(Luận văn) nghiên cứu tạo mô sẹo và tái sinh cây dâu tây (fragaria vesca l ) từ mảnh lá

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM VŨ MẠNH TUYỀN lu an n va Tên đề tài: tn to NGHIÊN CỨU TẠO MÔ SẸO VÀ TÁI SINH p ie gh CÂY DÂU TÂY (Fragaria vesca L.) TỪ MẢNH LÁ nl w d oa KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC u nf va an lu ll Hệ đào tạo Chuyên ngành Khoa Khóa học oi m z at nh : Chính qui : Cơng nghệ Sinh học : CNSH - CNTP : 2011 – 2015 z m co l gm @ an Lu Thái Nguyên, năm 2015 n va ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM VŨ MẠNH TUYỀN lu an n va Tên đề tài: tn to NGHIÊN CỨU TẠO MÔ SẸO VÀ TÁI SINH p ie gh CÂY DÂU TÂY (Fragaria vesca L.) TỪ MẢNH LÁ nl w d oa KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC u nf va an lu Hệ đào tạo Chuyên ngành Lớp Khoa Khóa học Giảng viên hƣớng dẫn ll : Chính qui : Công nghệ Sinh học : 43 – CNSH : CNSH - CNTP : 2011 – 2015 : TS Phạm Bằng Phƣơng ThS Bùi Đình Lãm Khoa CNSH – CNTP; Trường ĐH Nông Lâm Thái Nguyên oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va Thái Nguyên, năm 2015 ac th si i LỜI CẢM ƠN Được trí Ban Giám hiệu nhà trường, Ban Chủ nhiệm Khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm thời gian thực tập tốt nghiệp em thực đề tài: “Nghiên cứu tạo mô sẹo tái sinh dâu tây (Fragaria vesca L.) từ mảnh lá” Qua tháng thực tập phịng thí nghiệm ni cấy mơ tế bào thực vật, Bộ môn Công nghệ Sinh học, Khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực lu phẩm, Trường Đại Học Nông Lâm Thái Nguyên Để đạt kết an ngày hôm em xin chân thành cảm ơn KS Lã Văn Hiền giúp đỡ tạo va n điều kiện tốt cho em suốt trình thực đề tài to gh tn Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Phạm Bằng Phương ie ThS Bùi Đình Lãm tận tình bảo, hướng dẫn em thời gian p thực đề tài nl w Cuối em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè ln ủng hộ d oa động viên để em có tự tin suốt thời gian học tập nghiên cứu Do thời an lu gian thực đề tài có hạn nên khơng thể tránh khỏi sai sót Em hồn thiện ll u nf va mong nhận đóng góp ý kiến thầy cô bạn để đề tài em oi m Em xin chân thành cảm ơn ! z at nh Thái Nguyên, ngày 28 tháng năm 2015 Sinh viên thực z l gm @ m co Vũ Mạnh Tuyền an Lu n va ac th si ii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 Thành phần dinh dưỡng dâu tây Bảng 2.2 Diện tích, suất, sản lượng dâu tây giới giai đoạn 2006 - 2012 Bảng 2.3 Sản lượng dâu tây Châu lục giới năm 2012 Bảng 2.4 Diện tích suất dâu tây số nước qua năm 2010 – 2012 lu Bảng 4.1 Nghiên cứu khả nảy mầm hạt dâu tây (sau 30 ngày theo an dõi) 29 va n Bảng 4.2 Ảnh hưởng 2,4D TDZ đến khả tạo mô sẹo từ mảnh to gh tn (sau 30 ngày theo dõi) 31 p ie Bảng 4.3 Ảnh hưởng điều kiện sáng/tối đến khả tạo mô sẹo từ mảnh (theo dõi 30 ngày) 34 nl w Bảng 4.4 Ảnh hưởng BAP TDZ đến khả tái sinh nhân nhanh d oa chồi (theo dõi 30 ngày) 35 ll u nf va an lu Bảng 4.5 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh 39 oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si iii DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Cây dâu tây Hình 4.1 Nghiên cứu khả nảy mầm hạt (sau 30 ngày theo dõi) 30 Hình 4.2 Ảnh hưởng 2,4D TDZ đến khả tạo mơ sẹo từ mảnh lá33 Hình 4.3 Ảnh hưởng điều kiện sáng/tối đến khả tạo mô sẹo từ mảnh 35 Hình 4.4 Ảnh hưởng BAP + TDZ đến khả tái sinh chồi từ mơ sẹo 37 lu Hình 4.5 Ảnh hưởng BA + TDZ đến khả nhân nhanh chồi từ mô an sẹo 38 va n Hình 4.6 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh 41 p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si iv DANH MỤC CÁC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT Nghĩa đầy đủ STT Từ thuật ngữ viết tắt lu an n va BAP Cs Cộng CT Công thức CV Coeficient of Variation DNA Deoxyribonucleic Acid FAO GA3 Gibberellic acid IBA Indole Butyic Acid LSD Least Singnificant Diference Test MS Murashige & Skoog MT Môi trường gh tn to Food and Agriculture Organization of the United Nations oa nl α-Naphthalene acetic acid NAA d 12 w 11 10 p ie 6-Benzylaminopurine lu TDZ 14 2,4-D Thidiazuron va an 13 ll u nf 2,4 - Dichlorophenoxy Acetic Acid oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si v MỤC LỤC Trang Phần 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu 1.3 Yêu cầu 1.4 Ý nghĩa đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học lu 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn an Phần 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU va n 2.1 Tổng quan dâu tây tn to 2.1.1 Nguồn gốc phân loại ie gh 2.1.2 Đặc điểm sinh học dâu tây p 2.1.3 Giá trị dâu tây nl w 2.1.4 Phương pháp nhân giống dâu tây oa 2.2 Tình hình sản xuất dâu tây giới Việt Nam d 2.2.1 Trên giới lu va an 2.2.2 Ở Việt Nam 10 u nf 2.3 Những nghiên cứu nhân giống dâu tây giới Việt Nam 10 ll 2.3.1 Trên giới 10 m oi 2.3.2 Ở Việt Nam 11 z at nh 2.4 Khái niệm sở khoa học nuôi cấy mô tế bào 12 2.4.1 Khái niệm 12 z gm @ 2.4.2 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 12 2.5 Khái niệm hình thành mơ sẹo 14 l m co 2.5.1 Khái niệm 14 2.5.2 Sự hình thành mô sẹo 14 an Lu 2.6 Một số yếu tố ảnh hưởng đến q trình ni cấy mơ tế bào thực vật 16 n va ac th si vi 2.6.1 Vật liệu nuôi cấy 16 2.6.2 Môi trường dinh dưỡng 16 2.6.3 Điều kiện nuôi cấy 20 2.6.4 Chất điều hòa sinh trưởng 20 Phần 3: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 3.1 Vật liệu nghiên cứu 23 3.2 Hóa chất thiết bị sử dụng 23 3.2.1 Hóa chất sử dụng 23 lu 3.2.2 Thiết bị sử dụng 23 an 3.3 Địa điểm thời gian tiến hành 23 va n 3.4 Nội dung nghiên cứu 24 tn to 3.5 Phương pháp nghiên cứu 24 ie gh 3.5.1 Nghiên cứu tạo vật liệu vô trùng 24 p 3.5.2 Nghiên cứu tạo mô sẹo từ mảnh 25 w 3.5.3 Nghiên cứu tái sinh dâu tây từ mô sẹo 26 oa nl 3.6 Phương pháp đánh giá xử lý số liệu 27 d Phần 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 29 lu va an 4.1 Nghiên cứu khả nảy mầm hạt 29 u nf 4.2 Ảnh hưởng 2,4D TDZ đến khả tạo mô sẹo từ mảnh 30 ll 4.3 Ảnh hưởng điều kiện sáng/tối đến khả tạo mô sẹo từ mảnh 34 m oi 4.4 Ảnh hưởng BAP TDZ đến khả tái sinh nhân nhanh chồi 35 z at nh 4.5 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh 39 Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 42 z gm @ 5.1 Kết luận 42 5.2 Kiến Nghị 42 m co PHỤ LỤC l TÀI LIỆU THAM KHẢO an Lu n va ac th si Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Cây dâu tây có tên khoa học Fragaria vesca L thuộc chi Fragaria, giới có khoảng 20 lồi (Nguyễn Thị Thu Hằng, 2011) [3] Dâu tây thích nghi với nhiều loại điều kiện khí hậu khác như: ơn đới, Địa Trung Hải, cận nhiệt đới, ôn đới Ở nước ta vùng trồng dâu tây tập trung chủ yếu lu Lâm Đồng (Lê Thị Mai, 2009) [10] an Dâu tây loại có mùi thơm, vị pha lẫn vị chua va n người tiêu dùng ưa chuộng Khả cung cấp lượng dâu tây cho gh tn to thấy 100g dâu tây cho khoảng 34 calo, ngồi dâu tây có chứa ie nhiều loại vitamin cần thiết cho thể người như: vitamin A, B1, B2, C p đường fructose (Lê Thị Mai, 2009) [10] Trong dâu tây có chứa nl w chất bảo vệ, chống ôxy hóa như: chất khống K, Na, Fe, hợp chất d oa phenolic, chất flavonoid nhiều gấp 10 lần cà chua (Lê Thị Mai, 2009) an lu [10] Ở nước ta dâu tây mẻ so với loại trồng khác u nf va loại có giá trị kinh tế ý phát triển (Nguyễn Thị Thu Hằng, 2011) [3] ll oi m Tuy nhiên dâu tây có nhiều loại bệnh trùng như: z at nh nhện đỏ, sên, bọ trĩ… hay bệnh nấm như: bệnh đốm đen, đốm đỏ, mốc xám, bệnh thối đen rễ, bệnh phấn trắng…và bệnh sinh lý gây nên (Quy z trình kĩ thuật trồng dâu tây, 2012) [37] Các bệnh thường gây nên @ l gm thiệt hại suất chất lượng dâu tây Vì vậy, vấn đề đặt m co cần tạo giống dâu tây bệnh có xuất chất lượng tốt Trong năm gần nhà khoa học giới Việt an Lu Nam tiến hành nhiều nghiên cứu dâu tây Nguồn vật liệu sử n va ac th si dụng để phục vụ tái sinh dâu tây đa dạng hơn, sử dụng phận khác để nuôi cấy như: Lá (Nehra cs, 1988) [31]; (Hossam Zakaria cs, 2014) [36]; (Arzu Birinci Yildirim cs, 2014) [35]; (Nehra cs, 1988) [31], cuống lá, (Debnath cs, 2005) [25]; (Foucault cs, 2005) [27], nụ hoa, (Owen Miller, 1996) [32]), rễ (Owen Miller, 1996) [32], hạt phấn, đoạn thân (Foucault cs, 2005 [27] Xuất phát từ yêu cầu thực tiễn tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu tạo mô sẹo tái sinh dâu tây (Fragaria vesca L.) từ mảnh lá” lu 1.2 Mục tiêu an Nghiên cứu khả tạo mô sẹo tái sinh dâu tây từ va n mảnh  Nghiên cứu tạo vật liệu vô trùng  Nghiên cứu tạo mô sẹo từ mảnh p ie gh tn to 1.3 Yêu cầu oa nl w  Nghiên cứu tái sinh dâu tây từ mô sẹo d 1.4 Ý nghĩa đề tài an lu 1.4.1 Ý nghĩa khoa học u nf va - Hồn thiện quy trình tạo mơ sẹo để tạo nguồn nguyên liệu cho tái sinh ll tạo hoàn chỉnh dâu tây oi m - Cung cấp tài liệu học tập, nghiên cứu cho sinh viên, nhà khoa học z at nh đối tượng câu dâu tây - Giúp sinh viên củng cố hệ thống lại kiến thức học bổ z gm @ sung vào kiến thức lý thuyết học thông qua hoạt động thực tiễn - Giúp thân sinh viên học hỏi kiến thức, tích lũy đượckinh nghiệm l tác sau an Lu - Hồn thành khóa luận tốt nghiệp Đại học m co thực tế tác phong làm việc, nghiên cứu khoa học phục cho cho công n va ac th si 40 rễ 50,0% tăng nồng độ IBA lên 0,3; 0,5; 0,7 1,0 mg/l tỷ lệ rễ tăng lên 63,3%; 73,3%; 80,0% 93,3%, hình thái rễ thu tốt dần lên tương ứng Với giá trị LSD đạt 0,6 chứng tỏ cơng thức có sai khác có ý nghĩa với độ tin cậy 95% Với kết bảng cho thấy IBA có ảnh hưởng lớn đến phát sinh rễ để tạo hoàn chỉnh trước cho trồng mơi trường bên ngồi Nhiều cơng bố việc nuôi cấy giống dâu tây khác lu cho thấy hiệu việc sử dụng IBA để kích thích phát triển rễ an Theo Hossam Zakaria cs (2014) [36] công bố kết sử dụng IBA va n việc kích thích rễ loại dâu tây (Fragaria x ananassa), nồng độ IBA gh tn to 1,5 mg/l cho kết tốt, cụ thể với giống dâu tây Festival, Sweet Charlie ie Florida, kết thu tỷ lệ rễ cho giống dâu tây 90%, 86% p 80% Tương tự, theo Arzu Birinci Yildirim Arzu Ucar Turker, (2014) nl w [35] bổ sung IBA để kích thích rễ tốt nồng độ IBA 1,0 mg/l đạt tỷ d oa lệ 100% giống dâu tây Fragaria vesca L Sự khác biệt cơng thức thí an lu nghiệm cịn thể hình thái rễ Rễ thu công thức cho rễ u nf va trắng, dài 1-3 cm Từ kết đạt khn khổ thí nghiệm, chúng tơi chọn nồng độ IBA 1,0 mg/l nồng độ phù hợp cho việc kích ll oi m thích hình thành rễ z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 41 B C D lu A an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh E Hình 4.6 Ảnh hƣởng IBA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh B, IBA 0,3 mg/l C, IBA 0,5 mg/l D, IBA 0,7 mg/l z A, (Đ/c) IBA 0,0 mg/l @ m co l gm E, IBA 1,0 mg/l an Lu n va ac th si 42 Phần KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Trong khn khổ thí nghiệm đưa số kết luận sau: - Khả nảy mầm hạt cho kết tốt hạt phá vỡ trạng thái ngủ nghỉ, tỷ lệ hạt nảy mầm đạt 69,33% lu - Nồng độ 2,4D 0,1 mg/l + TDZ 1,0 mg/l cho kết tạo mô sẹo tốt an va với tỷ lệ 85,34% n - Điều kiện nuôi cấy tối 20 ngày, sau ni điều kiện ánh sáng - Nồng độ BA 0,2 mg/l + TDZ 1,0 mg/l cho tỷ lệ tái sinh chồi từ mô p ie gh tn to 2000 lux 10 ngày cho tỷ lệ tạo mô sẹo tốt với 91,3% sẹo cao đạt 11,7% d 4,83 chồi oa nl w - Nồng độ BA 0,2 mg/l + TDZ 0,1 mg/l cho hệ số nhân chồi cao đạt u nf va 5.2 Kiến Nghị an lu - Nồng độ IBA 1,0 mg/l cho tỷ lệ mẫu rễ cao đạt 93,3% - Tiếp tục nghiên cứu thêm ảnh hưởng chất kích thích sinh ll oi m trưởng đến khả tạo mô sẹo từ mảnh dâu tây z at nh - Tiếp tục nghiên cứu thêm ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng khác đến khả tái sinh chồi từ mô sẹo z @ - Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp chất kích thích sinh l gm trưởng đến khả nhân nhanh chồi dâu tây triển dâu tây in vitro m co - Nghiên cứu thêm loại giá thể thích hợp cho sinh trưởng phát an Lu n va ac th si TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Ngơ Xn Bình, Bùi Bảo Hồn, Nguyễn Thị Thúy Hà (2003), Giáo trình Cơng nghệ sinh học, NXB Nơng Nghiệp, Hà Nội Võ Khắc Chi (2003), Từ điển thực vật thông dụng, Tập 1, NXB Khoa học Kỹ thuật Nguyễn Thị Thu Hằng (201), “ Quy trình nhân giống dâu tây in vitro”, Luận văn tốt nghiệp đại học, Trường Đại Học Kỹ Thuật Công Nghệ lu an Thành Phố Hồ Chí Minh n va Nguyễn Như Hiền (2009), Công nghệ sinh học – Tập – Sinh học phân tn to tử tế bào – sở khoa học công nghệ sinh học, NXB Giáo dục nghiệm nước uống đóng chai từ dâu tây mủ trôm” Luận văn tốt p ie gh Nguyễn Thị Hường (2012), “Nghiên cứu đề cuất quy trình sản xuất thử nl w nghiệp đại học, Trường đại học Nha Trang oa Nguyễn Như Khanh, Nguyễn Văn Đính (2011), Giáo trình chất điều d hòa sinh trưởng thực vật, Nxb Giáo dục Việt Nam an lu Trần Thị Lệ, Trương Thị Bích Phượng, Trần Thị Triêu Hà (2008), Giáo va u nf trình Công nghệ sinh học thực vật, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội ll Thái Thị Thúy Liên, Bùi Thị Thùy Trang, Đống Thị Anh Đào (2008), oi m z at nh “Nghiên cứu sản xuất mứt từ dâu tây Đà Lạt,” Science & Technology Development, vol 11, no z Nguyễn Hồng Lộc (2007), Giáo trình nhập mơn công nghệ sinh học, gm @ Nxb Đại học Huế m co l 10 Lê Thị Mai (2009), “Khảo sát ảnh hưởng NAA GA3 lên khả sinh trưởng phát triển dâu tây Fragaria vesca L trồng thủy an Lu n va ac th si canh nhà kính huyện Đức Trọng, tỉnh Lân Đồng, Luận văn tốt nghiệp đại học, Trường Đại học Nơng Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh 11 Nguyễn Trí Minh (2010), Nghiên cứu hệ thống nhân giống dâu tây Fragaria x ananassa Duch công nghệ nuôi cấy mô thực vật, đặc biệt trọng công nghệ quang tự dưỡng, nhằm tạo dâu tây bệnh chất lượng cao , Luận văn Tiến sĩ Sinh học, Viện Sinh học Nhiệt đới 12 Nguyễn Trí Minh, Nguyễn Thị Quỳnh, Nguyễn Văn Uyển (2008), Ảnh hưởng cường độ ánh sáng hàm lượng CO2 lên khả sinh lu trưởng in vitro ex vitro dâu tây (Fragaria Ananassa Duch.), Tạp chí an Cơng nghệ Sinh Học 6: 233-239 va n 13 Trần Văn Minh (2003), Cơng nghệ tế bào thực vật Giáo trình cao học – to ie gh tn nghiên cứu sinh, Viện Sinh Học Nhiệt Đới, Trung tâm Khoa học tự nhiên Công nghệ Quốc gia p 14 Dương Tấn Nhựt, Lê Thị Thanh Xuân, Nguyễn Hồng Vũ, Nguyễn Văn nl w Bình, Nguyễn Trí Minh, Nguyễn Thị Thanh Hằng (2004), “ Cải tiến hệ d oa thống nhân giống dây tây nuôi cấy túi nilon”, Tạp chí an lu Cơng nghệ sinh học,2,(2),227-234 u nf va 15 Trần Công Huy Phương (2007), Ảnh hưởng chất điều hòa tăng trưởng thực vật quang kỳ phát triển hoa dâu tây Fragaria ll oi m vesca L., Luận văn Thạc sĩ Sinh học, Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí z at nh Minh – Đại học Khoa học tự nhiên 16 Hoàng thị sản (2006), Phân loại học thực vật, Nxb Đại học sư phạm z 17 Nguyễn Kim Thanh, Nguyễn Thuận Châu (2005), Giáo trình sinh lý học l gm @ thực vật, Nxb Giáo dục, Hà Nội m co 18 Hoàng Ngọc Thuận, 2000 Nhân giống vơ tính ăn (chiết, ghép, giâm cành, tách chồi nuôi cấy in vitro Nhà Xuất Bản Nông an Lu nghiệp Huế n va ac th si 19.Phạm Xuân Tùng, Phạm Thị Lan (2007), Ảnh hưởng biện pháp xử lý khử trùng mẫu yếu tố môi trường nhân nhanh giống dâu tây in vitro, Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp miền Nam 20 Đỗ Đăng Vịnh (2007), Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng, Nxb Nông nghiệp Hà Nội 21 Võ Quốc Việt, Đào Thị Thu Hương, Ma Thị Thúy Vân, 2010 Giáo trình ăn Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội lu 22 Vũ Văn Vụ, Hoàng Đức Sự cs (1993), Sinh lý thực vật, Giáo trình cao an học Nông nghiệp sinh học, Viện Khoa Học Kỹ Thuật Nông Nghiệp va n Miền Nam, NXB Khoa học kỹ thuật miền Nam học tập 2-Công nghệ sinh học tế bào, Nxb Giáo dục p ie gh tn to 23 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2009), Công nghệ sinh Tiếng Anh nl w 24 Barceló M, Iman El-Mansouri, José A Mercado, Miguel A Quesada & d oa Fernando Pliego (1998), “ Regeneration and transformation via an lu Agrobacterium tumefaciens of the strawberry cultivar Chandler”, Plant u nf va Cell, Tissue and Organ Culture 54, 29-36 25 Debnath SC (2005) “Strawberry sepal: another explant for thidiazuron- ll oi m induced adventitious shoot regeneration”, In Vitro Cell Dev Biol Plant, z at nh 41, 671-6; http:// dx.doi.org/10.1079/IVP2005688 26 FAOSTAT (2012) Producion from : http://faostat.fao.org z 27 Foucault C, Letouze R (1987), “In vitro regeneration de plantes de Fraisier a @ m co 29:409-14 l gm partir de fragmentes de petiole et de bourgeons floraux”, Biol Plant an Lu n va ac th si 28.Ko C.Y, Al-Abdulkarim A.M, Al-Jowid S.M, and Al-Baiz A (2009), “An effective disinfection protocol for plant regeneration from shoot tip cultures of strawberry”, African Journal of Biotechnology 8: 2611-2615 29 Landi L, Mezzetti B (2006), “TDZ, auxin and genotype effects on leaf organogenesis in Fragaria”, Plant Cell Rep, 25, 281-8 30 Mahmound O, Kosar M (2013), “Regeneration and Histological of Plants Derived from Leaf explants in vitro culture of Strawberry”, International Journal of Agriculture and Crop Sciences, 5-9, 943-950 lu 31 Nehra NS, Stushnoff C, Kartha KK (1988), “Regeneration of plants from an immature, leaf-derived callus of strawberry”, HortScience 23, 756 va n 32 Owen HR, Miller AR (1996), “Haploid plant regeneration from anther to ie gh tn cultures of three north american cultivars of strawberry (Fragaria x ananassa Duch.)”, Plant Cell Rep 15, 905-9 p 33 Passey A.J, Barrett K.J, Jame D.J (2002), “Adventitious shoot nl w regeneration from seven commercial strawberry cultivars (Fragaria x d oa ananassa Duch.) using a range of explant types”, Plant Cell Rep 21: an lu 397-401 u nf va 34 Whitley K.L (2004), “Factors influencing regeneration of plantlets from leaf strips of Strawberry (Fragaria x ananassa Duch.)”, Master thesis ll oi m Science, Louisiana State University and Agricultural and Mechanical z at nh College 35 Yildirim A.B, Turker A.U (2014), “Effects of regeneration enhancers on z gm @ micropropagation of Fragaria vesca L and phenolic content comparison of field-grown and in vitro-grown plant materials by liquid l m co chromatography-electrospray tandem mass spectrometry (LC–ESIMS/MS)”, Scientia Horticulturae,169,(2014),169-178 an Lu n va ac th si 36 Zakaria H, Gihan M hussein, abdel hadi a abdel hadi, and Naglaa a abdallah (2014) “Improved regeneration and transformation protocols for three strawberry cultivars” GM crops & Food: Biotechnology in agriculture and the Food chain 5:1, 27–35 (LÁ) Nguồn khác 37 Quy trình kĩ thuật trồng dâu tây, (ban hành kèm theo định số 1251/QĐ-SNN, ngày 13/12/2012 sở NN PTNT Lâm Đồng V/v ban hành tạm thời quy trình canh tác số trồng địa bàn tỉnh lu Lâm Đồng), Tham khảo ngày 21/11/2014 an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHỤ LỤC Phụ lục 1: Thành phần môi trƣờng MS Bottle Component Amount to take Final Solution preparation concentratic (g/l) (ml) (mg/ l) NH4NO3 82,5 KNO3 95 MgSO4 7H2O 37,0 MnSO4 4H2O 2,23 ZnSO4 7H2O 1,058 CuSO4 5H2O 0,0025 0,025 CaCl2.2H2O 44,0 440,0 KI 0,083 CoCl2.6H2O 0,0025 0,025 KH2PO4 17,0 170,0 H3BO3 0,62 Na2MoO4.2H2O 0,025 I lu II Stock an n va 1.900,0 370,0 22,3 10 10,6 10 0,83 p ie gh tn to III 1.650,0 20 d oa nl w IV FeSO4 7H2O 2,784 Na2EDTA 2H2O va 3,724 u nf an lu V 27,85 10 37,25 100 0,5 0,5 100 2,0 2,0 100 0,1 0,1 0,5 0,5 z at nh PyridoxineHCl 100 z ThiamineHCl 100,0 l gm @ Inositol Sucrose 30.000,0 m co Agar 5,8 8.000,0 an Lu PH 0,25 oi Glycine m Vitamin 6,2 mg/100ml ll Nicotinic acid 10 n va ac th si Phụ lục 2: Kết xử lý số liệu Bảng 4.1 Nghiên cứu khả nảy mầm hạt dâu tây (sau 30 ngày theo dõi) BALANCED ANOVA FOR VARIATE NAYMAM FILE 24/ 5/** 22: PAGE thi nghiem 1: khan nang mam cua hat VARIATE V003 NAYMAM LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1120.67 1120.67 840.46 0.000 * RESIDUAL 5.33356 1.33339 * TOTAL (CORRECTED) 1126.00 225.200 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 24/ 5/** 22: PAGE thi nghiem 1: khan nang mam cua hat an n va tn to MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ gh NOS 3 p ie NAYMAM 7.33333 34.6667 oa nl w SE(N= 3) 0.666681 5%LSD 4DF 2.61324 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 24/ 5/** 22: PAGE thi nghiem 1: khan nang mam cua hat d va an lu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 15.007 1.1547 5.5 0.0002 oi m | | | | z at nh GRAND MEAN (N= 6) NO OBS 21.000 ll NAYMAM u nf VARIATE z m co l gm @ an Lu n va ac th si Bảng 4.2 Ảnh hƣởng 2,4D TDZ đến khả tạo mô sẹo từ mảnh (sau 30 ngày theo dõi) BALANCED ANOVA FOR VARIATE MS FILE 24/ 5/** 20:24 PAGE thi nghiem 2: anh huong cua 2,4D + TDZ den kha nang tao mo seo VARIATE V003 MS LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4982.40 1245.60 169.85 0.000 * RESIDUAL 10 73.3338 7.33338 * TOTAL (CORRECTED) 14 5055.73 361.124 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 24/ 5/** 20:24 PAGE thi nghiem 2: anh huong cua 2,4D + TDZ den kha nang tao mo seo an n va tn to MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ gh NOS 3 3 p ie nl w MS 70.6667 78.6667 122.333 102.667 91.3333 d oa SE(N= 3) 1.56348 5%LSD 10DF 4.92657 - lu ll u nf va an ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 24/ 5/** 20:24 PAGE thi nghiem 2: anh huong cua 2,4D + TDZ den kha nang tao mo seo VARIATE STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 19.003 2.7080 2.9 0.0000 z at nh MS GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 93.133 oi m F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - | | | | z m co l gm @ an Lu n va ac th si Bảng 4.3 Ảnh hƣởng điều kiện sáng/tối đến khả tạo mô sẹo từ mảnh (theo dõi 30 ngày) BALANCED ANOVA FOR VARIATE MS FILE 25/ 5/** 16:27 PAGE thi nghiem 3: anh huong cua dieu kien sang/toi den kha nang tao mo seo VARIATE V003 MS LN SOURCE OF VARIATION DF lu an n va tn to SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 394.889 197.444 55.53 0.000 * RESIDUAL 21.3334 3.55556 * TOTAL (CORRECTED) 416.222 52.0278 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 25/ 5/** 16:27 PAGE thi nghiem 3: anh huong cua dieu kien sang/toi den kha nang tao mo seo CT$ NOS 3 MS 75.3333 81.0000 91.3333 nl w p ie gh MEANS FOR EFFECT CT$ - d oa SE(N= 3) 1.08866 5%LSD 6DF 3.76586 - lu ll u nf va an ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 25/ 5/** 16:27 PAGE thi nghiem 3: anh huong cua dieu kien sang/toi den kha nang tao mo seo MS GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 82.556 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 7.2130 1.8856 2.3 0.0003 z at nh VARIATE oi m F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - | | | | z m co l gm @ an Lu n va ac th si Bảng 4.4 Ảnh hƣởng BAP TDZ đến khả tái sinh nhân nhanh chồi (theo dõi 30 ngày) a, phần tái sinh chồi BALANCED ANOVA FOR VARIATE TS FILE 27/ BALANCED ANOVA FOR VARIATE TS FILE 27/ 5/** 16:33 PAGE thi nghiem 4: anh huong cua BA + TDZ den kha nang tai sinh choi tu mo seo VARIATE V003 TS LN SOURCE OF VARIATION DF lu an n va gh tn to SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.00000 1.00000 175.00 0.000 * RESIDUAL 14 800006E-01 571433E-02 * TOTAL (CORRECTED) 20 6.08000 304000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 27/ 5/** 16:33 PAGE thi nghiem 4: anh huong cua BA + TDZ den kha nang tai sinh choi tu mo seo p ie MEANS FOR EFFECT CT$ - CT$ NOS 3 3 3 TS 1.33333 1.33333 2.33333 2.66667 2.66667 1.66667 2.00000 d oa nl w an lu ll u nf va SE(N= 3) 0.436437E-01 5%LSD 14DF 0.132381 - oi m ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 27/ 5/** 16:33 PAGE thi nghiem 4: anh huong cua BA + TDZ den kha nang tai sinh choi tu mo seo z at nh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.55136 0.75593E-01 3.8 0.0000 | | | | m co l gm @ TS GRAND MEAN (N= 21) NO OBS 21 2.0000 z VARIATE an Lu n va ac th si b, phần nhân nhanh BALANCED ANOVA FOR VARIATE NN FILE 25/ 5/** 16:54 PAGE thi nghiem 4: anh huong cua BA + TDZ den kha nang nhan nhanh choi VARIATE V003 NN LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 17261.0 2876.83 428.46 0.000 * RESIDUAL 14 94.0017 6.71441 * TOTAL (CORRECTED) 20 17355.0 867.748 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 25/ 5/** 16:54 PAGE thi nghiem 4: anh huong cua BA + TDZ den kha nang nhan nhanh choi an n va MEANS FOR EFFECT CT$ NOS 3 3 3 p ie gh tn to CT$ w NN 100.667 115.667 144.667 136.667 169.000 84.3333 91.6667 d oa nl SE(N= 3) 1.49604 5%LSD 14DF 4.53782 - lu u nf va an ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 25/ 5/** 16:54 PAGE thi nghiem 4: anh huong cua BA + TDZ den kha nang nhan nhanh choi ll F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 29.458 2.5912 2.2 0.0000 oi z at nh NN GRAND MEAN (N= 21) NO OBS 21 120.38 m VARIATE | | | | z m co l gm @ an Lu n va ac th si Bảng 4.5 Ảnh hƣởng IBA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh (sau 30 ngày theo dõi) BALANCED ANOVA FOR VARIATE RARE FILE 25/ 5/** 20:30 PAGE thi nghiem 5: anh huong cua IBA den kha nang re tao cay hoan chinh VARIATE V003 RARE LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 32.4000 8.10000 68.64 0.000 * RESIDUAL 10 1.18000 118000 * TOTAL (CORRECTED) 14 33.5800 2.39857 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 25/ 5/** 20:30 PAGE thi nghiem 5: anh huong cua IBA den kha nang re tao cay hoan chinh an n va tn to MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ gh NOS 3 3 p ie nl w RARE 5.00000 6.33333 7.33333 8.00000 9.33333 d oa SE(N= 3) 0.198326 5%LSD 10DF 0.624934 - lu ll u nf va an ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 25/ 5/** 20:30 PAGE thi nghiem 5: anh huong cua IBA den kha nang re tao cay hoan chinh VARIATE STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.5487 0.34351 4.8 0.0000 z at nh RARE GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 7.2000 oi m F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - | | | | z m co l gm @ an Lu n va ac th si