KHOA HỌC CÔNG NGHỆ TỐI ƯU HÓA QUÁ TRÌNH TRÍCH LY SIÊU ÂM HAM LUỌNG SAPONIN TRITERPENO1T TỔNG VÀ HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA TÙ CÂY DIỆP HẠ CHÀU [Phyllanthus urinaria L ] Nguyễn Tân Thành1, *, Nguyễn Thị H[.]
KHOA HỌC CƠNG NGHỆ TỐI ƯU HĨA Q TRÌNH TRÍCH LY SIÊU ÂM HAM LUỌNG SAPONIN TRITERPENO1T TỔNG VÀ HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HĨA TÙ CÂY DIỆP HẠ CHÀU [Phyllanthus urinaria L-] Nguyễn Tân Thành1, *, Nguyễn Thị Huyền1, Nguyễn Thị Uyển Nhi1, Trần Văn Ngọc12 TÓM TẮT Nghiên cứu có mục đích tối ưu điều kiện trích ly siêu âm hàm lượng saponin triterpenoit tổng hoạt tính chống oxy hóa từ Diệp hạ châu (Phyllanthus urinaria) phưong pháp đáp ứng bề mặt (RSM) Bố trí thí nghiệm theo thiết kế Box - Benhken, xây dựng mơ hình tối ưu quy trinh tách chiết saponin triterpenoit tổng (TSTC-Yj) hoạt tính chống oxy (DPPH-Y2) vói ba yếu tố cơng suất siêu âm (Xị), thòi gian siêu âm (XQ tỷ lệ dung mơi/ngun liệu (X3) Theo mơ hình, điều kiện tối ưu hóa q trình trích ly có hỗ trợ sóng siêu âm để thu hàm lượng saponin triterpenoit tổng hoạt tính chống oxy hóa cao cơng suất siêu âm 315 w, thời gian trích ly 42 phút tỷ lệ dung mơi/ngun liệu 41 mL/g Vói thơng số này, dịch chiết thu có hàm lượng saponin triterpenoit tổng 3,02 ± 0,05 mg/g hoạt tính chống oxy 92,1 ± 0,2% Từ khố: Bề mặt đáp ứng, Phyllanthus urinaria, trích ly, saponin triterpenoit, hoạt tính chống oxy hỏa tế bào gan [9], ức chế phát triển tế bào ĐẬT VÃN ĐỀ Cây Diệp hạ châu (Phyllanthus urinaria L.) loại thảo dược thuộc họ Thầu dầu (Euphorbiaceae), Chi Phyllanthus phán bố rộng rãi Nam Mỹ, Ân Độ, Sri Lanka, Nhật Bản, Malaysia, gây u xưong [4] Ngoài nhóm chất flavonoids, phenols, terpenoid, polysaccharide lồi chi Phyllanthus cịn chứa lượng lớn họp chất saponin [5] Indonesia, Hoa Kỳ, Trung Quốc Việt Nam Cho Hoạt tính chống ung thư hoạt tính sinh học đến người ta phát chi Phyllanthus có hon nghiên cứu nhiều saponin Các 700 lồi, Việt Nam có 44 lồi, lồi ý saponin có tác động vào trinh biệt hóa tế bào dùng làm thuốc nhiều hon Phyllanthus urinaria ung thư, ngăn cản phân bào chúng [8, 10] L (Diệp hạ châu ngọt), Phyllanthus nirurih (Diệp Saponin ức chế phát triển hình thành cụm hạ châu thân xanh) Phyllanthus amarus (Diệp hạ khuẩn tế bào ung thư gan Morris kích thích châu đắng) tế bào tổng họp protein huyết thanh, Thành phần hóa học Diệp hạ châu nhiều nhà khoa học ngồi nước cơng bố flavonoid, axit cacboxylic, tannin, coumarin, làm biến đổi đặc điểm tế bào ung thư cấu trúc hình thái giống vói tế bào gan binh thường lignans corilagen, axit gallic, axit caffeolquinic, Cơng nghệ trích ly sử dụng sóng siêu âm làm geraniin rutinhave [6, 7] Trong họp chất tăng đáng kể tỷ lệ thu hồi hoạt chất so vói axit ellagic, flavanoid tannin có tác dụng phưong pháp trích ly truyền thống hay phưong chống ung thư [1], Các họp chất corilagin, pháp trích ly khác Thời gian trích ly cơng nghệ flavonoid làm giảm chứng viêm gan nhiễm mỡ giảm nhiều so với phưong pháp trích ly truyền thống Bài báo trình bày kết nghiên cứu q trinh trích ly có hỗ trợ sóng siêu Viện Cơng nghệ Hóa sinh Mơi trường, Trường Đại học Vinh Sở Nông nghiệp Phát triển nông thôn Nghệ An Email: nguyentanthanhvn@gmail.com âm nhằm thu tối đa hàm lượng saponin triterpenoit tổng hoạt tính chống oxy hóa từ Diệp hạ châu (phyllanthus urinaria) NỒNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIÊN NÔNG THÔN - KỲ - THÁNG 6/2022 77 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ VẬT LIÊU VÀ PHUONG PHÁP 2.4 Phương pháp phân tích 2.1 Vật liệu Cây Diệp hạ châu thu nhận huyện Con Cuông, tỉnh Nghệ An Mầu sấy khô nghiền nhỏ sàng qua lưới sàng kích thước mm để thu mẫu có kích thước đồng nhất, mẫu hút chân không bảo quản - 20°C trước tiến hành bước 2.2 Phương pháp thiết bị trích ly siêu âm Thiết bị nghiên cứu: sử dụng thiết bị trích ly siêu âm CYF-TES600N-4S hãng Chin Ying Fa, Đài Loan Thiết bị chiết 20 L, nhiệt độ chiết lên đến 100°C, công suất siêu âm tối đa 600 w Phưong pháp tiến hành: Mỗi thí nghiệm cân 10 g mẫu cho vào bình tam giác thể tích 500 ml, lựa chọn dung mơi cho q trinh trích ly nước, tỷ lệ dung môi cho trước theo phưong pháp bố trí thí nghiệm tối ưu Cho binh vào thiết bị trích ly, điều chỉnh cơng suất sóng siêu âm theo điều kiện thí nghiệm Tiến hành trích ly theo thời gian cho trước Sau kết thúc q trình trích ly, dịch lọc qua giấy lọc mang phân tích 2.3 Phương pháp bố trí thí nghiệm tối ưu hóa điều kiện trích ly Lựa chọn phương pháp bề mặt đáp ứng (Response Surface Methodology) để tối ưu hóa điều kiện trích ly hàm lượng saponin triterpenoit tổng hoạt tính chống oxy hóa từ Diệp hạ châu có hỗ 2.4.1 Xác định hàm lượng saponin triterpenoit tổng Hàm lượng saponin triterpenoit tổng xác định theo Dong cs (2001) [2] Mẫu sau trích ly lọc pha lỗng 10 lần, hút 0,2 mL mẫu pha loãng vào ống nghiệm, thêm 0,2 mL vanilin - acetate (10%), 1,2 mL HC1O4, đun cách thủy ủ 70°C 15 phút Sau 15 phút, ống nghiệm lấy làm mát phút, ethyl acetate bổ sung cho tổng thể tích đủ mL Tổng hàm lượng saponin triterpenoit phân tích dựa phương pháp đo độ hấp thu quang phổ bước sóng 548 nm vói chất chuẩn escin (máy đo quang phổ Agilent 8453) 2.4.2 Xác định hoạt tính chống oxy hóa theo khả khửgốc tự DPPH Dịch chiết Diệp hạ châu (P urinaria) đánh giá hoạt tính chống oxy hóa thơng qua xác định khả khử gốc tự DPPH theo phương pháp Fu cs (2002) [3] Khoảng 20 pl đến 140 pl dịch chiết trộn với nước cất để đạt thể tích tổng cộng ml Sau thêm ml dung dịch DPPH 0,2 mM, lắc để yên bóng tối 30 phút Độ hấp thu quang học đo bước sóng 517 nm (Agilent 8453 UVVisible Spectrophotometer) Khả khử gốc tự DPPH xác định theo công thức (2) sau: trự kỹ thuật siêu âm Ba thông số quan trọng DPPH (%) = 100 X (Abss - Absc) /Abss trình trích ly nghiên cứu bao gồm: Trong đó: Abss: độ hấp thu quang học mẫu Công suất siêu âm (Xi), thời gian siêu âm (Xọ) tỷ trắng không chứa dịch chiết; Absc: độ hấp thu quang lệ dung mơi/ngun liệu (X3) Các thí nghiệm học mẫu có chứa dịch chiết bố trí theo phương pháp Box - Behnken gồm 17 thí KẾT QUÀ NGHIÊN cuu VÀ THÁO LUẬN nghiệm, với 12 thí nghiệm hai mức (trên dưới) 3.1 Thiết lập mơ hình thí nghiệm tâm Mỗi thí nghiệm tiến hành lần lấy kết trung bình Mơ hình tốn (2) Các nghiên cứu ban đầu khảo sát ảnh hưởng yếu tố công suất siêu âm, thời gian tỷ lệ học mô tả ảnh hưởng biến độc lập nước/nguyên bệu đến q trình trích ly saponin biến phụ thuộc có dạng hàm đa thức bậc hai có triterpenoit tổng hoạt tính chống oxy hóa từ dịch dạng tổng quát sau: chiết Diệp hạ châu Vi nghiên cứu này, y=ft+ft ft+ft x,:+E L