Nghiên cứu thâm nhiễm tế bào Lympho tại mô ung thư phổi ppt

TCNCYH 26 (6) - 2003 Nghiên cứu thâm nhiễm tế bào lympho tại mô ung th phổi Phạm Văn Linh 1 , Văn Đình Hoa 2 , Lê Đình Roanh 2 1 Trờng Đại học Y Hải Phòng, 2 Trờng Đại học Y Hà Nội Sự tập trung các tế bào miễn dịch đặc hiệu tại chỗ là đặc điểm chính của đáp ứng miễn dịch đối với các khối u. Nghiên cứu đợc tiến hành ở 73 trờng hợp ung th phổi của viện Lao và bệnh phổi trung ơng: khảo sát sự thâm nhiễm các tế bào lympho trong các mô bệnh phẩm của bệnh nhân ung th phổi tiên phát đợc phẫu thuật. Xác định sự thâm nhiễm lympho bằng phơng pháp nhuộm HE, trong đó 47 trờng hợp nhuộm hoá mô miễn dịch với kháng thể chống CD3, CD20, CD8. Thâm nhiễm lympho đợc tìm thấy ở 64% các mô ung th, trong đó 42,5% trờng hợp có thâm nhiễm lympho ở mức cao. Thâm nhiễm lympho ở mô đệm và khu vực xen kẽ giữa các tế bào ung th, nhng chủ yếu là ở mô đệm. Hình thái nang chỉ thấy ở mô đệm. Sự thâm nhiễm các tế bào miễn dịch vào mô ung th đã đợc phân tích và bàn luận. i. Đặt vấn đề Ung th là một trong những nguyên nhân gây tử vong hàng đầu, là một vấn đề lớn của toàn cầu. Cho đến hiện tại đã có nhiều công trình nghiên cứu về miễn dịch ung th, nghiên cứu khả năng cơ thể loại trừ mô ung th thông qua đáp ứng miễn dịch. Tuy vậy phản ứng của cơ thể chống lại mô ung th vẫn cha có những hiểu biết đầy đủ về bản chất của sự đáp ứng và sự liên quan với tình trạng bệnh lý. Trong số các ung th, ung th phổi là một trong những ung th thờng gặp nhất. Mặc dù đã có nhiều tiến bộ trong chiến lợc phát hiện, chẩn đoán và điều trị, sự sống thêm của bệnh nhân ung th phổi gần nh cha thay đổi [4, 6]. Về miễn dịch, sự xâm nhiễm của các tế bào lympho tại mô ung th với các thành phần tế bào liên quan đến đáp ứng miễn dịch tự nhiên hay đáp ứng miễn dịch đặc hiệu thể hiện một đáp ứng miễn dịch tại chỗ chống lại mô ung th. ở Việt Nam sự ứng dụng hoá mô miễn dịch trong những năm gần đây đã giúp ích cho việc phân loại và chẩn đoán nhiều bệnh lý ác tính. Tuy vậy cha có công trình nào ứng dụng hoá mô miễn dịch nghiên cứu đáp ứng miễn dịch tại mô ung th phổi. Mục tiêu: - Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch tại chỗ chống tổ chức ung th phổi - Phân tích sự thâm nhiễm các tế bào lympho tại mô ung th phổi. ii. Đối tợng và phơng pháp nghiên cứu 1. Đối tợng nghiên cứu 73 bệnh nhân đợc chẩn đoán ung th phổi tiên phát và đợc phẫu thuật tại khoa Phẫu thuật lồng ngực viện Lao và bệnh phổi trung ơng từ năm 1998-2000. 12 TCNCYH 26 (6) - 2003 2. Phơng pháp nghiên cứu Nghiên cứu hồi cứu cắt ngang * Các bớc nghiên cứu: 1. Thu thập thông tin và bệnh phẩm 2. Tiến hành các kỹ thuật - Kỹ thuật mô học thờng quy - Kỹ thuật hoá mô miễn dịch: sau khi xử lý, phủ các kháng thể, nhuộm theo quy trình hoá mô miễn dịch (kháng thể đơn clôn chống CD3, CD8, CD20, kháng thể cầu nối biotin, phức hợp avidin biotin peroxidase ) đánh giá kết quả trên kính hiển vi quang học. + Thâm nhiễm lympho B, T: cả hai tiêu bản nhuộm CD3 và CD20: nếu tồn tại cả hai loại tế bào tơng ứng với mức phân tán (D2, D3) và nhiều ổ (MF): thâm nhiễm kết hợp. Nếu chỉ có một loại tế bào (tơng ứng mức D2, D3, MF): thâm nhiễm một loại tế bào đó. + Thâm nhiễm tế bào TCD8(+): thâm nhiễm < 5 tế bào/ 1 vi trờng: ít thâm nhiễm. Thâm nhiễm > 5 tế bào/ 1 vi trờng ở D1: ít thâm nhiễm. Thâm nhiễm > 5 tế bào/ 1 vi trờng ở D2: thâm nhiễm nhiều. * Xử lý kết quả Các kết quả nghiên cứu đợc xử lý bằng chơng trình thống kê Epi Info phiên bản 6.04, chơng trình Microsoft Excel, với các thuật toán thống kê thích hợp. iii. Kết quả Trên 73 bệnh nhân mà chúng tôi nghiên cứu có 47 trờng hợp (64,4%) đợc đánh giá là có thâm nhiễm lympho theo cách đánh giá trình bày ở phần đối tợng và phơng pháp nghiên cứu. Trong số 47 bệnh nhân này, 31 bệnh nhân có thâm nhiễm lympho ở mức cao đợc chúng tôi lựa chọn để nhuộm hoá mô miễn dịch. Bảng 1: Tỷ lệ có thâm nhiễm Lympho tại mô ung th phổi Thâm nhiễm lympho n % Có 47 64,4 Không 26 35,6 Tổng số 73 100 Bảng 2: Vị trí của thâm nhiễm Lympho Vị trí thâm nhiễm n % ở mô ung th đệm 37 78,7 Kết hợp 10 21,3 Tổng số 47 100 Trong số 47 trờng hợp đợc đánh giá có thâm nhiễm ở mô ung th, có 10 trờng hợp (21,3%) sự thâm nhiễm kết hợp vừa ở mô đệm vừa xen kẽ giữa các tế bào ung th. Các trờng hợp còn lại (37 trờng hợp) sự thâm nhiễm chỉ có ở mô đệm ung th. Không có trờng hợp nào có sự thâm nhiễm xen kẽ ở các tế bào ung th mà ở mô đệm không có sự thâm nhiễm. Về hình thái thâm nhiễm chúng tôi thấy các hình thái thâm nhiễm tập trung ở mô đệm ung th và có kết hợp hoặc không với thâm nhiễm xen kẽ với các tế bào ung th. Bảng 3: Vị trí và hình thái thâm nhiễm Tại mô đệm Kết hợp Phân tán 22 3 Tập trung 2 0 Kết hợp 13 7 Tổng số 37 10 Theo cách đánh giá mức độ thâm nhiễm lympho tại mô ung th đợc trình bày tại phần đối tợng và phơng pháp nghiên cứu chúng tôi thu đợc kết quả 13 TCNCYH 26 (6) - 2003 trình bày ở bảng 4. Trong tổng số 47 trờng hợp đợc xác định có thâm nhiễm lympho tại tổ chức ung th có 31 trờng hợp có mức độ thâm nhiễm cao (chiếm 42,5%), số còn lại (16 trờng hợp) có mức độ thâm nhiễm vừa, chiếm 21,9%. Bảng 4: Mức độ thâm nhiễm lympho Thâm nhiễm n % Mức độ nhiều 31 42,5 Mức độ vừa 16 21,9 Không hay rất ít 26 35,6 Tổng số 73 100 Trên 31 bệnh nhân đợc xác định ung th phổi và đợc đánh giá có mức độ thâm nhiễm cao các tế bào lympho tại tổ chức ung th, chúng tôi tiến hành nhuộm hoá mô miễn dịch với kháng thể kháng CD3, CD20, và CD8 cho mỗi trờng hợp. Đánh giá kết hợp kết quả nhuộm hoá mô miễn dịch xác định CD3 và CD20 trên từng trờng hợp cho thấy trên một nửa số các trờng hợp có sự thâm nhiễm kết hợp cả 2 loại tế bào CD20 (+) và CD3 (+). Khoảng 1/3 số các trờng hợp có tế bào thâm nhiễm chủ yếu là CD3 (+). Một số nhỏ (3/31) có tế bào thâm nhiễm chủ yếu là CD20 (+). Các tế bào CD20 (+) có chủ yếu ở các vị trí tế bào lympho thâm nhiễm thành đám và tập trung tại phần trung tâm và trong một số trờng hợp phân tán trong mô đệm hay xen kẽ giữa các tế bào ung th. Các tế bào CD3 (+) phân bố phân tán trong mô đệm, xen kẽ giữa các tế bào ung th hay tập trung ở vùng ngoại vi của các vùng tế bào lympho thâm nhiễm thành đám. Bảng 5: Kết quả xác định CD3 và CD20 Tế bào thâm nhiễm Số lợng Tỷ lệ (%) Tế bào CD20 (+) chiếm chủ yếu 3 9,7 Tế bào CD3 (+) chiếm chủ yếu 10 32,3 Kết hợp cả 2 loại 18 58 Tổng số 31 100 Kết quả không mong đợi mà chúng tôi nhận đợc là hầu hết các trờng hợp đợc đánh giá có thâm nhiễm tế bào lympho ở mức độ cao tại mô ung th không có hoặc có rất ít thành phần tế bào CD8(+). Bảng 6: Kết quả nhuộm xác định CD8 Tế bào thâm nhiễm n % Không có 18 58 Có với số lợng ít 10 32,3 Có nhiều 3 9,7 Tổng số 31 100 iv. Bàn luận Trên 73 bệnh nhân đợc nghiên cứu theo phơng pháp mô học với nhuộm HE nhằm tìm hiểu về tỷ lệ cũng nh mức độ của thâm nhiễm lympho tại tổ chức ung th phổi có 47 trờng hợp (64,4%) đợc đánh giá là có thâm nhiễm tế bào lympho mô ung th. Trong số 47 bệnh nhân này, 31 bệnh nhân (42,5%) có thâm nhiễm lympho ở mức cao. Tác giả Angelo Di Giorgio và cộng sự (2000) trong một nghiên cứu gần đây trên tổng số 172 bệnh nhân thấy 36,6 % có thâm nhiễm tế bào lympho tại mô ung th phổi ở mức độ cao [1]. 14 TCNCYH 26 (6) - 2003 Fajac và nhóm nghiên cứu ở Pháp (1992) nhận thấy có sự thâm nhiễm ở mức độ cao các tế bào lympho tại mô đệm tổ chức ung th phổi cũng nh xen kẽ giữa các tế bào ung th trong tất cả các trờng hợp nghiên cứu [2]. Về hình thái thâm nhiễm các tế bào lympho tại mô ung th phổi còn ít các nghiên cứu mô tả. Trên tiêu bản nhuộm HE chúng tôi thấy hình thái thâm nhiễm phân tán thấy cả ở mô đệm và xen kẽ giữa các tế bào ung th. Thâm nhiễm tế bào lympho ở vị trí xen kẽ giữa các tế bào ung th chỉ thấy kết hợp cùng với thâm nhiễm lympho ở mô đệm ung th và ở vị trí xen kẽ giữa các tế bào ung th, chúng tôi không thấy hình thái tập trung thành nang mà chỉ thấy hình thái thâm nhiễm phân tán. Tại mô đệm ở các vị trí tế bào lympho thâm nhiễm tập trung thành nang chúng tôi thấy trên các tiêu bản nhuộm HE hình ảnh của nang lympho thứ phát. Kết quả nghiên cứu ở các trờng hợp có thâm nhiễm lympho tại mô ung th trên các tiêu bản nhuộm HE và các tiêu bản nhuộm hoá mô miễn dịch kết hợp xác định CD3, CD20, CD8 của chúng tôi xác nhận trong hơn một nửa số các trờng hợp có thâm nhiễm tế bào lympho tại mô ung th, hình thái đáp ứng miễn dịch kết hợp của cơ thể. Trong nghiên cứu của chúng tôi, ngay cả trên những trờng hợp có thâm nhiễm chủ yếu các tế bào T, có một tỷ lệ rất thấp có thành phần TCD8 (+) trong các tế bào T thâm nhiễm và trên những đối tợng có thâm nhiễm, mật độ tế bào này cũng rất tha thớt. Qua kết quả nghiên cứu này có thể thấy đợc rằng hiệu quả của đáp ứng miễn dịch thông qua vai trò gây độc tế bào của các tế bào TCD8 (+) trong ung th phổi là rất thấp. Giải thích cho điều này theo chúng tôi có liên quan đến cơ chế nhận diện kháng nguyên và hoạt hoá tế bào T độc. Một nghiên cứu xác định rằng các tế bào lympho thâm nhiễm khối u không có hay có ở mức rất thấp tính độc tế bào [3, 5]. v. Kết luận 1. Tỷ lệ có thâm nhiễm lympho mô ung th phổi tơng đối cao (64,4%) trong đó 42,5 % trờng hợp có thâm nhiễm nhiều. Các tế bào lympho thâm nhiễm khối u gặp cả ở mô đệm ung th lẫn xen kẽ giữa các tế bào u. 2. Các trờng hợp thâm nhiễm đều có hình thái của một đáp ứng kết hợp của các tế bào lympho B và T. Trong thành phần các tế bào thâm nhiễm không có hoặc có rất ít tế bào TCD8 (+). Tài liệu tham khảo 1. Di Giorgio A, Mingazzini P, Sammatino P, et al (2000), Host defense and survival in patients with lung carcinoma, Cancer, 89(10), pp: 2038-45. 2. Fajac I, Tazi A, Hance AJ, et al (1992), Lymphocytes infitrating normal human lung and lung carcinomas rarely express gamma delta T cell antigen receptors. Clin Exp Immunol, 87(1), pp: 127-31. 3. Gotoh K, Gouchi A, Akura Y, et al (1991), Augmentation of cytotoxicity of tumor-infiltrating lymphocytes by biologycal response modifier. Ins J. Immunopharmacol, 13 (5), pp: 485-92. 4. John D.M (1998), Neoplasms of the lung. In: AS Fauci, E Braunwald, KJ Isselbacher: Harrison s Principles of Internal Medicine. Mc Graw-Hill, 14 th Ed,pp: 552-61. 15 TCNCYH 26 (6) - 2003 5. Tizard IR (1999), Resistance to Tumors. In: Immunology, 4 Ed,pp: 306-19. 6. TrÐdaniel J, Strucker I, Migand I (1991), DÐpistage du cancer bronchique. RÐalitÐ et persspectives. Rev Mal Resp, 1991, 8, pp: 543-50. Summary Study on infiltrated lymphocytes in lung cancer A central feature of any immune response toward tumor is the recruiment of specific immune cell populations. Study carried out in National institute of Tuberculosis and Pulmonary Diseases, investigating the infiltration of lymphocytes in surgically resected specimens of primary lung cancer. Lymphoid infiltrates were quantified on standard HE stained section and, in a subset of 47 cases, immunohistochemistry using antibodies to CD3, CD20, CD8. A lymphoid infiltration was mainly observed in the stroma and, to a lesser extent, between tumor cell. The follicular aspect was found only in the stroma. The immune cell types infiltrating tumor tissue are also analyzed and discussed. 16 . MF): thâm nhiễm một loại tế bào đó. + Thâm nhiễm tế bào TCD8(+): thâm nhiễm < 5 tế bào/ 1 vi trờng: ít thâm nhiễm. Thâm nhiễm > 5 tế bào/ 1 vi trờng ở D1: ít thâm nhiễm. Thâm nhiễm. tại mô đệm tổ chức ung th phổi cũng nh xen kẽ giữa các tế bào ung th trong tất cả các trờng hợp nghiên cứu [2]. Về hình thái thâm nhiễm các tế bào lympho tại mô ung th phổi còn ít các nghiên. hoá mô miễn dịch nghiên cứu đáp ứng miễn dịch tại mô ung th phổi. Mục tiêu: - Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch tại chỗ chống tổ chức ung th phổi - Phân tích sự thâm nhiễm các tế bào lympho tại