(Luận văn) nghiên cứu đặc điểm hình thái và xác định một số trình tự gen phân loại cây sói rừng (sarcandra glabra (thunb ) nakai)

i ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC - - MAI HOÀNG OANH lu an va n NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI VÀ XÁC to p ie gh tn ĐỊNH MỘT SỐ TRÌNH TỰ GEN PHÂN LOẠI d oa nl w CÂY SÓI RỪNG (Sarcandra Glabra (Thunb.) Nakai) nf va an lu lm ul LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG z at nh oi z m co l gm @ an Lu Thái Nguyên – 2016 n va ac th si ii ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC - - MAI HOÀNG OANH lu NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI VÀ XÁC an n va ĐỊNH MỘT SỐ TRÌNH TỰ GEN PHÂN LOẠI p ie gh tn to CÂY SÓI RỪNG (Sarcandra Glabra (Thunb.) Nakai) d oa nl w Mã số: 60.42.02.01 nf va an lu Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học z at nh oi lm ul LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG z @ m co l gm Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thị Hải Yến an Lu Thái Nguyên - 2016 n va ac th si iii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi nhóm nghiên cứu, số liệu, kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa có cơng bố cơng trình khác Thái Ngun, tháng 10 năm 2016 Tác giả luận văn lu an n va Mai Hoàng Oanh p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si iv LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận văn này, tơi xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Thị Hải Yến - Khoa Khoa học sống - Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên tận tình hướng dẫn giúp đỡ Tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Lê Văn Sơn ThS Hồ Mạnh Tường cán nghiên cứu thuộc Phịng cơng nghệ ADN ứng dụng - Viện Công nghệ sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt lu Nam giúp đỡ tơi q trình thực luận văn an va Tôi xin gửi lời cảm ơn tới thầy, cô giáo nhà khoa học trực n tiếp giảng dạy truyền đạt kinh nghiệm, kiến thức khoa học quý báu gh tn to Cảm ơn thầy cô, đồng nghiệp bạn bè tận tình giúp đỡ, tạo điều kiện p ie tốt để tơi hồn thành luận văn Tôi trân trọng biết ơn giúp w đỡ oa nl Tơi xin chân thành cảm ơn thầy cô cán sở đào tạo d thuộc Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên giúp đỡ tạo lu thực đề tài nf va an điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập trình lm ul Cuối cùng, tơi xin cảm ơn gia đình bạn bè động viên, giúp z at nh oi đỡ suốt trình học tập nghiên cứu Tác giả luận văn z co l gm @ m Mai Hoàng Oanh an Lu n va ac th si v MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan sói rừng .3 1.1.1 Phân loại học 1.1.2 Thành phần hóa học sói rừng 1.1.3 Tác dụng sinh học sói rừng 1.2 Tổng quan mã vạch DNA lu 1.2.1 Giới thiệu DNA Barcode an 1.2.2 Các đặc điểm trình tự barcode va n 1.2.3 Một số locus sử dụng phương pháp DNA barcode thực vật ie gh tn to 1.2.3.1 Trình tự gen nhân p 1.2.3.2 Vùng gen mã hóa ribosome 10 1.2.3.3 Trình tự gen lục lạp 10 w oa nl 1.3 Ứng dụng mã vạch DNA nhận biết dược liệu 14 d Chương 2:VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 lu nf va an 2.1 Vật liệu nghiên cứu, hóa chất thiết bị .18 2.1.1 Vật liệu thực vật 18 lm ul 2.1.2 Chủng vi khuẩn 18 z at nh oi 2.1.3 Hóa chất 18 2.1.4 Thiết bị sử dụng 19 2.1.5 Địa điểm nghiên cứu 19 z gm @ 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 l 2.2.1 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm hình thái 19 m co 2.2.2 Phương pháp sinh học phân tử 20 2.2.2.2 Kiểm tra sản phẩm DNA sau tách chiết 21 an Lu 2.2.2.3 Phương pháp nhân gen đích kỹ thuật PCR 22 n va 2.2.2.4 Tinh sản phẩm PCR 24 ac th si vi 2.2.2.5 Phản ứng ghép nối gen ngoại lai vào vector 25 2.2.2.6 Biến nạp DNA plasmid vào tế bào E coli phương pháp sốc nhiệt 26 2.2.2.7 Phương pháp PCR trực tiếp từ khuẩn lạc (colony - PCR) 26 2.2.2.8 Tách chiết plasmid từ tế bào E coli 28 2.2.2.9 Phương pháp xác định trình tự gen 29 Phương pháp phân tích số liệu 29 2.2.2.10 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Đặc điểm thực vật học sói rừng thu Lạng Sơn 30 lu 3.2 Phân lập gen từ mẫu sói rừng 32 an 3.2.1 Tách chiết DNA tổng số 32 va n 3.2.2 Khuếch đại vùng gen nghiên cứu phản ứng PCR 33 gh tn to 3.2.3 Kết ghép nối gen vào vector tách dòng 35 3.2.4 Kết chọn dòng tế bào mang gen tái tổ hợp 36 ie p 3.2.5 Kết tách chiết plasmid tái tổ hợp 37 nl w 3.3 Kết xác định trình tự đoạn đoạn gen nghiên cứu 38 d oa 3.3.1 Phân tích trình tự đoạn gen rpoC1 39 an lu 3.3.2 Phân tích vùng ITS 42 nf va KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si vii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tên tiếng Anh bp Base pair CBOL Consortium for the Barcode of Life CTAB Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide DNA Deoxyribonucleic acid dNTP Deoxyribonucleostide triphosphate EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid E coli Escherichia coli IPTG Isopropylthio-beta-D-galactoside UV Ultraviolet LB Luria Bertani ITS-rDNA Internal Transcribed Spacer-rDNA Kb Kilobase OD Optical density PCR Polymerase Chain Reaction RNA Ribonucleic acid rDNA Ribosome deoxyribonucleic acid lu Ký hiệu an n va p ie gh tn to nl w Sodium dodecyl sulphate d SDS Ribonuclease oa Rnase Tris - Acetic acid - EDTA Thermus aquaticus polymerase z at nh oi lm ul Taq polymerase Sequence-Tagged Site nf va TAE Solution an STS lu Sol TE Tris - Ethylenediaminetetraacetic acid X-gal X - - brom - - chloro3 - indolyl - β - D - galactosidase z m co l gm @ an Lu n va ac th si viii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thông tin số mồi DNA Barcode thiết kế cho hệ gen lục lạp 111 Bảng 2.1 Các máy móc thiết bị sử dụng thí nghiệm 19 Bảng 2.2 Thành phần dung dịch đệm rửa 200 Bảng 2.3 Thành phần dung dịch đệm tách 200 Bảng 2.4 Thành phần phản ứng PCR 22 lu Bảng 2.5 Chu trình nhiệt cho phản ứng PCR nhân gen ITS 23 an n va Bảng 2.6 Chu trình nhiệt cho phản ứng PCR nhân gen rpoC1 23 tn to Bảng 2.7 Trình tự mồi dùng phản ứng PCR 23 ie gh Bảng 2.8 Thành phần phản ứng ghép nối đoạn gen vào vector tách dịng 25 p Bảng 2.9.Thành phần mơi trường chọn lọc tế bào vi khuẩn mang 26 oa nl w Bảng 2.10 Thành phần phản ứng colony - PCR 27 d Bảng 2.11 Chu trình nhiệt phản ứng colony-PCR 27 an lu Bảng 2.12 Thành phần hóa chất tách plasmid 28 nf va lm ul Bảng 3.1 Các vị trí sai khác trình tự nucleotide đoạn gen rpoC1 41 z at nh oi Bảng 3.2 Hệ số tương đồng hệ số sai khác trình tự nucleotide gen rpoC1 phân lập từ mẫu sói rừng thu lạng sơn 41 z Bảng 3.3 Mức độ tương đồng gen ITS mẫu sói rừng nghiên cứu với @ số trình tự ngân hàng gen giới (NCBI) 44 gm co l Bảng 3.4 Các vị trí sai khác trình tự nucleotide đoạn gen ITS 46 m Bảng 3.5 Hệ số tương đồng hệ số sai khác trình tự nucleotide gen an Lu ITS phân lập từ mẫu sói rừng thu lạng sơn 46 n va ac th si ix DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh sói rừng tự nhiên Hình 2.1 Sơ đồ vector pBT 25 Hình 3.1 Mẫu Sói rừng thu thập Lạng sơn 30 Hình 3.2 Các phận sói rừng 31 Hình 3.3 Kết điện di DNA tổng số Sói rừng gel agarose 1% 32 lu Hình 3.4 Kết điện di sản phẩm nhân gen rpoC1 sản phẩm nhân gen an n va ITS từ cặp mồi đặc hiệu 34 tn to Hình 3.5 Kết biến nạp vector tái tổ hợp vào tế bào khả biến 35 ie gh Hình 3.6 Kết điện di sản phẩm PCR - clony khuẩn lạc sử dụng mồi p rpoC1 mồi ITS 37 oa nl w Hình 3.7 Kết điện di sản phẩm tách chiết plasmid 38 d Hình 3.8 Trình tự nucleotide đoạn rpoC1 phân lập từ mẫu sói rừng nf va an lu hai trình tự mang mã số EF380352 KP256024 Genbank 40 Hình 3.9 Sơ đồ hình so sánh mức độ tương đồng đoạn gen rpoC1 z at nh oi lm ul mẫu sói rừng với mẫu EF380352 KP256024 Genbank 42 Hình 3.10 Trình tự nucleotide đoạn gen ITS phân lập từ mẫu sói rừng SR trình tự mang mã số JN407442, JN407443, KC840060, KP317601 ngân z hàng gen quốc tế 45 @ l gm Hình 3.11 Sơ đồ hình so sánh mức độ tương đồng đoạn vùng gen ITS mẫu sói rừng với mẫu có mã số JN407442, JN407443, KC840060, KP317601 co m ngân hàng gen quốc tế ………………………………………………… 46 an Lu n va ac th si MỞ ĐẦU Theo đánh giá Tổ chức Y tế Thế giới, bệnh ung thư gánh nặng kinh tế - xã hội quốc gia, trung bình năm có thêm 10 - 16 triệu người mắc bệnh Đây bệnh nguy hiểm, có tỷ lệ tử vong cao Mặc dù có nhiều phương pháp điều trị đại nhằm loại bỏ khối u phương pháp xạ trị, hóa trị, liệu pháp hormon, liệu pháp sinh học, điều trị trúng đích ghép tế bào gốc để ức chế tiêu diệt tế bào ung thư Ngoài ra, người bệnh phải sử dụng thuốc nhằm nâng cao thể trạng, khắc phục hậu khối u gây ra, kéo dài thời lu an gian sống cho người bệnh Tuy nhiên, phương pháp tốn mặt n va kinh tế [3], [9] to tn Ngày việc sử dụng loại thuốc thảo dược theo cách cổ truyền ie gh hay hợp chất tổng hợp từ chất có nguồn gốc thiên nhiên có xu p hướng ngày tăng chiếm vị trí quan trọng y học, nl w chúng có khả chữa trị bệnh cao, an tồn tác dụng phụ Ở Việt Nam d oa tính đến 2005 xác định 3948 loài thực vật nấm, 52 loài tảo biển, an lu 408 loài động vật 75 loại khống vật có cơng dụng làm thuốc Đa số nf va thuốc mọc tự nhiên, tập trung chủ yếu quần xã rừng, có gần 10 % lm ul số thuốc trồng [1] Kết cho thấy nguồn dược liệu nước ta phong phú đa dạng chủng loại z at nh oi Các nghiên cứu khoa học gần cho thấy Sói rừng (Sarcandra Glabra (Thunb.) Nakai) dược liệu có khả chữa trị bệnh cảm mạo, z gm @ viêm phổi, viêm ruột thừa, đau lưng số bệnh ung thư ung thư tụy, ung thư dày, ung thư gan, ung thư trực tràng, ung thư cuống họng… [2], l co [12], [21] Tuy nhiên việc nghiên cứu sử dụng thuốc chưa quan m tâm mức làm cho khu vực phân bố loài bị thu hẹp trữ an Lu lượng loài suy giảm cách nghiêm trọng n va ac th si 40 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w Hình 3.8 Trình tự nucleotide đoạn rpoC1 phân lập từ mẫu sói rừng hai trình tự mang mã số EF380352 KP256024 ngân hàng gen an lu nf va Phân tích vị trí sai khác cho thấy, trình tự nucleotide gen rpoC1 phân lập từ mẫu Sói rừng có sai khác so với trình tự mang mã số lm ul EF380352 10 vị trí sai khác so với trình tự mang mã số KP256024 14 z at nh oi vị trí Các vị trí sai khác trình tự nucleotide mẫu sói rừng so với mẫu EF380352 KP256024 Genbank thể bảng 3.1 Sự sai khác z trình tự nucleotide mẫu sói rừng mẫu Genbank thông tin @ m co l gm quan trọng để xây dựng mã vach DNA có mẫu sói rừng khác an Lu n va ac th si 41 Bảng 3.1 Các vị trí sai khác trình tự nucleotide đoạn gen rpoC1 Trình tự nucleotide gen rpoC1 lồi có mã số lu an n va KP256024 SR.rpoC1 A A C 15 A 16 A A G 34 - T C 67 C C T 122 - T C 160 - C T 189 A A G 202 - C T 271 A A C 303 - T G 382 A A G 499 A A G - - G G G A ie gh tn to EF380352 p Vị trí điểm sai khác d oa nl nf va an lu 551 w 543 G z at nh oi lm ul Bảng 3.2 Hệ số tương đồng hệ số sai khác trình tự nucleotide gen rpoC1 phân lập từ mẫu sói rừng thu Lạng Sơn z m co l gm @ an Lu n va ac th si 42 Sơ đồ hình thể mối quan hệ di truyền mẫu sói rừng sở phân tích gen rpoC1 hình 3.9 cho thấy, mẫu SR thu thập từ Lạng sơn – Việt Nam nằm thành nhánh riêng biệt khác hẳn với nhánh cịn lại mang lồi thuộc họ hoa sói cơng bố Genbank (EF380352 phân lập từ sói Chloranthus spicatus KP256024 phân lập từ sói nhật Chloranthus japonicus) Khoảng cách di truyền xác định sở so sánh trình tự nucleotide đoạn gen rpoC1 phân lập từ mẫu sói rừng thu Lạng Sơn trình tự ngân hàng gen 1,0 % lu an n va p ie gh tn to nl w d oa Hình 3.9 Sơ đồ hình so sánh mức độ tương đồng đoạn gen rpoC1 an lu mẫu sói rừng với mẫu EF380352 KP256024 Genbank nf va Điều khẳng định tính bảo thủ hệ gen lục lạp thực vật 3.3.2 Phân tích vùng ITS z at nh oi lý xa lm ul trình tự gen so sánh thuộc lồi khác thu từ ba vùng địa z Vùng ITS (Internal Transcribed Spacers) vùng mã hóa cho @ gm đoạn ARN khơng đóng vai trị chức nằm vùng mã hóa cho co l ARN ribosome nhân Vùng ITS dài khoảng 655 bp gồm ba phần: vùng ITS1 m nằm vùng 18S 5,8S có kích thước khoảng 255-261 bp, vùng 5,8S dài an Lu khoảng 164 bp vùng ITS2 nằm vùng 5,8S 28S khoảng 216 - 233 bp n va ac th si 43 Đây trình tự thường xuyên sử dụng nghiên cứu hệ thống phát sinh loài thực vật Từ kết xác định trình tự, chúng tơi tiến hành so sánh mức độ tương đồng vùng ITS mẫu sói rừng nghiên cứu với kết công bố ngân hàng gen giới - NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) Kết xác định so sánh trình tự trình bày bảng 3.3 hình 3.10 Kết xác định trình tự thu đoạn gen khoảng 650 bp, với kích thước tính tốn lý thuyết vùng ITS khoảng 655 bp, so sánh trình tự lu DNA vùng gen ITS mẫu nghiên cứu với trình tự DNA vùng gen ITS an loài thuộc chi Sacandra công bố Genbank phần mềm va n Bioedit kết cho thấy có tỷ lệ tương đồng cao mẫu ITS phân tn to lập trình tự Genbank Vùng ITS mẫu sói rừng nghiên cứu ie gh tương đồng 99% so với vùng ITS mã số JN407442, JN407443, KC840060, p KP317601 ngân hàng gen quốc tế Kết khẳng định đoạn gen phân nl w lập từ mẫu sói rừng vùng ITS Như nhân xác d oa định trình tự đoạn vùng ITS phân lập từ mẫu Sói rừng từ Lạng Sơn nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si 44 Bảng 3.3 Mức độ tương đồng vùng ITS mẫu sói rừng nghiên cứu với số trình tự ngân hàng gen giới (NCBI) Tỷ lệ Trình tự tương đồng với ITS STT Mã số tương NCBI đồng (%) Sarcandra glabra isolate shawpc0691I 18S ribosomal RNA gene, partial sequence; internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal lu an JN407442 99 JN407443 99 spacer 1, partial sequence; and 5.8S KC840060 99 RNA gene, and internal transcribed spacer va n 2, complete sequence; and 28S ribosomal tn to RNA gene, partial sequence ribosomal RNA gene, partial sequence; p ie gh Sarcandra glabra isolate shawpc0692I 18S internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal nl w oa RNA gene, and internal transcribed spacer d 2, complete sequence; and 28S ribosomal lu Sarcandra nf va an RNA gene, partial sequence glabra subsp brachystachys lm ul voucher KUN 200653 internal transcribed ribosomal RNA z at nh oi gene and internal z transcribed spacer 2, complete sequence @ spacer 1, partial sequence; 5.8S ribosomal RNA gene, KP317601 99 spacer 2, partial sequence an Lu complete sequence; and internal transcribed m co transcribed l internal gm Sarcandra glabra voucher KWNU91871 n va ac th si 45 lu an n va p ie gh tn to nl w Hình 3.10 Trình tự nucleotide vùng ITS phân lập từ mẫu sói rừng SR d oa trình tự mang mã số JN407442, JN407443, KC840060, KP317601 an lu ngân hàng gen quốc tế nf va Kết so sánh trình tự đoạn vùng ITS phân lập từ mẫu sói rừng với lm ul trình tự Genbank có độ tương đồng giao động từ 99,1 đến 99,4 Sự sai z at nh oi khác giao động từ 0,6 – 0,8 Kết thể bảng 3.5 Mặc dù có hệ số tương đồng tương đối cao, trình tự z nucleotide vùng ITS phân lập từ mẫu Sói rừng có sai khác so với gm @ trình tự mang mã số JN407442, JN407443, KP317601 vị trí, sai khác l so với trình tự mang mã số KC840060 vị trí Các vị trí sai khác trình an Lu KP317601 Genbank thể bảng 3.4 m co tự nucleotide mẫu SR so với mẫu JN407442, JN407443, KC840060, n va ac th si 46 Bảng 3.4 Các vị trí sai khác trình tự nucleotide vùng ITS Trình tự nucleotide gen ITS lồi có mã số Vị trí điểm sai khác JN407442 JN407443 KC840060 KP317601 SR ITS lu C C T C C 66 G G G G C 102 C C C C T 215 G G G G A 375 C C C C T an va n Bảng 3.5 Hệ số tương đồng hệ số sai khác trình tự nucleotide tn to vùng ITS phân lập từ mẫu sói rừng thu Lạng Sơn p ie gh nf va an lu Hệ số phân ly d oa nl w z at nh oi lm ul z l gm @ m co Hình 3.11 Sơ đồ hình so sánh mức độ tương đồng đoạn vùng gen ITS an Lu mẫu sói rừng với mẫu có mã số JN407442, JN407443, KC840060, KP317601 n va ac th si 47 Sơ đồ hình hình 3.11 dựa kết so sánh trình tự nucleotide đoạn gen ITS cho thấy mẫu sói rừng chia thành nhóm Nhóm thứ gồm mẫu có mã số JN407442, JN407443, KC840060, KP317601 nhóm thứ mẫu Sói rừng Khoảng cách di truyền hai nhánh 0,3% Như dựa vào phương pháp so sánh trình tự ITS, góp phần khẳng định thêm vùng gen ITS mã vạch DNA tiềm cho nhận diện lồi Sử dụng mã vạch DNA có vai trò quan trọng việc nhận diện mẫu thực vật, đặc biệt nhân diện loài thực vật dùng làm thuốc thảo lu dược, giúp đảm bảo chất lượng sản phẩm có tầm quan trọng việc an nghiên cứu đặc tính đa dạng di truyền Trong nhiều nghiên cứu trước va n chứng minh trình tự ITS rpoC1 có vai trị to lớn việc nhận gh tn to diện nguyên liệu thảo mộc Chúng bước đầu nghiên cứu sử dụng hai trình tự gen ITS rpoC1 làm mã vạch DNA Kết giải trình tự phân tích kết ie p thu cho thấy mẫu nghiên cứu có độ tương đồng tương đối cao với nl w trình tự công bố Genbank Cùng với nghiên cứu khác giới d oa khẳng định vùng gen ITS rpoC1 giúp nhận diện lồi mã vạch nf va an lu phân tử z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si 48 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ I Kết luận Đã nghiên cứu đươc số đặc điểm hình thái sói rừng Cây thân bụi, có rễ phát triển, thân gỗ, mọc đối, bơng kép, có nhánh ngắn, nhỏ mọng Đã tách chiết tinh DNA tổng số mẫu sói rừng từ Lạng Sơn Nhân thành công hai vùng gen ITS rpoC1 phương pháp PCR tạo dịng thành cơng hai gen nhân lu an Đã xác định trình tự nucleotide đoạn gen rpoC1 ITS, kết n va phân tích cho thấy vùng ITS có kích thước khoảng 650 bp đoạn gen rpoC1 tn to có kích thước 550 bp Có hệ số tương đồng cao với trình tự ngân gh hàng gen giới, từ 97,6 % - 98,4 % với gen rpoC1; Còn với vùng ITS, hệ số p ie tương đồng từ 99,1 - 99,4 % Khoảng cách di truyền mẫu sói rừng thu nl w thập Lạng sơn mẫu Genbank dao động từ 0,3 - 1,0 d oa II Kiến nghị an lu Cần tiếp tục phân tích trình tự ncleotide gen phân loại khác z at nh oi lm ul sói rừng nf va matK, ycf5, trnH-psbA,… cở sở phục vụ xây dựng mã vạch DNA cho z m co l gm @ an Lu n va ac th si 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt [1] Cục Quản lý Dược (2005), Báo cáo tổng kết công tác dược 2000-2005 [2] Nguyễn Quỳnh Anh (2013), “ Nghiên cứu ứng dụng Sói rừng ( Sarcandra GlaBra (Thunb) Nakai) Cao Bằng để hỗ trợ điều trị số bệnh ung thư”, Khoa học công nghệ Cao Bằng [3] Đái Duy Ban Lữ Thị Cẩm Vân cs (2000) Phòng bênh ung thư Nhà xuất Y học Hà Nội, 150-155 lu [4] Võ Văn Chi, Từ điển thực vật thông dụng, Nxb Khoa học kỹ thuật, an n va tập 2, 2004 tn to [5] Võ Văn Chi (1999), Từ điền thuốc Việt Nam, NXB Y học Hà Nội, 1976 p ie gh [6] Vũ Văn Chuyên, Tóm tắt đặc điểm họ thuốc Việt Nam, Nxb Y học nl w [7] Phạm Hoàng Hộ, Cây cỏ Việt Nam, Nxb trẻ, 1, tr 287, 1999 oa [8] Đinh Đoàn Long, Đỗ Lê Thăng, (2008), Cơ sở di truyền học phân tử tế d bào, NXB Đại học Quốc Gia Hà Nội an lu nf va [9] Nguyễn Hải Nam (2012) Một số mục tiêu phân tử ứng dụng học Hà Nội, 18-25 z at nh oi lm ul nghiên cứu phát triển thuốc điều trị ung thư Nhà xuất Y [10] Bùi Văn Trọng, Nguyễn Cao Xuân Viên, Nguyễn Thanh Nguyên, (2014), “Ảnh hưởng số chất điều hòa sinh trưởng tới hình z thành rễ hom sói rừng ( Sarcandra Glaban (Thunb.) Nakai.) @ gm Lâm Đồng ”, Tạp chí Viện dược liệu Hà Nội, tập 19, số co l [11] Viện Dược Liệu (1973), Sổ tay thuốc Việt Nam NXB Y học, tr 213 m [12] Mai Thị Hải Yến (2010), “Nghiên cứu thành phần hóa học số tác an Lu dụng sinh học Sói rừng”, Luận văn thạc sỹ dược học, Học viện n va quân y ac th si 50 Tài liệu tiếng nước [13] Alvarez I., Wendel J.F (2003), “Ribosomal ITS sequences and plant phylogenetic inference”, Molecular Phylogenetics and Evolution, 29,pp.417-434 [14] Hamilton B.M (1999), “Four primer pairs for the amplification of chloroplast intergenic regions with intraspecific variation”, Molecular Ecology, 8,pp.513-525 lu [15] Borsch T., Hilu K.W., Quandt D., Wilde V., Neinhuis C., Barthlott W (2003), “Noncoding plastid trnT-trnF sequences reveal a well resolved phylogeny of basal angiosperms”, Journal of Evolutionary Biology, (6), pp 558-576 an n va p ie gh tn to [16] Chase M W., Nicolas S., Mike W., James M D., Rao P K., Nadia H., and Vincent S (2005), “Land plants and DNA barcodes: short-term and long-term goals”, Philosophical Transactions of the Royal Society, 360 (1462), pp 1889-1895 [17] Collons G.G and Symons R.H (1992), Plant Molecular Biology Reporter., 10,233 w oa nl [18] Feng S., Xu L., Wu M., Hao J., Qiu SX, Wei X., (2010), A new curmarin d from Sarcandra Glabra, Fitoterapia, an lu [19] Huang M.J., Zeng G.Y., Tan J.B., Li Y.L., Jan G.S., Zhou Y.J (2008), nf va Studies on flavonoid glycosides from Sarcandra Glabra, Zhongguo lm ul zhong yao za zahi, Vol 33(44), p 1700 – 10702 z at nh oi [20] Huang D., Huang H., Lu Y., (2013), Clinical Observation of Sarcandra glabra combined chemoradiotherapy for treating patients with local z advanced nasopharyngeal carcinoma Zhongguo Zhong Xi Yi Jie Za Zhi, gm @ 33(4), 456-458 Zhongguo Yao Xue Za Zhi, 43 (10), 721-723 m co l [21] Hu X., Xu X., Yang J., (2008), Progree in research on Sarcandra Glabra an Lu n va ac th si 51 [22] Hebert P.D.N, Cywinska A., Ball S.L., De Waard J.R., (2003), “Biological indentification through DNA barcodes”, Proc R Soc Lond B Biol Sci, 270,pp.313-321 [23] He R.R., Yao X.S., Li H.Y., Dai Y., Duan Y.H., Li Y.F., Kurihara H., (2009), The anti-stress effects of Sarcandra glabra extract on restraintevoked immunocompromise, Biological and Pharmaceutical Bulletin, 32(2), 247-252 [24] Jarman S.N., Elliott N.G., (2000), “DNA evidence for morphological an cryptic Cenozoic speciations in the Anaspididae, “living fossils” From the Triassic”, Journal of Evolutionary Biology., 13,pp.624-633 lu [25] Kesanakurthi R.P., Fazekas A.J., Burgess K.S., Percy D.M., Newmaster an S.G., Graham S.W., Barrett S.C., Hajibabaei M., Husband B.C., (2011), va n “Spatial patterns of plant diversity below ground as revealed by DNA gh tn to barcoding”, Molecular Ecology, 20, pp.1289-1302 [26] Kress J.W., Wurdack K.J., Zimmer E.A., Weigt L.A.,Janzen D.H., ie p (2005), “Use of DNA barcodes to identify flowering plants”, Proc.Natl nl w Acad.Sci USA, 102,pp.8369-8374 d oa [27] Kress W J., Erickson D L., (2008), “DNA barcodes: Genes, genomics, an lu and bioinformatics”, Proc Natl Acad Sci U S A, 105(8), pp 2761-2762 nf va [28] Kang M., Tang A.Z., Liang G., Yi X., Liu J., (2008), Study on the lm ul apoptosis of nasopharyngeal carcinoma cell line administrated with Sarcandra glabra extracts in vivo and its mechanism Zhong Yao Cai z at nh oi Vol.31 (10):1529-1533 [29] Leng Y., Li G., Chen S., (2010), Research related to the effectiveness of z anti tumor effect of Herba Sarcandra Chin J Mod Drug App, l 4, (6), 16-20 gm @ [30] Ole S., Gitte P., (2009), “How many loci does it take to DNA barcode a m co l crocus?”, PLoS ONE, 4(2), pp 4598 [31] Paul D.N Hebert, Alina C., Shelley L.B., Jeremy R.W., (2003), an Lu “Biological identifications through DNA barcodes” Proc.R.Soc.Lond.B n va (270.pp 313-321;DOI 10.1098/rspb.2002.2218 ac th si 52 [32] Porebski S., Baily L.G., Baum B.R., (1997), Modification of a CTAB DNA extraction protocol for plants containing high polysaccharide and polyphenol components Plant Molecular Biology Reporter 15, 8-15 [33] Ratnasingham S., Paul D.N Hebert , (2007), “BOLD: the barcode of life data system”, Molecular Ecology Resources, 7, pp.355-364 [34] Savolainen V., Chase M W., (2003), “A decade of progress in plant molecular phylogenetics”, Trends Genet, (19), pp 717-724 [35] Shaw J., Lickey E.B., Schilling E E., Small R.L., (2007),” Comparison of whole chloroplast genome sequences to choose noncoding regions for lu phylogenetic studies in angiosperms”, The tortoise and the hare III an Amer J Bot, (94), pp 275-288 va n [36] Song J.Y., Yao H., Li Y., Li X.W., Lin Y.L, Liu C., Han J., Xie to Chinese pharmacopoeia by DNA barcoding technique J Ethnopharm ie gh tn C., Chen S., (2009), Authentication of the family Polygonaceae in p 124: 434–439 nl w [37] Storchova H., Olson M S., (2007), “The architecture of the chloroplast d oa psbA-trnH non coding region in angiosperms” Plant systematic and an lu evolution Biomedical and life Sciences, Vol 268, No 1-4, pp 235-256 nf va [38] Sun W., Li J., Lan F., (2014), “Antitumor activities of Zhongjiefeng lm ul injection on FC in mice with precarcinoma of stomach and its toxicity”, Chinese Traditional Patent Medicine Journal , (3), 169-171 z at nh oi [39] Taberlet P., Eric C., Franỗois P., Ludovic G., Christian M., Alice V., Thierry V., Gérard C., Christian B., Eske W., (2007), “Power and z @ limitations of the chloroplast trnL (UAA) intron for plant DNA l gm barcoding”, Nucleic Acids Res, 35(3), pp14 m co [40] 徐国良,肖兵华,陈奇(2005),肿节风及其分离部位对免疫性血小板 减 an Lu 少性紫癜小鼠血小板的影响.中国实验方剂学杂志,11(4),120-124 n va ac th si 53 Từ Quốc Lượng, Tiêu Tân Hoa, Trần Kỳ (2005) Tác dụng thũng tiết phong thành phần thuốc tới tiểu cầu chuột xuất huyết giảm tiểu cầu Tạp chí thực nghiệm Trung Quốc, 11(4),120-124 [41] Van den Berg C., Higgins W E., Dressler R L., Whitten W M., Soto Arenas M A., Culham A., Chase M W., (2000), “A phylogenetic analysis of Laeliinae (Orchidaceae) based on sequence data from nuclear internal transcribed spacers (ITS) of ribosomal DNA”, Lindleyana (15), pp.96114 [42] Van DeWiel C C M., Van Der Schoot J., Van Valkenburg J L., lu Duistermaat C H., Smulders ,(2009), “DNA barcoding discriminates the an noxious invasive plant species, floating pennywort (Hydrocotyle va n ranunculoides L.f.), from non-invasive relatives”, Molecular Ecology to tn Resources (9), pp.1086-1091 ie gh [43] Vijayan K., Tsou C H., (2010), “DNA barcoding in plants: taxonomy in p a new perspective”, Current science, vol 99, pp 1530 - 1540 nl w [44] Wang X., T.Y., Yoshimaru H., Nagasaka K., Szmidt A.E., (1999), d oa “Phylogenetic relationships of Eurasian pines (pinut, Pinaceae) based on an lu chloroplast rbcL, matK, rpl120-rps18 spacer, and trnV intron nf va sequences”, American Journal of Botany 86,pp.1742-1753 lm ul [45] Wang W., Wu Y., Yan Y., Ermakova M., Kerstetter R (2010), “DNA barcoding of the Lemnaceae, a family of aquatic monocots”, BMC Plant z at nh oi Biology (10), pp.205 [46] Wang A.Q., Feng S.C., He X., Xu R.S., (1988), A new sesquiterpen z lactone from Sarcandra Glabra, Yao xue xue bao, Vol 23 (1): 64 – 66, Li J., Lan F., Yan gm @ [47] Wen J., G (2003), “Antitumor effect of l co Zhongjiefeng Injection on mice liver cancer HepA22 and its toxicity” m Chinese Traditional Patent Medicine Journal, 4, 39-43 an Lu [48] Wu F., Mueller L A., Crouzillat D., Petiard V., Tanksley S D (2006), n va “Combining bioinformatics and phylogenetics to identify large sets of ac th si 54 single-copy orthologous genes (COSII) for comparative, evolutionary and systematic studies: A test case in the euasterid plant clade”, Genetics (174), pp 1407-1420 [49] Xu X.D., Hu X.R., Yuan J.Q., Yang J.S., (2008), Studies on chemical constituents of Sarcandra glabra, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi Vol 33(8): 900-902 [50] Yao H., Song J., Liu C., Luo K., Han J., (2010), “Use of ITS2 region as theuniversal DNA barcode for plants and animals”, PLoS ONE (5), pp.13102 lu an [51] Yong H L., Jinlan R., Shilin C., Jingyuan S., Kun L., Dong L., Hui Y (2010), n va “Authentication of Taxillus chinensis using DNA barcoding technique”, tn to Journal of Medicinal Plants Research Vol 4(24), pp 2706-2709 ie gh [52] Yuan K., Zhu J.X., Si J.P., Cai H.K., Ding X.D., Pan Y.J (2008), Studies p on chemical constituents and antibacterial activity from n-butanol extract of Sarcandra glabra Zhongguo Zhong Yao Za Zhi Vol 33: 1843-1846 w d oa nl [53] Zhang Z., Liu W., Zheng Y., Jin L., Yao W., Gao X., (2014), SGP-2, an acidic polysaccharidee from Sarcandra Glabra inhibits proliferation and migration of human osteosarcoma cell Food Funct, 5, 16 nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si