơng thấy tính hướng đích đặc biệt lu an Nhóm nghiên cứu Viện Hóa học (Viện Hàn Lâm Khoa học công n va nghệ Việt Nam) phân lập từ loài A cochinchinensis sinh trưởng tn to Bình Định nhiều hợp chất alkaloid có giá trị 6-O-methylhamateine, gh hamatinine, 6-O-methylhamatinine, 6-O-demethyl-7-epi-ancistrobrevine D, 7- p ie epi- ancistrobrevine D and 6-O-demethyl-8-O-methyl-7-epi-ancistrobrevine D w với hoạt tính gây độc tế bào chống ơxy hóa [12], [13] Trong trình tìm oa nl kiếm hợp chất từ loài A cochinchinensis sinh trưởng Vĩnh Phúc, ba d hợp chất thuộc nhóm alkaloid isoquinoline alkaloid (AC3), anciscohine 6- lu va an 0-β-D-glucopyranoside (AC4) 4’-methoxy-5-epi-ancistecrorine (AC5) u nf phân lập; hai hợp chất AC4 AC5 hợp chất ll Bên cạnh đó, số hợp chất khác thuộc nhóm phenolic m oi Ancistronaphtoside A/B (AC1/2) Tortoside A (AC6) Khi bổ sung vào z at nh dòng tế bào ung thư phổi, ung thư máu ung thư biểu mô, hợp chất AC5 z thể khả ức chế sinh trưởng dòng tế bào cách rõ rệt gm @ Giá trị ức chế IC50 hợp chất AC5 lên dòng tế bào ung thư phổi, ung l thư máu ung thư biểu mô 6.52 ± 1.60, 5.02 ± 1.22, 6.79 ± 2.01 m co μg/mL (Bảng 3.7, 3.8, 3.9) Tương tự với loài A cochinchinensis Việt Nam, an Lu alkaloids nhóm hợp chất thứ cấp chủ yếu phân lập từ nhiều loài chi Trung quân A tectorius, A heyneanus, A cochinchinensis [17], [18] n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si 43 Đặc biệt, hai hợp chất nhóm naphthylisoquinoline alkaloid Dioncoquinones A B phân lập từ loài A heyneanus có khả ức chế mạnh mẽ tế bào u tủy in vitro với giá trị ức chế IC50 nồng độ 11 μM [18], [19] mà không gây độc tế bào bình thường Theo Bringmann cộng sự, khả diệt tế bào u tủy hai hợp chất Dioncoquinones A B tương tự melphalan, hợp chất nghiên cứu phát triển cho hóa trị liệu Với giá trị IC50 khoảng 5-6 μg/mL tương đương với 12-14 μM, hợp chất AC5 thể khả ức chế tế bào ung thư phổi, ung thư máu ung thư biểu mô tương tự hoạt tính hợp chất Dioncoquinones A B lu an tế bào u tủy Tuy nhiên, đánh giá hoạt tính dịng tế bào ung n va thư khác nhau, nên chưa có so sánh cụ thể hoạt tính nhóm hợp chất tn to alkaloid từ loài A cochinchinensis Việt Nam loài khác gh giới Bên cạnh khả tiêu diệt tế bào gây bệnh, khả không gây độc với p ie tế bào bình thường hợp chất AC5 cần phải nghiên cứu sâu w Thành phần hóa học Trung quân đa dạng, alkaloid oa nl nhóm hợp chất có hoạt tính sinh học rõ rệt với 140 dạng khác d [17] Đặc biệt hợp chất dimeric naphthylisoquinon alkaloids hay cịn gọi lu va an michellamines B có khả ức chế sinh trưởng virus gây suy giảm u nf miễn dịch người HIV mức độ in vivo [45] ll Hiện nay, khai thác sử dụng bền vững nguồn tài nguyên thiên nhiên, m oi đặc biệt dược liệu Việt Nam mối quan tâm đồng thời z at nh nhà nghiên cứu quản lý Thực tế cho thấy nhiều thuốc z thực phẩm chức phát triển từ hợp chất thiên nhiên gm @ có dược liệu chẳng hạn taxol chữa ung thư, curcumin kháng l khuẩn, chống oxy hóa đặc hiệu với bệnh viêm loét dày Chứa nhiều m co hợp chất tiềm năng, thành phần hóa học Trung quân Việt Nam an Lu số nhóm nghiên cứu khẳng định vai trị nhóm hợp chất alkaloid từ lồi này.Với ngun liệu thí nghiệm sáu hợp chất phân lập n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si 44 từ loài A cochichinenis (Vĩnh Phúc), đề tài xác định khả gây độc lên ba nhóm tế bào ung thư phổi, ung thư vú ung thư biểu mô hợp chất 4’-methoxy-5-epi-ancistecrorine A1 thuộc nhóm alkaloid Bên cạnh đó, hai hợp chất anciscohine 6-0-β-D-glucopyranoside (nhóm alkaloid) tortoside A (nhóm phenolic) thể khả ức chế sinh trưởng nhóm vi khuẩn gây bệnh đường ruột E coli, S aureus S typhimurium Những kết nghiên cứu bước đầu khẳng định giá trị loài Trung quân A cochichinenis Việt Nam, cung cấp sở khoa học cho việc sử dụng Trung quân thuốc dân gian trị lu an bệnh địa phương n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si 45 KẾT LUẬN, KIẾN NGHỊ Kết luận 1.1 Hoạt tính kháng sinh Sáu hợp chất phân lập từ loài Trung quân Ancistrocladus cochinchinensis sử dụng nghiên cứu thể khả ức chế sinh trưởng ba loại vi khuẩn kiểm định E coli, Staphylococcus aureus Salmonella typhymurium Hai hợp chất AC2 lu AC4 có khả ức chế ba vi khuẩn, hợp chất AC4 thể an n va hoạt tính tốt Hợp chất AC1, AC3 AC5 có khả ức chế hai vi tn to khuẩn Staphylococcus aureus Salmonella typhymurium hợp chất Sáu hợp chất từ loài loài Trung quân Ancistrocladus cochinchinensis p ie gh AC6 có khả ức chế vi khuẩn Staphylococcus aureus oa nl w khơng có hoạt tính đáng kể việc ức chế sinh trưởng phát triển d loại nấm thử nghiệm A fugamitus C albicans lu va an 1.2 Hoạt tính chống oxy hóa u nf Đối với thử nghiệm hoạt tính chống oxy hóa hệ DPPH, cho thấy ll có hợp chất AC4 bắt đầu thể hoạt tính trung hịa gốc tự với giá trị m oi SC50 76,16, nhiên nồng độ trung hòa 50% gốc tự cao nhều z at nh so với chất đối chứng dương (Acid Ascorbic 4,40) z 1.3 Hoạt tính gây độc tế bào @ l gm Mỗi hợp chất tách chiết có khả gây độc tế bào mức độ m co khác nhau, có hợp chất AC5 có hoạt tính tốt dịng tế bào thử nghiệm LU-1, HL-60, SK-MEL-2 với IC 50 6,52 ± 1,60, 5,02 ± 1,22, n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN an Lu 6,79 ± 2,01 ac th si 46 Kiến nghị Loài Trung quân Ancistrocladus cochinchinensis loài đặc trưng Việt Nam số hợp chất tinh chế chất nên chưa có nghiên cứu để đánh giá so sánh với kết thực nghiệm Do kết nghiên cứu bước đầu mở hướng nghiên cứu sâu hơn, rộng lĩnh vực kháng vi khuẩn, chống oxy hóa gây độc tế bào Đặc biệt hợp chất có biểu hoạt tính tốt cần tiếp tục nghiên cứu, sàng lọc Nhất thử nghiệm gây độc tế bào hợp chất cần đánh giá ảnh hưởng tế bào bình thường lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tiếng Việt Đỗ Tất Lợi (2005), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội Nguyễn Đăng Khoa, Trần Cơng Luận (2014), “Nghiên cứu hoạt tính kháng vi sinh vật cao chiết hợp chất flavonoid phân lập từ chùm ngây”, Tạp chí Dược liệu, 19(1) Phạm Đơng Phương, Trần Hùng (2009), “Khảo sát tác động, độc tính tế lu an bào thành phần alkaloid Naphthoquinon ba lồi va n Ancistrocladus Việt Nam”, Tạp chí Dược học, số 401, 23-27 Naphthoquinon ie gh tn to Phạm Đông Phương, Trần Hùng (2009), “Nghiên cứu thành phần loài Trung quân (Ancistrocladus.sp p Ancistrocladaceae) phát Việt Nam”, Tạp chí Dược học, số w Phạm Đông Phương, Trần Hùng (2009), “ Nghiên cứu tác dụng kháng d oa nl 396, 33-37 an lu nấm napthoquinon loài trung quân (Ancistrocladus.sp) Phan Quốc Kinh (2011), Giáo trình hợp chất thiên nhiên có hoạt ll u nf va phát Việt Nam”, Tạp chí Dược học, số 399, 36-40 m oi tính sinh học, Nhà xuất giáo dục Việt Nam z at nh Phan Tống Sơn, Phan Minh Giang (2016), Hóa học hợp chất thiên z nhiên, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, Hà Nội Trần Mỹ Linh, Lê Quỳnh Liên, Ninh Khắc Bản (2013), “Hoạt tính ức gm @ l chế nấm vi khuẩn gây bẹnh loài thực vật ngập mặn Aegiceras m co corniculatum, Avicennia marina Lumnitzera racemosa Vườn Quốc sinh vật lần thứ 5, 1127-1131 n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN an Lu gia Xuân Thủy”, Hội nghị khoa học toàn quốc sinh thái tài nguyên ac th si 48 II Tiếng Anh Allen D.E., Hatfield G (2004), “Medicinal Plants in FolkTradition: An Ethnobotany of Britain and Ireland”, Timber Press: Cambridge, U K, 431 10 Amstrong D (2002), “Oxidants and Antioxidants, Ultra structure and Molecular Biology Protocols”, Humana Press, 196, 3-12 11 Anh N.H, Helmut R., Andrea P., Sung T.V., Adam G (1997), “Tetralones from ancistrocladus cochinchinensis”, Phytochemistry, 44 (63), 549-551 lu 12 Anh N.H, Porzel A., Ripperge H., Bringmann G., Schaffer M., God R., an Sung T.V., Adam G (1997), “Naphthylisoquinoline from Ancistrocladus va n cochinchinensis”, Phytochemistry, 45(6),1287-1291 a chemical study on Vietnamese Ancistrocladus cochinchinensis”, p ie gh tn to 13 Anh N.H, Ripperger H., Sung T.V, Adam G (1996), “Some results from w Phytochemistry, 34,89-93 oa nl 14 Bernhoft (2010), Bioactive compounds in plants - benefits and risks for d man and animals, The Norwegian Academy of Science and Letters, va an lu Norway J.W., McMahon Y.F., Cardellina J.H., Manfredi z at nh M.R., Hallock oi 16 Boyd m Journal, 54(4), 656-69 ll u nf 15 Bohlmann J., Keeling C.I (2008), “Terpenoid biomaterials”, Plant J.B., Buckheit R.W.Jr., Bringmann K.P., Blunt G., Schäffer z M., Cragg G.M (1994), “Anti-HIV michellamines from Ancistrocladus @ l gm korupensis”, Journal Medicine Chemistry, 37(12),1740-1745 17 Bringmann G., Zhang G., Olschläger T., Stich A., Wu J., Chatterjee m co M., Brun R (2013), “Highly selective antiplasmodial naphthylisoquinoline an Lu alkaloids from Ancistrocladus tectorius”, Phytochemistry, 91, 220-228 n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si 49 18 Bringmann G., Hertlein-Amslinger B., Kajahn I., Dreyer M., Brun R., Moll H., Stich A., Ioset K.N., Schmitz W., Ngoc L.H (2011), “Phenolic analogs of the N,C-coupled naphthylisoquinoline alkaloid ancistrocladinium A, from with (Ancistrocladaceae), Ancistrocladus improved cochinchinensis antiprotozoal activities”, Phytochemistry, 72(1), 89-93 19 Bringmann G., Wohlfarth M., Rischer H., Rückert M., Schlauer J (1998) “The polyketide folding mode in the biogenesis of isoshinanolone and plumbagin from Ancistrocladus heyneanus (Ancistrocladaceae)” lu an Tetrahedron Letter, 39, 8445-8448 n va 20 Bringmann G., Rüdenauer S., Irmer A., Bruhn T., Brun R., Heimberger antileishmanial dioncoquinones and ancistroquinones from cell cultures of Triphyophyllum peltatum (Dioncophyllaceae) and Ancistrocladus p ie gh tn to T., Stühmer T., Bargou R., Chatterjee M (2008), “Antitumoral and w abbreviatus (Ancistrocladaceae)”, Phytochemistry, 69, 2501-2509 G., Dreyer oa nl 21 Bringmann M., Faber J.H., Dalsgaard P.W., Staerk d D., Jaroszewski W.N., Dangalasi H., Mbago F., Brun R., Christensen lu va an S.B (2004), “Ancistrotanzanine C and related 5,1'- and 7,3'-coupled u nf Naphthylisoquinoline alkaloids from Ancistrocladustanzaniensis”, ll Journal Nature Production,67(5), 743-748 m oi 22 Bringmann G.,Kinzinger L (1992), “Ancistrocline, A Napthylisoquinoline z at nh alkaloids from Ancistrocladus tectorius”, Phytochemistry, 31(9), 3297- z 3299 @ 23 Bringmann G., Saeb W., Assi L A., Sankara Narayanan A S., Peters gm l (1997), “Betulinic acid: isolation from Triphyophyllum peltatum and n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN an Lu benzyl ester”, Planta medica, 63(3), 255-257 m co Ancistrocldus heyneanus, antimalarial activity, and crystal structure of ac th si 50 24 Chowdhury A.R., Mandal S., Mittra B., Sharma S., Mukhopadhyay S., Majumder H.K (2002), “Betulinic acid, a potent inhibitor of eukaryotic topoisomerase I: identification of the inhibitory step, the major functinal group responsible and development of more potent derivatives”, Medical Science Monitor, 8(7), 254-265 25 Chua L.S (2013), “A review on plant-based rutin extraction methods and its pharmacological activities”, Journal Ethnopharmacol, 150(3), 805-17 26 Cowan M.M (1999), “Plant Products as Antimicrobial Agents”, lu Chiniacal microbiology reviews,12(4), 564 - 582 an va 27 Cragg G.M., Schepartz S.A., Suffuess M., Grever M.R (1993), n “The taxol supply crisis New NCI policies for handing the large- scale to Journal of natural products, 56, 1657-1668 p ie gh tn production of novel natural product anticancer and antiHIV agent, 28 Franỗois G., Bringmann G., Dochez C., Schneider C., Timperman nl w G., Akéassi L (1995), “Activities of extracts and naphthylisoquinoline d oa alkaloids from Triphyophyllum peltatum, Ancistrocladus abbreviatus an lu and Ancistrocladus barteri against Plasmodium berghei (Anka strain) va invitro”, Journal Ethnopharmacol, 46(2), 115-120 ll u nf 29 Francois G.,Timperman G., Eling W., Ake’assi L., Holenz R.G, oi m Bringmann G (1997), “Naphthylisoquinoline Alkaloids against Malaria: z at nh Evaluation of the Curative Potentials of Dioncophylline C and Dioncopeltine Aagainst Plasmodium berghei invivo”, Antimicrobial z Agents and Chemotherapy, 41(11), 2533-2539 @ l Natural Product Radiance, 5(4), 326-334 gm 30 Gupta V.K., Sharma S.K (2006), “Plants as natural antioxidants”, Comparability of Phytochemical analysis, 11, 137-147 and Assay n http://www.lrc.tnu.edu.vn Choice”, va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN Results an Lu Methodologies, m co 31 Hadacek F., Harald G (2000), “Testing of Antifungal Natural products: ac th si 51 32 Halliwell B (1991), “Reactive oxygen species in living systems: soure, biochemistry, and role in human disease”, The American Journal of Medicine,91,14-22 33 Houghton P., Fang R., Techatanawat I., Steventon G., Hylands P.J., Lee C.C (2007), “The sulforhodamine (SRB) assay and other approaches to testing plant extracts and derived compounds for activities related to reputed anticancer activity”, Methods, 42, 377-387 34 James B.M., Michael J.C., Robert J.G., Robert W.B., Carol L.S., Yali F.H., Michael R.B (1995), “Michellamine B, a Novel Plant Alkaloid, lu Inhibits HumanImmunodeficiency Virus-Induced Cell Killing byat Least an va Two Distinct Mechanisms”, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, n 39(2) 484-488 food components: Reviews”, Journal of Agricultural and Food p ie gh tn to 35 Joon-Kwan M., Takayuki S (2009), “Antioxidant assays for plant and Chemistry, 57, 1655-1666 oa nl w 36 Karn A.K., Sharon Mah., Kumar R., Sharon Mad (2014), “Naphthyl Isoquinoline alkaloids Extracted from Stem of Ancistrocladus heyneanus d an lu Exhibits Bactericidal Activity”, Research Journal of Pharmaceutical, va Biological and Chemical Sciences, 5(3), 1699-1707 ll u nf 37 Kaur R., Singh J., Singh G., Kaur H (2011), “Anticancer plants: A oi m review”, Journal natural product plant resource, 1(4), 131-136 z at nh 38 Kathiresan K, Boopathy N.S, Kavitha S (2006), “Coastal vegetationo’An underexplored source of anticancer drugs”, Natural Product Radian z 5(2), 115-119 @ gm 39 Lester P (1999), “Methods in enzymology”, Academic Press, 310, 489-503 m co l 40 Lin Z.X., Hoult J.R.S, Raman A (1999), “Sulforhodamine B assay for measuring proliferation of a pigmented melanocyte cell line and its an Lu application to the evaluation of crude drugs used in the treatment of vitiligo”, Journal of Ethnopharmacology, 66, 141-150 n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si 52 41 Marderosian A.Der., Beutler J A (2002), “The Review of Natural Products” 2nd edn, Facts and comparision, 13-43 42 Maclagan T (1876), Drug Discovery: A History, Lancet, 107, 342 43 Marjorie M.C (1999), “Plant products as antimicrobial agents”, Clinnical microbiolygy reviews, 12 (4), 564-582 44 Merck G.F (1848), Natural Product Chemistry for Drug Discovery, Annual of Physics Chemistry, 66, 125 45 McMahon J.B., Currens M.J., Gulakowski R.J., Buckheit R.W Jr., Lackman-Smith C., Hallock Y.F., Boyd M.R (1995), “Michellamine lu B, a novel plant alkaloid, inhibits human immunodeficiency virus- an va induced cell killing by at least two distinct mechanisms”, Antimicrobial n Agents Chemother, 39(2),484-488 “Antimicrobial activity of Naphthyl Iso-quinoline alkaloids of ie gh tn to 46 More S., Maldar N.N., Bhamra P., Sharon Mah., Sharon Mad (2012), p Ancistrocladus heyneanus: I Extracted from Leaves”, Advances in nl w Applied Science Research, (5), 2760-2765 d oa 47 Pazisis K.T., Geromichalos G.D., Dimitriadis K.A., Kortsaris A.H an lu (1997), “Optimization of the sulforhodamine B colorimetric assay”, va Journal of Immunological Methods, 208(2), 151-158 ll u nf 48 Pascal Amoa Onguéné P.A., Ntie-Kang F., Lifongo L.L., Ndom J.C., oi m Sippl W., Mbaze L.M (2013), “The potential of anti-malarial z at nh compounds derived from African medicinal plants, part I: a pharmacological evaluation of alkaloids and Terpenoids”, Malaria z Journal, 12,449 @ gm 49 Ponte-Sucre, Faber J.H., Gulder T., Kajahn I., Sarah E H Pedersen, Naphthylisoquinoline Alkaloids and m co l Schultheis M., Bringmann G., Moll H (2007), “Activities of Synthetic Analogs against 188-194 n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN an Lu Leishmania major”, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 51(1), ac th si 53 50 Reif-Acherman S (2011), “The contributions of Henri Victor Regnault in the context of organic chemistry of the first half of the nineteenthcentury”, Química Nova, 35(2), 438-443 51 Segiun M.A (1814), Natural Product Chemistry for Drug Discovery, Annual Chemistry, 92, 225 52 Wieland Voigt (2005), Methods in Molecular Medicine, Humana Press Inc, 110, 39-48 53 Wani M.C., Taylor H.L., Wall M.E., Coggon P., McPhail A.T (1971), “Plant antitumor agent VI The isolation and structure of taxol, a novel lu an antileukemic and antitumor agent from Taxus brevifolia”, Journal of n va American Chemical Society, 93, 2325-2327 tn to III Tài liệu trang Web gh 54 Botanyvn.com p ie 55 http://wikipedia.org/wiki/khang_sinh 56 http://en.wikipedia.org/wiki/Free-radical_theory w oa nl 57 http://en.wikipedia.org/wiki/Reactive_oxygen_species d 58 http://digipat.noip.gov.vn (Thư viện số sáng chế Việt Nam) ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n http://www.lrc.tnu.edu.vn va Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si