Đồ án tốt nghiệp khảo sát đột biến gen ret trên ca lâm sàng u sắc bào tuyến thượng thận mang tính gia đình

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT ĐỘT BIẾN GEN RET TRÊN CA LÂM SÀNG U SẮC BÀO TUYẾN THƯỢNG THẬN MANG TÍNH GIA ĐÌNH Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn: TS.BS Đỗ Đức Minh Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Mỹ Hiền MSSV: 1515100017 Lớp: 15HSH01 TP Hồ Chí Minh, 2017 LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan nội dung trình bày đồ án tốt nghiệp với đề tài “Khảo sát đột biến gen RET ca lâm sàng u sắc bào tuyến thượng thận mang tính gia đình” thành nghiên cứu sở số liệu thực tế thực hướng dẫn trực tiếp giáo viên hướng dẫn Mọi tham khảo đồ án trích dẫn rõ ràng nguồn gốc Mọi chép vi phạm quy chế nhà trường em xin chịu hồn tồn trách nhiệm Tp.Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng 07 năm 2017 Sinh viên Nguyễn Thị Mỹ Hiền LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn quý thầy cô Khoa Công nghệ Sinh học – Thực phẩm – Môi trường, Trường Đại học Công nghệ Tp.HCM tận tình giảng dạy truyền đạt kiến thức, lòng nhiệt huyết niềm đam mê nghiên cứu cho em suốt thời gian học tập trường Em xin gửi lời cảm ơn đến TS.BS Đỗ Đức Minh, người thầy, người anh tận tình hướng dẫn em thông tin lâm sàng, kiến thức sinh học phân tử suốt thời gian làm đồ án Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến anh chị Trung tâm Y sinh học phân tử - Đại học Y Dược Tp HCM quan tâm, tạo điều kiện thuận lợi để em hồn thành khóa luận Thời gian học hỏi làm việc môi trường thân thiện, ln nhận giúp đỡ góp ý nhiệt tình anh chị Trung tâm khoảng thời gian quý báu, mang lại cho em thêm nhiều kiến thức kinh nghiệm trình làm việc Và hết, xin gửi lời cảm ơn chân thành, sâu sắc tới gia đình Cảm ơn cha, mẹ sinh thành, nuôi dưỡng khôn lớn, bên cạnh động viên, ủng hộ, dõi theo bước đường Tp.Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng 07 năm 2017 Sinh viên Nguyễn Thị Mỹ Hiền Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 U sắc bào tuyến thượng thận 1.1.1 Giới thiệu 1.1.2 Nguyên nhân 1.1.3 Biểu 1.1.4 Xét nghiệm chẩn đoán 1.1.5 Điều trị 1.2 Bất thường di truyền 1.3 Các bệnh hội chứng liên quan 1.3.1 Hội chứng NF1 1.3.2 Hội chứng VHL 1.3.3 Hội chứng MEN 1.4 Cấu trúc, đột biến, chức gen RET 10 1.5 Các phương pháp giải trình tự 13 1.5.1 Phương pháp hóa học 13 1.5.2 Phương pháp enzyme 13 1.5.3 Giải trình tự máy tự động (automated sequencer) 14 1.5.4 Kỹ thuật giải trình tự hệ mới-454 Pyrosequencing 15 1.6 Cơ sở liệu phần mềm phân tích trình tự nucleotide 16 1.6.1 Cơ sở liệu 16 1.6.2 Phần mềm phân tích trình tự nucleotide 16 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG - VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP 2.1 Thiết kế nghiên cứu 17 2.2 Đối tượng nghiên cứu 17 i Đồ án tốt nghiệp 2.3 Vật liệu 19 2.3.1 Dụng cụ thiết bị 19 2.3.2 Hóa chất 20 2.4 Sơ đồ quy trình thực 23 2.5 Thuyết minh quy trình 24 2.5.1 Quy trình tách chiết DNA 24 2.5.1.1 Nguyên tắc: 24 2.5.1.2 Các bước thực hiện: 24 Quy trình PCR gen RET 25 2.5.2 2.5.2.1 Nguyên tắc: 25 2.5.2.2 Các bước thực hiện: 27 2.5.3 Điện di sản phẩm PCR 27 2.5.3.1 Nguyên tắc: 27 2.5.3.2 Các bước thực hiện: 29 2.5.4 Quy trình tinh sản phẩm PCR 30 2.5.4.1 Nguyên tắc: 30 2.5.4.2 Các bước thực hiện: 30 Quy trình cycle sequencing 31 2.5.5 2.5.5.1 Mục đích: 31 2.5.5.2 Các bước thực hiện: 31 Quy trình tủa sản phẩm cycle 32 2.5.6 2.5.6.1 Nguyên tắc: 32 2.5.6.2 Các bước thực hiện: 32 2.5.7 Giải trình tự máy ABI 3500 33 2.5.7.1 Nguyên tắc: 33 2.5.7.2 Đọc trình tự chuỗi DNA: 33 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ - BÀN LUẬN 3.1 Kết quả, bàn luận tách chiết 35 3.2 Kết quả, bàn luận PCR với cặp mồi đặc hiệu 35 ii Đồ án tốt nghiệp 3.3 Kết quả, bàn luận tinh sản phẩm PCR 37 3.4 Phản ứng cycle sequencing đọc kết giải trình tự 38 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận 44 4.2 Kiến nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Viết tắt Viết đầy đủ Aa Amino acid Bp Base pair CATE Catecholamines CT Computed tomography DNA Deoxyribonucleic acid dNTPs Deoxynucleotide triphosphate ddNTP Dideoxynucleotide triphosphate GDNF Glial cell line Derived Neurotrophic Factor GFLs Family Ligands MEN2 Đa u tuyến nội tiết loại MRI Chụp cộng hưởng từ (Magnetic resonance imaging) NCBI National Center For Biotechnology Information NF1 Neurofibromatosis loại PCCs Pheochromocytomas PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng khuếch đại chuỗi gen invitro) PGLs Paragangliomas PPGLs Pheochromocytomas Paragangliomas RNA Ribonucleic acid SNP Điểm đa hình nucleotide đơn (Single Nucleotide Polymorphisms) VHL Hội chứng Von Hippel-Lindau iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Trình tự mồi xi mồi ngược dùng cho phản ứng PCR 21 Bảng 2.2: Thành phần phản ứng PCR 27 Bảng 2.3: Các thông số điê ̣n di DNA bằ ng gel agarose 28 Bảng 2.4: Thành phần phản ứng cycle sequencing 32 Bảng 2.5: Thành phần hỗn hợp tủa DNA 33 Bảng 3.1: Kết đo nồng độ nucleic acid mẫu 35 Bảng 4.1: Kết giải trình tự phát SNP exon 11, 13 [1] 44 v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Mơ tả cách tiếp cận xét nghiệm gen theo hướng dẫn Hội Nội tiết .5 Hình 1.2: Bé trai tuổi có biểu điểm hạt cà phê tàn nhang Hình 1.3: Vị trí gen RET nhiễm sắc thể số 10 10 Hình 1.4: Cơ chế phân tử đột biến gen RET .12 Hình 1.5: Hình kí xạ tự ghi kết giải trình tự DNA gel polyacrylamide 14 Hình 1.6: Sơ đồ khối máy tự động giải trình tự dùng gel polyarylamide 15 Hình 2.1: Sơ đồ phả hệ gia đình bệnh nhân .18 Hình 2.2: Sơ đồ phản ứng chuỗi polymerase .26 Hình 2.3: Các chu kỳ PCR 26 Hình 2.4: Mơ tả q trình tinh sản phẩm PCR 30 Hình 3.1: Kết điện di kiểm tra sản phẩm exon 10, 11,13, 14 - 15,16 36 Hình 3.2: So sánh trình tự mẫu RET1 (exon 11) với trình tự chuẩn 39 Hình 3.3: So sánh trình tự mẫu RET1 (exon 13) với trình tự chuẩn 39 Hình 3.4: So sánh trình tự mẫu RET2 (exon 11) với trình tự chuẩn 40 Hình 3.5: So sánh trình tự mẫu RET2 (exon 13) với trình tự chuẩn 40 Hình 3.6: So sánh trình tự mẫu RET3 (exon 11) với trình tự chuẩn 41 Hình 3.7: So sánh trình tự mẫu RET3 (exon 13) với trình tự chuẩn 41 Hình 3.8: So sánh trình tự mẫu RET4 (exon 11) với trình tự chuẩn 42 Hình 3.9: So sánh trình tự mẫu RET4 (exon 13) với trình tự chuẩn 42 Hình 3.10: So sánh trình tự mẫu RET5 (exon 11) với trình tự chuẩn .43 Hình 3.11: So sánh trình tự mẫu RET5 (exon 13) với trình tự chuẩn .43 vi Đồ án tốt nghiệp MỞ ĐẦU U sắc bào tuyến thượng thận (PPGLs) bệnh nội tiết Việt Nam Tìm hiểu bệnh giúp có biện pháp phòng ngừa, giảm nguy mắc bệnh kịp thời thăm khám gặp triệu chứng bất thường Paragangliomas (PGLs) khối u có nguồn gốc từ mào thần kinh nằm hạch thần kinh giao cảm phó giao cảm khắp thể, khối u nằm tủy thượng thận gọi pheochromocytomas (PCCs), với triệu chứng lâm sàng đánh trống ngực, nhức đầu nhiều mồ hôi, kèm theo tăng huyết áp, tiết chất catecholamines (CATE) [9] Theo dõi lâm sàng điều cần thiết để chẩn đoán điều trị PPGLs, hầu hết khối u tiết CATE khơng điều trị tỷ lệ tử vong tim mạch di sang mô, quan lân cận cao Việc xác định bất thường di truyền quan trọng 1/3 bệnh nhân bị PPGLs có đột biến dịng mầm gây bệnh số 14 gen gây bệnh gồm: NF1, RET, VHL, SDHD, SDHC, SDHB, EGLN1/PHD2, KIF1B, SDH5/SDHAF2, IDH1, TMEM127, SDHA, MAX HIF2A [5,9,11] Theo hướng dẫn thực hành Hội Nội tiết lâm sàng, bệnh nhân PPGLs cần thăm khám kiểm tra di truyền cho người thân để sàng lọc di truyền gây bệnh Xuất phát từ thực tiễn nhóm tiến hành đề tài “Khảo sát đột biến gen RET ca lâm sàng u sắc bào tuyến thượng thận mang tính gia đình” cách sử dụng phương pháp mơ tả hàng loạt ca, với mục tiêu cụ thể: - Giải trình tự exon gen RET (exon 10,11,13,14,15,16) - Phân tích kết giải trình tự gen dựa liệu ngân hàng gen National Center For Biotechnology Information (NCBI) Đồ án tốt nghiệp gồm có chương: Chương 1: Tổng quan tài liệu Chương 2: Đối tượng – Vật liệu – Phương pháp Chương 3: Kết – Bàn luận Chương 4: Kết luận – Kiến nghị Đồ án tốt nghiệp CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Đồ án tốt nghiệp 1.1 U sắc bào tuyến thượng thận 1.1.1 Giới thiệu Paragangliomas (PGLs) khối u có nguồn gốc từ mào thần kinh nằm hạch thần kinh giao cảm phó giao cảm khắp thể, khối u nằm tủy thượng thận gọi pheochromocytomas (PCCs) thường tiết chất catecholamines (CATE): epinephrine, norepinephrine, dopamine Khoảng 80-85% khối u PCCs 15-20% PGLs [9] Tủy thượng thận nằm trung tâm tuyến thượng thận bao gồm tế bào thần kinh nội tiết (chromaffin) sản xuất giải phóng epinephrine (adrenaline) vào máu để đáp ứng với kích hoạt hệ thống thần kinh giao cảm Neuroblastoma (u nguyên bào thần kinh) pheochromocytomas (PCCs) hai loại u quan trọng phát sinh từ tủy thượng thận Cả hai loại u phát sinh từ vị trí ngồi tuyến thượng thận, cụ thể vùng cận hạch chuỗi giao cảm [17] U sắc bào tuyến thượng thận bao gồm u lành tính ác tính thượng thận Một số ý đến sản xuất thừa hormones nội tiết Ung thư thượng thận diện khối u ác tính tuyến thượng thận, bao gồm u nguyên bào thần kinh, ung thư biểu mô vỏ thượng thận (adrenocortical carcinoma) số u tế bào ưa crôm thượng thận (PGLs) [1] Hầu hết u tế bào ưa crôm tất u tuyến thượng thận khối u lành tính, khơng di xâm lấn mô lân cận, gây vấn đề sức khỏe đáng kể cân hormones Sự phổ biến PPGLs bệnh nhân tăng huyết áp phòng khám ngoại trú nói chung dao động từ 0,2 - 0,6% Ở trẻ em bị tăng huyết áp, phổ biến PPGLs khoảng 1,7% Gần 5% bệnh nhân PCCs có khối u thượng thận tình cờ phát hình ảnh giải phẫu Nghiên cứu khám nghiệm tử thi cho thấy khối u khơng chẩn đốn 0,05 - 0,1% bệnh nhân [9] PCCs sản xuất, tích trữ tiết CATE Hầu hết PCCs tiết epinephrine norepinephrine tiết không liên quan đến kích thích thần kinh Ngồi ra, PCCs cịn tiết hormones khác adrenocorticotropic hormone, somatostatin, Đồ án tốt nghiệp calcitonin, oxytocin vasopressin Nhiều cơng trình nghiên cứu PPGLs đúc kết quy luật số 10 bệnh lý này, là: 10% xảy trẻ em, 10% ác tính, 10% ngồi thượng thận 10% khơng chức [11] PCCs có lứa tuổi, độc lập liên kết với hội chứng ung thư di truyền, chẳng hạn đa u thần kinh nội tiết (Multiple endocrine neoplasmaMEN) loại 2A 2B, u xơ thần kinh (neurofibromatosis) loại (NF1), hội chứng Von Hippel-Lindau (VHL) Chỉ có 10% PCCs thượng thận ác tính, phần cịn lại lành tính [21] Chẩn đoán xác định đo nồng độ chất chuyển hóa CATE nước tiểu Hầu hết PCCs điều trị ban đầu với thuốc kháng adrenergic, phẫu thuật sử dụng để loại bỏ khối u bệnh nhân ổn định 1.1.2 Nguyên nhân U sắc bào tuyến thượng thận xuất đơn lẻ (các khối u đặc, bên u vùng thượng thận) có tính chất gia đình (điển hình tủy thượng thận thường nhiều ổ bên), hai nghiên cứu lớn, tần suất u tủy thượng thận có tính chất gia đình chiếm khoảng 30% thường nằm bệnh cảnh hội chứng di truyền trội nhiễm sắc thể thường Những bất thường di truyền phối hợp với u tủy thượng thận nguyên nhân đột biến gen sinh ung thư RET gen ức chế u VHL NF1 Khuyến cáo sàng lọc di truyền cho bệnh nhân chẩn đoán u tủy thượng thận trước 20 tuổi, u thượng thận bên, đa u cận hạch, hay cho bệnh nhân có tiền sử gia đình có người mắc u tủy thượng thận hay u cận hạch [22] Vì PCCs xuất phát từ vùng tủy thượng thận, khối u giải phóng khơng liên tục lượng CATE có tác dụng sinh học gây triệu chứng co mạch với tăng huyết áp tâm thu, tâm trương tăng nhịp tim Trong tế bào ưa crôm, norepinephrine epinephrine chuyển hóa enzyme O-methyl transferase thành dẫn xuất O-methyl tương ứng normetanephrine metanephrine Vì chuyển hóa CATE khối u độc lập với tình trạng giải phóng CATE (CATE giải phóng lúc với tỷ lệ thấp), định lượng chất chuyển hóa CATE huyết tương nước tiểu có độ nhạy cao Đồ án tốt nghiệp đóng vai trị chẩn đốn u tủy thượng thận [22] Ngồi ra, môi trường ô nhiễm, chế độ ăn uống không khoa học, hút thuốc lá, sử dụng rượu bia thời gian dài,… làm tăng nguy ung thư tuyến thượng thận 1.1.3 Biểu - Triệu chứng lâm sàng thường có: đánh trống ngực, nhức đầu, nhiều mồ hôi, kèm theo tăng huyết áp (lúc triệu chứng có độ nhạy 91%, độ đặc hiệu 94%) - Tiết nhiều CATE dẫn đến suy tim, phù phổi, loạn nhịp xuất huyết nội sọ Tuy nhiên triệu chứng trội tăng huyết áp Tăng tiết CATE làm cho bệnh nhân loạn nhịp tim Các kịch phát thường kéo dài bị thúc đẩy phẫu thuật, thay đổi tư thế, tập thể dục, mang thai [22] 1.1.4 Xét nghiệm chẩn đoán Theo hướng dẫn thực hành Hội Nội tiết lâm sàng khuyến cáo: - Xét nghiệm sinh hóa ban đầu: đo huyết tương metanephrines tự metanephrines phân đoạn niệu, lấy mẫu máu bệnh nhân theo hướng dẫn tài liệu tham khảo, sử dụng phương pháp sắc ký lỏng: phổ khối lượng phát điện hóa Đề nghị bệnh nhân có kết xét nghiệm dương tính cần theo dõi mức độ tăng giá trị biểu lâm sàng [9] - Hình ảnh học: chụp cắt lớp vi tính (CT), chụp MRI bệnh nhân có di căn, sử dụng 123 I-metaiodobenzylguanidine (MIBG) ghi xạ hình, sử dụng 18 Ffluorodeoxyglucose (18 FFDG) chụp cắt lớp phát xạ [9] - Kiểm tra di truyền: thử nghiệm di truyền phịng thí nghiệm uy tín với bệnh nhân nghi ngờ đột biến dòng mầm tư vấn sau có kết [9] 1.1.5 Điều trị - Cắt bỏ hoàn toàn khối u - Điều chỉnh chế độ ăn uống có nhiều natri chất lỏng để điều hòa việc tiết CATE gây co huyết khối để ngăn chặn hạ huyết áp nghiêm trọng sau loại bỏ khối u Đồ án tốt nghiệp 1.2 Bất thường di truyền Cứ ca PPGLs có ca nguyên nhân di truyền chủ yếu đột biến dòng mầm số 14 gen gồm: NF1, RET, VHL, SDHD, SDHC, SDHB, EGLN1/PHD2, KIF1B, SDH5/SDHAF2, IDH1, TMEM127, SDHA, MAX HIF2A [9] Hình 1.1: Mơ tả cách tiếp cận xét nghiệm gen theo hướng dẫn Hội Nội tiết Có thể nghi ngờ bệnh khác gia đình có biểu lâm sàng: bệnh NF1, MEN2, VHL, ung thư biểu mô tế bào thận với đột biến SDHB [13], khối u car-ney (u tuyến thượng thận, khối u hạch dày, chondroma phổi) hội chứng CarneyStratakis (u tuyến tụy sarcomas dày) [14] Các hội chứng MEN2 VHL thường đặc trưng dấu hiệu lâm sàng riêng biệt hướng tới việc kiểm tra gen RET VHL Phát đột biến gen NF1 phức tạp xét nghiệm có sẵn phịng xét nghiệm trực tuyến, việc chẩn đốn xác định hội chứng chủ yếu dựa vào triệu chứng lâm sàng [12] Tuy nhiên, số bệnh nhân có đột biến gen NF1 số báo cáo PPGLs có đặc điểm tương đồng [4, 6] Những phát cho thấy tầm quan trọng việc Đồ án tốt nghiệp điều tra dấu hiệu lâm sàng xảy đột biến tất bệnh nhân PPGL Với bệnh gia đình (di truyền) việc phát nguyên nhân gây bệnh giúp tư vấn di truyền chẩn đoán, điều trị sớm thành viên khác gia đình *Theo tờ báo Hiệp hội Mỹ việc quản lý bệnh Ung thư tuyến giáp dạng tuỷ [16] Nhóm bệnh MEN2A có đến 95% bệnh nhân đột biến gen RET codon 609, 611, 618 620 vị trí exon 10 codon 630, 634 exon 11 Hầu tất bệnh nhân có biểu u tuyến giáp dạng tuỷ số bệnh nhân mắc bệnh PCCs u tuyến cận giáp, thường phụ thuộc vào đột biến đặc trưng RET Ví dụ đột biến RET codon 634 khiến nguy mắc PCCs cao tăng theo độ tuổi · 30 tuổi – 25% · 50 tuổi – 52% · 77 tuổi – 82% Song, bệnh nhân mắc bệnh PCCs lại chiểm tỷ lệ thấp bị đột biến exon 10 Tỷ lệ sau: · Codon 609 – → 26% · Codon 611 – 10 → 25% · Codon 618 – 12 → 23% · Codon 620 – 13 → 24% Nhóm bệnh MEN2B Khoảng 75% trường hợp MEN2B riêng lẻ bệnh nhân bị ảnh hưởng đột biến gen RET, 25% trường hợp xảy có liên quan đến di truyền gia đình Với bệnh nhân đột biến gen RET, có đến 95% bệnh nhân bị đột biến exon 16 (codon M918T) 5% exon 15 (codon A883F) Tỷ lệ bệnh nhân mắc bệnh MEN2B phổ biến độ tuổi 20 30 Tại Bệnh viện Chợ Rẫy (2005 – 2010), theo khảo sát 74 bệnh nhân đặc điểm Đồ án tốt nghiệp lâm sàng cận lâm sàng trường hợp u sắc bào tuỷ thượng thận, nhận thấy độ tuổi mắc bệnh trung bình từ 40 – 49 tuổi (chiếm 39,2%) Đặc điểm thường gặp khối u thống kê sau: · U có tuyến: 4,1% · U tuyến phải: 70,3% · U tuyến trái: 25,6% Kích thước trung bình khối u: 5,86 ± 4,14 cm · Kích thước thường gặp: → cm (37,3%) · U bên trái: 7,79 → 5,11 cm · U bên phải: thường nhỏ u bên trái có kích thước khoảng 5,38 ± 3,65 cm · U bên: ± 0,82 cm nhỏ so với trường hợp có u (6,02 ± 4,19 cm) Một cơng trình khảo sát yếu tố di truyền liên quan PCCs cho thấy: - Khảo sát 2499 đối tượng khoảng thời gian 10 năm (2001 – 2010), có 1620 trường hợp riêng lẻ 879 trường hợp liên quan đến di truyền gia đình [5] - Trong 363 trường hợp riêng lẻ (22,4%) có 269 đột biến hệ gen SDHx (137 – SHDB, 100 – SDHD, 30 – SHDC, – SHDA), 64 đột biến xảy gen VHL, 23 – RET – TMEM127 [5] - Xét theo tỷ lệ 363/1620 trường hợp đột biến riêng lẻ (22,4%; 23,5% bệnh nhận bị hội chứng NF1) Các gen SDHB, SDHD gen VHL gen đột biến xảy phần lớn bệnh nhân, mà đột biến SDHB chiếm 37,7%; 27,5% SDHD; 17,6% VHL; 8,26% SDHC; 6,3% RET; 1,93% TMEM127 0,55% SDHA Không phát đột biến gen SDHAF2 [5] - 137 bệnh nhân đột biến gen SDHB (119 đột biến điểm, bao gồm: đột biến thay thế, nhân đôi, cắt chèn điểm nhỏ 18 trường hợp đột biến vùng) [5] - Ở gen VHL có 64 bệnh nhân (63 trường hợp đột biến điểm đột biến vùng) - Bệnh nhân mang gen đột biến SDHD có 100 người (95 trường hợp đột biến điểm trường hợp đột biến vùng) - Đột biến SDHC có 30 bệnh nhân (25 trường hợp đột biến điểm trường hợp Đồ án tốt nghiệp đột biến vùng) [5] - Theo tỷ lệ đột biến gen riêng lẻ · Đột biến gen SDHB – 8,46% · Đột biến gen SDHD – 6,2% · Đột biến gen VHL – 3,95% · Đột biến gen SDHC – 1,85% · Đột biến gen RET – 1,42% · Đột biến gen TMEM127 – 0,43% · Đột biến gen SDHA – 0,12% 1.3 Các bệnh hội chứng liên quan 1.3.1 Hội chứng NF1 NF1 rối loạn di truyền đa chức đặc trưng phát da, đặc biệt điểm hạt cà phê tàn nhang, loạn sản xương phát triển hệ thống khối u thần kinh lành tính ác tính, đáng ý mơ thần kinh lành tính [17] Hình 1.2: Bé trai tuổi có biểu điểm hạt cà phê tàn nhang 1.3.2 Hội chứng VHL Hội chứng VHL có liên quan đến PCCs PCCs thường không gây ung thư, chúng khơng gây triệu chứng, số trường hợp, chúng có liên quan đến nhức đầu, hoảng loạn, đổ mồ hôi nhiều huyết áp cao nguy Đồ án tốt nghiệp hiểm khơng đáp ứng với thuốc PCCs đặc biệt nguy hiểm chúng phát triển thai kỳ [18] Hội chứng MEN 1.3.3 Đa u tuyến nội tiết nhóm rối loạn ảnh hưởng đến mạng lưới sản sinh hormones thể gọi hệ thống nội tiết Hormones chất hố học phóng thích vào máu, điều chỉnh chức tế bào mô khắp thể Đa u tuyến nội tiết thường liên quan đến khối u hai tuyến nội tiết, khối u phát triển quan mô khác Những tăng trưởng khơng ung thư (lành tính) ung thư (ác tính) Nếu khối u trở thành ung thư, tình trạng đe dọa tính mạng [19] Các đột biến gen MEN1 gây nhiều loại đa u tuyến nội tiết loại Gen mã hóa cho việc sản xuất protein gọi menin Menin hoạt động chất ức chế khối u, có nghĩa giữ cho tế bào khơng tăng trưởng phân chia nhanh phân chia không kiểm sốt Mặc dù chức menin khơng rõ ràng, tham gia vào chức khác tế bào chép sửa chữa DNA điều chỉnh hoạt động gen khác Khi đột biến làm vơ hiệu hóa hai gen MEN1, menin khơng cịn khả dụng để kiểm soát tăng trưởng phân chia tế bào, mát protein làm cho tế bào phân chia nhiều, dẫn đến hình thành khối u đặc trưng đa u tuyến nội tiết loại [19, 23] Dấu hiệu phổ biến đa u tuyến nội tiết loại dạng ung thư tuyến giáp gọi ung thư tuyến giáp dạng tủy Một số người bị rối loạn đồng mắc PCCs dẫn đến cao huyết áp Đa u tuyến nội tiết loại chia thành ba phân típ: loại 2A, loại 2B ung thư tuyến giáp dạng tủy mang tính gia đình (FMTC) Những phân nhóm khác dấu hiệu, triệu chứng đặc trưng nguy khối u cụ thể Ví dụ, cường giáp xảy loại 2A ung thư tuyến giáp đặc điểm FMTC Các dấu hiệu triệu chứng đa u tuyến nội tiết loại tương đối phù hợp gia đình [19, 23] Các đột biến gen RET gây đa u tuyến nội tiết loại Gen mã hóa cho Đồ án tốt nghiệp việc sản xuất protein liên quan đến tín hiệu tế bào Protein RET kích hoạt phản ứng hóa học hướng dẫn tế bào phản ứng với môi trường chúng, ví dụ cách phân chia sinh trưởng Các đột biến gen RET kích hoạt chức báo hiệu protein, kích hoạt tăng trưởng phân chia tế bào khơng có tín hiệu từ bên tế bào Sự phân chia tế bào khơng kiểm sốt dẫn đến hình thành khối u tuyến nội tiết mô khác [19, 23] 1.4 Cấu trúc, đột biến, chức gen RET Gen RET tìm thấy sau gây nhiễm dòng tế bào nguyên bào sợi 3T3 với DNA lấy từ tế bào lymphoma người Gen RET nằm nhiễm sắc thể số 10, nhánh dài, vùng 1, băng 1, băng phụ (10q11.2) gồm 20 exon [10, 20] Hình 1.3: Vị trí gen RET nhiễm sắc thể số 10 Sự nối ghép tự nhiên gen RET tạo dạng đồng phân khác protein RET: RET51, RET43 RET9 chứa 51, 43 Aa đuôi C cuối chúng [10] RET protein xuyên màng Mỗi protein chia thành ba miền: miền ngoại bào N với bốn lần lặp lặp lại giống cadherin (là protein thành phần, phần bên tế bào gắn với khung xương tế bào phần bên ngồi tế bào polypeptide có đồng phân gắn kết với nhau) vùng giàu Cystein, miền màng xốp kẽm miền tyrosine kinase nội bào, chia chèn thêm 27 Aa Trong miền tyrosine kinase nội bào, có 16 Tyrosines (Tyrs) RET9 18 RET51 Tyr1090 Tyr1096 có dạng đồng vị RET51 [10, 15] Miền ngoại bào RET chứa chín vị trí N-glycosyl hóa Protein RET 10 ...LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan nội dung trình bày đồ án tốt nghiệp với đề tài ? ?Khảo sát đột biến gen RET ca lâm sàng u sắc bào tuyến thượng thận mang tính gia đình? ?? thành nghiên c? ?u sở số li? ?u thực... [17] U sắc bào tuyến thượng thận bao gồm u lành tính ác tính thượng thận Một số ý đến sản xuất thừa hormones nội tiết Ung thư thượng thận diện khối u ác tính tuyến thượng thận, bao gồm u nguyên bào. .. tra di truyền cho người thân để sàng lọc di truyền gây bệnh Xuất phát từ thực tiễn nhóm tiến hành đề tài ? ?Khảo sát đột biến gen RET ca lâm sàng u sắc bào tuyến thượng thận mang tính gia đình? ?? cách