Đồ án tốt nghiệp a LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan đây là công trình nghiên cứu của tôi Các nội dung nghiên cứu và kết quả trong đề tài này là trung thực và chưa được ai công bố trong bất kỳ chương trình nà[.]
Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các nội dung nghiên cứu kết đề tài trung thực chưa công bố chương trình trước Tơi xin hồn toàn chịu trách nhiệm lời cam đoan Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng Sinh viên thực Lê Trần Quang Huy a năm 2015 Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Lời nói em xin chân thành cảm ơn tới Ban Lãnh Đạo, toàn thể quý Thầy Cô khoa Công Nghệ Sinh Học - Thực Phẩm - Môi Trường, trường Đại Học Công Nghệ TPHCM, người trực tiếp giảng dạy, truyền đạt kiến thức bổ ích cho em, tảng bản, hành trang vô quý giá, bước cho em bước vào nghiệp sau tương lai Đặc biệt, em xin chân thành cảm ơn cô TS Nguyễn Thị Hai người hướng dẫn trực tiếp, giúp đỡ, động viên tận tình quan tâm em q trình hồn thành đồ án tốt nghiệp Bên cạnh em xin gửi lời cảm ơn đến thầy Thành, người tạo điều kiện tốt máy móc, trang thiết bị, hóa chất cho em suốt q trình làm việc phịng thí nghiệm Cảm ơn đến bạn người tận tình giúp đỡ, chia kiến thức vơ bổ ích cho tơi để tơi hồn thành đồ án cách tốt Vì chưa có nhiều kinh nghiệm, dựa vào kiến thức hạn hẹp với thời gian ngắn ngủi nên chắn khơng tránh khỏi sai sót Kính mong nhận góp ý q Thầy, Cơ để kiến thức em ngày hoàn thiện rút kinh nghiệm bổ ích cho trình học tập làm việc sau Và lời nói cuối xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Ba Mẹ, anh chị người thân gia đình ln sát cánh, động viên tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập hành trang tương lai Kính chúc q Thầy, Cơ người vui vẻ, hạnh phúc, dồi sức khỏe thành công công việc Em xin chân thành cảm ơn! Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng Sinh viên thực Lê Trần Quang Huy b năm 2015 Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH DANH MỤC CÁC BẢNG VÀ BIỂU ĐỒ LỜI MỞ ĐẦU a Tính cấp thiết đề tài .1 Mục đích nghiên cứu .2 Nội dung nghiên cứu .2 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu tuyến trùng thực vật .3 1.1.1 Lịch sử nghiên cứu tuyến trùng thực vật 1.1.2 Khái quát tuyến trùng thực vật 1.1.3 Phân loại tuyến trùng thực vật .5 1.1.4 Hình thái, cấu tạo hình thức sinh sản tuyến trùng thực vật 1.1.4.1 Về hình thái 1.1.4.2 Về cấu tạo 1.1.4.3 Hình thức sinh sản .9 1.2 Tuyến trùng sần rễ Meloidogyne spp 1.2.1 Phân loại 1.2.2 Đặc điểm hình thái 10 1.2.3 Đặc điểm sinh học .11 1.2.4 Vòng đời tuyến trùng sần rễ Meloidogyne spp 11 1.2.5 Tình hình gây hại tuyến trùng Meloidogyne spp số loại trồng .12 i Đồ án tốt nghiệp 1.2.5.1 Tuyến trùng Meloidogyne spp gây hại lúa 12 1.2.5.2 Tuyến trùng Meloidogyne spp gây hại cà rốt .13 1.2.5.3 Tuyến trùng Meloidogyne spp gây hại tiêu 13 1.2.5.4 Tuyến trùng Meloidogyne spp gây hại cà chua 13 1.3 Một số biện pháp phòng trừ tuyến trùng thực vật 14 1.3.1 Chọn giống 14 1.3.2 Ngăn ngừa .14 1.3.3 Luân canh .14 1.3.4 Biện pháp canh tác .15 1.3.5 Biện pháp hóa học 15 1.3.6 Biện pháp vật lý 15 1.3.7 Biện pháp sinh học 16 1.4 Giới thiệu nấm kí sinh Paecilomyces sp 16 1.4.1 Vị trí phân loại phân bố nấm Paecilomyces sp 16 1.4.2 Đặc điểm hình thái, sinh học nấm Paecilomyces sp 17 1.4.3 Độc tố nấm Paecilomyces sp 18 1.4.4 Một số yếu tố ảnh hưởng đến phát triển nấm Paecilomyces sp 19 1.4.4.1 Ảnh hưởng yếu tố dinh dưỡng 19 1.4.4.2 Ảnh hưởng nhiệt độ, độ ẩm ánh sáng 19 1.4.4.3 Ảnh hưởng pH môi trường 20 1.4.4.4 Ảnh hưởng độ thống khí 20 1.4.5 Cơ chế tác động chủng nấm Paecilomyces sp lên tuyến trùng 20 ii Đồ án tốt nghiệp 1.4.6 Một số sản phẩm trị tuyến trùng nấm Paecilomyces sp vào thực tiễn đời sống .21 CHƢƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 24 2.2 Vật liệu nghiên cứu, thiết bị hóa chất 24 2.2.1 Vật liệu nghiên cứu .24 2.2.2 Thiết bị 24 2.2.3 Hóa chất 25 2.3 Các môi trƣờng đƣợc sử dụng để xác định hoạt tính, ni cấy 25 2.3.1 Môi trường PDA (Potato D - Glucose Agar) 25 2.3.2 Môi trường thử nghiệm hoạt tính chitinase, protase sử dụng chitin casein làm chất (Nguyễn Thị Hồng Thương, 2000 - 2001) 25 2.3.3 Môi trường Sauboraud + Khoáng chất 26 2.3.4 Môi trường cảm ứng sử dụng để nuôi cấy sinh tổng hợp enzyme chitinase: 26 2.3.5 Môi trường Czapeck - Dox 26 2.3.6 Môi trường Malt agar (Nguyễn Đức Lượng, 2006) .27 2.3.7 Môi trường WA khảo sát khả kí sinh tuyến trùng đĩa petri 27 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 27 2.4.1 Phương pháp làm phịng ẩm ni cấy để quan sát J.T.Dunean 27 2.4.2 Khảo sát khả sinh trưởng nấm Paecilomyces sp môi trường PDA 28 2.4.3 Phương pháp xác định khả sinh enzyme ngoại bào nấm Paecilomyces sp 28 iii Đồ án tốt nghiệp 2.4.3.1 Xác định khả tổng hợp enzyme chitinase cách đo đường kính vịng phân giải 28 2.4.3.2 Xác định khả tổng hợp enzyme protease cách đo đường kính vịng phân giải 29 2.4.4 Phương pháp nuôi cấy Paecilomyces sp môi trường cảm ứng sinh enzyme chitinase 29 2.4.5 Xác định hoạt độ enzyme chitinase phương pháp DNS .29 2.4.6 Khảo sát ảnh hưởng số yếu tố môi trường đến phát triển nấm Paecilomyces sp 32 2.4.6.1 Khảo sát ảnh hưởng pH đến phát triển nấm Paecilomyces sp 32 2.4.6.2 Khảo sát phát triển nấm Paecilomyces sp môi trường khác 33 2.4.7 Ảnh hưởng số loại thuốc trừ bệnh trồng đến phát triển nấm Paecilomyces sp 34 2.4.8 Phương pháp tách tuyến trùng từ rễ tiêu (dẫn theo Lê Thị Mai Châm, 2014) 35 2.4.9 Đánh giá khả kí sinh trứng tuyến trùng Meloidogyne spp đĩa petri 35 2.4.10 Phương pháp xử lý số liệu 35 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 36 3.1 Đặc điểm hình thái, sinh học chủng Paecilomyces sp phân lập 36 3.2 Tốc độ tăng trưởng nấm Paecilomyces sp qua ngày nuôi cấy .37 3.3 Khả sinh enzyme chitinase chủng nấm Paecilomycess sp môi trường thạch 38 3.4 Hoạt tính chitinase mơi trường cảm ứng nấm Paecilomyces sp 39 iv Đồ án tốt nghiệp 3.5 Khả sinh enzyme protease chủng nấm Paecilomycess sp môi trường thạch 40 3.6 Khảo sát ảnh hưởng yếu tố pH đến phát triển nấm Paecilomyces sp 42 3.7 Khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến phát triển nấm Paecilomyces sp 44 3.8 Ảnh hưởng số loại thuốc trừ bệnh trồng nấm Paecilomyces sp 47 3.9 Khả kí sinh trứng tuyến trùng Meloidogyne sp chủng nấm Paecilomyces sp chọn 49 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 4.1 Kết luận 52 4.2 Kiến nghị 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 v Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT PDA: Potato D – Glucose Agar TCA: Trichloacetic Acid WA: Water Agar vi Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Một số hình dạng tuyến trùng thực vật Hình 1.2 Cấu tạo tuyến trùng thực vật Hình 1.3 Con trứng tuyến trùng Meloidogyne spp 10 Hình 1.4 Vịng đời tuyến trùng sần rễ 12 Hình 1.5 Đặc điểm đại thể vi thể nấm Paecilomyces sp 18 Hình 1.6 Sản phẩm Bio- Nematon có khả phịng trừ tuyến trùng 21 Hình 1.7 Chế phẩm TKS – NEMA trị tuyến trùng 22 Hình 1.8 Chế phẩm sinh học BIO PEST phòng trừ tuyến trùng 22 Hình 1.9 Chế phẩm sinh học Palila 500 WP 23 Hình 2.1 Tuyến trùng sần rễ Meloidogyne spp kính hiển vi soi 40X 24 Hình 2.2 Phản ứng hóa học thuốc thử DNS 30 Hình 2.3 Xác định hoạt tính enzyme chitinase chủng nấm Paecilomyces sp 32 Hình 3.1 Đặc điểm hình thái nấm Paecilomyces sp phân lập 36 Hình 3.2 Đường kính khuẩn lạc nấm Paecilomyces sp qua ngày nuôi cấy 37 Hình 3.3 Đường kính vịng phân giải chitin chủng nấm Paecilomyces sp sau 1, 2, 3, ngày nuôi cấy 39 Hình 3.4 Đường kính vịng phân giải casein chủng nấm Paecilomyces sp sau 1, 2, 3, ngày nuôi cấy 41 Hình 3.5 Nấm Paecilomyces sp phát triển pH 5, 6, 7, sau 14 ngày 43 Hình 3.6 Nấm Paecilomyces sp phát triển môi trường khác sau 14 ngày 46 Hình 3.7 Nấm Paecilomyces sp bị ức chế xử lý loại thuốc sau 15 ngày 48 Hình 3.8 Con Meloidogyne spp bị nấm Paecilomyces sp ký sinh qua ngày chụp kính hiển vi soi 50 Hình 3.9 Túi trứng Meloidogyne spp bị nấm Paecilomyces sp ký sinh qua ngày chụp kính hiển vi soi 51 vii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG VÀ BIỂU ĐỒ Bảng 2.1 Dựng đường chuẩn N-acetyl-D-glucosamine 30 Bảng 3.1 Đường kính tản nấm Paecilomyces sp môi trường PDA qua ngày sau cấy 37 Bảng 3.2 Đường kính vịng phân giải chitin chủng nấm Paecilomyces sp 38 Bảng 3.3 Kết xác định hoạt tính chitinase môi trường cảm ứng nấm Paecilomyces sp 40 Bảng 3.4 Đường kính vịng phân giải casein chủng nấm Paecilomyces sp 40 Bảng 3.5 Kết ảnh hưởng pH đến phát triển nấm Paecilomyces sp qua ngày 42 Bảng 3.6 Kết khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến phát triển nám Paecilomyces sp qua ngày 44 Bảng 3.7 Kết ảnh hưởng loại thuốc đến phát triển nấm Paecilomyces sp qua 10 NSC, 15 NSC 47 Bảng 3.8 Hiệu lực kí sinh trứng Meloidogyne spp nấm Paecilomyces sp 49 Biểu đồ 3.1 Ảnh hưởng pH môi trường đến phát triển nấm Paecilomyces sp qua ngày 42 Biểu đồ 3.2 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến phát triển nấm Paecilomyces sp qua ngày 44 viii Đồ án tốt nghiệp LỜI MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Tuyến trùng thực vật nhóm sinh vật gây hại nguy hiểm cho loại trồng Hàng năm chúng làm giảm 10 – 20% suất trồng giới Powell (1984) cho biết: tính riêng tuyến trùng sần rễ gây hại thuốc năm 1982 vùng Bắc Carolina làm giảm 0,77% sản lượng, gây thiệt hại ngàn 932 USD Ở Việt Nam mức độ gây hại tuyến trùng ảnh hưởng lớn đến suất trồng Các loại bệnh tuyến trùng gây lây lan môi trường đất gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến sản lượng chất lượng ảnh hưởng đến giá trị sản phẩm Chúng gây hại cho nhiều loại trồng cà rốt, khoai tây, bầu bí, chanh, hành, cà chua, tiêu, cà phê…, loại cảnh, dược liệu Tuyến trùng gây hại phận khác thực vật thân, rễ chúng có kích thước hiển vi, khả di chuyển cao Tuyến trùng có phổ kí chủ rộng biết đến Meloidogyne, chúng gây tổn thất kinh tế lớn cho trồng vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Bên cạnh đó, việc lạm dụng thuốc trừ sâu hay thuốc hóa học diệt tuyến trùng ngày nhiều làm tăng tính kháng thuốc, mà cịn tiêu diệt hệ thiên địch, gây dịch hại mới, ảnh hưởng đến sức khỏe người Từ thực tế đó, biện pháp quản lý dịch hại theo hướng sinh học ngày phát triển Trong năm gần đây, loạt cơng trình nghiên cứu ngồi nước sản xuất ứng dụng chế phẩm sinh học từ nguồn nấm ký sinh côn trùng Các chế phẩm sinh học từ nguồn nấm ký sinh có vai trò quan trọng việc phòng chống sâu hại trồng, đồng thời bảo vệ môi trường sức khỏe người (Noris CS., 2002) Trên giới sản xuất sử dụng thành công nhiều loại chế phẩm sinh học có nguồn gốc từ nấm Paecilomyces sp để phòng trừ tuyến trùng gây hại mang lại hiệu cao (Burges H.D.,1998; Butt T.M and Copping L.,2000) Tuy nhiên, Việt Nam, nghiên cứu ứng dụng lồi cịn hạn chế Đồ án tốt nghiệp Xuất phát từ thực tế trên, sinh viên định thực đề tài : “Đánh giá khả kí sinh tuyến trùng Meloidogyne spp gây hại trồng chủng nấm Paecilomyces sp.” Mục đích nghiên cứu Chọn chủng nấm Paecilomyces sp có khả phịng trừ tuyến trùng gây hại trồng Nội dung nghiên cứu Khảo sát khả sinh trưởng nấm Paecilomyces sp Khảo sát khả sinh enzyme ngoại bào chủng nấm Paecilomyces sp thu nhận Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng nấm Paecilomyces sp điều kiện in vitro Đánh giá khả gây chết tuyến trùng Meloidogyne spp nấm Paecilomyces sp Đồ án tốt nghiệp CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu tuyến trùng thực vật 1.1.1 Lịch sử nghiên cứu tuyến trùng thực vật Tuyến trùng thực vật tìm thấy từ kỷ 18 Lần Needham (1743) phát tuyến trùng thực vật bơng lúa mì, quan sát hạt lúa mì bị dị tật, teo lại ông phát hàng loạt động vật dạng sợi di chuyển xoắn vặn nước, mà ông cho chúng động vật nước chúng gọi giun lươn giống lươn giấm quan sát khoảng 90 năm trước Đến năm 1945, công bố ông giúp người biết đến tuyến trùng loài động vật đa dạng hành tinh Từ năm 1960 Mỹ nhiều nước khác giới, tuyến trùng học nói chung tuyến trùng thực vật nói riêng trở thành môn khoa học nghiên cứu quy luật sinh thái học, phát triển tuyến trùng, loài tuyến trùng ký sinh thực vật Sự đa đạng chủng loài, số lượng cá thể đặc điểm mơi trường sống góp phần phong phú thêm cho ngành tuyến trùng học giới Ở Việt Nam cơng trình nghiên cứu tuyến trùng thực vật nhà khoa học người Hungary – Tiến Sỹ Andrassy công bố năm 1970 30 loài tuyến trùng ký sinh thực vật tuyến trùng sống tự đất quanh rễ trồng thuộc hai Tylenchida Dorylaimida Mặc dù nghiên cứu tuyến trùng năm 1970 trở lại khẳng định vai trò to lớn tuyến trùng phương diện tuyến trùng gây hại (tuyến trùng thực vật) có lợi (tuyến trùng ký sinh gây bệnh côn trùng, tuyến trùng sống tự đất, nước) nông nghiệp sinh thái môi trường nước ta 1.1.2 Khái quát tuyến trùng thực vật Tuyến trùng thực vật nhóm động vật khơng xương sống có đặc điểm sinh thái thích nghi với đời sống ký sinh thực vật Nhóm tuyến trùng có số đặc trưng quan trọng so với nhóm ký sinh động vật nhóm sinh thái khác như: có kích thước hiển vi, phần miệng có cấu tạo kim hút chuyển hóa để châm chích mơ thực vật hút chất dinh dưỡng, tạo vết thương bề mặt bên thân, rễ Đồ án tốt nghiệp thực vật, kích thước trứng lớn so với kích thước thể, đời sống chúng có quan hệ bắt buộc trực tiếp với thực vật phát triển Trải qua q trình tiến hóa tuyến trùng thích nghi có mặt hầu hết phận thực vật như: rễ, thân, lá, hoa, quả, rễ nơi gặp nhiều nhóm tuyến trùng ký sinh Tuyến trùng ký sinh thực vật có tập quán dinh dưỡng khác nhau, số loài dinh dưỡng mơ ngồi thực vật, số khác xâm nhập vào mô sâu hơn, số khác làm cho chủ tạo nguồn dinh dưỡng đặc biệt nơi chúng ký sinh Khi bị tuyến trùng gây hại, ngừng sinh trưởng, khả quang hợp bị biến đổi bị phá hủy, vàng, hoa đậu Đặc biệt, quan sát rễ thấy có nốt sần xuất trình di chuyển, châm chích hút dinh dưỡng thể thực vật Ngoài tác hại trực tiếp trên, tuyến trùng tạo điều kiện, liên kết, tương hỗ với tác nhân gây bệnh khác nấm, vi khuẩn virus, gây nên bệnh khác cho thực vật Người ta thấy bị tuyến trùng xâm nhiễm dễ dàng bị héo Fusarium so với không bị tuyến trùng xâm nhiễm (Roberts cộng sự, 1985; Porter Powell, 1967) Ảnh hưởng tuyến trùng bướu rễ lên mức độ bệnh thối rễ tác nhân gây bệnh Phytophthora parasitica (Powell Nusbaum, 1960), Pythium spp., Fusarium spp., Rhizoctonia solani (Brodie Cooper, 1964) Thielaviopsis basicola (Fichter cộng sự, 2005) thấy có diện tuyến trùng M incognita làm gia tăng mức độ mẫn cảm trồng với tất nấm gây bệnh Quá trình gây bệnh bên rễ tuyến trùng trải qua giai đoạn: Giai đoạn 1: Khi tuyến trùng bắt đầu xâm nhập vào rễ tạo nốt sần, rễ màu sáng, chức rễ chưa bị ảnh hưởng nhiều Giai đoạn 2: Rễ chuyển sang màu nâu, chức dinh dưỡng vận chuyển nước rễ bị ảnh hưởng, xảy trình hoại sinh, tạo điều kiện cho nấm, vi khuẩn xâm nhập gây thêm bệnh khác cho Giai đoạn 3: Rễ chuyển thành màu đen, chức rễ bị phá hủy hoàn toàn Đồ án tốt nghiệp Bệnh sần rễ không biểu vàng lá, còi cọc mà xanh tốt bệnh phát triển giai đoạn đầu, chức rễ chưa bị hủy hoại (Nguyễn Ngọc Châu 14 ctv., 1990) Tuyến trùng thực vật có mặt khắp nơi tầng đất canh tác loại hoa màu, vườn ươm đồng ruộng Mật độ tuyến trùng cao độ sau từ – 15 cm, nhiệt độ thích hợp cho tuyến trùng phát triển 25 – 280C, ẩm độ khoảng 60%, điều kiện khô hạn ngập nước lâu dài tuyến trùng phát triển Ngồi yếu tố địa hình, tác nhân sinh học hay hoạt động người ảnh hưởng đến cấu trúc quần xã tuyến trùng 1.1.3 Phân loại tuyến trùng thực vật Theo động vật chí Việt Nam, dựa vào đặc điểm hình thái, tập quán sinh sống, đặc tính sinh vật học, mối quan hệ nhóm tuyến trùng thực vật trồng mà chúng chia làm khác nhau: Bộ Tylenchida: gồm hầu hết lồi tuyến trùng đại diện cho nhóm ký sinh phần khác thực vật, nhóm tuyến trùng đơng đảo có tầm quan trọng ngành sản xuất nông nghiệp Bộ Aphelenchida: gồm khoảng 500 loài, loài tuyến trùng ký sinh phần mặt đất lá, hoa, hạt Bộ Dorylaimida: gồm loài thuộc họ Longidoridae nhóm tuyến trùng ngoại ký sinh thực vật, số lồi có khả mang truyền virus Bộ Triplonchida: gồm loài họ Trichodoridae Diphterophoridae nhóm ngoại thực vật, nhiều lồi có khả mang truyền virus Về hình thức ký sinh thực vật, tuyến trùng chia làm nhóm: + Ngoại ký sinh: sử dụng kim chích để lấy dinh dưỡng cịn thể nằm ngồi mơ thực vật, khơng xâm nhập vào bên + Bán nội ký sinh: phần trước thể tuyến trùng xâm nhập vào rễ, phần sau thể tuyến trùng ngồi rễ, phình to Đồ án tốt nghiệp + Nội ký sinh: xác định 17 loài ký sinh gây bệnh tổn thương rễ (Nguyễn Ngọc Châu Nguyễn Vũ Thanh, 2000), toàn tuyến trùng xâm nhập vào rễ Nhóm chia nhóm nhỏ: Nội ký sinh di động: tuyến trùng di chuyển từ mô đến mô khác bên để châm chích, hút dinh dưỡng, tạo thành khối u sưng, điển hình giống Meloidogyne spp Nội ký sinh cố định: khơng có khả di chuyển, chúng dinh dưỡng nơi cố định bên mô rễ trở nên phình to (con cái) 1.1.4 Hình thái, cấu tạo hình thức sinh sản tuyến trùng thực vật 1.1.4.1 Về hình thái Tuyến trùng thực vật có kích thước thân nhỏ, dạng giun, dài 0,2 – 2,5 mm, nhỏ loài Greeffiella minutum, thể dài 82 µm, đa số nhỏ mm Hình dáng chúng đa dạng có liên quan chặt chẽ với đặc tính sinh sống Ví dụ lồi Tylenchulus (hình lê), Helicotylenchus (dạng giun/xoắn), Pratylenchus (dạng giun), Heterodera (hình chanh), Hirschmanniella (hình giun/dài), Meloidogyne (hình cầu/bầu) Các lồi tuyến trùng sống có hình sợi nằm gian bào tế bào thực vật Loại phá hủy mô tế bào có dạng hình trụ, hình thoi sống rễ đất Đồ án tốt nghiệp Tylenchulus (hình lê) Meloidogyne (hình cầu/bầu) (Nguồn: plpnemweb.ucdavis.edu) Pratylenchus (hình giun) Heterodera (hình chanh) (Nguồn: nematode.unl.edu) (Nguồn:pest.ceris.purdue.edu) Hình 1.1 Một số hình dạng tuyến trùng thực vật 1.1.4.2 Về cấu tạo Theo Eoshenko Nguyễn Vũ Thanh (1981) thể tuyến trùng chia làm phần: Phần đầu: cịn gọi vùng mơi, gồm đầu có miệng chích hút, xung quanh quan xúc giác Hai đầu nhọn hình trịn dẹt Phần giữa: từ eo thắt phần đầu đến lỗ hậu môn đến huyệt sinh dục đực Phần đuôi: hậu mơn Hình dáng đặc điểm quan trọng để phân loại tuyến trùng Có nhiều dạng khác nhau: hình kim nhọn, hình thoi thon dài, có mấu gai khơng Đồ án tốt nghiệp Bao bọc toàn thể tuyến trùng lớp vỏ cutin tương đối bền vững co giãn, vỏ cutin có lỗ hệ tiêu hóa, sinh dục, tiết, số lỗ khác quan tiết thụ cảm khác Hệ thống thần kinh trung ương liên quan chặt chẽ với vách thân Hệ thần kinh tuyến trùng gồm bó thần kinh chạy dọc da vòng dây thần kinh nối liền với Bộ máy tiêu hóa tuyến trùng thực vật gồm ống ruột, miệng kết thúc hậu mơn nằm phía bụng Hệ sinh sản đực khác nhau: Con cái: gồm có buồng trứng, ống dẫn trứng, tử cung, lỗ giao phối thân Con đực: gồm tinh hoàn nhất, ống dẫn tinh gai giao phối ruột Ở số loài, đực có vây giúp cho q trình giao phối Hình 1.2 Cấu tạo tuyến trùng thực vật (Nguồn: thesoilhuggersjourney.wordpress.com) Đồ án tốt nghiệp 1.1.4.3 Hình thức sinh sản Tuyến trùng phần lớn sinh sản hữu tính chủ yếu Tỷ lệ đực phụ thuộc vào nhiều yếu tố Điều kiện ngoại cảnh ảnh hưởng đến trình sinh sản phát triển qua giai đoạn từ tuyến trùng non lên tuyến trùng trưởng thành để phân giới đực (loài Meloidogyne spp.; Globodera rostochiensis; Heterodera avenae) Tuyến trùng đẻ trứng chủ yếu, trứng hình thành thể mẹ phát triển tế bào trứng Một trứng thụ tinh trứng có nhân với nhiễm sắc thể, sau thực trình phân chia nhân tế bào.Trứng sau thụ tinh, số phát triển vỏ trứng (loài Meloidogyne spp.), số khác nằm thể mẹ (loài Heterodera spp.), vỏ thể mẹ chuyển thành nang tuyến trùng non phát triển đó, sau chui ngồi tuổi điều kiện ngoại cảnh phù hợp Tuyến trùng sần rễ Meloidogyne spp 1.2 1.2.1 Phân loại Giới: Animalia Ngành: Nematoda Lớp: Secernentea Bộ: Tylenchida Họ: Heteroderidae Giống: Meloidogyne Tuyến trùng sần rễ Meloidogyne Berkeley phát vào năm 1855 dưa chuột Anh, đại diện cho nhóm tuyến trùng ký sinh thực vật quan trọng nhất, chúng gây hại 3.000 loài thực vật toàn giới, bao gồm hầu hết trồng quan trọng rau màu, đậu đỗ, ngũ cốc, hòa thảo, bụi ăn quả, thảo mộc nhiều loài cảnh thân gỗ (Malcolm Charles, 2000) Tuyến trùng gây giảm sản lượng thu hoạch chất lượng sản phẩm trồng Cho đến thống kê khoảng gần 80 loài ký sinh thuộc giống này, Đồ án tốt nghiệp có loài ký sinh gây hại quan trọng là: M incognita, M arenaria, M javanica M hapla Đây loài phân bố rộng gây hại lớn vùng nơng nghiệp giới Ngồi ra, số loài khác gây hại quan trọng chúng gây hại – trồng phân bố hẹp 1.2.2 Đặc điểm hình thái Theo phân loại Goldi (1887, có chỉnh sửa vào năm 2000), Meloidogyne spp có đặc điểm sau: Đối với trưởng thành có hình trịn tới dạng lê, màu trắng, vận động Khơng có giai đoạn u nang Có kim chích nhỏ mảnh, thường dài từ 12 – 15 µm Lỗ tiết nằm trước tới khoang khối tròn, thường sau kim chích Sáu tuyến trực tràng lớn tiết chất đặc sệt để bảo quản trứng, đẻ trứng Con đực trưởng thành có hình giống giun, dài đến mm, xoắn trịn, phát triển qua lần biến thái rễ Có kinh chích nhỏ mảnh, dài 18 – 25 µm Tuyến hầu chủ yếu nằm phần bụng đến ruột Gai nhỏ mảnh, thường dài 25 – 33 µm, ống dẫn dài từ – 11 µm Có tinh hồn Ấu trùng: trứng tuyến trùng sần rễ đẻ bọc gelatin (còn gọi bọc trứng) nằm bề mặt sần rễ Ấu trùng cảm nhiễm tuổi (J2) có dạng cân đối hình giun, dài khoảng 0,4 – 0,5 mm Kim chích vùng đầu kitin hóa yếu, hình chóp Hình 1.3 Con trứng tuyến trùng Meloidogyne spp (Nguồn: clfs.umd.edu) 10 ... Tuyến trùng Meloidogyne spp gây hại lúa 12 1.2.5.2 Tuyến trùng Meloidogyne spp gây hại cà rốt .13 1.2.5.3 Tuyến trùng Meloidogyne spp gây hại tiêu 13 1.2.5.4 Tuyến trùng Meloidogyne spp gây. .. Đồ án tốt nghiệp Xuất phát từ thực tế trên, sinh viên định thực đề tài : ? ?Đánh giá khả kí sinh tuyến trùng Meloidogyne spp gây hại trồng chủng nấm Paecilomyces sp. ” Mục đích nghiên cứu Chọn chủng. .. chủng nấm Paecilomyces sp có khả phịng trừ tuyến trùng gây hại trồng Nội dung nghiên cứu Khảo sát khả sinh trưởng nấm Paecilomyces sp Khảo sát khả sinh enzyme ngoại bào chủng nấm Paecilomyces sp