Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http //www lrc tnu edu vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC ĐỖ THỊ CẨM VÂN SO SÁNH TRÌNH TỰ GEN TỔNG HỢP ISOFLAVONE PHÂN LẬP TỪ ĐẬU XANH LUẬN VĂN THẠC SĨ[.]
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC ĐỖ THỊ CẨM VÂN SO SÁNH TRÌNH TỰ GEN TỔNG HỢP ISOFLAVONE PHÂN LẬP TỪ ĐẬU XANH LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG THÁI NGUYÊN - 2016 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC ĐỖ THỊ CẨM VÂN SO SÁNH TRÌNH TỰ GEN TỔNG HỢP ISOFLAVONE PHÂN LẬP TỪ ĐẬU XANH Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Vũ Thanh Thanh THÁI NGUYÊN - 2016 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Mọi thơng tin trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Tơi xin cam đoan hồn tồn chịu trách nhiệm số liệu luận văn Thái Nguyên, ngày 20 tháng 10 năm 2016 Tác giả luận văn Đỗ Thị Cẩm Vân Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ii LỜI CẢM ƠN Lời tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Vũ Thanh Thanh quan tâm, hướng dẫn bảo tận tình cho tơi suốt thời gian nghiên cứu thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn TS Hoàng Thị Thu Yến thầy cô giáo Khoa Khoa học sống - Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ thời gian học tập thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Lê Văn Sơn, KS Hồ Mạnh Tường cán bộ, kỹ thuật viên phịng Cơng nghệ DNA ứng dụng - Viện Cơng nghệ Sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tạo điều kiện giúp đỡ tốt để tơi hồn thành đề tài nghiên cứu Cuối cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới gia đình, đồng nghiệp bạn bè ln động viên, khích lệ, chia sẻ khó khăn tơi suốt q trình học tập nghiên cứu hoàn thiện luận văn Thái Nguyên, ngày 20 tháng 10 năm 2016 Tác giả luận văn Đỗ Thị Cẩm Vân Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT vii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cây đậu xanh 1.1.1 Nguồn gốc phân loại đậu xanh 1.1.2 Đặc điểm hình thái đậu xanh 1.1.3 Giá trị đậu xanh 1.2 Thành phần hoạt tính Isoflavone 10 1.2.1 Thành phần Isoflavone 10 1.2.2 Hoạt tính tác dụng điều trị bệnh Isoflavone 13 1.3 Gen đường sinh tổng hợp Isoflavone 15 1.3.1 Con đường sinh tổng hợp Isoflavone 15 1.3.2 Gen tổng hợp Isoflavone 16 1.3.3 Gen tổng hợp Isoflavone CHI xanh 18 Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Vật liệu, thiết bị, hóa chất địa điểm nghiên cứu 19 2.1.1 Vật liệu 19 2.1.2 Hóa chất 20 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn iv 2.1.3 Thiết bị 21 2.1.4 Địa điểm nghiên cứu 21 2.2 Phương pháp nghiên cứu 22 2.2.1 Phương pháp tách chiết DNA tổng số mRNA tổng số 22 2.2.2 Phương pháp tổng hợp cDNA 23 2.2.3 PCR khuếch đại gen CHI 24 2.2.4 Tách dòng gen CHI 27 2.2.5 Phương pháp xác định trình tự nucleotide 29 2.2.6 Phương pháp phân tích trình tự gen 29 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Tạo dòng xác định trình tự gen CHI từ DNA genome 30 3.1.1 Kết tách chiết DNA tổng số 30 3.1.2 Kết khuếch đại gen CHI từ đậu xanh 31 3.1.3 Kết tách dòng gen CHI từ DNA genome 32 3.2 Tạo dịng xác định trình tự gen CHI từ cDNA 34 3.3 Phân tích trình tự gen CHI từ mẫu nghiên cứu 37 3.3.1 Kết so sánh trình tự gen CHI từ DNA genome từ cDNA 37 3.3.2 Kết so sánh trình tự gen CHI phân lập từ mẫu đậu xanh nghiên cứu với trình tự gen CHI cơng bố Ngân hàng gen 41 3.3.3 Phân tích trình tự amino acid suy diễn từ gen CHI mẫu đậu xanh nghiên cứu 43 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 48 Kết luận 48 Đề nghị 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn v DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Amino acid bột đậu xanh tiêu chuẩn FAO/WHO Bảng 2.1 Cặp mồi nhân gen CHI 20 Bảng 2.2 Danh mục thiết bị sử dụng 21 Bảng 2.3 Thành phần phản ứng tổng hợp cDNA 24 Bảng 2.4 Thành phần phản ứng nhân gen CHI 25 Bảng 2.5 Chu kì nhiệt phản ứng PCR nhân gen CHI 25 Bảng 2.6 Thành phần phản ứng nối gen CHI vào vector pBT 27 Bảng 3.1 Tỷ số A260/A280 hàm lượng DNA tổng số hai giống đậu xanh nghiên cứu 31 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cây đậu xanh Hình 1.2 Cấu trúc hóa học Genistein Daidzein 11 Hình 1.3 Con đường sinh tổng hợp isoflavone 16 Hình 2.1 Hình ảnh hạt mẫu giống đậu xanh nghiên cứu 19 Hình 3.1 Hình ảnh điện di DNA tổng số gel agarose 30 Hình 3.2 Kết điện di kiểm tra sản phẩm PCR khuếch đại DNA gen CHI từ hai giống đậu xanh ĐXĐP và ĐXHL10 32 Hình 3.3 Hình ảnh điện di kiểm tra sản phẩm PCR plasmid 34 Hình 3.4 Kết điện di kiểm tra sản phẩm PCR khuếch đại cDNA gen CHI từ hai giống đậu xanh ĐXĐP và ĐXHL10 35 Hình 3.5 Kết kiể m tra sản phẩ m cắt vector pBT-CHI că ̣p enzyme NcoI NotI 36 Hình 3.6: Đặc điểm cấu trúc gen CHI từ mẫu đậu xanh nghiên cứu 40 Hình 3.7 So sánh trình tự nucleotide gen CHI đậu xanh Việt Nam với trình tự cơng bố 42 Hình 3.8 So sánh trình tự amino acid từ gen CHI đậu xanh Việt Nam với trình tự cơng bố 43 Hình 3.9 So sánh (alignment) trình tự amino acid CHI loài thực vật khác 45 Hình 3.10 Cây phân loại CHI số thực vật 46 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn vii DANH MỤC NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT bp Base pair (cặp bazơ) cDNA Complementary DNA CHI Chalcone isomerase cs cộng DEPC Diethyl pyrocarbonate DNA Deoxyribose nucleic acid dNTP Deoxy nucleoside triphosphate EDTA Ethylene diamine tetraacetic acid E.coli Escherichia coli kb Kilo base mRNA Messenger ribonucleic acid PCR Polymerase chain reaction (phản ứng chuỗi trùng hợp) RNA Ribonucleic acid TAE Tris-acetate-Ethylene diamine tetraacetic acid X-gal 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-ß-D-galacto-pyranoside Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Đậu xanh đậu đỗ ngắn ngày, khả sinh trưởng mạnh, dễ thích ứng với nhiều mơ hình trồng trọt Đặc biệt nghiên cứu gần cho thấy đậu xanh trồng nhiều vụ năm Đậu xanh trồng xen, trồng gối, trồng nhiều loại đất canh tác khác Cây Đậu xanh ngồi giá trị kinh tế cịn có giá trị vơ quan trọng khác mặt sinh học, khả cố định nitơ khí thành đạm cung cấp cho nhờ vi khuẩn Rhirobium virgana cộng sinh rễ Hạt đậu xanh loại thực phẩm có giá trị dinh dưỡng cao, hạt đậu xanh giàu hydratcacbon, protein loại vitamin khác Protein đậu xanh chứa đầy đủ amino acid không thay Với hàm lượng dinh dưỡng cao hạt đậu xanh nên sản phẩm chế biến từ hạt đậu xanh phong phú như: Bột đậu xanh, bánh đậu xanh, đồ xôi, nấu chè làm miến, làm giá đỗ Ngoài việc cung cấp dinh dưỡng, hạt đậu xanh cịn dùng đơng y thuốc nam: Vỏ hạt đậu xanh có vị ngọt, tính hàn có tác dụng giải nhiệt giải độc Dùng nấu ăn để tiêu phù thũng, hạ bí, giải nhiệt độc, giải chất độc thuốc kim loại, hạt đậu xanh dùng chữa bệnh đái tháo đường Trong đậu xanh cịn có chứa thành phần isoflavone dược chất có nguồn gốc thảo mộc, làm giảm xuất số loại ung thư, giảm triệu chứng mãn kinh, ngăn ngừa bệnh tim mạch, béo phì, lỗng xương, ngăn chặn gia tăng choleterol máu Bên cạnh đó, hoạt chất Isoflavone giúp phụ nữ tăng cường chất lượng da, giảm nếp nhăn, giảm độ sâu nếp nhăn mắt, làm cho da săn nhờ tăng cường kết nối collagen, đồng thời cải thiện màu sắc giữ ẩm cho da Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Các cơng trình nghiên cứu đậu xanh chủ yếu phương diện hình thái, suất, đánh giá đa dạng kiểu gen, kiểu hình đa hình protein … Một số nghiên cứu bước đầu đánh giá khả kháng côn trùng, kháng nấm, kháng virus, kháng mọt,… số giống đậu xanh Tuy nhiên, nghiên cứu hoạt tính, tác dụng Isoflavone đậu xanh gen isoflavone đậu xanh hạn chế Xuất phát từ yêu cầu thực tế khách quan đó, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: "So sánh trình tự gen tổng hợp Isoflavone phân lập từ đậu xanh" Mục tiêu nghiên cứu Xác định đặc điểm trình tự gen CHI phân lập từ hai mẫu giống đậu xanh Nội dung nghiên cứu - Tách DNA tổng số, tách mRNA tổng số, nhân gen, tách dịng gen xác định trình tự gen mẫu giống đậu xanh nghiên cứu - So sánh trình tự gen CHI trình tự amino acid suy diễn protein CHI từ mẫu đậu xanh nghiên cứu với mẫu ngân hàng gen Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cây đậu xanh 1.1.1 Nguồn gốc phân loại đậu xanh Cây đậu xanh [Vigna radiata (L.) Wilczeck] hay gọi đậu nhỏ, đậu chè, có NST 2n = 22, loại ăn hạt, thân thảo Cây đậu xanh đươ ̣c xế p ̣ thố ng phân loại khoa học sau: Giới: Plantae Ngành: Magnoliophyta Lớp: Magnoliopsida Bộ: Fabales Họ: Fabaceae Phân họ: Faboideae Chi: Vinga Loài: V.radiata Đậu xanh theo quan điểm lấy hạt bao gồm loài thuộc hai chi phụ Vigna Ceratotropic Chi phụ Ceratotropic cịn gọi nhóm đậu châu Á, bao gồm 16 lồi có lồi trồng trọt là: Đậu xanh (Vigna radiata (L).Wiliczek), đậu gạo (Vigna umbellata (thumb)), đậu ván (Vigna aconiti folia (Jacq)), đậu Adzukia (Vigna angularis (Wild), Vigna trilobata (L).Wildzek [3], [5] Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Theo Vavilov, đậu xanh có nguồn gốc từ Ấn Độ, phân bố rộng rãi nước Đông Nam Á, khu vực Đông Dương [5] 1.1.2 Đặc điểm hình thái đậu xanh Đậu xanh hàng năm, thuộc loại thân thảo, thân yếu có lớp lông mịn màu nâu sáng Thân gồm 7-8 đốt, phân cành muộn, chiều cao trung bình 40-70 cm, đường kính trung bình 8-12 mm Một đậu xanh hoàn chỉnh bao gồm rễ, thân, lá, hoa, hạt (Hình 1.1) a b c d e f Nguồn [43], [44] Hình 1.1 Cây đậu xanh (a):thân, lá, hoa đậu xanh; (b):cây đậu xanh giai đoạn bắt đầu non;(c):cây đậu xanh giai đoạn chắc; (d):cây đậu xanh vào thời kỳ chín;(e):quả đậu xanh lúc chín; (f):hạt đậu xanh Rễ Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Bộ rễ đậu xanh bao gồm rễ rễ phụ Rễ thường ăn sâu vào đất khoảng 20-30 cm, điều kiện thuận lợi ăn sâu tới 70-100 cm Rễ phụ thường có 30-40 cái, dài khoảng 20-25 cm, phân bổ chủ yếu tầng mặt, không sâu 25 cm [2] Trên rễ phụ có nhiều lơng hút biểu bì rễ biến đổi thành, có vai trị tăng cường sức hút nước chất dinh dưỡng cho Ở điểm tiếp giáp rễ rễ phụ chiều dài rễ phụ thường hình thành nhiều nốt sần Nốt sần nơi tụ tập vi khuẩn cố định đạm Rhizobium So với số loại đậu đỗ khác số lượng nốt sần đậu xanh hơn, nốt sần nhỏ Thường trung bình có khoảng 20-30 nốt sần, tập trung chủ yếu cổ rễ Kích thước nốt sần khơng giống nhau, đường kính dao động từ 4-5 mm Các nốt sần rễ bắt đầu hình thành có 2-3 thật đạt tối đa hoa rộ Trên loại rễ lớp rễ có nhiều nốt sần, lớp rễ mọc từ cổ rễ sau nốt sần Người ta nhận thấy nốt sần hình thành sau hoa (nốt sần thứ cấp) hoạt động mạnh loại nốt sần sinh nửa đầu thời kỳ sinh trưởng Trung bình vụ, đậu xanh bù lại cho đất tương ứng 85-107 kg nitơ làm cho đất tơi xốp [7], [9] Nếu rễ phát triển tốt xanh lâu, nhiều hoa, quả, hạt mẩy Ngược lại, rễ phát triển chóng tàn, đợt hoa sau khó đậu quả bị lép [3], [8] Thân, cành Thân đậu xanh thuộc loại thân thảo hình trụ, phân đốt, cao khoảng 40-70 cm mọc thẳng đứng, có nghiêng Thân đậu xanh nhỏ, trịn, có màu xanh màu tím tùy thuộc vào kiểu gen, có lớp lơng màu nâu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn sáng bao bọc Thân có dạng: đứng thẳng, đứng nghiêng, bò lan mặt đất Dạng bò lan thường gặp vùng đồi núi Ấn Độ Mianma Trên thân chia 7-8 đốt, hai đốt gọi lóng Độ dài lóng thay đổi tùy theo vị trí điều kiện khác Các lóng dài khoảng 8-10 cm, lóng ngắn 3-4 cm Từ đốt mọc cành, trung bình có 1-5 cành Các cành mọc từ nách thứ 2, phát triển mạnh gọi cành cấp I, cành lại có trung bình 2-3 mắt, từ mắt mọc chùm hoa Các đốt thứ 4, 5, thường mọc chùm hoa Thời kỳ trước có chét tốc độ tăng trưởng thân chậm, sau tăng nhanh dần đến hoa hoa rộ, đạt chiều cao tối đa lúc có Đường kính trung bình thân từ 8-12 mm tăng trưởng tỷ lệ thuận với tốc độ tăng trưởng chiều cao [3] Lá Lá đậu xanh thuộc loại kép, có ba chét, mọc cách Trên thân có 7-8 thật, chúng xuất sau xuất mầm đơn Lá thật hồn chỉnh gồm có: kèm, cuống phiến Cả hai mặt có lơng bao phủ Diện tích tăng dần từ lên, mọc thân lại giảm dần lên phía Chỉ số diện tích (m2 lá/m2 đất) có ảnh hưởng lớn đến hiệu suất quang hợp suất thu hoạch Số lượng lá, kích thước, hình dạng số diện tích thay đổi tuỳ thuộc vào giống, đất trồng thời vụ [2], [3] Hoa Hoa đậu xanh loại hoa lưỡng tính, tự thụ phấn, mọc thành chùm to, xếp xen kẽ cuống Các chùm hoa phát sinh từ mắt thứ ba thân, nhiều mắt thứ tư, cịn cành tất mắt Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn có khả hoa Thường sau mọc 18-20 ngày mầm hoa hình thành, sau 35-40 ngày nở hoa Trong chùm hoa, từ hoa nở đến hoa cuối kéo dài 10-15 ngày Mỗi chùm hoa dài từ 2-10 cm có từ 10-125 hoa Khi hình thành hoa có hình cánh bướm, màu xanh tím, nở cánh hoa có màu vàng nhạt [3] Hoa đậu xanh thường nở rải rác, hoa thân nở trước, hoa cành nở sau, chậm hơn, có cịn chậm chùm hoa cuối Trên cành, chùm hoa nở chênh lệch có đến 10-15 ngày Trong chùm hoa vậy, từ hoa nở đến hoa cuối chênh 10-15 ngày Hoa nở 24 tàn, sau nở hoa thụ tinh khoảng 20 ngày chín Số lượng hoa dao động lớn, từ 30 đến 280 hoa Công thức hoa là: K5C5A10G1[3] Thời gian nở hoa chia thành nhóm: - Nhóm hoa tập trung: Hoa nở kéo dài 16 ngày - Nhóm hoa khơng tập trung: Hoa nở liên tiếp 30 ngày - Nhóm hoa trung gian: Hoa nở từ 16 đến 30 ngày Quả hạt Quả đậu xanh thuộc loại giáp, có dạng hình trụ, dạng trịn dạng dẹt với đường kính 4-6 mm, dài 8-14 cm, dài khoảng 8-10 cm, có gân rõ dọc hai bên quả, đa số thẳng, có số cong, cịn non có màu xanh, chín vỏ có màu nâu vàng xám đen, đen gặp nắng rễ bị tách vỏ Một trung bình có khoảng 20-30 quả, có từ 5-10 hạt Trên vỏ bao phủ lớp lông mịn Mật độ lông phụ thuộc vào đặc điểm giống khả chống chịu Những giống đậu xanh chống chịu bệnh Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn khảm vàng virus sâu đục có mật độ lơng dày, vào thời kì chín hồn tồn lơng thường rụng tự tiêu biến [1], [2] Các lứa hoa đầu lại thường chín chậm lứa sau đó, to hạt mẩy Các đợt hoa sau thường ngắn, hạt, hạt không mẩy, màu hạt nhạt bé Các sinh từ chùm hoa thân nhiều to, dài chùm hoa cành Quả đậu xanh chín rải rác, có kéo dài đến 20 ngày [9] Hạt khơng nội nhũ, phôi cong, hai mầm dày, lớn chứa nhiều chất dinh dưỡng Hạt gồm vỏ hạt, rốn hạt mầm mầm non Mầm non nơi thu nhỏ mầm rễ, đơn, thân kép Hạt có hình trịn, hình trụ, hình van, hình thoi có nhiều màu sắc khác như: màu xanh mốc, xanh bóng, xanh nâu, vàng mốc, vàng bóng nằm ngăn cách vách xốp Ruột hạt màu vàng, xanh, xanh nhạt Hình dạng hạt kết hợp với màu sắc độ lớn hạt tiêu quan trọng để đánh giá chất lượng hạt Mỗi có từ 8-15 hạt Hạt thân thường to, mẩy hạt cành Hạt lứa đầu to mẩy lứa sau Số lượng hạt trung bình trong yếu tố chủ yếu tạo thành suất đậu xanh Trọng lượng hạt biến động lớn từ 20-90 gam tùy giống, thời vụ chế độ canh tác Trọng lượng 1000 hạt từ 50-70 gam[9] 1.1.3 Giá trị đậu xanh Cây đậu xanh loại trồng có giá trị kinh tế cao, đứng hàng thứ ba sau đậu tương lạc Về dinh dưỡng, hạt đậu xanh nguồn thực phẩm giàu đạm (khoảng 24-28%), ngồi ra, cịn có lipid khoảng 1,3%, glucid 60,2% chất khoáng Ca, Fe, Na, K, P… nhiều loại vitamin hoà tan nước vitamin B1, B2, C… Protein hạt đậu xanh chứa đầy Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn đủ amino acid không thay leucine, isoleucine, lysine, methyonine, valine…[3], [8] Protein đậu xanh chứa đầy đủ amino acid không thay tương đối phù hợp với tiêu chuẩn dinh dưỡng dành cho trẻ em tổ chức Nông lương y tế giới đưa theo bảng 1.1 Hàm lượng dinh dưỡng 100g bột đậu xanh khơng tách vỏ có 24,0g Protein; 1,3g dầu; 59,7g hydratcacbon; 3,5g khoáng; 124mg Ca; 326mg P; 7,3mg Fe; 94,0mg Caroten; 0,47mg B1; 0,39mg B2 334kcalo Bảng 1.1 Amino acid bột đậu xanh tiêu chuẩn FAO/WHO Amino acid Bột Đậu Xanh (% protein) Thực phẩm tiêu chuẩn FAO/WHO -2007 (% protein) Isoleicine 3,5 3,6 Leucine 5,9 7,3 Lycine 6,1 6,4 Methionin + Cystine 2,0 3,5 Phenyalanin + Tyrosine 6,7 7,3 Threonine 2,1 4,2 Tryptophan 1,8 1,0 Valin 4,1 5,0 (Nguồn: FAO năm 2007) Hạt đậu xanh không phù hợp với nhu cầu tiêu dùng nước mà mặt hàng xuất có giá trị làm ngun liệu cho cơng nghiệp chế biến tinh rút protein Hạt đậu xanh dùng để chế biến nhiều loại thực phẩm ngon, bổ, hấp dẫn loại bột dinh dưỡng, loại bánh, chè, xôi đỗ số đồ uống [8] Lá non đậu xanh Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 10 dùng để làm rau, muối dưa Thân xanh đậu xanh dùng làm thức ăn cho chăn ni, cịn thân già đem phơi khô, nghiền nhỏ làm bột dự trữ cho gia súc [3], [8] Ngồi ra, đậu xanh cịn có giá trị y học Hạt đậu xanh có vị ngọt, tính mát, khơng độc nên có tác dụng giải nhiệt, giải bách độc [4] Cây đậu xanh giá trị kinh tế cịn có giá trị vơ quan trọng khác mặt sinh học, khả cố định nitơ khí thành đạm cung cấp cho nhờ vi khuẩn Rhirobium virgana cộng sinh rễ Lượng đạm cố định phụ thuộc vào môi trường đất tương đương từ 30 - 60kg N/ha 1.2 Thành phần hoạt tính Isoflavone 1.2.1 Thành phần Isoflavone Isoflavone có nguồn gốc phytoestrogen thực vật thuộc nhóm hợp chất flavonoid Các hợp chất tìm thấy phân lớp đậu thuộc họ đậu Chúng hợp chất phenolic với cấu trúc tương tự cấu trúc estrogen người Isoflavone có nhiều loại đậu khác nhau, có đậu xanh Isoflavone tồn dạng tự aglucon dạng liên kết glucosid Isoflavone dạng tự gồm có loại genistein, daidzein glycitein; có hoạt tính sinh học cao nhiều so với Isoflavon cịn lại Genistein daidzein (hình 1.2) hai hợp chất isoflavone tự nhiên nghiên cứu lợi ích sức khỏe đáng kể mà đem lại, hai hợp chất chiếm phần lớn tổng số Isoflavone Theo Cục quản lý thực phẩm dược phẩm Hoa Kỳ (FDA) tổng hàm lượng daizdein genistein chiếm khoảng từ 93% đến 98% Isoflavone tổng số Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 11 Hình 1.2 Cấu trúc hóa học Genistein Daidzein [45] Genistein: Genistein thuộc nhóm isoflavones Genistein có tên đầy đủ 7Dihydroxy-3-(4-hydroxyphenyl) chromen-4-one hay 4',5,7-Trihydroxyisoflavone Genistein xác định có mặt nhiều loại đậu, rau ngũ cốc khác với hàm lượng khác Genistein chứng minh phytoestrogen có khả phát huy nhiều tác dụng ảnh hưởng khác có mặt thể Các tác động hợp chất thơng quan thụ quan hormon sinh dục nữ estrogen không quan thụ quan [24] Genistein có tác động tương tự estrogen (estrogen angonist): Kích thích phát triển trì đặc tính sinh dục (bao gồm đặc điểm sinh dục sơ cấp thứ cấp) Genistein có khả hạn chế lỗng xương phụ nữ mãn kinh, ảnh hưởng tốt đến tim mạch nồng độ cholesterol máu Hạn chế đáp ứng tế bào với estrogen nhờ khả "khóa" thụ quan hormon Một số Isoflavone (bao gồm genistein) có khả hạn chế q trình hình thành mạch máu (antiangiogenic), ức chế tế bào phát triển vơ giới Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ...ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC ĐỖ THỊ CẨM VÂN SO SÁNH TRÌNH TỰ GEN TỔNG HỢP ISOFLAVONE PHÂN LẬP TỪ ĐẬU XANH Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH. .. Kết so sánh trình tự gen CHI từ DNA genome từ cDNA 37 3.3.2 Kết so sánh trình tự gen CHI phân lập từ mẫu đậu xanh nghiên cứu với trình tự gen CHI công bố Ngân hàng gen 41 3.3.3 Phân tích trình. .. "So sánh trình tự gen tổng hợp Isoflavone phân lập từ đậu xanh" Mục tiêu nghiên cứu Xác định đặc điểm trình tự gen CHI phân lập từ hai mẫu giống đậu xanh Nội dung nghiên cứu - Tách DNA tổng số,