ẢNH HƢỞNG CỦA BỨC XẠ GAMMA COBALT 60 LÊN SINH TRƢỞNG VÀ HÀM LƢỢNG PHENOLIC TỔNG SỐ CỦA RỄ TƠ BỒ ĐỀ FICUS RELIGIOSA L IN VITRO HÀ THỊ NGỌC TRINH1, ĐOÀN PHẠM NGỌC NGÀ1, CAO THỊ BẰNG GIANG1 Trung tâm Hạt nhân Thành phố Hồ Chí Minh_217 Nguyễn Trãi, Quận 1, Thành phố Hồ Chí Minh ngoctrinhhathi@gmail.com, dpngocnga@gmail.com, caothibanggiang@gmail.com Tóm tắt: Nghiên cứu thực nhằm cảm ứng tạo rễ tơ bồ đề Ficus religiosa L đồng thời khảo sát ảnh hưởng chiếu xạ gamma liều thấp lên đặc tính sinh trưởng hàm lượng phenolic rễ tơ F religiosa L Các mẫu lá, cuống đoạn thân in vitro bồ đề ngâm dịch vi khuẩn A rhizogenes TR7, đồng nuôi cấy môi trường MS (bổ sung sucrose %, agar g / L, pH 5,8) tối, 25 °C Rễ tơ xuất sau - tuần chuyển sang môi trường MS lỏng bổ sung sucrose % môi trường tốt cho tăng sinh rễ tơ Sau tuần, sợi rễ khỏe mạnh xử lý chiếu xạ liều thấp nguồn 60Co từ 0-40 Gray (Gy) Kết nghiên cứu cho thấy ba loại vật liệu gây nhiễm với A rhizogenes TR7 (lá, cuống đoạn thân in vitro) mơ vật liệu thích hợp có tần số cảm ứng đạt 66,67 ± 7,64 % với thời gian gây nhiễm 30 phút, đồng nuôi cấy ngày Sự diện gene rolB, rolC vắng mặt gene virD kiểm tra bằng phương pháp PCR khẳng định rễ tơ chuyển gene thành công Dưới ảnh hưởng xạ gamma 60Co, tỉ lệ sống, khối lượng tươi số tăng trưởng rễ tơ giảm Tuy nhiên khối lượng khô liều chiếu 30 Gy lại tăng (22,25 ± 1,38 %) so với đối chứng (15,04 ± 0,71 %) Liều chiếu xạ 20 Gy cho hàm lượng phenolic cao đạt 36,72 mg GAE/g DW, tăng 1,44 lần so với đối chứng Từ khóa: Bồ đề, Ficus religiosa L., Agrobacterium rhizogenes TR7, rễ tơ, xạ gamma MỞ ĐẦU Ficus religiosa L (họ Moraceae), thường gọi bồ đề có nguồn gốc từ Ấn Độ, nơi có tầm quan trọng lớn mặt y học từ thời xa xưa Đây có 50 ứng dụng y học đa dạng, tạo phận vỏ cây, chồi non, khô, quả, hạt mủ [1] Loài thực vật báo cáo có phổ rộng hoạt tính chống ung thư, chống oxy hóa, chống đái tháo đường, kháng khuẩn, chống giun, chống loét, chống suy nhược chống thoái hóa thần kinh Ni cấy rễ tơ, cịn gọi nuôi cấy rễ biến đổi, loại nuôi cấy mô thực vật sử dụng để nghiên cứu trình trao đổi chất thực vật để sản xuất chất chuyển hóa thứ cấp có giá trị Nuôi cấy rễ tơ phát triển cho 100 loài thực vật Tuy nhiên, nhiều loại quan trọng mặt y học kinh tế, việc nuôi cấy rễ tơ chưa phát triển; Ficus religiosa L số Tại Việt Nam, nghiên cứu khiêm tốn kể đến nghiên cứu thành phần hóa học đề cập đến tác giả Cầm Thị Ính 2009 [2], [3]; Hồng Thanh Hương 2009 [4] Trên giới đặc biệt Ấn Độ có nhiều cơng trình nghiên cứu, thiết lập điều kiện nuôi cấy in vitro phù hợp tạo callus nhằm nhân giống thu nhận hợp chất từ [5], [6] Về mặt ứng dụng nuôi cấy rễ tơ bồ đề, có năm 2014, Siwach đồng tác giả sở hữu sáng chế cảm ứng tạo rễ tơ bồ đề thu nhận dịch chiết có hoạt tính ức chế acetylcholinesterase cao sử dụng điều trị Alzheimer [7] Điều chứng tỏ giá trị kinh tế khả ứng dụng nuôi cấy rễ tơ đối tượng Việt Nam, nơi có phân bố rộng rãi loài này, việc thiết lập quy trình nhân ni rễ tơ đặc thù riêng cho bồ đề nhằm khai thác nguồn dược liệu địa phương điều cần thiết Bức xạ nói chung tia gamma nói riêng nhân tố kích thích phi sinh học coi phương pháp nhanh mới, có khả làm thay đổi đặc tính sinh trưởng khả tổng hợp hợp chất thực vật [8] Với cường độ thích hợp, xạ gamma gia tăng tốc độ sinh trưởng tổng hợp hợp chất thứ cấp thực vật [9] Hơn nữa, sử dụng tia gamma tạo đột biến gen liên quan đến biểu enzyme chống oxy hóa với tác dụng giảm stress oxy hóa, hệ thực vật [10] Nghiên cứu thực nhằm cảm ứng tạo rễ tơ bồ đề (Ficus religiosa L.) nhờ vi khuẩn Agrobacterium rhizogenes TR7; bước đầu khảo sát ảnh hưởng xạ gamma Cobalt-60 đến khả sinh trưởng tổng hợp hợp chất phenolic rễ tơ bồ đề cho nghiên cứu sâu ứng dụng sản xuất hợp chất có hoạt tính sinh học từ loài dược liệu NỘI DUNG 2.1 Đối tƣợng Phƣơng pháp - Đối tƣợng + Chồi đỉnh chồi nách thuộc non nhánh bồ đề khỏe mạnh 5560 năm tuổi sinh trưởng khuôn viên chùa Lâm Tế (Thành phố Hồ Chí Minh) sử dụng làm nguồn vật liệu tạo in vitro + Chủng A rhizogenes TR7 sử dụng chuyển gene cung cấp Phịng Cơng nghệ gene, Viện Sinh học Nhiệt đới - Phƣơng pháp 2.1.1 Chuyển gene thực vật Hình Quy trình chuyển gene thực vật Vi khuẩn nuôi cấy môi trường NB lỏng đạt OD600nm 0,8-0,85 sử dụng để gây nhiễm Lá, cuống đoạn thân từ các bồ đề in vitro 2,5 tháng tuổi sử dụng làm vật liệu gây nhiễm Các mẫu cắt tạo vết thương, ngâm dịch huyền phù A rhizogenes 10, 20, 30 40 phút Sau đó, thấm khơ mẫu giấy thấm vơ trùng để loại bỏ nước vi khuẩn cịn sót bề mặt; đồng nuôi cấy chúng môi trường MS (bổ sung % sucrose, agar g / L, pH 5,8) tối, 25 °C 2, 3, 4, ngày Sau thời gian đồng nuôi cấy, mẫu chuyển vào đĩa môi trường MS bổ sung 400 mg / L cefotaxime % sucrose Rễ tơ xuất sau - tuần vị trí bị thương mẫu cắt thành đoạn dài cm nuôi cấy, trì mơi trường MS bổ sung % sucrose 2.1.2 Tách chiết DNA khuếch đại PCR DNA gene bồ đề tách chiết từ rễ tơ giải định rễ bình thường (chứng âm) sử dụng kit ISOLATE II Plant Plasmid từ A rhizogenes TR7 sử dụng làm chứng dương tách chiết kit QIAGEN Sự chuyển gene xác nhận diện gene rolA, rolC vắng mặt gene virD với trình tự mồi đặc hiệu thiết kế Cơng ty TNHH MTV Sinh Hóa Phù Sa (Bảng 1) Bảng Mồi sử dụng phân tích PCR Primer Trình tự mồi (5’3’) Kích thƣớc khuếch đại dự kiến (bp) RolB RolBF RolBR GCTCTTGCAGTGCTAGATTT GAAGGTGCAAGCTACCTCTC 780 RolC RolCF RolCR CTCCTGACATCAAACTCGTC TGCTTCGAGTTATGGGTACA 540 VirD RolBF RolBR ATGTCGCAAGGACGTAAGCCC GGAGTCTTTCAGCATGGAGCA 450 Gene 2.1.3 Chiếu xạ mẫu Các sợi rễ phân nhánh cấp có kích thước khoảng 6-7 cm trình tăng trưởng xử lý chiếu xạ gamma Cobalt-60 liều chiếu tăng dần 0, 10, 20, 30 40 Gy Viện Nghiên cứu Hạt nhân Đà Lạt Mẫu sau xử lý chiếu xạ tiếp tục nuôi cấy môi trường MS bổ sung 30 g/L sucrose để ghi nhận tăng trưởng 2.1.4 Xử lý số liệu Các số liệu ghi nhận từ thí nghiệm xử lý sơ phần mềm Microsoft Office Excel 2013, xử lý thống kê phần mềm Statistical Program Scientific System (SPSS) phiên 20.0 dành cho Window Sự sai biệt có ý nghĩa độ tin cậy 95% giá trị biểu mẫu tự (a,b,c,d) kèm theo sau độ lệch chuẩn (standard deviation _SD) Kết trình bày dạng: trung bình ± độ lệch chuẩn (Mean ± SD) 2.2 Kết 2.2.1 Ảnh hưởng vật liệu gây nhiễm đến hiệu cảm ứng rễ tơ Nhằm xác định phận thích hợp sử dụng cho gây nhiễm với A rhizogenes TR7 tạo rễ tơ, phận: lá, cuống đoạn thân mang chồi bên bồ đề in vitro ngâm dịch vi khuẩn OD600nm đạt 0,8 – 0,85 20 phút, thời gian đồng nuôi cấy ngày Kết thể qua Bảng Hình Chuyển gene Bảng Ảnh hưởng vật liệu gây nhiễm đến cảm ứng tạo rễ tơ Vật liệu Số rễ trung bình (rễ/mẫu) Lá 2.27 ± 0.05 Cuống - Đoạn thân 1.70 ± 0.11 a Tỉ lệ mẫu tạo rễ (%) 32.00 ± 4.0 a b 16.00 ± 2.0 Thời gian xuất rễ tơ (ngày) 26.0 ± 2.0 a b 21.00 ± 2.0 b A B C Hình Cảm ứng rễ tơ từ (A), đoạn thân (B) cuống (C) 2.2.2 Ảnh hưởng thời gian gây nhiễm đến hiệu cảm ứng rễ tơ Để xác định thời gian gây nhiễm thích hợp cho cảm ứng tạo rễ tơ, bồ đề in vitro tạo vết cắt nhang qua gân nhằm tăng khả tiếp xúc với vi khuẩn, sau được ngâm dịch vi khuẩn OD600nm đạt 0,8 – 0,85 thời gian từ 10 đến 40 phút; thời gian đồng nuôi cấy ngày Kết thể Bảng Bảng Ảnh hưởng thời gian gây nhiễm đến khả tạo rễ tơ bồ đề in vitro Thời gian gây Số rễ trung bình Thời gian xuất Tỉ lệ mẫu tạo rễ (%) nhiễm (phút) (rễ/mẫu) rễ tơ (ngày) a c a 10 2,10 ± 0,21 15,33 ± 1,15 25,53 ± 1,53 2,02 ± 0,09 30 2,20 ± 0,16 40 2,21 ± 0,45 a 20 a a 36,67 ± 5,03 44,00 ± 6,00 b a 21,33 ± 4,16 c 27,33 ± 2,52 26,67 ± 2,08 28,00 ± 1,73 a a a 2.2.3 Ảnh hưởng thời gian đồng nuôi cấy đến hiệu cảm ứng rễ tơ Nhằm xác định thời gian đồng ni cấy thích hợp cho cảm ứng tạo rễ tơ bồ đề vi khuẩn A rhizogenes TR7, mẫu tạo vết cắt ngâm dịch vi khuẩn với thời gian 30 phút sau đồng nuôi cấy môi trường MS từ đến ngày Kết thể Bảng Bảng Ảnh hưởng thời gian đồng nuôi cấy đến khả tạo rễ tơ bồ đề in vitro Thời gian đồng Số rễ trung bình Thời gian xuất Tỉ lệ mẫu tạo rễ (%) nuôi cấy (ngày) (rễ/mẫu) rễ tơ (ngày) 2,08 ± 0,31 2,22 ± 0,26 1,92 ± 0,49 1,97 ± 0,44 1,94 ± 0,34 a a a a a 40,83 ± 3,82 51,67 ± 8,04 59,17 ± 8,04 bc ab 66,67 ± 7,64 52,50 ± 9,01 c a abc 30,33 ± 4,16 29,67 ± 3,06 26,67 ± 8,02 28,33 ± 4,16 29,33 ± 2.52 a a a a a 2.2.4 Kiểm tra chuyển gene kỹ thuật PCR Bên cạnh đặc điểm hình thái, xác nhận trạng thái biến đổi rễ tơ thực phân tích phân tử Trong nghiên cứu này, plasmid DNA A Rhizogenes TR7, rễ tơ rễ bình thường phân tích PCR Kết thể Hình Hình Xác nhận chuyển gene PCR A PCR khuếch đại gene rolB (780bp) Lane 1, 2: mẫu rễ tơ; Lane 3: A rhizogenes plasmid DNA (chứng dương); Lane 4: rễ không chuyển gene (chứng âm) B PCR khuếch đại gene rolC (540 bp) Lane 1: rễ không chuyển gene (chứng âm); Lane 2: A rhizogenes plasmid DNA (chứng dương); Lane 3, 4: Mẫu rễ tơ C PCR khuếch đại gene virD (450 bp) Lane 1: rễ không chuyển gene (chứng âm); Lane 2: A rhizogenes plasmid DNA (chứng dương); Lane 3, 4: mẫu rễ tơ 2.2.5 Ảnh hưởng xạ gamma Cobalt-60 lên sinh trưởng phát triển tích lũy hợp chất phenolic rễ tơ bồ đề Nhằm đánh giá ảnh hưởng xạ gamma Cobalt-60 lên sinh trưởng phát triển tổng hợp phenolic rễ tơ bồ đề, rễ tơ xử lý chiếu xạ dãy liều từ (đối chứng) đến 40 Gy sau theo dõi tiêu sinh trưởng, đặc điểm hình thái hàm lượng phenolic tổng Bảng Ảnh hưởng liều chiếu xạ đến số số tăng trưởng rễ tơ Tỉ lệ sống (%) Khối lƣợng tƣơi (g) Chỉ số tăng trƣởng Khối lƣợng khô (%) 100,00 ± 0,0a 0,362 ± 0,051a 18,25 ± 1,39a 15,04 ± 0,71b 10 86,67 ± 13,33b 0,284 ± 0,030b 12,66 ± 1,19b 14,05 ± 2,59b 20 55,56 ± 10,18c 0,184 ± 0,041c 7,59 ± 1,18c 14,13 ± 2,03b 30 31,11 ± 10,18d 0,161 ± 0,041c 7,96 ± 2,51c 22,25 ± 1,38a 40 0,00 ± 0,0e - - - Phenolic tổng (mg GAE/g DW) Liều (Gy) 40 35 30 25 20 15 10 25,54 32,35 36,72 23,21 10 20 30 Liều xạ (Gy) Hình Tác động liều chiếu xạ gamma lên hàm lượng phenolic tổng số 2.3 Bàn luận 2.3.1 Ảnh hưởng vật liệu, thời gian gây nhiễm thời gian đồng nuôi cấy đến hiệu cảm ứng rễ tơ Kết khảo sát phận thích hợp cảm ứng tạo rễ tơ cho thấy bồ đề, quan thích hợp cho việc cảm ứng tạo rễ tơ thông qua xâm nhiễm A rhizogenes TR7, đoạn thân mang chồi bên với tỷ lệ tạo rễ tơ tương ứng 32,00 ± 4,0 % 16,00 ± 2,0 %; cuống không cho kết cảm ứng tạo rễ tơ Kết phù hợp với nghiên cứu trước thực rau sam Portulaca oleracea, Solanaceae đan sâm Salvia miltiorrhiza [11-13] Theo Pavar Maheshvari (2004), có khác tỷ lệ cảm ứng tạo rễ tơ vật liệu phản ứng mô thực vật khác với xâm nhiễm vi khuẩn A rhizogenes khác phụ thuộc lớn vào trạng thái sinh lý mô [14] Kết ảnh hưởng thời gian gây nhiễm đến hiệu cảm ứng tạo rễ tơ cho thấy tỉ lệ mẫu tạo rễ có xu hướng tăng dần tương ứng với thời gian gây nhiễm tăng từ 10 đến 30 phút; vượt 30 phút, tỉ lệ mẫu tạo rễ giảm Thời gian gây nhiễm 30 phút thời gian phù hợp cho cảm ứng tạo rễ tơ bồ đề nghiệm thức khảo sát đạt 44,00 ± 6,00 % Nhiều nghiên cứu cho thấy rằng, thời gian gây nhiễm với A rhizogenes cho hiệu chuyển gene phụ thuộc vào loài thực vật [15-17] Khảo sát ảnh hưởng thời gian đồng nuôi cấy đến hiệu cảm ứng tạo rễ tơ cho thấy nhìn chung, tỷ lệ mẫu hình thành rễ tơ tăng theo thời gian đồng nuôi cấy từ đến ngày Thời gian đồng ni cấy ngày có tỷ lệ tạo rễ cao đạt 66,67 ± 7,64 %, thời gian đồng nuôi cấy dài ngày không làm tăng tỷ lệ mẫu hình thành rễ mà ngược lại xuất số mẫu chết tế bào vi khuẩn bao quanh, gây thối đen vết cắt phát triển mức vi khuẩn Kết tương tự nghiên cứu Plumbago zeylanica L [18] 2.3.2 Kiểm tra chuyển gene kỹ thuật PCR Kết điện di sản phẩm PCR cho thấy, mẫu rễ cảm ứng có có xuất vạch băng DNA kích thước 780 bp (giếng 2_Hình 3.A) 540 bp (giếng 4_ Hình 3.B) trùng vị trí với đối chứng dương Như vậy, mẫu rễ tơ rễ tơ chuyển gene chứa gene rolB rolC genome Để loại trừ khả gene rolB, rolC có mặt mẫu rễ tơ vi khuẩn A rhizogenes tồn rễ, phản ứng PCR với cặp mồi virDF virDR thực để khuếch đại gene virD_một gene gây độc có mặt vùng gene vir Ri-plasmid không chuyển vào genome thực vật trình lây nhiễm Kết cho thấy, mẫu rễ tơ (giếng 4_Hình 3.C) khơng xuất vạch băng tương ứng với kích thước gene virD Điều chứng tỏ mẫu rễ tơ mẫu rễ tơ chuyển gene 2.3.3 Ảnh hưởng xạ gamma Cobalt-60 lên sinh trưởng phát triển tích lũy hợp chất phenolic rễ tơ bồ đề Kết thu cho thấy tỉ lệ sống, khối lượng tươi số tăng trưởng giảm tăng liều xạ từ 10 dến 40 Kết giải thích dựa vào tương tác xạ gamma với nguyên tử phân tử tế bào để tạo gốc tự từ có khả làm thay đổi thành phần quan trọng tế bào thực vật Những gốc tự chứng minh có ảnh hưởng đến hình thái, giải phẫu, sinh hóa sinh lý thực vật Một số kết nghiên cứu cho thấy gây đột biến tia phóng xạ làm thay đổi kiểu hình giảm khả sinh trưởng callus [19], [20] protocorm-like bodies [21] Có khác biệt rõ rệt hàm lượng phenolic rễ tơ liều chiếu xạ khác Hàm lượng phenolic tổng cao liều chiếu 20 Gy đạt 36,72 mg GAE/g DW gấp 1,44 lần so với đối chứng 25,54 mg GAE/g DW; rễ tơ liều chiếu 30 Gy có hàm lượng phenolic tổng thấp 23,21 mg GAE/g DW Kết tương tự với số nghiên cứu khảo sát ảnh hưởng xạ đến vật liệu in vitro khoảng liều gây chết 50 % [22-24] Sự tăng hàm lượng phenolic rễ tơ tác dụng xạ gamma giải thích gây stress oxy hóa, tế bào rễ tơ sản xuất hợp chất phenolic chống lại stress cách tăng cường hoạt động enzyme tham gia vào q trình chuyển hóa phenolic phân giải hợp chất phenolic phức tạp KẾT LUẬN Mô vật liệu thích hợp cho cảm ứng tạo rễ tơ vi khuẩn A rhizogenes TR7 Tần số cảm ứng cao đạt 66,67 ± 7,64 % với mô bị gây nhiễm thời gian 30 phút, đồng nuôi cấy ngày Kết kiểm tra PCR để xác nhận trình chuyển gene A rhizogenes cho phản ứng dương tính với gene mục tiêu rolB, rolC âm tính với gene virD chứng tỏ mẫu rễ tơ chuyển gene thành công Bức xạ gamma ảnh hưởng đến tốc độ tăng trưởng hàm lượng phenolic tổng số rễ tơ Dưới tác động xạ gamma, hàm lượng phenolic cao đạt với mẫu rễ tơ chiếu xạ liều 20 Gy TÀI LIỆU THAM KHẢO 10 11 12 13 Ruby Tiwari, C.S.Rana “Plant secondary metabolites: a review”, International Journal of Engineering Research and General Science, 3(5), 661-670, 2015 Cầm Thị Ính, Trần Hồng Quang, Hoàng Thanh Hương, Châu Văn Minh, Phan Văn Kiệm “Một megastigman glycoside từ đề Ficus religiosa L (Moraceae)”, Tạp chí Hóa học, 47(1), 81-84, 2009 Cầm Thị Ính, Trần Hồng Quang, Hồng Thanh Hương, Châu Văn Minh, Phan Văn Kiệm “Axit shikimic axit phenolic phân lập từ vỏ đề Ficus religiosa L (Moraceae)”, Tạp chí Hóa học, 49(3), 367-370, 2011 Hồng Thanh Hương, Trần Hồng Quang, Cầm Thị Ính, Châu Văn Minh, Phan Văn Kiệm “Phân lập xác định hai cấu trúc dẫn xuất C13 nor-isoprenoid từ đề Ficus religiosa L (Moraceae)”, Tạp chí Hóa học, 47(6), 629-633, 2009 Mohsen Hesami, Mohammad Hosein Daneshvar and Mohsen Yoosefzadeh-Najafabadi “Establishment of a Protocol for in vitro Seed Germination and Callus Formation of Ficus religiosa L., an Important Medicinal Plant”, Jundishapur J Nat Pharm Prod, In Press (In Press):e62682, doi: 10.5812/jjnpp.62682, 2018 Varsha Parasharami, Priya Yadav, Shilpa Mandkulkar and Sushama Gaikwad “Ficus religiosa L.: Callus, Suspension Culture and Lectin Activity in Fruits and In vitro Regenerated Tissues”, British Biotechnology Journal, 4(2), 215-227, 2014 https://patentscope.wipo.int/search/en/detail.jsf?recNum=1&queryString=EN_ALLTXT%3A% 28A+process+for+preparing+a+hairy+root+culture+extract+of+Ficus+religiosa+L.+having+ind uced+acetylcholinesterase+inhibitory+activity+%29&office=&sortOption=Relevance&prevFilt er=&maxRec=3&navig=previous Ashouri Sheikhi A, Hassanpour H, Jonoubi P et al The Effect of Gamma Irradiation on In vitro Total Phenolic Content and Antioxidant Activity of Ferula gummosa Bioss Journal of Medicinal Plants, 15(59), 122-131 (2016) Chakravarty B and Sen, S “Enhancement of regeneration potential and variability by γirradiation in cultured cells of Scilla indica”, Biologia plantarum, 44(2), 189-193, 2001 Ramazan Beyaz and Mustafa Yildiz “The Use of Gamma Irradiation in Plant Mutation Breeding” Plant Engineering, Chapter 3, 32-42, 2017 Pirian, K Piri, T Ghiyasvand “Hairy roots induction from Portulaca oleracea using Agrobacterium rhizogenes to Noradrenaline’s production”, Int Res J Appl Basic Sci., 3, 642649, 2012 P.K Pawar, V.L Maheshwari “Agrobacterium Rhizogenes Mediated hairy root induction in two medicinally important members of family Solanaceae”, Indian Journal of Biotechnology, 3(3), 414-417, 2004 Ninh Thị Thảo, Lê Tiến Vinh, Lã Hoàng Anh, Nguyễn Thị Thủy, Nguyễn Thị Phương Thảo “Nghiên cứu cảm ứng nuôi cấy rễ tơ đan sâm (Salvia miltiorrhiza Bunge)” Tạp chí ... Important Medicinal Plant”, Jundishapur J Nat Pharm Prod, In Press (In Press):e62682, doi: 10.5812/jjnpp.62682, 2018 Varsha Parasharami, Priya Yadav, Shilpa Mandkulkar and Sushama Gaikwad “Ficus religiosa... 18,25 ± 1,39a 15 ,04 ± 0,71b 10 86,67 ± 13,33b 0,284 ± 0,030b 12,66 ± 1,19b 14,05 ± 2,59b 20 55,56 ± 10,18c 0,184 ± 0 ,041 c 7,59 ± 1,18c 14,13 ± 2,03b 30 31,11 ± 10,18d 0,161 ± 0 ,041 c 7,96 ± 2,51c... Hoàng Thanh Hương, Châu Văn Minh, Phan Văn Kiệm “Một megastigman glycoside từ đề Ficus religiosa L (Moraceae)”, Tạp chí Hóa học, 47(1), 81-84, 2009 Cầm Thị Ính, Trần Hồng Quang, Hồng Thanh Hương,