Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống
1
/ 171 trang
THÔNG TIN TÀI LIỆU
Nội dung
1 ĐẶT VẤN ĐỀ Theo Tổ chức Y tế giới, bệnh muỗi truyền lànguyên nhân gây triệu ca chết năm [126] Trong đó, bệnh sốt xuất huyết Dengue (SXHD) vấn đề y tế nghiêm trọng toàn cầu Hiện nay, tỷ lệ mắc SXHD tăng 30 lần sau 50 năm nhiều quốc gia lần báo cáo dịch SXHD, bệnh muỗi Aedes truyền cótốc độ lây lan nhanh giới [123] Ngồi ra, gần số bệnh muỗi Aedes truyền gia tăng mở rộng nhiều khu vực bệnh virus Chikungunya, Zika vàTổ chức Y tế giới cảnh báo bệnh virus Zika làvấn đề khẩn cấp y tế cơng cộng tồn cầu [71] Bệnh SXHD, bệnh virus Chikungunya vàZika làcác bệnh truyền nhiễm cấp tí nh, lan truyền thơng qua vết đốt muỗi Aedes aegypti Aedes albopictus [11],[126] Hiện có 251 quốc gia/vùng lãnh thổ có mơi trường sống thích hợp cho tồn vàphát triển muỗi Ae aegypti Ae albopictus, điều gây mối hiểm họa sức khỏe toàn cầu [106] Ở Việt Nam, bệnh SXHD, bệnh virus Chikungunya vàZika ghi nhận, SXHD làmột mười bệnh truyền nhiễm có tỷ lệ mắc vàtử vong cao 10 năm trở lại Bệnh lưu hành hầu hết tỉnh/thành phố chủ yếu miền Nam Nam Trung Những nơi phát muỗi Ae aegypti, số điểm bắt Ae albopictus Mặc dùChương trì nh phòng chống SXHD quốc gia hoạt động từ năm 1999 làm giảm mắc vàtử vong, nhiên số mắc năm mức cao từ 70.000-100.000 ca vàhàng trăm ca tử vong [7],[11] Tỉnh Bình Định Gia Lai hai tỉnh trọng điểm SXHD miền Trung-Tây Nguyên, năm 2010 có số ca mắc cao kể từ năm 1998, sau số mắc giảm qua năm [4],[45] Nhưng đến năm 2015 số ca mắc gia tăng trở lại, cụ thể Gia Lai ghi nhận 3.022 ca, số ca mắc cao Tây Nguyên vàtại Bình Định ghi nhận 2.849 ca mắc, đứng thứ sau khánh Hòa miền Trung [9] Năm 2016, số mắc tiếp tục tăng cao Bình Định (4.378 ca) Gia Lai (13.374 ca) Đáng lưu ý số mắc mở rộng phân bố nhiều miền núi, nông thôn tăng nhiều so với trước [10] Một vấn đề đặt trước SXHD thường gây dịch vùng đô thị, nơi đông dân cư, năm gần số mắc có xu hướng tăng thường gây dịch nơng thơn vàmiền núi Bình Định vàGia Lai? Giả thuyết đưa cóthể làdo mở rộng phân bố muỗi Aedes từ thành thị nông thơn, miền núi ngược lại Ngồi ngun nhân khác cóthể sau thời gian dài phun hóa chất diệt trùng tác động mạnh đến muỗi Ae aegypti vàAe albopictus, làm cho muỗi thay đổi tập tí nh, tăng sức chịu đựng vàkháng với hóa chất Đây lànhững vấn đề lớn gây khó khăn, thách thức cho cơng tác phịng chống dịch bệnh địa phương Với lýdo cấp thiết trên, đề tài: “Nghiên cứu phân bố, tập tính, độ nhạy cảm với hóa chất diệt trùng muỗi Aedes aegypti Aedes albopictus tỉnh Bình Định Gia Lai (2016-2018)” tiến hành với hai mục tiêu: Xác định phân bố, tập tí nh vàtỷ lệ nhiễm virus Dengue muỗi Ae aegypti vàAe albopictus điểm nghiên cứu tỉnh Bì nh Định vàGia Lai (2016-2018) Đánh giá độ nhạy cảm với số hóa chất diệt trùng, đột biến gen kdr muỗi Ae aegypti vàAe albopictus điểm nghiên cứu Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Nghiên cứu phân bố, tập tí nh vai trò truyền bệnh muỗi Aedes giới vàViệt Nam 1.1.1 Vị tríphân loại muỗi Aedes Muỗi Aedes spp thuộc phân họ Culicinae, phân họ lớn có khoảng 3.069 lồi với 110 giống, nhiều giống véc tơ truyền nhiều bệnh cho người Giống Aedes có vai trị quan trọng truyền bệnh sốt vàng, SXHD, bệnh virus Chikungunya, Zika vài loài Aedes véc tơ truyền bệnh giun vàvirus [30],[68],[123],[126] Vị tríphân loại muỗi Ae aegypti vàAe alboipctus [27],[68],[84] Aedes aegypti (Linnaeus, 1762) Aedes albopictus (Skuse, 1894) Giới: Animalia Giới: Animalia Ngành: Arthropoda Ngành: Arthropoda Lớp: Insecta Lớp: Insecta Bộ: Diptera Bộ: Diptera Họ: Culicidae Họ: Culicidae Phân họ: Culicinae Phân họ: Culicinae Giống: Aedes Giống: Aedes Phân giống: Stegomyia Phân giống: Stegomyia Loài: Aedes (Stegomyia) aegypti Loài: Aedes (Stegomyia) albopictus Trong nghiên cứu tập trung vào hai loài muỗi gồm Ae aegypti Ae albopictus, hai véc tơ truyền bệnh SXHD Việt Nam nhiều khu vực khác giới Ngoài ra, hai loài truyền bệnh sốt vàng, bệnh virus Zika vàChikungunya [11],[106],[126] 1.1.2 Hình thái muỗi Ae aegypti vàAe albopictus Cả hai lồi có kích thước nhỏ đến trung bình, thân có màu đen bóng, có nhiều vẩy trắng bạc tập trung thành cụm hay đường, đặc biệt phần ngực Loài Ae aegypti định loại dựa vào mặt lưng lưng ngực có hai đường vẩy trắng bạc phình hai nửa vịng cung ơm hai bên lưng ngực giống hình đàn Muỗi Ae albopictus, mặt lưng lưng ngực có đường vảy trắng bạc lưng [27],[84],[124] (a) (b) Hình 1.1 Hình thái ngồi muỗi Ae aegypti (a) vàAe albopictus (b) “Nguồn: CDC Hoa Kỳ, 2016” [52] 1.1.3 Phân bố, tập tí nh vàvai tròtruyền bệnh muỗi Aedes giới 1.1.3.1 Nghiên cứu phân bố vàtập tí nh muỗi Aedes Muỗi giống Aedes cómặt khắp nơi giới vàcókhoảng 950 loài, gây mối phiền hàlớn việc đốt người vàsúc vật Muỗi giống Aedes, đặt biệt hai lồi Ae aegypti vàAe albopictus đóng vai trị quan trọng lan truyền bệnh SXHD, sốt vàng, bệnh virus Zika, Chikungunya, bệnh virus khác truyền bệnh giun [30],[126] Muỗi Ae aegypti phổ biến thành thị, nơi đông dân cư nên xem làvéc tơ gây dịch SXHD đô thị, mở rộng phân bố vùng nông thôn, thường liên quan đến q trình thị hóa, phát triển sở hạ tầng mở rộng cơng trì nh cấp nước vàcải tạo hệ thống giao thơng vùng nông thôn [120],[124] Độ cao làyếu tố quan trọng giới hạn phân bố muỗi Ae aegypti lên cao thìmật độ muỗi giảm dần Tại Ấn Độ, muỗi Ae aegypti phân bố độ cao lên đến 1.200 m so với mặt nước biển Khu vực Đông Nam Á, độ cao từ 1.000 m đến 1.500 m xem làgiới hạn phân bố loài Tuy nhiên khu vực khác thìlồi phân bố độ cao lên đến 2.200 m Colombia và2.400 m Eritrea (WHO, 1997 vàWHO, 2011) [120],[124] Muỗi Ae aegypti véc tơ quan trọng truyền arbovirus chúng thường sống nhà thích đốt người Lồi đốt ban ngày có hai đỉnh đốt gồm sáng sớm vàchiều tối, nhiên đỉnh hoạt động cóthể thay đổi thùy theo địa phương mùa Muỗi Ae aegypti thường đốt lần để hoàn thành chu kỳ tiêu sinh, điều làm gia tăng nguy lan truyền bệnh Lồi khơng đốt vào ban đêm đốt phịng có ánh sáng Giai đoạn ấu trùng thường tìm thấy dụng cụ chứa nước (DCCN) vàxung quanh nhà[30],[124] Khả phát tán loài Ae aegypti phụ thuộc vào vị trísinh sản vật chủ, thơng thường giới hạn khoảng từ 30 - 50 m tính từ vị trímuỗi nở Tuy nhiên nghiên cứu gần cho biết lồi cóthể phát tán 400 m Puerto Rico (Mỹ) Ngồi chúng vận chuyển thụ động thơng qua dụng cụ cóbọ gậy vàtrứng [124] Không giống Ae aegypti, số quần thể muỗi Ae albopictus thí ch nghi với vùng cókhíhậu lạnh Bắc Á vàchâu Mỹ, vìtrứng chúng cókhả tồn qua mùa đơng Lồi muỗi véc tơ truyền bệnh SXHD quan trọng so với loài Ae aegypti [30],[121],[124] Muỗi Ae albopictus phân bố chí nh rừng, thích nghi với môi trường sống người khu vực đô thị, bán đô thị vànông thôn Trong sinh cảnh rừng chúng đẻ hốc tre nứa, ngách lá; sinh cảnh đô thị chúng đẻ DCCN nhân tạo chum vại, phuy [121],[124] Các vùng bán khôhạn Ấn Độ, muỗi Ae aegypti véc tơ đô thị chúng thay đổi theo lượng mưa thói quen trữ nước cộng đồng Các quốc gia Đơng Nam Á cólượng mưa năm thường lớn 200 cm, muỗi Ae aegypti trìổn định thị, bán thị vànơng thôn Do tập quán trữ nước người dân Indonesia, Myanmar vàThái Lan, nên mật độ muỗi Aedes ngoại ôcao so với trung tâm Xu hướng đô thị hóa làm tăng mơi trường sống thuận lợi cho Ae aegypti phát triển quanh năm Ở số đô thị cóthảm thực vật đa dạng, thìAe aegypti vàAe albopictus cómặt muỗi Ae aegypti chiếm ưu [126] Phân bố muỗi Ae aegypti vàAe albopictus mở rộng toàn cầu làm tăng nguy mắc SXHD, Chikungunya vàZika Muỗi Ae aegypti, phố biến châu Á châu Đại Dương, tiếp đến châu Mỹ vàmột số khu vực châu Phi châu Âu Tương tự, muỗi Ae albopictus phổ biến châu Á, tiếp đến châu Mỹ châu Phi, châu Âu Các quốc đảo Thái Bình Dương ghi nhận có mặt hai véc tơ Muỗi Ae aegypti véc tơ phổ biến thành thị, thích đốt người, ngược lại muỗi Ae albopictus phân bố vùng nơng thơn đốt người động vật [85],[86],[92] Loài Ae albopictus thường giới hạn quốc gia khu vực cận Sahara châu Phi, mở rộng sang Mali Đây lần Mali ghi nhận có mặt muỗi Ae albopictus gia tăng khu vực miền Trung vàthủ đô Bamako Sự mở rộng phân bố làdo vận chuyển hàng hóa có chứa trứng bọ gậy đường sơng Dự báo lồi mở rộng đến khu vực thượng nguồn sông Niger vàcác nhánh sông [93] Đây minh chứng chứng tỏ mở rộng loài nhiều vùng khác Warabhorn vàcộng (2006) nghiên cứu sinh thái bọ gậy hai loài Ae aegypti Ae albopictus ba khu vực miền Nam, Thái Lan cho biết nơi sinh sản chủ yếu chúng DCCN vàngồi nhà, khu vực miền Nam có diện muỗi Ae aegypti Ae albopictus [119] Nghiên cứu Sisaket, Thái Lan Wongkoon (2013) cho biết mật độ bọ gậy Ae aegypti cao so với Ae albopictus vào mùa đông mùa mưa Bọ gậy Aedes/nhàvào mùa mưa nhiều mua đơng mùa hè [131] Một nghiên cứu thành phố Cebu, Philippines năm 2012 cho biết có 38,4% số điểm điều tra có mặt muỗi Ae aegypti và11,9% điểm có mặt Ae albopictus Những nơi sinh sản chí nh muỗi Ae aegypti gồm thùng nhựa (40,2%), thùng kim loại (29,6%) vàhộp nhựa (10,5%); nơi sinh sản chí nh muỗi Ae albopictus gồm gốc tre (28,5%), thùng nhựa (21,1%) vàlốp xe (19,1%) [61] Nghiên cứu đặc điểm sinh học vàkiểm soát muỗi Ae albopictus đảo Reunion cho thấy với muỗi Ae aegypti thìmuỗi Ae albopictus làvéc tơ gây vụ dịch đảo Ấn Độ Dương, đặc biệt Reunion Muỗi Ae albopictus cókhả phát triển mạnh, DCCN nhỏ đô thị làmôi trường lý tưởng cho Ae albopictus phát triển vàcác điểm sinh sản tự nhiên hốc tre, hốc đá nơi ưa thích Ae albopictus [59] Dieng vàcộng (2010) nghiên cứu muỗi Ae albopictus nhàvàvai trị dịch tễ chúng bán đảo phía bắc Malaysia cho biết muỗi Ae albopictus sinh sản nhà môi trường nước nhân tạo Khi sống môi trường nhà chúng tăng tuổi thọ, hút máu làm tăng khả véc tơ [60] Tác giả Kamgang vàcộng (2010), nghiên cứu muỗi Ae aegypti Ae albopictus thị trấn (Garoua, Douala Yaoundé) Cameroon rằng: hai loài muỗi phát Douala Yaoundé, thị trấn Garoua cólồi Ae aegypti Mơi trường sống hai lồi thị trấn gần giống nhau, loài Ae albopictus tập trung sinh sản mảnh vụn thực vật, hốc Với muỗi Ae aegypti sinh sản chủ yếu DCCN nhà[73]; Sự mở rộng vùng phân bố địa lý véc tơ SXHD chứng minh Mỹ Trong năm thập kỷ không ghi nhận dịch SXHD, gần dịch SXHD xảy phí a Nam bang Texas (2004-2005) Florida (2009-2011) điều tra phát muỗi Ae aegypti - loài mở rộng đến khu vực phí a Bắc nơi có khí hậu lạnh [62] Nghiên cứu môi trường sống muỗi Ae aegypti vàAe albopictus khu vực ngoại ô hai vùng khíhậu khác Sri Lanka từ năm 2007-2009 cho biết số bọ gậy khu vực có nguy xảy dịch bệnh phong phú muỗi Ae albopictus Nơi có số cao hai loài làkhu vực Kandy, nơi có thảm thực vật dày, lượng mưa cao nhiệt độ thấp Với Ae albopictus, số trứng trung bì nh hàng tháng cóquan hệ chặt chẽ với độ ẩm tương đối hai huyện lượng mưa huyện Kandy [115] Dave Chadee (2013), nghiên cứu tập tính trú đậu Ae aegypti Trinidad cho biết vị trí trú đậu Ae aegypti phịng ngủ (81,9%), phòng khách (8,7%) vànhàbếp (6,9%) Nghiên cứu phịng thínghiệm cho thấy, 10% muỗi hút máu sau quăng hóa lột xác thành muỗi, phần lớn 70% muỗi hút máu sau 12 [57] Theo nghiên cứu năm 2018 tác giả Samson Leta cộng (2018) cho biết: có 251 quốc gia/vùng lãnh thổ tồn cầu có mơi trường sống thích hợp cho tồn muỗi Ae aegypti Ae albopictus, có 197 quốc gia/vùng lãnh thổ có mơi trường sống thí ch hợp cho Ae albopictus và188 quốc gia/vũng lãnh thổ thích hợp Ae aegypti [106], điều gây mối hiểm họa sức khỏe tồn cầu Nhì n chung kết nghiên cứu cho thấy: hai loài phân bố rộng vùng nhiệt đới ôn đới Trong đó, muỗi Ae aegypti cómặt thành thị, khu đông dân cư sinh sản chủ yếu DCCN nhỏ nhân tạo vàxung quanh nhàvàhiện mở rộng phân bố nhiều vùng khác Cả hai loài muỗi Ae aegypti vàAe albopictus hoạt động đốt mồi vào ban ngày, muỗi Ae aegypti chủ yếu đốt người vàsống nhà Ngược lại muỗi Ae albopictus sống ngồi nhà, khu cơng viên, vườn cây, bìa rừng, đốt người động vật Đặc biệt khả chịu lạnh loài Ae albopictus, lồi cóthể sống vùng khíhậu lạnh châu Âu, khu vực phí a Bắc Mỹ Sự phân bố đặc điểm sinh thái hai loài muỗi khác tùy theo địa phương khu vực 1.1.3.2 Nghiên cứu vai tròtruyền bệnh muỗi Aedes Muỗi Ae aegypti Ae albopictus hai véc tơ quan trọng truyền bệnh SXHD, chúng truyền bệnh sốt vàng, sốt virus Zika, Chikungunya nhiều nơi giới [126] Do vậy, đối tượng màcác nhàkhoa học tập trung nghiên cứu vànhiều kết công bố, sở khoa học để xây dựng chiến lược phòng chống thích hợp Khi so sánh vai trị muỗi Ae aegypti vàAe albopictus xuất bệnh SXHD vàChikungunya Trung Phi cho thấy: khu vực ngoại thành muỗi Ae albopictus đốt người phong phú so với Ae aegypti Gabon Tuy nhiên, loài Ae aegypti chiếm ưu khu vực đô thị Libreville Ở thành phố này, virus Chikungunya vàDengue phát loài Ae 10 albopictus Điều cho thấy, muỗi Ae albopictus đóng vai trị lan truyền virus Chikungunya vàDengue Libreville năm 2007 [54] Roop Kumari (2011) nghiên cứu sinh thái vàvai trò truyền bệnh SXHD muỗi Ae albopictus Dehli, Ấn Độ từ năm 2008-2009 cho thấy: muỗi Ae aegypti phổ biến vàcómặt tất tháng năm Có 9,52% điểm điều tra phát muỗi Ae albopictus trung tâm Dehli vào tháng vàtừ tháng đến tháng 10 Muỗi Ae albopictus vàAe vittatus thích nghi với môi trường sống DCCN nhân tạo khu vực thị Delhi ngồi mơi trường tự nhiên làbụi tre vàhố đá Trong đó, 229 DCCN có mặt lồi Ae aegypti và34 DCCN cómặt lồi Ae albopictus kiểm tra kết cho thấy có 10,5% Ae aegypti 11,76% Ae albopictus nhiễm virus Dengue Riêng loài Ae vittatus không nhiễm với virus Đây báo cáo lần phát Ae albopictus nhiễm virus Dengue phí a Bắc Ấn Độ [102] Maciel-de-Freitas R (2013), nghiên cứu tuổi thọ quần thể ảnh hưởng đến lan truyền SXHD cho thấy: virus DEN-2 có liên quan đến quần thể muỗi mật độ, thói quen hút máu, khả tồn tại, sinh sản đẻ trứng Muỗi nhiễm virus có khả cơng vật chủ nhiều hơn, nguyên nhân làm cho muỗi có tuổi thọ giảm đẻ trứng số trứng nở thành bọ gậy so với muỗi không bị nhiễm [87] Nhiều nghiên cứu giới loài muỗi Ae aegypti Ae albopictus hai véc tơ truyền bệnh SXHD nhiều khu vực giới Ngoài hai lồi có khả truyền virus Zika Chikungunya Tỷ lệ muỗi Ae aegypti vàAe albopictus nhiễm virus Dengue khác từ 1,33% đến 11,76% tùy theo quốc gia, khu vực mức độ lưu hành nơi thu thập muỗi, cụ thể sau: Nghiên cứu Singapore năm 2001 cho biết tỷ lệ muỗi Ae aegypti vàAe albopictus đực dương tính 95.Murcia O, Henrí quez B, Castro A et al (2019), Presence of the point mutations Val1016Gly in the voltage-gated sodium channel detected in a single mosquito from Panama, Parasites and vectors 12 (1), 62 96.Nazif Ullah Khan, Shams Ullah Khan et al., (2016), Susceptibility status of Dengue vector (Aedes aegypti) against different insecticides in district Mansehra, Khyber Pakhtunkhwa, Pakistan, Journal of Entomology and Zoology Studies, 4(5), pp 1107-1112 97.Nguyen Thi Kim Lien, Nguyen Thi Hong Ngoc, Nguyen Thu Hien et al (2018), Two novel mutations in the voltage-gated sodium channel associated with knockdown resistance (kdr) in the dengue vector Aedes aegypti in Vietnam Journal of Vector Ecology, 43 (1), pp 184-189 98.Olger C.A, Troyo A, Moreira-Soto R.D et al (2015), Dengue viruses in Aedes albopictus Skuse from a pineapple plantation in Costa Rica Journal of vector ecology, 40 (1), pp 184-186 99.Pérez-Castro R, Castellanos J.E et al (2016), Detection of all four dengue serotypes in Aedes aegypti female mosquitoes collected in a rural area in Colombia, Memórias Instituto Oswaldo Cruz 111(4), pp 233-240 100 Prapanthadara L, Nongkran P, Surangchit K et al (2002), Mechanisms of DDT and Permrthrin Resistance in Aedes aegypti from Chiang Mai, Thailand, Dengue Bulletin, 26, pp 185-189 101 Rapeeporn Yaichaaroen, Rachada Kiatfuengfoo, Theeraphap Chareonviriyaphap et al (2005), Characterization of deltamethrin resistance in field populations of Aedes aegypti in Thailand, Journal of Vector Ecology, 30(1), pp 144-150 102 Roop Kumari, Kaushal Kumar, Lakhbir S.C et al (2011), First dengue virus detection in Aedes albopictus from Delhi, India: its breeding ecology and role in dengue transmission, Tropical Medicine &International Health, 16(8), pp 949-954 103 Ronald M.S, Paula P.L, Doris G.C (2018), Co‐occurrence of V1016I and F1534C mutations in the voltage‐gated sodium channel and resistance to pyrethroids in Ae aegypti (L.) from the Colombian Caribbean region, Pest Management Science 104 Roth A, Mercier A, Lepers C, Hoy D et al (2014), Concurrent outbreaks of dengue, chikungunya and Zika virus infections - an unprecedented epidemic wave of mosquito-borne viruses in the Pacific 2012-2014, Eurosurveillance, 19 (41) 105 Saavedra-Rodriguez K, Urdaneta-Marquez L, Rajatileka S et al (2007), A mutation in the voltage-gated sodium channel gene associated with pyrethroid resistance in Latin American Aedes aegypti, Insect Mol Biol, 16(6), pp 785-798 106 Samson Leta, Beyene T.J, De Clercq E.M et al (2018), Global risk mapping for major diseases transmitted by Aedes aegypti and Aedes albopictus, International Journal of Infectious Diseases, 67, pp 25-35 107 Samyra Giarola Cecílio, Willer F Silva, Antonio Helvecio Totola et al (2015), Dengue virus detection in Aedes aegypti larvae from southeastern Brazil, Journal of vector ecology, 40 (1), pp 7174 108 Sébastien Marcombe, Mathieu RB, Pocquet N et al (2012), Insecticide Resistance in the Dengue Vector Aedes aegypti from Martinique: Distribution, Mechanisms and Relations with Environmental Factors, PLoS One, 7(2), e30989 109 Sivan A, Shriram AN, Sunish I.P et al (2015), Studies on insecticide susceptibility of Aedes aegypti (Linn) and Aedes albopictus (Skuse) vectors of dengue and chikungunya in Andaman and Nicobar Islands, India, Parasitology Research, 114(12), pp 4693-4702 110 Sharma S.N, Saxena V.K, Lal S et al (2004), Study on susceptibility status in aquatic and adult stages of Ae aegypti and Ae albopictus against insecticides at international airports of south India, The Journal of communicable diseases 36(3), pp 177-181 111 Smith Letícia B, Kasai S, Scott J.G (2016), Review Pyrethroid resistance in Aedes aegypti and Aedes albopictus: Important mosquito vectors of human diseases, Pestic Biochem Physiol., 133, pp 1-12 112 Somboon P, Prapanthadara L.A, Suwonkerd W et al (2003), Insecticide susceptibility tests of Anopheles minimus s.l., Aedes aegypti, Aedes albopictus, and Culex quinquefasciatus in northern Thailand, Southeast Asian J Trop Med Public Health, 34(1), pp 8793 113 Thavara U, Siriyasatien P, Tawatsin A et al (2006), Double infection of heteroserotypes of dengue viruses in field populations of Aedes aegypti and Aedes albopictus (Diptera: Culicidae) and serological features of dengue viruses found in patients in southern Thailand, Southeast Asian journal of tropical medicine and public health, 37(3), pp 468-476 114 Theeraphap Chareonviriyaphap, Michael J.B, Wannapa S et al (2013), Review of insecticide resistance and behavioral avoidance of vectors of human diseases in Thailand, Parasites & Vectors, 280 115 Thilini C W, Devika B P, Mohamed Mansoor et al (2013), Prevalence and breeding habitats of the dengue vectors Aedes aegypti and Aedes albopictus (Diptera: Culicidae) in the semi-urban areas of two different climatic zones in Sri Lanka, International Journal of Tropical Insect Science, Cambridge University, 33 (4), pp 216-226 116 Tran Vu Phong and Vu Sinh Nam (1999), Key breeding Sites of Dengue Vectors in Hanoi,Vietnam,1994-1997, Dengue Bulletin, 23, pp 67-72 117 Tuksinvaracharn R, Tanayapong P, Pongrattanaman S, Hansasuta P et al (2004), Prevalence of dengue virus in Aedes mosquitoes during dry season by semi-nested reverse transcriptasepolymerase chain reaction (semi-nested RT-PCR), J Med Assoc Thai, 87(2), pp 129-133 118 Urdaneta L, Herrera F, Pernalete M et al (2005), Detection of dengue viruses in field-caught Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) in Maracay, Aragua state, Venezuela by type-specific polymerase chain reaction, Infect Genet Evol, 5(2), pp 177-184 119 Warabhorn Preechaporn, Mullica J, Krisanadej J et al (2006), The Larval Ecology of Ae aegypti and Ae albopictus in Three Topographical Areas of Southern Thailand, Dengue Bulletin, 30, pp 204-213 120 WHO (1997), Dengue haemorrhagic fever Diagnosis, treatment, prevention and control, Geneva 121 WHO (2003), Guideline for Dengue surveillance anh mosquito control, WHO Regional Office for the Western Pacific, Manila 122 WHO (2006), Pesticides and their application for the control of vectors and pests of public health importance, WHO/CDS/NTD/WHOPES/GCDPP/2006.1, 125 123 WHO (2009), Dengue: guidelines for diagnosis, treatment, prevention and control (WHO/HTM/NTD/DEN/2009.1), Geneva, Switzerland 124 WHO (2011), Comprehensive Guidelines for Prevention and Control of Dengue and Dengue Haemorrhagic Fever, WHO Regional Office for South-East Asia, New Delhi 125 WHO (2012), Global plan for insecticide resistance management in malaria vectors, Geneva, Switzerland 126 WHO (2014), A global brief on vector-borne diseases, geneve, Switzerland 127 WHO (2016), Monitoring and managing insecticide resistance in Aedes mosquitoes populations, WHO/ZIKV/VC/16.1, 11p Geneva, Switzerland 128 WHO (2017), Chikungunya, (https://www.who.int/news- room/fact-sheets/detail/chikungunya) 129 WHO (2018), Yellow fever, (https://www.who.int/news- room/fact-sheets/detail/yellow-fever) 130 WHO (2018), Dengue and severe dengue, (http://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/dengue-and-severedengue) 131 Wongkoon S, Jaroensutasinee M., Jaroensutasinee K et al (2013), Distribution, seasonal variation & dengue transmission prediction in Sisaket, Thailand Indian J Med Res, 138(3), pp 347353 132 Wuliandari J.R, Lee S.F, White V.L et al (2015), Association between Three Mutations, F1565C, V1023G and S996P, in the Voltage-Sensitive Sodium Channel Gene and Knockdown Resistance in Aedes aegypti from Yogyakarta, Indonesia, Insects., 6(3), pp 658-685 133 Yuzhe Du, Yoshiko Nomura, Boris S.Z et al (2016), Sodium Channel Mutations and Pyrethroid Resistance in Aedes aegypti, Insects-Open Access Journal, (4), 60 134 Yanola J, Somboon P, Walton C et al (2011), High- throughput assays for detection of the F1534C mutation in the voltage-gated sodium channel gene in permethrin-resistant Aedes aegypti and the distribution of this mutation throughout Thailand, Trop Med Int Health 16(4), pp 501-509 135 Yukiko Higa, Nguyen Thi Yen, Hitoshi Kawada et al (2010), Geographic Distribution of Aedes aegypti and Aedes albopictus Collected from Used Tires in Vietnam, Journal of the American Mosquito Control Association, 26(1), pp 1-9 PHỤ LỤC HÌNH ẢNH CÁC DỤNG CỤ CHỨA NƯỚC Chum vại Phuy Chậu cảnh Xôthùng Lọ hoa Lốp xe Nước gia cầm uống Hố ga Bể măng Bể xi măng Vật phế thải Vật phế thải Vật chứa nước khác PHỤ LỤC QUY TRÌNH XÉT NGHIỆM MUỖI AEDES NHIỄM VIRUS DENGUE Trong nghiên cứu này, sử dụng phương pháp one-step RT- PCR để nhân vùng gen mãhóa protein vỏ E gen virus để sàng lọc mẫu muỗi Aedes nhiễm virus Dengue Vật liệu + Bộ kit tách chiết RNA virus “Viral RNA Mini Kit” hãng Qiagen + Hóa chất dùng phản ứng one-step RT-PCR gồm: sử dụng OneStep RT-PCR kit hãng Qiagen bao gồm buffer 5X, dNTP, Enzym Mix, Rnase-free water vàmồi hãng Sigma-Aldrich + Hóa chất dùng điện di DNA: Agarose (Bio-Rad), Đệm TBE 1X dùng để pha gel agarose vàchạy điện di cóthành phần gồm: Tris 89Mm; Acid boric 89mM; EDTA 0,5M là2mM Đệm nạp mẫu (6X) cóthành phần: Orange G 0,25% (w/v); Glycerol 30% (v/v); Dung dịch nhuộm DNA agarose: Ethydium bromide Phương pháp phát virus Dengue a Nguyên tắc * Nguyên tắc phương pháp one-step RT-PCR: Cả hai giai đoạn phiên mã ngược từ RNA thành cDNA (RT) vàgiai đoạn nhân cDNA (PCR) xảy ống phản ứng, giai đoạn RT xảy trước giai đoạn PCR liền theo sau Trong ống phản ứng RT-PCR cócả loại enzyme reverse transcriptase sử dụng cho chép khuếch đại RT vàDNA sử dụng cho PCR Trong phương pháp one-step RT- PCR, toàn sản phẩm cDNA tham gia vào PCR vìvậy độ nhạy phản ứng làrất cao * Nguyên tắc điện di Nguyên tắc phương pháp điện di dựa vào đặc tí nh cấu trúc acid nucleic Đó đại phân tử tích điện âm đồng khắp bề mặt nên chịu tác động điện trường, chúng di chuyển cực dương điện trường Nancy-520 làchất phát huỳnh quang có khả gắn xen vào DNA mạch đơi Do miếng gel nhuộm với Nancy-520 sau chiếu đèn UV phát vạch DNA b Các bước tiến hành RNA virus Dengue sau tách chiết từ mẫu muỗi sử dụng làm khuôn để chạy phản ứng one-step RT- PCR với cặp mồi bảng 21 Thành phần phản ứng chương trình chạy phản ứng one-step RT- PCR bảng & Bảng Hệ thống mồi đặc hiệu cho gen vỏ E DENV [72] Kích thước sản Trình tự mồi phẩm PCR DEN750 (5’-CAAGAACCGAAACGTGGATG-3’) 1,4Kb DENGUE2639 (5’-TGTGGAAGCAAATATCACCTG-3’) Bảng Thành phần phản ứng one-step RT-PCR Thành phần Thể tích cần lấy Nước SHPT 25 µl 5X buffer 10 µl dNTP µl Mồi DEN750 (10µM) µl Mồi DEN2639 (10µM) µl Enzym mix µl RNA µl Bảng Chương trình chạy one-step RT-PCR phản ứng xác định gen vỏ E Bước Nhiệt độ Thời gian Số chu kỳ Phiên mã ngược 500C 30 phút chu kỳ Hoạt hóa 950C 15 phút chu kỳ Biến tính 940C 30 giây Bắt cặp 520C 30 giây Kéo dài 680C phút Kéo dài 720C phút 40 chu kỳ chu kỳ Đổ gel 2%: Cân 2g agarose cho vào 100 ml dung dịch TE, đun tan agarose, sau để nguội khoảng 500C vàcho Nancy-520 vào với hàm lượng 3,5 µl/100 ml dung dịch Lắc dung dịch đổ vào khuôn, gắn lược để tạo giếng, chờ gel đông thời gian khoảng 30 phút Chạy điện di: lấy µl sản phẩm PCR hịa vào µl loading buffer 6X, cho hỗn hợp vào giếng bảng gel tiến hành chạy điện di với thang 100bp/1Kb Quá trình điện di thực vòng 1h, 140 vol PHỤ LỤC KỸ THUẬT XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN GEN kdr LIÊN QUAN ĐẾN KHÁNG HÓA CHẤT CỦA MUỖI Ae aegypti TẠI CÁC ĐIỂM NGHIÊN CỨU Kỹ thuật tách chiết ADN tổng số Acid nucleic tách chiết DNeasy blood and tissue hãng Qiagen vàcác bước thực theo hướng dẫn nhàsản xuất Kỹ thuật PCR thu nhận gen kdr Phản ứng PCR thực với cặp mồi AaSCF1 vàAaSCR4 vùng gen có kích thước khoảng 650 bp thuộc exon 20 vàexon 21 gen quy định kênh natri (Kawada vàcs., 2016) AaSCF1 5’-AGACAATGTGGATCGCTTCC-3’ AaSCR4 5’-GGACGCAATCTGGCTTGTTA-3’ Thành phần phản ứng 10X Buffer µl 25mM MgCl2 µl 10mM dNTP µl 10µM Primer µl 10µM Primer 2 µl Taq DNA polymerase (5U/ µl) 0,2 µl Nước tinh khiết 31,8 µl DNA khn µl Tổng số 50 µl Chu trình nhiệt: 95oC 5’ 95oC 30 giây 60oC 45 giây 720C phút 72oC 10 phút chu kỳ 35 chu kỳ Sản phẩm PCR bảo quản 40C sử dụng cho phân tích Điện di thạch agarose 1,5% để kiểm tra sản phẩm phản ứng PCR Kết máy đọc dải băng thạch agarose chụp ảnh (Vilber Lourmat) Nếu sản phẩm kích thước gen dự kiến thu nhận tiến hành tinh sản phẩm PCR, làm nguyên liệu cho bước Kỹ thuật tinh sản phẩm PCR Trước giải trì nh tự, sản phẩm PCR tinh QIAquick PCR purification kit (Qiagen) Các bước thực theo hướng dẫn kít Nguyên lýcủa kỹ thuật tinh sạch: Sản phẩm PCR tinh dựa phương pháp cột truyền thống kết hợp với kỹ thuật gắn cóchọn lọc màng silica Cách tiến hành - Thêm 200 µl PB vào 40 µl sản phẩm - trộn - Chuyển cột, ly tâm 13000 vòng/1 phút phút , bỏ dịch bên - Thêm 750 µl PE, ly tâm 13.000 vòng/phút phút, bỏ dịch bên - Ly tâm tiếp 13.000 vòng/1 phút phút, bỏ dịch bên - Chuyển cột sang ống eppendorf - Thêm 30 µl EB, ly tâm 13.000 vòng/1 phút phút - Sản phẩm PCR tinh thu nhận, kíhiệu mẫu vàgiữ -20oC sử dụng Kỹ thuật giải trình tự trực tiếp Sản phẩm PCR sau khuếch đại giải trì nh tự trực tiếp máy giải trì nh tự hãng Beckman Coulter Hệ thống giải trì nh tự Beckman Coulter Sản phẩm PCR gen kdr giải trì nh tự trực tiếp máy giải trình tự hãng Beckman Coulter Các trì nh tự kiểm tra xác định chương trình BLAST Ngân hàng gen NCBI Phân tích trình tự: Ứng dụng phần mềm Sinh tin GenomeLab GeXP, Geneous 8, liệu gen Genbank để phân tích trình tự nucleotide thu gen kdr muỗi Aedes aegypti Kỹ thuật tinh sản phẩm PCR giải trình tự Các bước tinh thủy sản phẩm PCR giải trình tự ethanol: Chuần bị ống eppendorf 1.5ml (đã khử trùng, số lượng ống tương đương số lượng mẫu cần tinh sạch) Thêm vào ống hỗn hợp dung dịch dừng phản ứng với thành phần vàthể tích sau: 3M Natri Acetate pH 5.2 2µl 100mM Na2EDTA pH 8.0 2µl 20mg/ml Glycogen (Cung cấp kèm theo DTCS Quick Start Kit) 1µl Chuyển tồn dung dịch phản ứng PCR giải trì nh tự có vào ống có hỗn hợp dung dịch dừng phản ứng vàtrộn vài giây Thêm vào ống 60µl ethanol lạnh 95% (được bảo quản tủ lạnh -200-C), trộn vàly tâm với tốc độ 14000 vòng/phút 15 phút 40C Cẩn thận hút bỏ dung dịch Bước thực lần Quay khơ chân khơng vịng 10 phút, để khơ tự nhiên nhiệt độ phịng (khơng sử dụng máy ủ nhiệt để làm khơmẫu) Hịa tan DNA tủa vào 40 µl SLS (cung cấp kèm theo DTCS Quick Start Kit) ... Xác định phân bố, tập tí nh vàtỷ lệ nhiễm virus Dengue muỗi Ae aegypti vàAe albopictus điểm nghiên cứu tỉnh Bì nh Định v? ?Gia Lai (2016- 2018) Đánh giá độ nhạy cảm với số hóa chất diệt trùng, đột... thiết giai đoạn hai tỉnh Bình Định v? ?Gia Lai 1.2 Nghiên cứu tình trạng kháng hóa chất diệt trùng muỗi Aedes 1.2.1 Các loại hóa chất diệt trùng Hiện nay, cóí t nhóm hóa chất diệt trùng tổng hợp sử... thử nhạy cảm muỗi Aedes với hóa chất diệt muỗi? ?? Bộ Y tế năm 2010 [5] 47 Mục đích thử nhạy cảm làphát cáthể muỗi quần thể muỗi Ae aegypti Ae albopictus nhạy cảm, có khả kháng hay kháng với hóa chất