(TIỂU LUẬN) báo cáo môn học THỰC tập DI TRUYỀN QUAN sát tế bào BACILLUS SUBTILIS và SACCHAROMYCES CEREVISIAE, đo KÍCH THƯỚC VI SINH vật BẰNG TRẮC VI vật

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA SINH HỌC – CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO MÔN HỌC THỰC TẬP DI TRUYỀN NHÓM 13 CA NGUYỄN THÀNH TRUNG MSSV: 1718340 NGUYỄN PHAN ANH TÚ MSSV: 1718345 NGUYỄN LÊ ANH TUẤN MSSV: 1718346 THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, THÁNG 11 NĂM 2019 THỰC TẬP DI TRUYỀN - NHÓM 13 Nguyễn Thành Trung 1718340 Nguyễn Phan Anh Tú 1718345 Nguyễn Lê Anh Tuấn 1718346 MỤC LỤC BUỔI QUAN SÁT TẾ BÀO BACILLUS SUBTILIS VÀ SACCHAROMYCES CEREVISIAE, ĐO KÍCH THƯỚC VI SINH VẬT BẰNG TRẮC VI VẬT KÍNH VÀ TRẮC VI THỊ KÍNH ĐỊNH LUẬT MEN ĐEN VÀ PHƯƠNG PHÁP CHI BÌNH PHƯƠNG BUỔI HÌNH THÁI NHIỂM SẮC THỂ QUA CÁC KỲ PHÂN BÀO NGUYÊN NHIỄM .7 NUÔI RUỒI VÀ LAI RUỒI GIẤM BUỔI .10 HÌNH THÁI NHIỂM SẮC THỂ QUA CÁC KỲ PHÂN BÀO GIẢM NHIỄM .10 NHIỄM SẮC THỂ KHỔNG LỒ Ở RUỒI GIẤM 12 LAI NẤM LỚN 13 BUỔI .14 CẢM ỨNG VÀ PHÂN LẬP ĐỘT BIẾN KHUYẾT DƯỠNG ƠER NẤM MEN BẰNG TIA UV 14 QUAN SÁT NST NGƯỜI DƯỚI KÍNH HIỂN VI 15 PHỤ LỤC 17 BÀI : SỬ DỤNG PHƯƠNG PHÁP CHI BÌNH PHƯƠNG TRONG PHÂN TÍCH KẾT QUẢ TỈ LỆ NHÓM MÁU 17 BÀI 2: PHÂN TÍCH CÁC ĐẶC ĐIỂM DI TRUYỀN NGƯỜI DỰA VÀO KẾT QUẢ RELP 17 BÀI :BẢN ĐỒ CẮT ENZYME CẮT GIỚI HẠN 19 BÀI : BIỆN LUẬN SỰ ĐA DẠNG VÀ PHÂN NHÓM KIỂU HÌNH KHÁNG KHÁNG SINH VÀ DÃY PH VI KHUẨN TĂNG TRƯỞNG CỦA CÁC CHỦNG LAB ĐƯỢC CHO 20 BUỔI BẢNG PHÂN CÔNG CƠNG VIỆC VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA NHĨM 13 CA Buổi Bài Nhuộm chất nhân Trắc vi thị kính – Trắc vi vật kính Định luật Menden – Phép thử chi bình phương Bài góp Đánh giá QUAN SÁT TẾ BÀO BACILLUS SUBTILIS VÀ SACCHAROMYCES CEREVISIAE, ĐO KÍCH THƯỚC VI SINH VẬT BẰNG TRẮC VI VẬT KÍNH VÀ TRẮC VI THỊ KÍNH a Mục tiêu thí nghiệm Ngun tắc: Fuchsin kiềm chúa gốc kiềm có khả nhuộm màu vùng nhân tế bào Nhuộm quan sát nhân chất vi sinh vật qua kính hiển vi Xác đinh kích thước vùng nhân kích thước tế bào vi sinh vật nhờ sử dụng thước đo trắc vi thị vật kính Trắc vi thị kính b c Đối tượng nghiên cứu Bacilus subtilis Saccharomyces cerevisiae Kết Tỉ lệ trắc vi thị kính trắc vi vật kính 10 - Độ chia nhỏ thị kính= - Đường kính tế bào Saccharomyces cerevisiae là: 4.35 x 1=4.35 µm - Chiều dài tế bào Bacilus subtilis là: 4.35 x 0.5=2.175 µm ĐỊNH LUẬT MEN ĐEN VÀ PHƯƠNG PHÁP CHI BÌNH PHƯƠNG 23 x 10 µm=4.35 µm - Có loại hạt cườm đại diện cho cặp tính trạng khác - Tạo hệ F1: Do bố mẹ chủng nên F1 chắn có KG dị hợp cặp gen nên ta chọn loại gồm màu vào bịch, ta thu F1 - Tạo giao tử F2: Chọn ngẫu nhiên từ bịch hạt từ bịch loại, ta thu F2 theo tính trạng riêng lẻ Sau chọn ngẫu nhiên loại bịnh xem màu sắc tổ hợp, ta thu F2 xét chung cặp tính trạng - Quy ước gen: H: hồng X: xanh Xét riêng cặp tính trạng Xét chung cặp tính trạng H-H Đ-Đ Quan sát (o) Dự kiến ( e ) Sai lệch (d) d bình phương d bình phương/e Chi bình phương Ta có: F=8 P > 0.05 Khác biệt kết quan sát kết dự kiến không đáng kể Kết tổ hợp tuân theo quy luật phân ly độc lập Vậy ta thấy bốc chia hạt cườm cách ngẫu nhiên cho tỉ lệ tương đương với tỉ lệ kiểu gen quy luật phân ly độc lập Mendel 1.637022 -0.36298 0.131753 0.080483 5.008927 BUỔI BẢNG PHÂN CƠNG CƠNG VIỆC VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA NHĨM 13 CA Bài Ngun phân Ni lai ruồi Bài góp Đánh giá HÌNH THÁI NHIỂM SẮC THỂ QUA CÁC KỲ PHÂN BÀO NGUYÊN NHIỄM Interphase Các nhiễm sắt thể dãn xoắn cực tiến hành thực chức tế bào n Prophase Các nhiễm sắc thể bắt đầu đóng xoắn, co ngắn, màng nhân bắt đầu tiêu biế Metaphase Các nhiễm sắc thể xếp thành hàng mặt phẳng xích đạo tế bào Anaphase Các nhiễm sắc thể sợi vô sắc kéo cực tế bào Telophase Các nhiễm sắc thể đến cực tế bào, lúc tế bào bắt đầu hình thành vách ngăn ( thực vật) h NUÔI RUỒI VÀ LAI RUỒI GIẤM a Nuôi ruồi giấm Nhận ống ruồi: Mỗi nhóm: nhận bình ruồi giống thuần: mắt đỏ (1 bình) + mắt trắng (1 bình) + falcon môi trường + falcon không + chổi lông (cọ vẽ nhỏ) Các bước tiến hành:  Cách tạo ruồi trinh: - Đuổi ruồi khỏi bình giống cái: Cho tất ruồi bình giống làm (mẹ) vào ống falcon môi trường (Cách thực hiện: vỗ nhẹ bình giống vào lồng bàn tay cho ruồi khơng cịn bu miệng bình; nhanh tay đặt bình ruồi xuống bàn, mở nút ra; mở nút ống falcon, úp ngược miệng ống falcon mơi trường vào miệng bình), ruồi chuyển động lên ống falcon; nhanh tay đổi chiều ống falcon bình ruồi, vỗ nhẹ đáy falcon vào lồng bàn tay cho ruồi từ bình giống sang ống falcon Ống falcon ruồi để lấy ấu trùng phục vụ cho tách tuyến nước bọt TRong trường hợp, SV khơng thể đuổi tất ruồi qua ống falcon SV mở miệng bình ruồi giống bịch nilon mở miệng, cho phép tất ruồi bay khỏi bình vào bịch nilon (giết ruồi) - Chờ ruồi từ bình giống nở từ kén vịng 12 tiếng (sau nở), gây mê phương pháp đá lạnh (Gây mê đá lạnh: cho ruồi từ ống nghiệm nuôi vào ống falcon (50 ml), đặt ống falcon vào ly đá lạnh, để – 10 phút Đặt ruồi bị gây mê mảnh giấy A4), lựa ruồi (2-5 con) chổi lông cho vào falcon mơi trường cịn lại (để ống falcon mơi trường có ruồi nằm ngang mặt bàn, tất ruồi tỉnh lại dựng đứng lên) Nếu lần, khơng thể bắt đủ số lượng ruồi bắt -3 lần, lần thứ lần thứ ba cách không ngày - Khi bắt đủ số lượng ruồi cái, tiến hành bắt ruồi đực (2-5 con) từ ống giống: thực tương tự bắt ruồi cái, nên bắt lần thơi Cho đực vào ống falcon có ruồi - Đặt ống ruồi nơi mát - Sau -3 ngày ni, xuất dịi (ấu trùng) falcon có ruồi lai, thả cha mẹ - Chờ ruồi nở ra, tiến hành quan sát ghi nhận kết (có thể gây mê để phân biệt đực đếm) b Kết lai ruồi giấm Trường hợp 1: Cái mắt đỏ x Đực mắt trắng   P ~ 0.01 < 0.05 Kết quan sát không với kỳ vọng SƠ ĐỒ LAI P: a ♂ Mắt trắng (X Y) x ♀ Mắt A A đỏ (X X ) F1: TLKG: ½ XAX a : ½ XAY TLKH: 50% ♀ đỏ : 50% ♂ đỏ Ngồi kết quan sát cịn xuất ruồi mắt trắng nhiên theo sơ đồ lai không xuất ruồi mắt trắng Do vài nhóm để ruồi lâu xảy tượng tự phối cá thể F1 sinh hệ F2 làm sai lệch kết quan sát Trường hợp 2: Cái mắt trắng x đực mắt đỏ Quan sát (o) Kỳ vọng (e) Sai lệch (d) = 0.06 MàF=1   P >0.05 Kết phù hợp với lý thuyết SƠ ĐỒ LAI A P: ♂ Mắt đỏ (X Y) x ♀ Mắt a a trắng (X X ) F1: TLKG: ½ XA Xa : ½ Xa Y TLKH: 50% ♀ đỏ : 50% ♂ trắng Vậy phép lai TH P: Cái mắt trắng x đực mắt đỏ có kết tuân theo quy luật di truyền liên kết giới tính NST X Prophase c Metaphase I Bộ bốn xếp thành hàng mặt phẳng xích đạo, chromatid chị em gắn với protein cohesin, phân cản phân li sớm, chiasma nối chromatide không chị em bị bẻ gãy Metaphase d Anaphase I Khử polymer hóa vi ống kinetochore => hai NST kép tương đồng phân tách nhau, chromatid chị em gắn với protein kinetochore Anaphase e Telophase I Sau di chuyển hai cực tế bào NST bắt đầu dãn xoắn , màng nhân nhân hình thành Thoi vơ sắc tiêu biến , màng nhân nhân xuất Telophase f Prophase II NST bắt đầu đóng xoắn Màng nhân nhân tiêu biến Thoi vô sắc xuất Prophase ll g Metaphase II NST kép co xoắn cực đại tập trung hàng mặt phẳng xích đạo thoi vơ sắc Thoi vơ sắc dính vào phía NST kép Metaphase ll h Anaphase II NST tách tâm động trượt thoi vô sắc di chuyển hai cực tế bào Anaphase ll i Telophase II NST dãn xoắn Màng nhân nhân xuất hiện, màng tế bào hình thành Tạo hai tế bào Telophase ll NHIỄM SẮC THỂ KHỔNG LỒ Ở RUỒI GIẤM Đôi tuyến nước bọt ấu trùng ruồi LAI NẤM LỚN a Mục đích b Kết - Phân lập bào tử từ thể nấm bào ngư trưởng thành - Nuôi cấy thực lai tơ bào tử bào tử phân lập - Tạo dòng bào tử đơn bội nấm bào ngư - Kết lai dòng nấm: lai Xuất gờ vị trí lai dịng nấm - Hai dịng bào tử nấm lai với khơng có giống - yếu tố giới tính A B + Yếu tố giới tính A: kiểm sóat dung hợp nhân, hình thành mấu liên kết, tạo vách ngăn tế bào + Yếu tố giới tính B: làm tan vách ngăn , kiểm sóat di chuyển nhân (Chú thích: Do nhớ điện thoại bạn Trung nhóm có vấn đề nên hình sau chụp đã bị hoàn toàn.) BUỔI BẢNG PHÂN CƠNG CƠNG VIỆC VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA NHĨM 13 CA Bài Cảm ứng phân lập đột biến khuyết dưỡng ơer nấm men tia UV Quan sát NST người kính hiển vi Bài góp Đánh giá CẢM ỨNG VÀ PHÂN LẬP ĐỘT BIẾN KHUYẾT DƯỠNG ƠER NẤM MEN BẰNG TIA UV a Cơ sở khoa học Các chủng vi khuẩn đột biến khuyết dưỡng Adenine phát triển tốt mơi trường giàu dinh dưỡng tích tụ tiền chất Aminoimidazole ribonucleotide ( AIR) Tiền chất bị oxi hố điều kiện hiếu khí tạo sắc tố đỏ b Kết báo cáo Nồng độ pha loãng 10-5 Tổng số tế bào/ ml thời gian chiếu xạ = Số khuẩn lạc thời gian chiếu xạ ∗ 10 Độ pha loãng Đơn vị: CFU/ml Liều chiếu xạ 30 45 60 90 Kết trải huyền phù dịch nấm men độ pha loãng 10-3, 10-5, 10-7 đem chiếu UV 90s : Ở độ pha loãng thấy mặt trải xuất khuẩn lạc màu trắng đục đồng thời không xuất khuẩn lạc màu đỏ lí thuyết nói → Khơng có chủng đột biết khuyết dưỡng Adenin Ngồi ra, nấm men nuôi cấy môi trường YEDA MVA, hai mơi trường có thành phần hàm lượng chất dinh dưỡng khác có hàm lượng Adenin cao, có xuất khuẩn lạc màu trắng QUAN SÁT NST NGƯỜI DƯỚI KÍNH HIỂN VI Nhiễm sắc thể người kính hiển vi THỰC TẬP DI TRUYỀN - NHÓM 13 PHỤ LỤC BÀI : SỬ DỤNG PHƯƠNG PHÁP CHI BÌNH PHƯƠNG TRONG PHÂN TÍCH KẾT QUẢ TỈ LỆ NHĨM MÁU Đặt vấn đề Tần số nhóm máu chung người Việt Nam là: Nhóm máu O: 42%, Nhóm máu A: 22%, Nhóm máu B: 31%, Nhóm máu AB: 5% Theo thống kê nhóm máu khố K17, xem có khác biệt tần số nhóm máu khố K17 tần số nhóm máu chung người Việt Nam Kết phân tích = 3.404682 Đặt giả thuyết H0: Số liệu nhóm máu lớp tương đồng với tỉ lệ nhóm máu người Việt Nam H1: Số liệu nhóm máu lớp khác với tỉ lệ nhóm máu người Việt Nam Ta có: F = 3; α = 0.05  α/2 = 9.35 Ta thấy < α/2 nên ta chấp nhận giả thuyết H0 Vậy tỉ lệ nhóm máu lớp tương đồng với tỉ lệ nhóm máu người Việt Nam BÀI 2: PHÂN TÍCH CÁC ĐẶC ĐIỂM DI TRUYỀN NGƯỜI DỰA VÀO KẾT QUẢ RELP Vị trí gen HUNTINGTON kỹ thuật RELP 17 THỰC TẬP DI TRUYỀN - NHÓM 13 - Các khả có thai nhi: ℎ ; ℎ - Xác định kiểu gen thai nhi cách dùng enzyme HindIII cắt DNA tổng số, chạy điện di lai Southernblot - Tái tổ hợp xảy khơng ảnh hưởng đến độ xác phương pháp Xác định tội phạm? Xét hình biểu kết RFLP phân tích mẫu máu bên dưới: Ta thấy: - Biểu xét nghiệm RFLP mẫu máu số khác hoàn toàn so với mẫu máu áo nạn nhân mẫu máu lấy từ âm đạo nạn nhân => loại B khỏi đối tượng tình nghi - Vậy ta cịn lại đối tượng tình nghi A, có tương đồng biểu kiểu gen RFLP mẫu máu 3, nhiên khơng phải hồn tồn giống chưa thể kết luận A thủ phạm mà cần phải thu thập thêm chứng Độ xác phương pháp khơng cao so với phương pháp xét biểu gen RFLP, kết xét nghiệm có khả bị tương đồng với vài người khác 18 Bệnh xơ nang -Gene gây bệnh gen lặn - Khả kiểu gen thai nhi số 8: Bh/DH; Ah/Bh; Ah/CH; CH/DH -Khả mắc bệnh thai nhi 100% RFLP AB BÀI :BẢN ĐỒ CẮT ENZYME CẮT GIỚI HẠN BÀI : BIỆN LUẬN SỰ ĐA DẠNG VÀ PHÂN NHĨM KIỂU HÌNH KHÁNG KHÁNG SINH VÀ DÃY PH VI KHUẨN TĂNG TRƯỞNG CỦA CÁC CHỦNG LAB ĐƯỢC CHO A Biện luận đa dạng phân nhóm kiểu hình kháng kháng sinh vi khuẩn tăng trưởng chủng LAB cho Bảng sô liệu tác động kháng sinh Bảng số liệu cho thấy, ứng với tổ hợp chủng vi khuẩn kháng sinh thí nghiệm lặp lại lần Do đó, để tìm kháng sinh thích hợp để kháng chủng vi khuẩn nào, nghĩa sinh trưởng vi khuẩn thấp nhất, ta tiến hành đặt giả thiết sau: H0 (A): sinh trưởng vi khuẩn LAB không phụ thuộc vào loại kháng sinh H0 (B): sinh trưởng vi khuẩn LAB không phụ thuộc vào chủng vi khuẩn H0 (AB): sinh trưởng vi khuẩn LAB không phụ thuộc vào tương tác chủng loại kháng sinh H1 (A): sinh trưởng vi khuẩn LAB phụ thuộc vào loại kháng sinh H1 (B): sinh trưởng vi khuẩn LAB phụ thuộc vào chủng vi khuẩn H1 (AB): sinh trưởng vi khuẩn LAB phụ thuộc vào tương tác chủng loại kháng sinh ANOVA Source of Varia Sample Columns Interaction Within Total Kết kiểm định Anova: Two-factor with replication Từ bảng kết theo phần ANOVA cho thấy: FA = 852.1412 > F tiêu chuẩn (1.909), nên giả thuyết H0 (A) bị bác bỏ, sinh trưởng vi khuẩn LAB phụ thuộc chủng vi khuẩn FB= 27.70522 > F tiêu chuẩn (1.70), H0 (B) bị bác bỏ, sinh trưởng củng vi khuẩn LAB phụ thuộc vào loại kháng sinh FC= 12.26869 > F tiêu chuẩn (1.26), H0 (C) bị bác bỏ , sinh trưởng vi khuẩn LAB phụ thuộc vào tương tác loại kháng sinh chủng vi khuẩn KHÁNG SINH B Biện luận pH vi khuẩn tăng trưởng chủng LAB cho: Bảng số liệu tương tác pH Bảng sô liệu cho thấy, ứng với tổ hợp chủng vi khuẩn kháng pH thí nghiệm lặp lại lần Do đó, để tìm pH thích hợp với chủng vi khuẩn nào, nghĩa sinh trưởng vi khuẩn thấp cao nhất, ta tiến hành đặt giả thiết sau: LB12 Height Cluster Dendrogram dist(bt) hclust (*, "complete") H0 (A): sinh trưởng vi khuẩn LAB không phụ thuộc vào loại pH H0 (B): sinh trưởng vi khuẩn LAB không phụ thuộc vào chủng vi khuẩn H0 (AB): sinh trưởng vi khuẩn LAB không phụ thuộc vào tương tác chủng pH H1 (A): sinh trưởng vi khuẩn LAB phụ thuộc vào loại pH H1 (B): sinh trưởng vi khuẩn LAB phụ thuộc vào chủng vi khuẩn H1 (AB): sinh trưởng vi khuẩn LAB phụ thuộc vào tương tác chủng pH Kết kiểm định Anova: Two-factor with replication Từ bảng kết theo phần ANOVA cho thấy: FA = 6254.461> F tiêu chuẩn (3.091191), nên giả thuyết H0 (A) bị bác bỏ, sinh trưởng vi khuẩn LAB phụ thuộc pH FB= 2.683927> F tiêu chuẩn (1.7718) H0 (B) bị bác bỏ, sinh trưởng củng vi khuẩn LAB phụ thuộc vào chủng vi khuẩn FC= 4.447637> F tiêu chuẩn (1.578041) H0 (C) bị bác bỏ, sinh trưởng vi khuẩn LAB phụ thuộc vào tương tác độ pH chủng vi khuẩn ĐỘ pH LB9 Height Cluster Dendrogram dist(ct) hclust (*, "complete") ... nhân tế bào Nhuộm quan sát nhân chất vi sinh vật qua kính hiển vi Xác đinh kích thước vùng nhân kích thước tế bào vi sinh vật nhờ sử dụng thước đo trắc vi thị vật kính Trắc vi thị kính b c Đối... SUBTILIS VÀ SACCHAROMYCES CEREVISIAE, ĐO KÍCH THƯỚC VI SINH VẬT BẰNG TRẮC VI VẬT KÍNH VÀ TRẮC VI THỊ KÍNH a Mục tiêu thí nghiệm Ngun tắc: Fuchsin kiềm chúa gốc kiềm có khả nhuộm màu vùng nhân tế bào. .. BÀO BACILLUS SUBTILIS VÀ SACCHAROMYCES CEREVISIAE, ĐO KÍCH THƯỚC VI SINH VẬT BẰNG TRẮC VI VẬT KÍNH VÀ TRẮC VI THỊ KÍNH ĐỊNH LUẬT MEN ĐEN VÀ PHƯƠNG PHÁP CHI BÌNH PHƯƠNG BUỔI