Luận văn thạc sĩ nghiên cứu nhân nhanh giống giảo cổ lam (gynostemma pentaphyllum) bằng kỹ thuật in vitro

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - ĐỖ NGỌC HÂN Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH GIỐNG GIẢO CỔ LAM (Gynostemma pentaphyllum) BẰNG KỸ THUẬT IN VITRO” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo Chun ngành Khoa Khố học : Chính quy : Công nghệ sinh học : CNSH - CNTP : 2011 - 2015 Thái Nguyên, 2015 n ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - ĐỖ NGỌC HÂN Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH GIỐNG GIẢO CỔ LAM (Gynostemma pentaphyllum) BẰNG KỸ THUẬT IN VITRO” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Khoa : CNSH - CNTP Khoá học : 2011 - 2015 Giảng viên hƣớng dẫn: ThS Dương Mạnh Cường Khoa CNSH - CNTP, Trường ĐHNL Thái Nguyên ThS Lê Thị Hảo Viện Khoa học Sự Sống - Trường ĐHNL Thái Nguyên Thái Nguyên, 2015 n i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành khóa luận em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường Trường Đại Học Nông Lâm Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm khoa CNSH CNTP thầy cô giáo môn Công nghệ tế bào tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian qua Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo ThS Dương Mạnh Cường Th.S Lê Thị Hảo tận tình bảo, hướng dẫn em thời gian thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, đến người thân động viên giúp đỡ tạo điều kiện cho em vật chất lẫn tinh thần suốt thời gian học tập nghiên cứu Do thời gian thực đề tài có hạn nên cịn nhiều thiếu sót, em mong nhận đóng góp ý kiến chân thành từ thầy bạn để đề tài hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày tháng năm 2015 Sinh viên Đỗ Ngọc Hân n ii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 4.1 Kết ảnh hưởng H2O2 (20%) đến khả vô trùng mẫu Giảo cổ lam (sau 15 ngày) 23 Bảng 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng HgCl2 (0,1%) đến khả vô trùng mẫu Giảo cổ lam (sau 15 ngày nuôi cấy) 25 Bảng 4.3 Kết ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM, N6 đến khả tái sinh chồi Giảo cổ lam (sau 20 ngày nuôi cấy) 28 Bảng 4.4 Kết ảnh hưởng kinetin (mg/l) đến khả tái sinh chồi Giảo cổ lam (sau 20 ngày nuôi cấy) 30 Bảng 4.5 Kết ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam (sau 30 ngày) 33 Bảng 4.6 Kết ảnh hưởng kinetin đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam (sau 30 ngày) 35 Bảng 4.7 Kết ảnh hưởng kết hợp BAP IAA đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam (sau 30 ngày) 38 n iii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 4.1 Biểu đồ thể ảnh hưởng H2O2 (20%) đến khả vô trùng mẫu Giảo cổ lam (sau 15 ngày nuôi cấy) 24 Hình 4.2 Biểu đồ thể ảnh hưởng HgCl2 (0,1%) đến khả vô trùng mẫu Giảo cổ lam (sau 15 ngày nuôi cấy) 26 Hình 4.3 Biểu đồ thể ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM, N6 đến khả tái sinh chồi Giảo cổ lam (sau 20 ngày ni cấy) 28 Hình 4.4 Biểu đồ thể ảnh hưởng kinetin (mg/l) đến khả tái sinh chồi Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) (sau 20 ngày ni cấy) 31 Hình 4.5 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam (sau 30 ngày ni cấy) 34 Hình 4.6 Biểu đồ thể ảnh hưởng kinetin đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam (sau 30 ngày nuôi cấy) 36 Hình 4.7 Biểu đồ thể ảnh hưởng kết hợp BAP IAA đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam (sau 30 ngày nuôi cấy) 38 n iv DANH MỤC CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT 2,4 D : 2,4 Diclorophenoxy acetic acid B5 : Gamborg Medium BA : 6-Benzylaminopurine BAP : BAP bezylamino purine Cs : Cộng CT : Công thức CV : Coeficient of Variation ĐC : Đối chứng GA3 : Gibberellic acid IAA : Indole-3-acetic acid IBA : Indole butyric acid Kinetin : 6-Furfurylaminopurine LSD : Least Singnificant Difference Test MS : Murashige & Skoog (1962) MT : Môi trường N6 : Chu Medium WPM : McCown woody Plant Medium n v MỤC LỤC PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài 1.3 Yêu cầu đề tài 1.4 Ý nghĩa đề tài .2 PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung Giảo cổ lam .3 2.1.1 Đặc điểm thực vật học chi Gynostemma 2.1.2 Đặc điểm thực vật học loài Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino 2.1.3 Nguồn gốc phân bố 2.1.4 Thành phần hóa học Giảo cổ lam .4 2.1.5 Giá trị dược liệu Giảo cổ lam .5 2.2 Tình hình nghiên cứu Giảo cổ lam nước giới 2.2.1 Tình hình nghiên cứu nhân giống Giảo cổ lam giới 2.2.2 Tình hình nghiên cứu Giảo cổ lam nước 2.3 Khái quát nuôi cấy mô-tế bào thực vật 2.3.1 Khái niệm nuôi cấy 2.3.2 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô-tế bào thực vật 2.4 Các nhân tố ảnh hưởng tới trình nhân giống Giảo cổ lam 10 2.4.1 Môi trường nghiên cứu 10 2.4.2 Các điều kiện nghiên cứu vật liệu nghiên cứu 14 PHẦN VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .16 3.1 Vật liệu, hóa chất thiết bị nghiên cứu 16 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu .16 3.1.2 Hóa chất sử dụng .16 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 16 n vi 3.2.1.Địa điểm nghiên cứu 16 3.2.2 Thời gian nghiên cứu 16 3.3 Nội dung phương pháp nghiên cứu 17 3.3.1 Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng số chất khử trùng đến khả vô trùng mẫu Giảo cổ lam 17 3.3.2 Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng số môi trường chất điều tiết sinh trưởng đến khả tái sinh chồi Giảo cổ lam 18 3.3.3 Nội dung 3: Nghiên cứu ảnh hưởng số chất điều tiết sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam 20 3.4 Điều kiện thí nghiệm 22 3.5 Phương pháp xử lý số liệu 22 PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 23 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất khử trùng đến khả vô trùng mẫu Giảo cổ lam 23 4.1.1 Kết ảnh hưởng H2O2 (20%) đến khả vô trùng mẫu Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) .23 4.1.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng HgCl2 (0,1%) đến khả vô trùng mẫu Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) .25 4.2 Kết ảnh hưởng số môi trường chất điều tiết sinh trưởng đến khả tái sinh chồi Giảo cổ lam .27 4.2.1 Kết ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM, N6 đến khả tái sinh chồi Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) .27 4.2.2 Kết ảnh hưởng kinetin (mg/l) đến khả tái sinh chồi Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) .30 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất điều tiết sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam .32 4.3.1 Kết ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) 33 n vii 4.3.2 Kết ảnh hưởng kinetin đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) .35 4.3.3 Kết ảnh hưởng kết hợp BAP IAA đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) .38 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 5.1 Kết luận 41 5.2 Kiến nghị 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO n PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Giảo cổ lam hay gọi Thất diệp đảm, có tên khoa học Gynostemma pentaphyllum thuộc họ bầu bí (cucurbitaceae) Có nguồn gốc từ vùng núi miền nam trung Quốc, Nhật Bản Đông Nam Á (Hà Thanh Bình, 2002) [3] Ở Việt Nam, Giảo cổ lam tìm thấy số địa phương thuộc vùng đồi núi phía bắc Hịa Bình, Sa Pa,… Các nhà khoa học chứng minh công dụng thần kỳ Giảo cổ lam sức khỏe người trở thành thuốc quý có giá trị Giảo cổ lam làm hạ cholesterol toàn phần máu, làm tăng miễn dịch nâng cao sức đề kháng thể, có tác dụng kìm hãm phát triển khối u cách rõ rệt, giúp bình ổn huyết áp Sử dụng Giảo cổ lam giúp dễ ngủ ngủ sâu giấc, giảm béo phì, nhuận tràng, giúp tăng cường máu não mạnh, giảm đau tim (Phạm Thanh Kỳ, 2007) [18] Trong tự nhiên Giảo cổ lam thường mọc sườn vách đá có độ ẩm cao, hệ số nhân giống thấp, tốc độ phát triển phụ thuộc vào nhiều yếu tố ngoại cảnh Do nhu cầu sử dụng dược liệu tăng mạnh thời gian gần dẫn đến nguồn nguyên liệu đáp ứng đủ nhu cầu thị trường Với phát triển khoa học kỹ thuật việc ứng dụng nuôi cấy mô tế bào thực vật nhân giống Giảo cổ lam trở nên có ý nghĩa Vì nghiên cứu kỹ thuật nhân giống Giảo cổ lam phương pháp nuôi cấy mô cung cấp sở khoa học thực tiễn để tạo hàng loạt ổn định mặt di truyền nhằm bảo tồn phát triển loài dược liệu quý Xuất phát từ sở chúng tơi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu nhân nhanh giống Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) kỹ thuật in vitro” n TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE VOTRUNG 22/ 5/** 17:28 PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS TLMS TLMN TLMC 0.000000 100.000 0.000000 38.3333 56.6667 5.00000 3 63.3333 26.6667 10.0000 45.0000 18.3333 36.6667 35.0000 11.6667 53.3333 SE(N= 3) 0.912880 5%LSD 8DF 1.62447 2.97681 0.986011 5.29722 3.21528 - MEANS FOR EFFECT R - R NOS TLMS TLMN TLMC 37.0000 43.0000 20.0000 37.0000 42.0000 21.0000 35.0000 43.0000 22.0000 SE(N= 5) 0.707114 5%LSD 8DF 2.30583 1.25831 0.763761 4.10321 2.49055 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE VOTRUNG 22/ 5/** 17:28 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 15) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | | | | | | | | TLMS 15 36.333 21.420 1.5812 4.4 0.0000 0.1287 TLMN 15 42.667 33.746 2.8137 6.6 0.0000 0.8156 TLMC 15 21.000 21.314 1.7078 8.1 0.0000 0.2397 n |R | Bảng 4.3 Kết ảnh hƣởng môi trƣờng MS, B5, WPM, N6 đến khả tái sinh chồi Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLBC FILE MT 26/ 5/** 15:24 PAGE VARIATE V003 TLBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 840.748 280.249 45.35 0.000 2R 22.2444 11.1222 1.80 0.244 * RESIDUAL 37.0743 6.17904 * TOTAL (CORRECTED) 11 900.067 81.8242 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE MT 26/ 5/** 15:24 PAGE VARIATE V004 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 133367 2R 716668E-03 358334E-03 0.19 0.834 * RESIDUAL 444555E-01 23.23 0.001 114834E-01 191389E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 145567 132333E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MT 26/ 5/** 15:24 PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS TLBC HSNC 55.5533 1.29000 40.0000 1.02333 3 33.3300 1.04667 37.7767 1.15333 SE(N= 3) 5%LSD 6DF 1.43516 4.96444 0.252580E-01 0.873713E-01 n - MEANS FOR EFFECT R - R NOS TLBC HSNC 41.6650 1.11750 39.9975 1.13500 43.3325 1.13250 SE(N= 4) 1.24288 5%LSD 6DF 0.218740E-01 4.29933 0.756658E-01 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MT 26/ 5/** 15:24 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 12) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | TLBC 12 41.665 9.0457 HSNC 12 1.1283 0.11504 2.4858 | | | | | | | 6.0 0.0003 0.2440 0.43748E-01 3.9 0.0015 0.8343 n |R | Bảng 4.4 Kết ảnh hƣởng kinetin (mg/l) đến khả tái sinh chồi Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLBC FILE MT 26/ 5/** 16:59 PAGE VARIATE V003 TLBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 968.025 193.605 17.03 0.000 2R 4.94321 2.47160 0.22 0.810 * RESIDUAL 10 113.694 11.3694 * TOTAL (CORRECTED) 17 1086.66 63.9213 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE MT 26/ 5/** 16:59 PAGE VARIATE V004 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 1.60798 2R 544445E-03 272223E-03 0.11 0.893 * RESIDUAL 321596 134.81 0.000 10 238556E-01 238556E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 1.63238 960222E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MT 26/ 5/** 16:59 PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS TLBC HSNC 55.5533 1.29000 64.4467 1.42333 3 77.7767 1.55333 66.6700 2.17667 60.0000 1.60000 57.7767 1.31000 n SE(N= 3) 1.94674 5%LSD 10DF 0.281990E-01 6.13424 0.888562E-01 - MEANS FOR EFFECT R - R NOS TLBC HSNC 63.3333 1.56667 64.4450 1.55500 63.3333 1.55500 SE(N= 6) 1.37655 5%LSD 10DF 0.199397E-01 4.33757 0.628308E-01 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MT 26/ 5/** 16:59 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 18) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS TLBC 18 63.704 7.9951 HSNC 18 1.5589 0.30987 3.3719 | % | | | | | | | 5.3 0.0002 0.8097 0.48842E-01 3.1 0.0000 0.8929 n |R | Bảng 4.5 Kết ảnh hƣởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE MT 26/ 5/** 18:42 PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 5.83469 2R 781111E-02 390555E-02 0.93 0.427 * RESIDUAL 1.16694 279.24 0.000 10 417895E-01 417895E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 5.88429 346135 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTBC FILE MT 26/ 5/** 18:42 PAGE VARIATE V004 CCTBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 1.55111 2R 777778E-02 388889E-02 0.74 0.503 * RESIDUAL 310222 59.40 0.000 10 522223E-01 522223E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 1.61111 947712E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MT 26/ 5/** 18:42 PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS HSNC CCTBC 1.26667 1.16667 2.40000 1.60000 3 2.60000 1.80000 2.82333 2.10000 3.00000 1.93333 2.73333 1.73333 n SE(N= 3) 0.373227E-01 0.417222E-01 5%LSD 10DF 0.117605 0.131468 - MEANS FOR EFFECT R - R NOS HSNC CCTBC 2.44167 1.70000 2.49000 1.71667 2.48000 1.75000 SE(N= 6) 0.263911E-01 0.295021E-01 5%LSD 10DF 0.831594E-01 0.929620E-01 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MT 26/ 5/** 18:42 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 18) SD/MEAN | NO OBS HSNC CCTBC BASED ON BASED ON % TOTAL SS RESID SS | 18 2.4706 0.58833 18 1.7222 0.30785 | | | | | | | 0.64645E-01 2.6 0.0000 0.4269 0.72265E-01 4.2 0.0000 0.5029 n |R | Bảng 4.6: Kết ảnh hƣởng kinetin đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE MT 26/ 5/** 18:53 PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 4.86996 2R 577779E-03 288889E-03 0.08 0.921 * RESIDUAL 973992 277.58 0.000 10 350890E-01 350890E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 4.90563 288566 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTBC FILE MT 26/ 5/** 18:53 PAGE VARIATE V004 CCTBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 1.36444 2R 111111E-02 555556E-03 0.11 0.900 * RESIDUAL 272889 52.26 0.000 10 522224E-01 522224E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 1.41778 833987E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MT 26/ 5/** 18:53 PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS HSNC CCTBC 1.26667 1.16667 2.46667 1.56667 3 2.57667 1.73333 2.82333 2.03333 2.69000 1.90000 2.60000 1.73333 n SE(N= 3) 0.341999E-01 0.417223E-01 5%LSD 10DF 0.107765 0.131468 - MEANS FOR EFFECT R - R NOS HSNC CCTBC 2.39833 1.70000 2.40167 1.68333 2.41167 1.68333 SE(N= 6) 0.241830E-01 0.295021E-01 5%LSD 10DF 0.762014E-01 0.929622E-01 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MT 26/ 5/** 18:53 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 18) SD/MEAN | NO OBS HSNC CCTBC BASED ON BASED ON % TOTAL SS RESID SS | 18 2.4039 0.53718 18 1.6889 0.28879 | | | | | | | 0.59236E-01 2.5 0.0000 0.9211 0.72265E-01 4.3 0.0000 0.8996 n |R | Bảng 4.7: Kết ảnh hƣởng kết hợp BAP IAA đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE HAN 27/ 5/** 16: PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 944911 2R 194444E-02 972220E-03 0.28 0.761 * RESIDUAL 188982 55.28 0.000 10 341890E-01 341890E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 981044 577085E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTBC FILE HAN 27/ 5/** 16: PAGE VARIATE V004 CCTBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 384444 2R 777778E-02 388889E-02 0.85 0.457 * RESIDUAL 768889E-01 16.88 0.000 10 455556E-01 455556E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 437778 257516E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HAN 27/ 5/** 16: PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS HSNC CCTBC 3.00000 1.93333 2.80000 1.60000 3 3.09000 1.83333 3.15333 1.93333 3.29000 2.06667 3.53333 1.96667 n SE(N= 3) 0.337585E-01 0.389682E-01 5%LSD 10DF 0.106374 0.122790 - MEANS FOR EFFECT R - R NOS HSNC CCTBC 3.14167 1.91667 3.13333 1.86667 3.15833 1.88333 SE(N= 6) 0.238708E-01 0.275547E-01 5%LSD 10DF 0.752178E-01 0.868258E-01 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HAN 27/ 5/** 16: PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 18) SD/MEAN | NO OBS HSNC CCTBC BASED ON BASED ON % TOTAL SS RESID SS | 18 3.1444 0.24023 18 1.8889 0.16047 | | | | | | | 0.58471E-01 1.9 0.0000 0.7610 0.67495E-01 3.6 0.0002 0.4575 n |R | Phụ luc 2: Môi trƣờng MS - Murashige and Skoog’s Thành phần mơi trƣờng Khống đa lượng Khoáng vi lượng Vitamin Hàm lƣợng (mg/l) NH4NO3 1650 CaCl2.2H2O 332,2 MgSO4.7H2O 370 KNO3 1900 KH2PO4 170 H3BO3 6,2 CoCl2.6H2O 0,025 CuSO4.5 H2O 0,025 Na2EDTA 37,3 FeSO4.7H2O 27,8 MnSO4H2O 16,9 KI 0,83 Na2MoO4.2H2O 0,25 ZnSO4.7H2O 8,6 Myo-inositol 100 Glycine 2,0 Nicotinic acid 0,5 B1 0,5 B6 0,1 n Thành phần môi trƣờng B5 (Gamborg Medium) Thành phần môi trƣờng Khoáng đa lượng NH4NO3 134 CaCl2.2H2O 150 MgSO4.7H2O 250 KNO3 2500 NaH2PO4 130,5 H3BO3 Khoáng vi lượng Hàm lƣợng (mg/l) 3,0 CoCl2.6H2O 0,025 CuSO4.5 H2O 0,025 Na2EDTA 37,3 FeSO4.7H2O 27,8 MnSO4.H2O 10,0 KI 0,75 Na2MoO4 2H2O 0,25 ZnSO4.7H2O 2,0 Myo-inositol 100 Nicotinic acid 1,0 B1 0,1 B6 10,0 Vitamin n Thành phần môi trƣờng WPM (Woody Plant Medium) Thành phần mơi trƣờng Khống đa lượng Khống vi lượng Vitamin Hàm lƣợng (mg/l) NH4NO3 400 CaCl2.2H2O 96 Ca(NO3)2.4H2O 556 MgSO4.7H2O 370 K2SO4 990 KH2PO4 170 H3BO3 6,2 CuSO4.5 H2O 0,25 Na2EDTA 37,3 FeSO4.7H2O 27,8 MnSO4.H2O 22,3 Na2MoO4 2H2O 0,25 ZnSO4.7H2O 8,6 Myo-inositol 100 Glycine 2,0 Nicotinic acid 0,5 B1 0,5 B6 1,0 n Thành phần môi trƣờng N6 (Chu Medium) Thành phần mơi trƣờng NH4SO4 463 CaCl2.2H2O 166,02 Khống đa lượng MgSO4.7H2O Khoáng vi lượng Vitamin Hàm lƣợng (mg/l) 90,37 KNO3 2830 KH2PO4 400 H3BO5 1,6 Na2EDTA 37,26 MnSO4.H2O 3,33 KI 0,8 FeSO4.7H2O 27,8 ZnSO4.7H2O 1,5 Thiamine hydrochrochloride 1,0 Pyridoxine hydrochrochloride 0,5 Nicotinic acid (Free acid) 0,5 Glycine (Free base) 2,0 n