Luận văn thạc sĩ VNUA nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ của bệnh do vi khuẩn ornithobacterium rhinotracheale trên gà lương phượng và chẩn đoán bệnh

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM TRẦN THỊ THU TRANG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ CỦA BỆNH DO VI KHUẨN ORNITHOBACTERIUM RHINOTRACHEALE TRÊN GÀ LƯƠNG PHƯỢNG VÀ CHẨN ĐOÁN BỆNH Ngành: Thú y Mã ngành: 60.64.01.01 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Chu Đức Thắng NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2017 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Trần Thị Thu Trang i LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, cố gắng thân, nhận quan tâm giúp đỡ tổ chức, quan, nhà khoa học, thầy cô giáo, bạn bè đồng nghiệp người thân gia đình Nhân dịp này, xin cảm ơn giúp đỡ giảng viên khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam giảng dạy suốt thời gian học tập Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc hướng dẫn, giúp đỡ chân tình, đầy trách nhiệm hết lịng khoa học PGS.TS Chu Đức Thắng thầy phịng thí nghiệm trọng điểm CNSH – Thú Y cụm – khoa Thú Y – Học viện nông nghiệp Việt Nam Cuối xin gửi lời cảm ơn tới người thân gia đình ln quan tâm, động viên giúp tơi hồn thành luận văn Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Trần Thị Thu Trang ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN ix THESIS ABSTRACT xi PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 1.3 Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU BỆNH TRÊN THẾ GIỚI VÀ TRONG NƯỚC 2.1.1 Tình hình nghiên cứu giới 2.1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh vi khuẩn ORT nước 2.2 THIỆT HẠI VỀ KINH TẾ 2.3 CĂN BỆNH 2.3.1 Phân loại 2.3.2 Hình thái cấu trúc vi khuẩn 2.3.3 Tính chất nuôi cấy 2.3.4 Cấu trúc kháng nguyên độc lực 2.3.5 Định serotype phân loại chủng 2.3.6 Khả gây bệnh 2.3.7 Khả miễn dịch vật chủ 2.3.8 Sức đề kháng 2.4 TRUYỀN NHIỄM HỌC 2.4.1 Phân bố dịch bệnh 2.4.2 Động vật mắc bệnh 10 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.4.3 Lứa tuổi mắc bệnh tỷ lệ chết 10 2.4.4 Phương thức chăn nuôi 10 2.4.5 Chất chứa mầm bệnh 11 2.4.6 Sự truyền lây 11 2.4.7 Mùa vụ mắc bệnh 11 2.5 TRIỆU CHỨNG VÀ BỆNH TÍCH 12 2.5.1 Triệu chứng 12 2.5.2 Bệnh tích 12 2.6 CHẨN ĐOÁN 13 2.6.1 Chẩn đoán lâm sàng 13 2.6.2 Chẩn đoán vi khuẩn học 14 2.6.3 Chẩn đoán phân biệt 15 2.7 BIỆN PHÁP PHÒNG VÀ TRỊ BỆNH 16 2.7.1 Phòng bệnh 16 2.7.2 Điều trị 16 2.8 NGUỒN GỐC, ĐẶC TÍNH VÀ TÍNH NĂNG SẢN XUẤT CỦA GÀ LƯƠNG PHƯỢNG 17 PHẦN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 3.1 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 18 3.2 THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 18 3.3 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 18 3.4 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 18 3.5 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 3.5.1 Phương pháp nghiên cứu dịch tễ 18 3.5.2 Phương pháp chẩn đoán lâm sàng 18 3.5.3 Phương pháp mổ khám 18 3.5.4 Phương pháp lấy mẫu bảo quản mẫu làm tiêu 19 3.5.5 Phương pháp PCR 19 3.5.6 Phương pháp nuôi cấy phân lập vi khuẩn 22 3.5.7 Phương pháp thử đặc tính sinh hóa 22 3.5.8 Phương pháp kháng sinh đồ 22 3.5.9 Phương pháp phân tích xử lý số liệu 23 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.6 NGUYÊN LIỆU NGHIÊN CỨU 24 3.6.1 Mẫu bệnh phẩm 24 3.6.2 Máy móc 24 3.6.3 Dụng cụ 24 3.6.4 Hóa chất 24 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 4.1 ĐÁNH GIÁ TÌNH HÌNH CHĂN NI GIA CẦM CỦA CÁC HUYỆN TẠI TỈNH BẮC NINH QUA CÁC NĂM 25 4.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ CỦA BỆNH ORT TRÊN ĐÀN GÀ LƯƠNG PHƯỢNG 26 4.2.1 Tình hình gà mắc bệnh ORT theo lứa tuổi 26 4.2.2 Tình hình gà mắc bệnh ORT theo mùa vụ 28 4.2.3 Tình hình gà mắc bệnh ORT theo truyền thống chăn nuôi 30 4.2.4 Tình hình gà mắc bệnh ORT theo phương thức chăn nuôi 32 4.3 CHẨN ĐOÁN GÀ MẮC BỆNH ORT 34 4.3.1 Chẩn đoán lâm sàng đàn gà mắc ORT 34 4.3.2 Chẩn đoán vi khuẩn học 40 4.4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU TÍNH MẪN CẢM VỚI MỘT SỐ KHÁNG SINH CỦA ORT 45 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 5.1 KẾT LUẬN 48 5.1.1 Đánh giá tình hình chăn ni gia cầm huyện tỉnh Bắc Ninh 48 5.1.2 Đặc điểm dịch tễ đàn gà mắc bệnh ORT gà Lương Phượng tỉnh Bắc Ninh 48 5.1.3 Chẩn đoán gà mắc bệnh ORT gà Lương Phượng 48 5.1.4 Kết nghiên cứu tính mẫn cảm với số kháng sinh ORT 49 5.2 KIẾN NGHỊ 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt AGP Accelerated Graphics PORT BEAs Boiled Extract Antigens BHB Brain Heart Infusion Broth CBA Columbia Blood agar Base CRD Chronic Respiratory Disease DNA Deoxyribonucleic Acid ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay GAP Agar Gel Precipitation IB Infectious Bronchitis ILT Infectious Laryngo Tracheitis IgM Immunoglobulin M ORT Ornithobacterium rhinotracheale PAP Peroxidase - Anti Peroxidase PB Pasteurella Broth PBS Phosphate Saline Buffer PCR Polymerase Chain Reaction PGNR Pleomorphic Gram Negative Rod Rrna Ribosomal Ribonucleic Acide TBE Tris-borate-EDTA vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Serotyping O rhinotracheale thử nghiệm AGP khác biệt O.rhinotracheale với vi khuẩn gram âm khác phương pháp ELISA Bảng 2.2 Chẩn đoán phân biệt ORT với bệnh thường gặp 15 Bảng 3.1 Tiêu chuẩn nhà cung cấp giấy tẩm kháng sinh 23 Bảng 4.1 Tình hình phát triển gia cầm huyện quí I + II địa bàn tỉnh Bắc Ninh qua năm 26 Bảng 4.2 Tình hình mắc bệnh ORT theo lứa tuổi gà Lương Phượng tỉnh Bắc Ninh .27 Bảng 4.3 Tình hình gà Lương Phượng mắc bệnh ORT theo mùa vụ tỉnh Bắc Ninh .29 Bảng 4.4 Tình hình mắc bệnh ORT theo thâm niên chăn nuôi 31 Bảng 4.5 Tình hình gà Lương Phượng mắc bệnh ORT theo phương thức chăn nuôi 32 Bảng 4.6 Kết thu thập gà mắc bệnh ORT số huyện địa bàn tỉnh Bắc Ninh 34 Bảng 4.7 Triệu chứng lâm sàng gà mắc ORT 38 Bảng 4.8 Kết mổ khám kiểm tra bệnh tích đại thể gà 37 mắc bệnh ORT (n = 50) 37 Bảng 4.9 Kết phân lập chủng vi khuẩn ORT thu thập gà Lương Phượng tỉnh Bắc Ninh 41 Bảng 4.10 Kết số đặc tính sinh hóa vi khuẩn ORT 42 Bảng 4.11 Kết phản ứng PCR mẫu bệnh phẩm chẩn đoán bệnh ORT 45 Bảng 4.12 Kết kiểm tra tính mẫn cảm vi khuẩn ORT loại kháng sinh 46 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hình ảnh nhuộm Gram, vi khuẩn ORT bắt màu đỏ Hình 2.2 Hình ảnh mơi trường thạch máu Hình 4.1 Tình hình gà mắc bệnh ORT theo lứa tuổi 28 Hình 4.2 Tình hình gà mắc bệnh ORT theo mùa vụ 30 Hình 4.3 Tình hình mắc bệnh ORT theo truyền thống chăn ni 31 Hình 4.4 Tình hình gà mắc bệnh ORT theo phương thức chăn nuôi 33 Hình 4.5 Gà chảy dịch mắt, miệng Error! Bookmark not defined Hình 4.6 Gà khó thở, há mồm để thở Error! Bookmark not defined Hình 4.7 Phân lỗng Error! Bookmark not defined Hình 4.8 Trứng méo mó, sần sùi, vỏ trứng mỏng Error! Bookmark not defined Hình 4.9 Khí quản xuất huyết, có dịch nhày 38 Hình 4.10 Phổi viêm có mủ nhánh phế quản 38 Hình 4.11 Phổi viêm 39 Hình 4.12 Túi khí dày, mờ đục, có bã đậu Error! Bookmark not defined Hình 4.13 Xoang bao tim tích nước Error! Bookmark not defined Hình 4.14 Khuẩn lạc ORT nuôi cấy môi trường thạch máu sau 48 40 Hình 4.15 Kết kiểm tra phản ứng Catalaza vi khuẩn ORTError! Bookmark not defined Hình 4.16 Kết kiểm tra phản ứng Oxidase vi khuẩn ORTError! Bookmark not defined Hình 4.17 Kết kiểm tra phản ứng Indol vi khuẩn ORTError! Bookmark not defined Hình 4.18 Hình thái vi khuẩn ORT kính hiển vi Error! Bookmark not defined Hình 4.19 Kiểm tra sản phẩm PCR vi khuẩn ORT .44 Hình 4.20 Kết kiểm tra tính mẫn cảm vi khuẩn ORT loại kháng sinh thạch 47 viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Trần Thị Thu Trang Tên luận văn: “Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ bệnh vi khuẩn Ornithobacterium rhinotracheale gà Lương Phượng chẩn đoán bệnh” Ngành: Thú Y Mã số: 24150420 Tên sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Xác định số đặc điểm dịch tễ gà mắc bệnh ORT như: Lứa tuổi mắc bệnh, mùa vụ, phương thức chăn nuôi, phương thức truyền lây bệnh Nghiên cứu xây dựng phương pháp chẩn đoán bệnh làm sở cho phương pháp điều trị bệnh đạt hiệu cao Phương pháp nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Đánh giá tình hình chăn ni huyện địa bàn tỉnh Bắc Ninh Nghiên cứu dịch tễ học bệnh suy giảm hô hấp vi khuẩn ORT: Xác định lứa tuổi mắc bệnh, mùa vụ, tỷ lệ mắc bệnh, tỷ lệ chết Chẩn đoán bệnh lâm sàng chẩn đốn dựa vào phịng thí nghiệm Tính mẫn cảm chủng ORT phân lập với kháng sinh Phương pháp Phương pháp nghiên cứu dịch tễ; Phương pháp chẩn đoán lâm sang; Phương pháp mổ khám; Phương pháp lấy mẫu bảo quản mẫu làm tiêu bản; Phương pháp PCR; Phương pháp nuôi cấy phân lập vi khuẩn; Phương pháp thử đặc tính sinh hóa; Phương pháp kháng sinh đồ Kết kết luận Đánh giá tình hình chăn ni gia cầm huyện tỉnh Bắc Ninh ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình 4.13 Xoang bao tim tích nước Ngồi cịn có số biểu quan sát như: Gan sưng, có tượng xuất huyết điểm chiếm 36% số gà quan sát được, lách xuất huyết to bình thường chiếm 24% Viêm khớp với tỷ lệ 16% tuyến tụy xuất huyết, quan sát thấy có 21/50 có bệnh tích chiếm 42% 4.3.2 Chẩn đoán vi khuẩn học Sau quan sát triệu chứng lâm sàng, tiến hành mổ khám, lấy mẫu bệnh phẩm nuôi cấy môi trường thạch máu Colombia Blood Agar (có bổ sung 5% máu thỏ 10µl/ml Gentamycin), điều kiện 37ºC, CO 5%, thời gian 48 - 72h để kiểm tra có mặt vi khuẩn ORT thể gà nghi mắc bệnh Kết nuôi cấy hiển thị hình 4.14 Hình 4.14 Khuẩn lạc ORT ni cấy môi trường thạch máu sau 48 40 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Quan sát chọn khuẩn lạc có đặc điểm hình 4.13: khuẩn lạc nhỏ, không dung huyết xung quanh, màu xám tới xám trắng đơi có màu đỏ, khuẩn lạc có mặt lồi rìa rõ ràng Ở lần ni cấy đầu tiên, khuẩn lạc có kích thước lớn khoảng – mm sau khoảng 48 sau nuôi cấy lần sau thường khuẩn lạc nhỏ biến dạng không đồng Kết phù hợp với nghiên cứu công bố Võ Thị Trà An cs (2014) Tiến hành phân lập vi khuẩn từ 50 gà Lương Phượng lứa tuổi có triệu chứng điển hình ORT thu thập hộ chăn nuôi địa bàn tỉnh Bắc Ninh Gà nghi mắc ORT đưa phịng thí nghiệm trọng điểm công nghệ sinh học Thú Y để tiến hành phân lập vi khuẩn Bằng phương pháp lấy mẫu nuôi cấy, kết thu sau 24 – 72 ni tủ ấm 37ºC trình bày bảng 4.9 Bảng 4.9 Kết phân lập chủng vi khuẩn ORT thu thập gà Lương Phượng tỉnh Bắc Ninh Mẫu Số mẫu Tỷ lệ dương tính (%) 78 19 24,36 15 45 20,00 27 22,22 50 150 34 22,67 STT Nhóm gà – tuần tuổi 26 Gà thịt Gà đẻ Số phân lập bệnh phẩm Ghi chú: gà lấy loại mẫu bệnh phẩm: dịch khí quản, phổi túi khí Thơng qua bảng 4.9 cho thấy: Trong tổng số 150 mẫu lựa chọn phân lập (mỗi lựa chọn quan/ phận: Khí quản, túi khí, phổi) có 34 mẫu cho kết dương tính, chiếm tỷ lệ 22,67% Trong đó: gà – tuần tuổi tỷ lệ cao với 24,36% (19 mẫu dương tính tổng số 78 mẫu phân lập) Tiếp theo gà đẻ với mẫu dương tính tổng số 27 mẫu phân lập chiếm 22,22% Gà thịt có tỷ lệ số mẫu dương tính thấp khoảng 20% (9 mẫu dương tính tổng số 45 mẫu phân lập) Sau tiến hành ni cấy, phân lập ORT mơi trường thích hợp, tiến hành giám định số đặc tính sinh hóa Mỗi loại vi khuẩn có đặc tính sinh học khác như: đặc tính sinh hóa, tính chất chuyển hóa loại đường, khả sinh sản hợp chất sinh học trung gian trình trao đổi chất vào môi trường nuôi cấy 41 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Từ kết nuôi cấy chọn khuẩn lạc đặc trưng để kiểm tra số phản ứng sinh hóa (Catalase, Oxidase, Indol), kết thể thông qua bảng 4.10 Bảng 4.10 Kết số đặc tính sinh hóa vi khuẩn ORT Catalase Hiện tượng Kết Oxidase Xuất màu tím Khơng có tượng sủi bọt đen giấy đổi màu (màu xanh) - + Indol Không xuất vòng tròn đỏ - Kết nghiên cứu cho thấy 100% số mẫu tiến hành giám định đặc tính sinh hóa cho kết trùng khớp với kết nghiên cứu trước Charlton et al (1993), Hafez (1996) với Catalase (-), Indol (-), Oxidase (+) Trong q trình tiến hành thí nghiệm số hình ảnh tương ứng với kết nhận hình 4.15, 4.16 4.17 Hình 4.15 Kết kiểm tra phản ứng Catalaza vi khuẩn ORT ORT-Catalaza (-) Hình 4.16 Kết kiểm tra phản ứng Oxidase vi khuẩn ORT ORT- Oxidase (-) 42 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình 4.17 Kết kiểm tra phản ứng Indol vi khuẩn ORT ORT- Indol (-) Thơng qua hình 4.15, 4.16 4.17 nhận thấy với khuẩn lạc vi khuẩn ORT cho kết phản ứng Catalase âm tính, điều chứng tỏ vi khuẩn ORT khơng có men Catalase nên chúng khơng có khả phân hủy H2O2 tạo thành H2O O2 phản ứng khơng có bọt Ở phản ứng Oxidase dương tính chuyển thành màu tím than Kết phù hợp với nghiên cứu trước (Hafez HM and Mohammed Zahra, 2002) Để thử phản ứng Indol, chọn khuẩn lạc điển hình cấy vào mơi trường trypton ủ 37oC, 5% CO2 24 giờ, sau nhỏ thuốc thử Indol vào cho kết âm tính (khơng xuất vòng tròn màu hồng cánh sen) Kết phù hợp với nghiên cứu trước (Amonsin et al., 1997) Sau thử phản ứng sinh hóa cho kết xác định vi khuẩn ORT, tiến hành chọn khuẩn lạc vị trí đánh dấu, sau tiến hành nhuộm gram theo quy trình hướng dẫn nhà sản xuất để xác định hình thái chủng vi khuẩn ORT phân lập hộ chăn nuôi tỉnh Bắc Ninh Kết thu thể thơng qua hình 4.18 43 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình 4.18 Hình thái vi khuẩn ORT kính hiển vi Kết hình 4.18 cho thấy: Vi khuẩn ORT phân lập gram âm (bắt màu đỏ) đa dạng kiểm tra kính hiển vi Từ kết trên, chúng tơi tiến hành xác định xác diện ORT số mẫu phân lập cho kết dương tính, tách chiết DNA vi khuẩn ORT tiến hành thực phản ứng PCR để kiểm tra có hay khơng có DNA vi khuẩn ORT canh khuẩn Kết phản ứng PCR thể thơng qua hình 4.19 Hình 4.19 Kiểm tra sản phẩm PCR vi khuẩn ORT Kết thể thông qua bảng 4.11 44 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng 4.11 Kết phản ứng PCR mẫu bệnh phẩm chẩn đoán bệnh ORT STT Cơ quan Số Kết lượng Dương tính Tỷ lệ Âm tính Tỷ lệ Dịch khí quản 12 10 83,33 16,67 Phổi 17 15 88,24 11,76 Túi khí 60,00 40,00 Kết hình 4.19 cho thấy: đối chứng dương lên vạch cho sản phẩm PCR nhỏ 800bp (khoảng 784bp thiết kế cặp mồi đặc hiệu) Đối chứng âm không lên vạch thiết kế cặp mồi đặc hiệu; chứng tỏ phản ứng đặc hiệu, cho độ tin cậy cao trình phân tích đánh giá kết Các mẫu cần kiểm tra lên vạch, cho sản phẩm PCR nhỏ 800bp (khoảng 784bp) Như mẫu có chứa DNA vi khuẩn ORT Qua bảng 4.11 cho thấy: mẫu bệnh phẩm lấy để chẩn đoán ORT mẫu phổi dịch khí quản, túi khí gà có triệu chứng lâm sàng để khẳng định có mặt vi khuẩn ORT mẫu tiến hành nghiên cứu Điều chứng tỏ, vi khuẩn ORT tồn chủ yếu đường hơ hấp gà Trong đó, dịch khí quản phổi nơi trú ngụ nhiều vi khuẩn ORT 4.4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU TÍNH MẪN CẢM VỚI MỘT SỐ KHÁNG SINH CỦA ORT ORT bệnh gây thiệt hại nghiêm trọng cho người chăn ni, đó, việc điều trị bệnh ORT gặp nhiều khó khăn, vi sinh vật nhanh nhờn thuốc nên việc nghiên cứu tính mẫn cảm với số kháng sinh ORT cần thiết Từ kết chọn loại kháng sinh mà vi khuẩn ORT mẫn cảm để điều trị bệnh không chọn kháng sinh mà vi khuẩn ORT kháng Có nhiều cách để đánh giá mẫn cảm vi khuẩn ORT với thuốc kháng sinh có phương pháp kháng sinh đồ kỹ thuật khoanh giấy khuyếch tán dựa theo nguyên lý Kirby – Bauer kỹ thuật phổ biến Đo đường kính vịng vô khuẩn, đem so với bảng tiêu chuẩn đánh giá mức độ mẫn cảm kháng kháng sinh theo nhà sản xuất giấy thử kháng sinh 45 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Trong nghiên cứu tiến hành kiểm tra tính mẫn cảm vi khuẩn ORT phân lập trước với loại kháng sinh khác kết trình bày hình bảng 4.12 Bảng 4.12 Kết kiểm tra tính mẫn cảm vi khuẩn ORT loại kháng sinh Kết Số STT Loại kháng sinh kiểm Số mẫn Tỷ lệ Số Tỷ lệ tra cảm (%) kháng (%) Amoxicillin/Clavulanic acid 9 100,00 0,00 Ampicillin 88,89 11,11 Tetracycline 9 100,00 0,00 Erythromycine 55,56 44,45 Sulphamethaxazol/ 00,00 100,00 Trimethoprime Lincomycine 0,00 100,00 Doxycycline 0,00 100,00 Kết bảng 4.12 cho ta thấy: Trong tổng số mẫu ORT phân lập kiểm tra, mức độ mẫn cảm với loại kháng sinh Amoxicillin/Clavulanic acid Tetracycline chiếm tỷ lệ 100% (9/9 mẫu); kết phù hợp với nghiên cứu trước Võ Thị Trà An cs (2014) Sau loại kháng sinh Ampicillin có độ mẫn cảm chiếm chiếm tỷ lệ 88,89% (8/9 mẫu) Erythromycine loại kháng sinh chuyên điều trị bệnh đường hô hấp kiểm tra với vi khuẩn ORT tỷ lệ mẫn cảm với thuốc giảm xuống 55,56% (5/9 mẫu) Còn loại kháng sinh Sulphamethoxazol/Trimethoprime, Lincomycine Doxycycline có tỷ lệ mẫn cảm thấp (0%) Hiện tượng giải thích sau: loại kháng sinh sử dụng thường xuyên thời gian dài trại nói chung hộ gia đình nói riêng để điều trị bệnh nhiễm khuẩn nói chung gây Vì vậy, gây tượng kháng thuốc chủng vi khuẩn kiểm tra chủng vi khuẩn kiểm tra thu nạp plasmid kháng thuốc tượng truyền ngang loài vi khuẩn khác gây nên 46 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình 4.20 Kết kiểm tra tính mẫn cảm vi khuẩn ORT loại kháng sinh thạch 1) Kháng sinh Sulphamethaxazol/Trimethoprime; 2) Amoxicillin/Clavulanic acid; 3) Ampicillin; 4) Tetracycline; 5) Lincomycine; 6) Doxycycline 7) Erythromycin Tuy nhiên vấn đề kháng kháng sinh trở thành hiểm họa lớn nhân loại Nếu chúng ta, người chăn nuôi, bác sĩ thú y sử dụng kháng sinh cách hợp lý, quy định dễ dàng tạo điều kiện cho vi khuẩn kháng thuốc gây nhiều khó khăn phịng trị kiểm sốt dịch bệnh ORT vi khuẩn việc dùng kháng sinh quan trọng để có hiệu việc điều trị bệnh không gây ảnh hưởng xấu đến người tiêu dùng 47 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN 5.1.1 Đánh giá tình hình chăn ni gia cầm huyện tỉnh Bắc Ninh - Đánh giá tình hình chăn ni tỉnh Bắc Ninh có biến động qua năm - Chăn nuôi gia cầm thành phố Bắc Ninh, huyện Gia Bình, Lương Tài, Thuận Thành, Tiên Du, Từ Sơn huyện, thành phố nhìn chung có số lượng đàn gia cầm phát triển ổn định quý I + II qua năm 5.1.2 Đặc điểm dịch tễ đàn gà mắc bệnh ORT gà Lương Phượng tỉnh Bắc Ninh - Gà giai đoạn – tuần tuổi chiếm tỷ lệ mắc bệnh tỷ lệ chết cao (54,19% 30,48%) Tiếp theo nhóm gà – 20 tuần tuổi thấp nhóm gà 20 tuần tuổi (40,79% 10,53%) - Vụ Đông – Xuân tỷ lệ mắc bệnh chết cao (53,77% 26,27%) Tỷ lệ mắc bệnh tỷ lệ chết Xuân - Hè thấp (43,27% 18,75%) - Đối với hộ có thâm niên chăn ni từ – năm, tỷ lệ mắc bệnh tỷ lệ chết cao (59,90% 27,25%) Hộ chăn nuôi có thâm niên lâu năm từ 11 – 15 năm có tỷ lệ mắc bệnh tỷ lệ chết thấp (38,38% 19,72%) - Đối với phương thức nuôi gà thả vườn, tỷ lệ mắc tỷ lệ chết thấp (40,63% 13,64%) Phương thức ni nhốt có tỷ lệ mắc tỷ lệ chết cao (57,47% 31,90%) 5.1.3 Chẩn đoán gà mắc bệnh ORT gà Lương Phượng - Triệu chứng, bệnh tích chủ yếu gà mắc bệnh suy giảm hô hấp vi khuẩn ORT sốt, khó thở, há miệng lên để thở, ủ rũ, giảm ăn bỏ ăn, diều tích nhiều nước, phân lỗng, mặt sưng, phù, miệng mũi có chảy dịch nhày - Các tổn thương đại thể thường gặp quan gà mắc bệnh suy giảm hơ hấp vi khuẩn ORT: khí quản xuất huyết có dịch nhày, lịng khí quản có bã đậu, ngã ba khí quản xuất bã đậu, phổi viêm có mủ tơ huyết, túi khí viêm dày mờ đục, có dịch tiết màu trắng giống màu sữa chua Bệnh suy giảm hô hấp vi khuẩn ORT tập trung chủ yếu quan đường hơ hấp phổi, khí quản, túi khí… giai đoan gà từ – tuần tuổi 48 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com - Các chủng ORT phân lập có đặc điểm: khuẩn lạc nhỏ, không dung huyết xung quanh, màu xám tới xám trắng, bờ mặt lồi với bờ rìa rõ ràng Vi khuẩn Gram âm, bắt màu đỏ Oxidase dương tính, Catalase Indol âm tính Các chủng vi khuẩn ORT phân lập được khẳng định phản ứng PCR, sản phẩm có độ dài 784 bp 5.1.4 Kết nghiên cứu tính mẫn cảm với số kháng sinh ORT Kết kiểm tra tính mẫn cảm số loại kháng sinh: ORT mẫn cảm với Amoxciciclline, Tetracyclline Ampiciclline dùng loại kháng sinh điều trị bệnh ORT gây gia cầm 5.2 KIẾN NGHỊ - Bệnh ORT bệnh mới, xảy đường hơ hấp Bệnh có số triệu chứng giống với bệnh khác viêm khí quản truyền nhiễm, CRD… nên thường xảy nhầm lẫn Vì vậy, cần có nghiên cứu sâu tượng đồng nhiễm, số bệnh kế phát, từ đưa biện pháp chẩn đốn phân biệt hữu hiệu giúp người chăn ni q trình phịng chữa bệnh đàn gà - Hiện giới có nghiên cứu thử nghiệm chủng vacxin phòng bệnh chưa sử dụng lưu hành Ở Việt Nam cần có nghiên cứu chuyên sâu vi khuẩn ORT làm sở cho việc sản xuất vacxin - Hiện tượng lạm dụng kháng sinh toàn giới trọng Đặc biệt, Việt Nam, tình trạng sử dụng kháng sinh phổ biến Vì vậy, cần có sách nghiêm ngặt công tác sử dụng kháng sinh thuốc thú y 49 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: Nguyễn Thị Lan, Nguyễn Vũ Sơn, Nguyễn Hữu Nam, Nguyễn Thị Hoa Lê Văn Năm (2014) Bệnh Orninobacterium rhinotracheale (ORT) gà thơng tin để chẩn đốn, phịng trị bệnh (bài tổng hợp) Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, 21(5) tr 77- 83 Võ Thị Trà, An Nguyễn Thị Bích Liên, Trần Thị Ngọc Hân, Hồ Quang Dũng Niwwat Chansiripornchai (2014) Nhận dạng, phân lập xác định mước độ mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn Orninobacterium rhinotracheale gà Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, 21(7) tr 23-27 Tiếng Anh: Amonsin A., J F Wellehan, L L Li, P Vandamme, C Lindeman, M Edman, R A Robinson and V Kapur (1997) Molecular epidemiology of Ornithobacterium rhinotracheale J Clin Microbiol 35(11) pp 2894-2898 Asadpour Y., M H Bozorgmehrifard, S A Pourbakhsh, M Banani and S Charkhkar (2008) Isolation and identification of Ornithobacterium rhinotracheale in broiler breeder flocks of Guilan province, north of Iran Pak J Biol Sci 11(11) pp 1487-1491 Back A., D Halvorson, G Rajashekara and K V Nagaraja (1998) Development of a serum plate agglutination test to detect antibodies to Ornithobacterium rhinotracheale J Vet Diagn Invest 10(1) pp 84-86 Bisschop S P., M van Vuuren and B Gummow (2004) The use of a bacterin vaccine in broiler breeders for the control of Ornithobacterium rhinotracheale in commercial broilers J S Afr Vet Assoc 75(3) pp 125-128 Bock R., P Fewidlin, S Tomer, M Manoim, A Inbar, A Frommar, P Vandamme, P Wilding and D Hickson (1995) Orithobacterium rhinotracheale (ORT) associater with a new turkry respiratory tract infectious agent Proe 33 rd Annual Convention of the Israel Branch of the World Veterinary Association pp 43-45 Bock R., P Freidlin, M Manoim, A Inbar, A Frommer, P Vandamme and P Wilding (1997) Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) associated with a new turkey respiratory tract infectious agent in Israel Proc 11 th Int Cong World Vet Poult Assoc., Budapest 120 50 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Canal C W., J A Leao, D J Ferreira, M Macagnan, C T Pippi Salle and A Back (2003) Prevalence of antibodies against Ornithobacterium rhinotracheale in broilers and breeders in Southern Brazil Avian Dis 47(3) pp 731-737 10 Canal C W., J A Leao, S L Rocha, M Macagnan, C A Lima-Rosa, S D Oliveira and A Back (2005) Isolation and characterization of Ornithobacterium rhinotracheale from chickens in Brazil Res Vet Sci 78(3) pp 225-230 11 Chansiripornchai N (2014) Molecular Interaction of Ornithobacterium rhinotracheale with Eukaryotic Cells Netherlands, Utrecht University 12 Charlton B R., S E Channing-Santiago, A A Bickford, C J Cardona, R P Chin, G L Cooper, R Droual, J S Jeffrey, C U Meteyer, H L Shivaprasad and et al (1993) Preliminary characterization of a pleomorphic gram-negative rod associated with avian respiratory disease J Vet Diagn Invest 5(1) pp 47-51 13 Chin R.P, Van Empel P.C.M and Hafez H.M (2008) In: Diseases of Poultry 12 Saif YM, editor Ames, IA: Blackwell Publishing; 2008 Ornithobacterium rhinotracheale infection; pp 765–74 14 De Rosa M., R Droual, R P Chin, H L Shivaprasad and R L Walker (1996) Ornithobacterium rhinotracheale infection in turkey breeders Avian Dis 40(4) pp 865-874 15 Devriese L A., J Hommez, P Vandamme, K Kersters and F Haesebrouck (1995) In vitro antibiotic sensitivity of Ornithobacterium rhinotracheale strains from poultry and wild birds Vet Rec 137(17) pp 435-436 16 Hafez H M (1996) Current status on the role of Orithobacterium rhinotracheale (ORT) in respiratory disease complexes in poultry Arch Gefluă gelkd 60 pp 208-211 17 Hafez HM and Mohammed Zahra (2002) Diagnosis of Ornithobacterium rhinotracheale Institute of Poultry Diseases, Free University berlin Koserstr.21; 14.195 Berlin Germany, International of Poultry Science 1(5):114 - 118 18 Hafez H M and M Lierz (2010) Ornithobacterium rhinotracheale in nestling falcons Avian Dis 54(1) pp 161-163 19 Hafez H M and R Sting (1999) Investigations on different Ornithobacterium rhinotracheale "ORT" isolates Avian Dis 43(1) pp 1-7 20 Hinz KH and Hafez HM (1997) The early history of Ornithobacterium rhinotracheale (ORT), Arch Geflu gelkd 61: 95 - 96 51 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 21 Hinz K H., C Blome and M Ryll (1994) Acute exudative pneumonia and airsacculitis associated with Ornithobacterium rhinotracheale in turkeys Vet Rec 135(10) pp 233-234 22 Hung A L and A Alvarado (2001) Phenotypic and molecular characterization of isolates of Ornithobacterium rhinotracheale from Peru Avian Dis 45(4) pp 999-1005 23 Joubert P., R Higgins, A Laperle, I Mikaelian, D Venne and A Silim (1999) Isolation of ornithobacterium rhinotracheale from turkeys in Quebec, Canada Avian Dis 43(3) pp 622-626 24 Karrimi V., M Hassanzadeh, N Fallah and I Ashrafi (2010) Molecular characterization of Ornithobacterium rhinotracheale isolated from broiler chicken flocks in Iran Turk J Vet Anim Sci., 34(4) pp 526 – 530 25 Leroy-Setrin S., G Flaujac, K Thenaisy and E Chaslus-Dancla (1998) Genetic diversity of Ornithobacterium rhinotracheale strains isolated from poultry in France Lett Appl Microbiol 26(3) pp 189-193 26 Marien M., H Nauwynck, L Duchateau, A Martel, K Chiers, L Devriese, R Froyman and A Decostere (2006) Comparison of the efficacy of four antimicrobial treatment schemes against experimental Ornithobacterium rhinotracheale infection in turkey poults pre-infected with avian pneumovirus Avian Pathol 35(3) pp 230-237 27 Moreno B., G Chacon, A Villa, A Fernandez, A I Vela, J F FernandezGarayzabal, S Ferre and E Gracia (2009) Nervous signs associated with otitis and cranial osteomyelitis and with Ornithobacterium rhinotracheale infection in redlegged partridges (Alectoris rufa) Avian Pathol 38(5) pp 341-347 28 Odor E M., M Salem, C R Pope, B Sample, M Primm, K Vance and M Murphy (1997) Isolation and identification of Ornithobacterium rhinotracheale from commercial broiler flocks on the Delmarva peninsula Avian Dis 41(1) pp 257-260 29 Page´s A., A Foix, R March and C Artigas (1995) Estudio bacteriolo´ gico de un agente asociado a problemas respiratorios en aves de producci’on: Ornithobacterium rhinotracheale Medicina Veterinaria, 12, 585 - 588 30 Pan Q., A Liu, F Zhang, Y Ling, C Ou, N Hou and C He (2012) Co-infection of broilers with Ornithobacteriumrhinotracheale and H9N2 avian influenza virus BMC Vet Res., 8: 104 52 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 31 Saif Y M., H.J Barnes, J.R Glisson, A.M Fadly, L.R McDougald and D E S (Eds.) (2003) Diseases of Poultry, 11th edn (pp 683 690) Ames: Iowa State Press 32 Schuijffel D F., P C Van Empel, R P Segers, J P Van Putten and P J Nuijten (2006) Vaccine potential of recombinant Ornithobacterium rhinotracheale antigens Vaccine 24(11) pp 1858-1867 33 Soriano V E., M G Longinos, P G Navarrete and R P Fernandez (2002) Identification and characterization of Ornithobacterium rhinotracheale isolates from Mexico Avian Dis 46(3) pp 686-690 34 Sprenger S J., A Back, D P Shaw, K V Nagaraja, D C Roepke and D A Halvorson (1998) Ornithobacterium rhinotracheale infection in turkeys: experimental reproduction of the disease Avian Dis 42(1) pp 154-161 35 Tabatabai L B., M K Zimmerli, E S Zehr, R E Briggs and F M Tatum (2010) Ornithobacterium rhinotracheale North American field isolates express a hemolysin-like protein Avian Dis 54(3) pp 994-1001 36 Travers A F., L Coetzee and B Gummow (1996) Pathogenicity differences between South African isolates of Ornithobacterium rhinotracheale Onderstepoort J Vet Res 63(3) pp 197-207 37 Tsai H J and C W Huang (2006) Phenotypic and molecular characterization of isolates of Ornithobacterium rhinotracheale from chickens and pigeons in Taiwan Avian Dis 50(4) pp 502-507 38 Van Beek P N G M., P C M Van Empel, G Van den Bosch, P K Storm, G H Bongers and J H Du Preez (1994) Ademhalingsproble men, groeivertraging en gewrichtsontsteking bij kalkoenen en vleeskuikens door een pasteurella-achtige bacterie: Ornithobacterium rhinotracheale of Taxon 28 Tijdschrift voor Diergeneeskunde , 119, pp 99–101 39 van Empel P C and H M Hafez (1999) Ornithobacterium rhinotracheale: A review Avian Pathol 28(3) pp 217-227 40 van Veen L., E Gruys, K Frik and P van Empel (2000) Increased condemnation of broilers associated with Ornithobacterium rhinotracheale Vet Rec 147(15) pp 422-423 41 Vandamme P., P Segers, M Vancanneyt, K van Hove, R Mutters, J Hommez, F Dewhirst, B Paster, K Kersters, E Falsen and et al (1994) Ornithobacterium rhinotracheale gen nov., sp nov., isolated from the avian respiratory tract International Journal of Systematic Bacteriology 44(1) pp 24-37 53 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 42 Varga J., L Fodor and L Makrai (2001) Characterisation of some Ornithobacterium rhinotracheale strains and examination of their transmission via eggs Acta Vet Hung 49(2) pp 125-130 43 Walters J., R Evans, T LeRoith, N Sriranganathan, A McElroy and F W Pierson (2014) Experimental comparison of hemolytic and nonhemolytic Ornithobacterium rhinotracheale field isolates in vivo Avian Dis 58(1) pp 78-82 44 Wyffels R and J Hommez (1990) Pasteurella anatipestifer isolated from respiratory lesions in partridges kept in captivity (Perdix perdix) Vlaams Diergeneeskundig Tijdschrift, 59 pp 105-106 45 Zahra M., Ferreri M., Alkasir R., Yin J., Han B., Su J (2013) Isolation and characterization of small-colony variants of Ornithobacterium rhinotracheale J Clin Microbiol., 51(10) pp 3228-3236 54 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... số đặc điểm dịch tễ bệnh vi khuẩn Ornithobacterium rhinotracheale gà Lương Phượng chẩn đoán bệnh? ?? Ngành: Thú Y Mã số: 24150420 Tên sở đào tạo: Học vi? ??n Nơng nghiệp Vi? ??t Nam Mục đích nghiên cứu. .. rõ bệnh vi khuẩn có phương pháp chẩn đốn bệnh xác, tìm biện pháp phịng chống bệnh hiệu Chúng tơi thực đề tài: ? ?Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ bệnh vi khuẩn Ornithobacterium rhinotracheale gà Lương. .. pháp chẩn đoán bệnh làm sở cho phương pháp điều trị bệnh đạt hiệu cao 1.3 Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI Kết nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ chẩn đoán bệnh ORT sở bước đầu cho nghiên cứu