Luận văn thạc sĩ nghiên cứu khả năng sinh trưởng, sinh sản của các chủng muỗi aedes và anopheles trong điều kiện nuôi nhân tạo bằng máy hemotek tại phòng thí nghiệm viện sốt rét ký sinh trùng côn trùng quy nhơn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN PHAN THỊ TUYẾT NHUNG NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG SINH TRƯỞNG, SINH SẢN CỦA CÁC CHỦNG MUỖI AEDES VÀ ANOPHELES TRONG ĐIỀU KIỆN NUÔI NHÂN TẠO BẰNG MÁY HEMOTEK TẠI PHỊNG THÍ NGHIỆM VIỆN SỐT RÉT - KÝ SINH TRÙNG CÔN TRÙNG QUY NHƠN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Bình Định – Năm 2019 e BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN PHAN THỊ TUYẾT NHUNG NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG SINH TRƯỞNG, SINH SẢN CỦA CÁC CHỦNG MUỖI AEDES VÀ ANOPHELES TRONG ĐIỀU KIỆN NUÔI NHÂN TẠO BẰNG MÁY HEMOTEK TẠI PHỊNG THÍ NGHIỆM VIỆN SỐT RÉT - KÝ SINH TRÙNG CÔN TRÙNG QUY NHƠN Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số : 8420114 Người hướng dẫn: TS Nguyễn Xuân Quang e LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng thân nhóm nghiên cứu với trợ giúp cán khoa côn trùng, Viện sốt rét- Ký sinh trùng - Côn trùng Quy Nhơn Các số liệu sử dụng phân tích luận văn tơi tự tìm hiểu, phân tích cách trung thực, khách quan phù hợp với thực tiễn Kết trung thực chưa công bố cơng trình nghiên cứu khác Tác giả Phan Thị Tuyết Nhung e LỜI CẢM ƠN Trước hết em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc kính trọng tới ban giám hiệu Trường Đại học Quy Nhơn, quý thầy cô khoa Sinh-KTNN tạo điều kiện truyền thụ kiến thức quý báu để em hồn thành khóa học Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy TS Nguyễn Xuân Quang, người thầy đầy tâm huyết ln tạo điều kiện tốt để em hồn thành luận văn Thầy tận tình giúp đỡ, nhắc nhở trình thực đề tài, tạo nhiều hội để em học tập trải nghiệm kiến thức Em xin cảm ơn anh, chị, cơng tác Tổ ni tồn thể cán khoa Côn trùng, Viện Sốt rét - Ký Sinh Trùng - Cơn trùng Quy Nhơn hết lịng giúp đỡ, tận tình bảo, tạo điều kiện tốt để em hoàn thành tốt luận văn Lời cảm ơn thiêng liêng muốn gửi tới Ba Mẹ yêu thương, động viên, chỗ dựa vững lúc gặp khó khăn Quy Nhơn, ngày 24 tháng năm 2019 Tác giả Phan Thị Tuyết Nhung e MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu đề tài 3 Đối tượng nghiên cứu Địa điểm thời gian nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Ý nghĩa đề tài 7.1.Ý nghĩa khoa học 7.2.Ý nghĩa thực tiễn Cấu trúc luận văn Chương 1.TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình sốt xuất huyết, sốt rét giới Việt Nam 1.1.1 Tình hình sốt xuất huyết sốt rét giới 1.1.2 Tình hình sốt xuất huyết sốt rét Việt Nam 1.2 Tình hình nghiên cứu muỗi Aedes Anopheles 1.2.1 Đặc điểm hình thái, sinh lý sinh thái muỗi Aedes 1.2.1.1 Đặc điểm nhận dạng hình thái ngồi Aedes 1.2.1.2 Chu kỳ phát triển muỗi Aedes 1.2.1.3 Đặc điểm sinh thái muỗi Aedes 10 e 1.2.2.Đặc điểm hình thái, sinh lý sinh thái muỗi Anopheles 11 1.2.2.1 Đặc điểm nhận dạng hình thái ngồi Anopheles 11 1.2.2.2 Chu kỳ phát triển muỗi Anopheles 12 1.2.2.3 Đặc điểm sinh thái muỗi Anopheles 14 1.3 Các nghiên cứu biện pháp nuôi muỗi 15 1.4 Hệ thống máy cho ăn nhân tạo Hemotek 24 Chương 2.ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Đối tượng nghiên cứu 26 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 26 2.2.1 Thời gian nghiên cứu 26 2.2.2 Địa điểm nghiên cứu 26 2.3 Nội dung nghiên cứu 26 2.4 Phương pháp nghiên cứu 27 2.4.1 Thử nghiệm với phương pháp cho muỗi ăn khác 27 2.4.2 Theo dõi ảnh hưởng phương pháp cho ăn khác lên giai đoạn phát triển muỗi 27 2.5 Các kỹ thuật sử dụng nghiên cứu 27 2.5.1 Phương pháp xác định khả sinh sản 27 2.5.2 Phương pháp xác định tỷ lệ trứng nở 28 2.5.3 Phương pháp xác định thời gian sống 28 2.5.4 Cơng thức tính chu kỳ sinh thực 28 2.5.5 Kỹ thuật nuôi bọ gậy, muỗi Aedes (Ae aegypti, Ae albopictus) 29 2.5.6 Kỹ thuật nuôi bọ gậy, muỗi Anopheles (An dirus, An epiroticus) 33 2.5.7 Kỹ thuật cho ăn nhân tạo 37 2.5.7.1 Giai đoạn chuẩn bị 37 2.5.7.2 Quy trình thực 37 e 2.6 Vật liệu nghiên cứu 39 2.7 Các biến số nghiên cứu 39 2.8 Xử lý số liệu 40 2.9 Đạo đức nghiên cứu 40 Chương 3.KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 41 3.1 Tỷ lệ hút máu no, chu kỳ tiêu sinh tuổi thọ loài muỗi Aedes Anopheles điều kiện nuôi nhân tạo máy Hemotek 41 3.1.1 Tỷ lệ hút máu no loài muỗi Aedes Anopheles đốt máu chuột đốt máu qua loại màng 41 3.1.1.1 Tỷ lệ đốt máu qua loại màng muỗi Aedes Anopheles 41 3.1.1.2 Tỷ lệ hút máu no loài muỗi Anopheles Aedes 445 3.1.2 Chu kỳ tiêu sinh muỗi Aedes Anopheles qua phương pháp cho ăn khác 49 3.1.3 Tuổi thọ trung bình muỗi Aedes Anopheles cho ăn qua phương pháp khác 54 3.1.3.1 Tuổi thọ trung bình muỗi Aedes cho ăn qua phương pháp khác 54 3.1.3.2 Tuổi thọ trung bình muỗi Anopheles cho ăn qua phương pháp khác 57 3.2 Đánh giá số yếu tố liên quan đến khả cho trứng, tỷ lệ nở đến muỗi trưởng thành dịng muỗi quy trình ni muỗi hệ thống máy Hemotek 60 3.2.1 Khả cho trứng, tỷ lệ trứng nở đến muỗi trưởng thành loài muỗi Ae aegypti 60 3.2.2 Khả cho trứng, tỷ lệ trứng nở đến muỗi trưởng thành loài muỗi Ae albopictus 62 e 3.2.3 Khả cho trứng, tỷ lệ trứng nở đến muỗi trưởng thành loài muỗi An dirus 64 3.2.4 Khả cho trứng, tỷ lệ trứng nở thành muỗi trưởng thành loài muỗi An epiroticus 65 3.2.5 Tỷ lệ muỗi đực, cho ăn phương pháp khác 67 KẾT LUẬN 69 KHUYẾN NGHỊ 70 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 72 PHỤ LỤC QUYẾT ĐỊNH GIAO ĐỀ TÀI LUẬN VĂN THẠC SĨ (Bản sao) e DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT An Anopheles Ae Aedes ACD Acid citrate dextrose BSA Bovine Serum Albumin CPD Citrate phosphate dextrose DDT Dichlorodiphenyltrichloethane EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid PTFE Polytetrafluoroethylene SXH Sốt xuất huyết SXHD Sốt xuất huyết Dengue WHO World Health Organization e DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Tỷ lệ muỗi Aedes đốt máu no qua loại màng khác 41 Bảng 3.2 Tỷ lệ muỗi Anopheles đốt máu no qua loại màng khác 42 Bảng 3.3 Tỷ lệ muỗi Ae aegypti đốt no máu cho đốt qua loại màng đốt trực tiếp chuột 46 Bảng 3.4 Tỷ lệ muỗi Ae albopictus đốt no đốt máu qua loại màng cho đốt chuột 47 Bảng 3.5 Tỷ lệ muỗi An dirus đốt no máu cho đốt chuột đốt máu qua loại màng 48 Bảng 3.6 Tỷ lệ muỗi An epiroticus đốt no máu cho đốt chuột qua loại màng 48 Bảng 3.7.Thời gian trung bình hoàn thành chu kỳ sinh thực muỗi Ae aegypti 49 Bảng 3.8 Thời gian trung bình hồn thành chu kỳ sinh thực muỗi Ae albopictus 51 Bảng 3.9 Thời gian trung bình hồn thành chu kỳ sinh thực muỗi An dirus 52 Bảng 3.10 Thời gian trung bình hồn thành chu kỳ sinh thực muỗi An epiroticus 53 Bảng 3.11 Khả cho trứng, tỷ lệ trứng nở đến muỗi trưởng thành loài muỗi Ae.aegypti 60 Bảng 3.12 Khả cho trứng, tỷ lệ trứng nở đến muỗi trưởng thành loài muỗi Ae.albopictus 62 Bảng 3.13 Khả cho trứng, tỷ lệ trứng nở đến muỗi trưởng thành loài muỗi An.dirus 64 Bảng 3.14 Khả cho trứng, tỷ lệ trứng nở đến muỗi trưởng thành loài muỗi An.epiroticus 65 e 71 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt [1] Vũ Đình Chữ, Phạm Thị Hoan c.s (2009), ‘‘Một số đặc điểm sinh học chủng An dirus (Phú Yên) phịng thí nghiệm’’ Tạp chí phịng chống bệnh sốt rét bệnh ký sinh trùng, số 3-2009, tr 36-40 [2] Bùi Đại (1999), Dengue sốt xuất huyết, NXB Y học, Hà Nội [3] Huỳnh Trọng Đạo (2016) ‘‘Nghiên cứu mức độ nhạy, kháng véc tơ sốt rét với hóa chất diệt trùng số điểm sốt rét lưu hành khu vực Miền Trung – Tây Nguyên’’ Tr -8 [4] Huỳnh Ly Na, Nguyễn Xuân Quang (2016), ‘‘Hiệu lực chế phẩm diệt bọ gậy Pyriproxyfen (Sumilarv 0.5G) phịng chống muỗi Aedes aegypti Bình Định’’ Viện Sốt rét-KST-CT Quy Nhơn [5] Đỗ Công Tấn (2016), ‘‘Chuyên đề muỗi truyền bệnh sốt xuất huyết Aedes aegypti biện pháp phòng chống bệnh’’ Viện Sốt rét-KST-CT Quy Nhơn [6] Tạ Huy Thịnh (1997), Sách côn trùng Giáo trình trùng y học, Hà Nội, tr.10 ; [7] Bộ Y tế (2002), Giáo trình trùng sốt rét, Viện sốt rét-KST-CT Quy Nhơn, tr23 [8] Bộ Y tế (2014), Hướng dẫn giám sát phòng, chống Sốt xuất huyết Dengue, Hà Nội [9] Bộ Y Tế (2000), Dịch sốt rét phòng chống dịch sốt rét Việt Nam Nhà xuất y học [10] Cục Y tế Dự Phòng Bộ Y tế (2016) Sốt xuất huyết diễn biến phức tạp http://vncdc.gov.vn/vi/tin-tuc-trong-nuoc/981/%E2%80%8Bsot- xuat-huyet-van-dang-dien-bien-phuc-tap-nhieu-noi-tren-the-gioi [11] https://dietcontrunggiare.com/tin-tuc/vong-doi-phat-trien-cua-muoi.html e 72 [12] https://pestcarepro.com/tin-tuc/dac-tinh-sinh-hoc-cua-loai-muoi pest care- đặc điểm sinh học muỗi [13] https://alldrugs.net/tinh-hinh-benh-sot-ret-o-viet-nam.html [14] http://vncdc.gov.vn/vi/tin-tuc-trong-nuoc/981/%E2%80%8Bsot-xuat- huyet-van-dang-dien-bien-phuc-tap-nhieu-noi-tren-the-gioi [15] http://contrungyhoc.com/tin-tuc/511/Dac-diem-hinh-thai-muoi- Anopheles.html [16] https://blogysinhhoc.blogspot.com/2015/06/vai-tro-cua-muoi-trong-viec- truyen-benh.html [17] http://www.impe-qn.org.vn/impe qn/vn/portal/InfoDetail.jsp?area=58&cat=936&ID=6056 Tiếng anh [18] Andre´ Luis Costa-da-Silva Fla´ via Rosa Navarrete1, Felipe Scassi Salvador, Maria Karina-Costa,(2013), ‘‘Glytube: A Conical Tube and Parafilm M-Based Method as a Simplified Device to Artificially Blood-Feed the Dengue Vector Mosquito, Aedes aegypti’’ PLoS ONE 8(1): e53816 doi: 10.1371/journal.pone.0053816 [19] Cheong, H T et al (2016), ‘‘Membrane feeding of dengue patient’s blood as a substitute for direct skin feeding in studying Aedes dengue virus interaction’’ Parasites & Vectors20169:211 https://doi.org/10.1186/s13071-016-1469-6 [20] Dias Luciana, Bauzer Luíz, Lima José (2018), “Artificial blood feeding for Culicidae colony maintenance in laboratories: does the blood source condition matter?”, Original article, Rev Inst Med Trop São Paulo 2018; 60: e45 [21] D Damiens, S M Soliban, F Balestrino, R Alsir, M.J.B Vreysen And J.R.L Gilles, ‘‘Different Blood and Sugar Feeding Regimes Affect the Productivityof Anopheles arabiensis Colonies (Diptera: Culicidae)’’ e 73 http://dx.doi.org/10.1603/ME12212 [22] Doreen J Siria, Elis P A Batista, Mercy A Opiyo1 (2018), ‘‘Evaluation of a simple polytetrafluoroethylene (PTFE)-based membrane for bloodfeeding of malaria and dengue fever vectors in the laboratory’’ https://doi.org/10.1186/s13071-018-2823-7 [23] Deng L, Koou S.Y, Png A.B, Ng L.C (2011), ‘‘A novel mosquito feeding system for routine blood-feeding of Aedes aegypti and Aedes albopictus’’ Tropical Biomedicine 29(1): 169–174 [24] Finlayson C, Saingamsook J and Somboon.P (2015), ‘‘This is a repository copy of A simple and affordable membrane - feeding method for Aedes aegpyti and Anopheles minimus (Diptera: Culicidae)’’.White Rose Research Online URL for this paper http://eprints.whiterose.ac.uk/139037/ [25] Gunathilaka N, Ranathunge T, Udayanga L, and Abeyewickreme W (2017), “Efficacy of Blood Sources and Artificial Blood Feeding Methods in Rearing of Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) for Sterile Insect Technique and Incompatible Insect Technique Approaches in Sri Lanka”, Biomed Res Int 2017;2017:3196924 [26] http://hemotek.co.uk/accessories/ [27] Kondrachine A & Trigg PI., (1997), “Control of malaria in the world”, Indian Journal of Malariology , 34, pp 92-110 [28] Kristina K Gonzales, Hitoshi Tsujimoto, Immo A Hansen (2015), ‘‘Blood serum and BSA, but neither red blood cells nor hemoglobin can support vitellogenesis and egg production in the dengue vector Aedes aegypti’’ Published online 212 [29] Luciana dos Santos Dias, Luíz Guilherme Soares da Rocha Bauzer, José Bento Pereira Lima (2018), ‘‘Artificial blood feeding for Culicidae colony e 74 maintenance in laboratories: does the blood source condition matter’’ Published online 2018 Sep 13 doi: 10.1590/S1678-9946201860045 015 May doi: 10.7717/peerj.938 [30] Mark G Novak, William J Berry, Wayne A Rowley (1991), ‘‘Comparison of four membranes for artificially blood feeding mosquitoes’’ Department of Entomology, Iowa State University, Ames, IA 5001 | -3222 [31] Pothikasikorn, Boonplueang R, Suebsaeng C, Khaen-graeng R, Chareonviriyaphap T (2010), ‘‘Feeding response of Aedes aegypti and Anopheles dirus (Diptera: Culicidae) using out-of-date human blood in a membrane feeding apparatus’’ Journal of Vector Ecology 35 (1): 149-155 2010 [32] Phasomkusolsil S, Tawong J, Monkanna N, Pantuwatana K, Damdangdee N, Khongtak W, et al (2013), “Maintenance of mosquito vectors: effects of blood source on feeding, survival, fecundity, and egg hatching and maintaining Aedes aegypti and Aedes albopictus mosquitoes”, J Vector Ecol 2014;39:271-7 [33] Tseng M (2003), ‘‘A Simple Parafilm M-Based Method for Blood- Feeding Aedes aegypti and Aedes albopictus (Diptera: Culicidae)’’ Journal of Medical Entomology 40(4),pp.588-589 https://doi.org/10.1603/0022-2585-40.4.588 [34] WHO, (1998), Techniques to detect insecticide resistance mechanism, WHO/CDS/CPC/MAL/98.6 [35] WHO, (1967), Expert Committee on Malaria: 13th Report Technical Report Series N°357, Geneva [36] WHO, (1998), Techniques to detect insecticide resistance mechanism, WHO/CDS/CPC/MAL/98.6 [37] WHO, (1967), Expert Committee on Malaria: 13th Report Technical Report e 75 Series N°357, Geneva [38] Yi-Pey Luo (2014), ‘‘A novel multiple membrane blood-feeding system for investigating and maintaining Aedes aegypti and Aedes albopictus mosquitoes’’.Journal of vector ecology 2014 Dec; 39(2):271-7 doi: 10.1111/jvec.12101 e 76 Phụ lục 1: Phiếu theo dõi kết Tổng trứng BGT2 % trứng nở bọ gậy BGT3 BGT4 Quăng % BG nở quăng Muỗi % quăng nở muỗi MĐ % MĐ MC % MC e 10 77 Giấy xác nhận thực đề tài e 78 Phụ lục 2: Một số hình ảnh trình thực đề tài labo Viện Viện Sốt rét-KST-CT Quy Nhơn e 79 Phịng ni muỗi Hình ảnh ni bọ gậy phịng ni muỗi e 80 Bể chứa máu gắn Bể chứa máu gắn màngParafilm màngHemotek Bể chứa máu gắn màng ruột heo e Feeder 81 Bộ nguồn PS6 Xử lý màng ruột heo Gắn màng vào nguồn chứa máu e 82 Bình chứa máu có sẵn Lắc liên tục bình chứa máu hạt thủy tinh Hút máu khử fibrin vào lọ e Nhỏ máu vào nguồn chứa máu 83 Mặt trước nguồn chứa máu Mặt sau nguồn chứa máu Gắn nguồn chứa máu vào Feeder e 84 Kết nối Feeder với nguồn điện e 85 Một số hình ảnh trình theo dõi phát triển muỗi e ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN PHAN THỊ TUYẾT NHUNG NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG SINH TRƯỞNG, SINH SẢN CỦA CÁC CHỦNG MUỖI AEDES VÀ ANOPHELES TRONG ĐIỀU KIỆN NUÔI NHÂN TẠO BẰNG MÁY HEMOTEK TẠI... trình nghiên cứu riêng thân nhóm nghiên cứu với trợ giúp cán khoa côn trùng, Viện sốt rét- Ký sinh trùng - Côn trùng Quy Nhơn Các số liệu sử dụng phân tích luận văn tơi tự tìm hiểu, phân tích cách... phí nghiên cứu khoa học liên quan đến hoạt động phòng chống véc tơ [25], [21] Xuất phát từ lý trên, đề tài: Nghiên cứu khả sinh trưởng, sinh sản chủng muỗi Aedes Anopheles điều kiện nuôi nhân tạo