Tạo phối Soma trực tiếp từ chồi và tái sinh chồi từ phôi giống lan Dendrobium Nestor bằng phương pháp nuôi cấy in vitro

Đề tài Tạo phối Soma trực tiếp từ chồi và tái sinh chồi từ phôi giống lan Dendrobium Nestor bằng phương pháp nuôi cấy in vitro tiến hành nghiên cứu nhằm bổ sung thêm các giống lan mới cho thị trường, đẩy mạnh phát triển đa dạng các giống cho ngành lan cắt cành Việt Nam. Đề tài đã chọn giống Dendrobium Caesar White và Dendrobium Uraiwan làm vật liệu nghiên cứu.

TẠO PHÔI SOMA TRỰC TIẾP TỪ CHỒI VÀ TÁI SINH CHỒI TỪ PHÔI GIỐNG LAN DENDROBIUM NESTOR BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY IN VITRO Nguyễn Hà Phi Long1, Nguyễn Thị Hà1, Tô Thị Nhã Trầm1 ABSTRACT Today, the Dendrobium nestor there is only a very small number, scattered in Ho Chi Minh City and southern provinces These species are currently famous for noble beauty, fancy, special aromas, great potential in growing orchids cut flower industry in market The topic chosen Dendrobium Caesar White and Dendrobium Uraiwan make original material Research results show the best process use disinfected samples with concentrations of 30% Javel in 20 minutes combined with HgCl in minutes Shoot regeneration medium for high efficiency is Knudson C + mg/l BA + 0.5 mg/l IBA Somatic embryogenesis induction medium is KC additional 20% coconut water combined 1.5 mg/l BA + 0.3 mg/l NAA Plant regeneration through direct somatic embryogenesis on Knudson C medium additional mg/l BA combined 0.5 mg/l IBA 15% coconut water and 0.5 g/l of activated charcoal The purpose of the study is the result for the study's premise biomass somatic embryogenesis created a large number of seedlings for production Keywords: Dendrobium nestor, Dendrobium Caesar White, Dendrobium Uraiwan, Direct somatic embryogenesis TÓM TẮT Các giống lan Dendrobium Nestor (hay Dendrobium chịu nhiệt) cịn số lượng ít, phân bố rải rác thành phố Hồ Chí Minh số tỉnh miền Nam Đây giống thị trường ưa chuộng vẻ đẹp cao, lạ mắt, mùi hương đặt biệt, có tiềm công nghiệp trồng lan cắt cành Đề tài chọn giống Dendrobium Caesar White Dendrobium Uraiwan làm vật liệu ban đầu Kết nghiên cứu cho thấy quy trình khử trùng mẫu tốt sử dụng Javel với nồng độ 30% 20 phút kết hợp với HgCl2 phút Môi trường tái sinh chồi bên cho hiệu cao Knudson C + mg/l BA + 0,5 mg/l IBA Phơi soma cảm ứng hình thành môi trường KC bổ sung 20% nước dừa kết hợp 1,5 mg/l BA + 0,3 mg/l NAA Chồi tái sinh từ phôi soma đạt hiệu cao môi trường Knudson C có bổ sung 15% nước dừa, 0,5 g/l than hoạt tính, 0,5 mg/l IBA mg/l BA Mục đích nghiên cứu kết tiền đề cho nghiên cứu nhân sinh khối phôi soma tạo số lượng lớn giống phục vụ sản xuất Từ khóa: Dendrobium chịu nhiệt, phơi soma trực tiếp, Dendrobium Caesar White, Uraiwan, Dendrobium nestor Dendrobium ĐẶT VẤN ĐỀ Đã nữ hoàng loài lan Việt Nam giai đoạn trước 1975, giống Dendrobium chịu nhiệt phù hợp với điều kiện với khí hậu miền Nam có nhiều yếu tố phù hợp cho nhóm lan cắt cành Sau giai đoạn này, nhiều loại hoa lan lạ đẹp mắt khác xâm nhập vào Việt Nam khiến giống lan Dendrobium chịu nhiệt dần vị thế, số lượng bị giảm đáng kể Tuy nhiên, giống lan Dendrobium chịu nhiệt lại có sức hút trở lại số lượng không đáp ứng đủ cho nhu cầu thị trường nội địa xuất Ngày nay, phương pháp vi nhân giống hay nhân giống in vitro trở nên phổ biến việc nhân giống nhiều loài có ưu điểm nhân giống nhanh với số lượng nhiều tạo với chất lượng tốt (Nguyễn Bảo Tồn, 2010) Trong đó, kỹ thuật nhân giống phơi vơ tính thực quy mô công nghiệp mà không cần diện tích nhiều với hao phí lao động thấp Đã có nhiều nghiên cứu ngồi nước Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh 417 ứng dụng tạo phôi soma nhân giống lan Hồ điệp (Dương Tấn Nhựt, 2009) thành công tạo phơi soma mơi trường MS có bổ sung mg/l BA kết hợp với 0,5 mg/l NAA, g/l than hoạt tính, 20% nước dừa Tuy nhiên, việc tạo phôi soma lan dendrobium chưa phát triển, tập trung nghiên cứu nhiều (Chung cs, 2005) Để chủ động nguồn giống có chất lượng cao, bệnh phục vụ cho phát triển sản xuất cung cấp nhu cầu nội địa xuất nhiệm vụ nhân giống lan phương pháp ni cấy mô hướng đắn nhằm bổ sung thêm giống lan cho thị trường, đẩy mạnh phát triển đa dạng giống cho ngành lan cắt cành Việt Nam VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu: Hai giống lan Dendrobium Caesar White Dendrobium Uraiwan mang từ vườn lan thành phố Hồ Chí Minh chăm sóc Vườn ươm Bộ môn Công nghệ sinh học, trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh Mẫu thí nghiệm thân giả hành to, khỏe, màu xanh không bị bệnh Nội dung nghiên cứu: Khảo sát ảnh hưởng Javel (NaOCl) đến hiệu khử trùng mẫu cấy Mẫu sau cắt từ vườn ươm lột bỏ lớp bẹ lá, rửa sạch, ngâm xà phòng, tia vịi nước 10 phút cho vào bình tam giác hấp khử trùng để tiến hành bước bên tủ cấy Quy trình bên tiến hành sau: cồn 70 phút, javel 30%, HgCl2 phút, kháng sinh 20 phút Trong javel 30% khảo sát với khoảng thời gian 10, 15, 20, 25 30 phút Khảo sát ảnh hưởng BA IBA đến khả tạo chồi lan in vitro Sau 30 ngày nuôi cấy, mẫu nấm khuẩn chuyển sang môi trường Knudson C bổ sung 0,5 mg/l IBA BA nồng độ khác nhau: mg/l; 1,5 mg/l; mg/l 2,5 mg/l Khảo sát nồng độ BA NAA đến hình thành phôi soma trực tiếp từ chồi in vitro Các chồi tách từ đốt thân giả hành chuyển sang môi trường cảm ứng tạo phôi soma trực tiếp Knudson C có bổ sung 20% nước dừa, 0,3 mg/l NAA kết hợp với BA có dãy nồng độ khác gồm 0,5 mg/l; mg/l; 1,5 mg/l; mg/l nhằm khảo sát nồng độ phù hợp cho việc tạo phôi soma trực tiếp từ chồi in vitro Ảnh hưởng nồng độ BA IBA đến khả tái sinh chồi từ phôi soma Các phôi soma tách từ chồi chuyển sang môi trường tăng sinh Knudson C bổ sung 10% nước dừa, 30 g/l chuối, 30 g/l khoai tây mg/l BA để tăng sinh phơi Sau mẫu chuyển sang mơi trường Knudson C + 15% nước dừa 0,5 mg/l than hoạt tính cảm ứng tái sinh chồi có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng BA IBA nồng độ thay đổi theo nghiệm thức để khảo sát tái sinh chồi từ phôi Môi trường nuôi cấy chuẩn pH mức 5,7 - 5,8 (dùng NaOH HCl 1N) trước đem hấp vô trùng autoclave điều kiện 1atm, 1210C 20 phút 418 Điều kiện phịng ni cấy nhiệt độ 25 20C, thời gian chiếu sáng 16 - 18 giờ/ngày, cường độ chiếu sáng 40 - 45 µmolm-2s-1 Số liệu lấy sau 30 ngày 60 ngày nuôi cấy Số liệu thu thập xử lý thống kê máy tính phần mềm MSTATC Đọc kết dựa vào bảng ANOVA, bảng trung bình bảng so sánh khác biệt nghiệm thức (bằng phương pháp LSD) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Ảnh hưởng thời gian khử trung Javel (NaOCl) đến mẫu cấy Tỉ lệ vô trùng thành công phụ thuộc vào thời gian khử trùng nồng độ chất khử trùng Năm 2002, Estrela ctv đưa nhận định javel (NaClO) tan nước có phản ứng cân qua lại theo phương trình: NaOCl + H2O  NaOH + HClO + Na+ + OH- + H+ + OClHClO OCl- chất làm biến tính thủy phân amino acid Ngồi ra, NaOCl cịn hịa tan chất béo tạo các acid béo chuyển chúng thành muối acid béo glycerol nhờ phản ứng xà phịng hóa dẫn đến gây chết cho tế bào vi sinh vật Bảng Ảnh hưởng javel (NaOCl) đến tỉ lệ sống mẫu lan Dendrobium Caesar White Dendrobium Uraiwan Tỉ lệ mẫu sống (%) Thời gian Môi khử trùng Dendrobium trường Dendrobium Caesar White (phút) Uraiwan MS 10 38,89b 44,44c MS 15 55,56ab 55,56bc MS 20 72,22a 77,78a MS 25 66,67a 72,22ab MS 30 55,56ab 61,11abc 10,54 11,29 CV (%) Các ký tự khác theo sau giá trị trung bình cột thể khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê mức p < 0,01ở giống Dendrobium Uraiwan 0,01 < p < 0,05 giống Dendrobium Caesar White Số liệu chuyển đổi theo đổi theo công thức y=arcsin với x số phần trăm mẫu sống nghiệm thức lần lặp lại Clorua thủy ngân chất khử trùng có chứa kim loại nặng, ảnh hưởng trực tiếp đến hệ enzyme vi sinh vật Chính vậy, kết hợp hai chất khử trùng lại cho hiệu khử trùng mẫu tốt, đặc biệt kết tốt sử dụng javel 30% 20 phút HgCl2 phút Khi khử trùng lâu nhiều vi sinh vật bề mặt mẫu cấy bị tiêu diệt, đồng thời tác động Tween 80 làm giảm sức căng bề mặt nước, tăng khả tiếp xúc javel với mẫu cấy, chất khử trùng có đủ thời gian để len lõi vào sâu 419 bên kẽ chồi, đẩy bọt khí ngồi Tuy nhiên việc khử trùng mẫu cấy thời gian dài, javel phá vỡ thành phần tế bào thực vật diệp lục tố, sức sống mẫu khó phục hồi số tế bào bị ảnh hưởng nhiều Do đó, theo kết bảng 1, thời gian khử trùng hợp lý 20 phút với javel nồng độ 30% cho giống 3.2 Sự hình thành chồi mơi trường Knudson C bổ sung BA IBA Kết ghi nhận sau tuần nuôi cấy cho thấy môi trường Knudson C có bổ sung mg/l BA 0,5 mg/l IBA đạt hiệu tạo chồi tốt hai giống Dendrobium Caesar White Dendrobium Uraiwan Bảng Ảnh hưởng BA IBA đến khả tạo chồi lan Dendrobium Caesar White Môi trường BA (mg/l) IBA (mg/l) Chiều cao chồi (cm) KC 0 0d 1,81b 0,19 KC 1,0 0,5 KC 1,5 0,5 2,82a 0,24 KC 2,0 0,5 3,25a 0,39 KC 2,5 0,5 0,94c 0,07 CV (%) 12,70 Các giá trị trung bình cột có ký tự khác khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,01) Tuy nhiên, nồng độ này, giống Dendrobium Caesar White có khác biệt chiều cao chồi cịn giống Dendrobium Uraiwan có khác biệt số lượng chồi hình thành 420 chiều cao chồi Cụ thể, kết bảng hình cho thấy giống Dendrobium Caesar White tạo chồi nghiệm thức, chiều cao hình thái chồi lại có khác biệt Chiều cao chồi độ mở có xu hướng tăng theo nồng độ BA môi trường nuôi cấy chất điều hịa sinh trưởng BA thuộc nhóm chất cytokinin thúc đẩy phát triển sinh trưởng (Trần Văn Minh, 1997) Thế nồng độ cao môi trường nhân chồi BA làm giảm tăng trưởng, giảm chiều dài chồi hai (Dương Tấn Nhựt, 2010) Ở nồng độ mg/l BA chồi có chiều cao trung bình 1,81 cm, tương đối ngắn bẹ áp sát vào thân Khi tăng nồng độ BA từ 2,0 lên 2,5 mg/l chiều cao chồi giảm, thân nhỏ dưới, phình to trên, phát triển to dài nhiều so với thân chồi, chiều cao chồi đạt 0,94 cm Bảng Sự hình thành chồi lan Dendrobium Uraiwan mơi trường có bổ sung BA IBA sau tuần nuôi cấy Nghiệm thức Môi trường BA (mg/l) IBA (mg/l) Số chồi TB (Chồi) Chiều cao TB chồi (cm) C1.2 KC 0 1,0c 1,08c 0,09 C2.2 KC 1,0 0,5 1,0c 2,43b C3.2 KC 1,5 0,5 1,0c 3,31a 0,06 C4.2 KC 2,0 0,5 1,56b 0,1 2,39b 0,18 C5.2 KC 2,5 0,5 2,61a 0,26 0,55d 0,04 CV (%) 8,54 0,11 5,44 Các giá trị trung bình cột có ký tự khác khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,01) Dựa vào bảng hình cho thấy giống Dendrobium Uraiwan có khác biệt số chồi hình thành chiều cao chồi nghiệm thức Chồi hình thành mơi trường khơng có chất điều hịa sinh trưởng nồng độ BA IBA ngưỡng 2,5 mg/l 0,5 mg/l cho kết nhân chồi tốt (2,61 chồi/mẫu) Chiều cao chồi có khác biệt rõ rệt, nồng độ 1,5 mg/l BA + 0,5 mg/l IBA chồi có chiều cao trung bình cao 3,31 cm Khi nồng độ BA tăng lên từ 2,0 2,5 mg/l chiều cao chồi giảm đạt thấp 0,55 cm nồng độ 2,5 mg/l BA Sự tương quan số chồi chiều cao chồi hình thái chồi quan trọng cho thí nghiệm tạo phôi, nồng độ 2,5 mg/l BA có số lượng chồi cao thân chồi nhỏ, thấp mỏng Ngược lại, nồng độ mg/l BA có số chồi chồi to, khỏe, dày, chất lượng tốt phù hợp làm vật liệu cho thí nghiệm tạo phơi soma trực tiếp 421 Hình Sự hình thành chồi giống Dendrobium Uraiwan môi trường bổ sung BA IBA sau tuần nuôi cấy invitro Công nghệ tạo phôi soma công nghệ tiên tiến phôi soma nguồn vật liệu quan trọng cho tạo nhân giống với số lượng lớn Ngồi ra, phơi soma ứng dụng sản xuất bệnh, tạo hạt nhân tạo, chuyển gen, sản xuất hợp chất góp phần bảo quản nguồn gen quý (Dương Tấn Nhựt, 2011) Do đó, việc ứng dụng tạo phơi soma cho hai giống lan Dendrobium Caesar White Dendrobium Uraiwan thật cần thiết Kết tạo phôi soma giống Dendrobium Caesar White thể bảng hình Nhu cầu auxin chất điều hòa sinh trưởng thực vật khác cho việc khởi động phát sinh phôi để cảm ứng hai chế quan trọng phát sinh tế bào phôi in vitro phân chia tế bào bất đối xứng kéo dài tế bào (Dương Tấn Nhựt, 2008) Chính vậy, nghiệm thức đối chứng khơng sử dụng chất điều hòa sinh trưởng cho kết hồn tồn khơng có mẫu cảm ứng tạo phơi Bảng Ảnh hưởng BA NAA đến khả tạo phôi trực tiếp lan Dendrobium Caesar White Môi trường BA (mg/l) KC 0 0d KC 0,5 0,3 22,22cd KC 1,0 0,3 44,44bc KC 1,5 0,3 77,78a KC 2,0 0,3 61,11ab NAA (mg/l) CV (%) Tỉ lệ tạo phôi ( ) 17,82 422 Các giá trị trung bình cột có ký tự khác khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,01 Số liệu chuyển đổi theo đổi theo công thức y=arcsin với x số phần trăm mẫu tạo phôi nghiệm thức lần lặp lại Hình Phôi soma trực tiếp tạo từ chồi lan Dendrobium Caesar White mơi trường có bổ sung BA NAA Kết nghiên cứu Chung cs (2005) việc tạo phôi soma trực tiếp từ giống lan Dendrobium Chiengmai Pink đưa kết tương tự Ở nghiệm thức tiếp theo, BA bổ sung vào mơi trường Knudson C có 20% nước dừa với nồng độ thay đổi từ 0,5 - mg/l kết hợp với 0,3 mg/l NAA cho kết khả quan cảm ứng tạo phôi soma trực tiếp, tỉ lệ mẫu cảm ứng 22,22 %, 44,44% cao 77,78% nghiệm thức 0,5 mg/l BA; mg/l BA 1,5 mg/l Kết giải thích bổ sung BA vào mơi trường, có tác dụng kích thích tăng trưởng tế bào với điều kiện có mặt auxin mơi trường, có tác động lên hai bước phân chia tế bào: phân nhân phân bào Tuy nhiên, nồng độ BA tăng lên mg/l tỉ lệ tạo phơi giảm cịn 61,11% mẫu cảm ứng tạo phơi Mặc dù khơng có khác biệt ý nghĩa mặc thống kê thấy nồng độ BA mg/l + 0,3 mg/l NAA + 20% nước dừa có dấu hiệu ức chế hình thành phơi Sự phát sinh phôi chịu ảnh hưởng yếu tố di truyền tính trạng khác kiểu gen hay giống Nên chọn mẫu ni cấy có ảnh hưởng quan trọng đến dịng tế bào có khả phát sinh phơi (Lo Sciavo, 1995) Ở lồi thực vật khác có tiềm phát sinh phơi khác nhau, nên mẫu nuôi cấy chịu ảnh hưởng kiểu di truyền, giai đoạn phát triển mẹ, sinh lý mẹ lấy mẫu trạng thái mẫu nuôi cấy (Litz Gray, 1995) Do vậy, khảo sát kiểu bố trí thí nghiệm, với giống Dendrobium Caesar White ta 423 thu nhận kết khả quan trên, cịn với giống Dendrobium Uraiwan, khơng nhận thấy dấu hiệu phát sinh phôi soma trực tiếp mà quan sát tạo chồi giống lan Hình Phơi soma lan Dendrobium Caesar White A Phơi hình tim; B Phơi nảy mầm 3.3 Ảnh hưởng nồng độ BA IBA đến khả tái sinh chồi từ phôi soma Kết nghiên cứu cho thấy 100% mẫu cấy hình thành chồi, nghiệm thức mơi trường Knudson C có bổ sung mg/l BA 0,5 mg/l IBA cho số lượng chồi cao (13,48 chồi/mẫu), cụm chồi xanh, chồi tách rõ ràng, có từ hai đến ba lá, thân chồi phát triển tốt, có xuất rễ Khi tăng nồng độ BA lên 2,5 mg/l giữ nguyên nồng độ 0,5 mg/l IBA, số lượng chồi hình thành 13,18 chồi/mẫu, số chồi khơng có khác biệt so với nghiệm thức D4 (2 mg/l BA + 00,5 mg/l IBA) Tuy nhiên, nghiệm thức bổ sung mg/l BA 0,5 mg/l IBA, số chồi/mẫu giảm rõ rệt, cịn 7,81 chồi/mẫu Chỉ có số chồi có thân chồi vươn cao, mang hai đến ba lá, cịn lại khối hình thành mầm nhỏ ngắn, chưa chưa phát triển thành chồi hoàn chỉnh Ở nghiệm thức D1, D2, D3 bên cạnh việc hình thành chồi, mẫu cấy có xuất protocorm phía chồi, đặc biệt nghiệm thức D2 (1 mg/l BA + 0,5 mg/l IBA) lượng lớn protocorm hình thành, mẫu cấy dễ tách rời Số chồi/mẫu đạt 3,81 chồi/mẫu nghiệm thức D1 (0,5 mg/l BA 0,5 mg/l IBA), nghiệm thức D2 5,17 chồi/mẫu D3 10,56 chồi/mẫu Các chồi xanh phát triển tốt mơi trường Bảng Số lượng chồi hình thành từ phôi soma lan Dendrobium Caesar White sau 60 ngày nuôi cấy Nghiệm Môi BA IBA Số chồi/mẫu thức trường (mg/l) (mg/l) 3,81 0,39e D1 KC 0,5 0,5 D2 KC 1,0 0,5 5,17 0,13d D3 KC 1,5 0,5 10,56 0,40b D4 KC 2,0 0,5 13,48 0,34a D5 KC 2,5 0,5 13,18 0,06a D6 KC 3,0 0,5 7,81 0,53c CV (%) 3,87 424 Hình Chồi lan Dendrobium Caesar White sau 60 ngày nuôi cấy D1: KC + 0,5 mg/l BA + 0,5 mg/l IBA D4: KC + 2,0 mg/l BA + 0,5 mg/l IBA D2: KC + 1,0 mg/l BA + 0,5 mg/l IBA D5: KC + 2,5 mg/l BA + 0,5 mg/l IBA D3: KC + 1,5 mg/l BA + 0,5 mg/l IBA D6: KC + 3,0 mg/l BA + 0,5 mg/l IBA KẾT LUẬN Thời gian xử lí mẫu đốt thân Dendrobium Caesar White Dendrobium Uraiwan với Javel 30% 20 phút cho hiệu tốt, tỉ lệ mẫu sống nấm, khuẩn cao: Dendrobium Caesar White - 77,78%; Dendrobium Uraiwan - 72,22% Môi trường Knudson C chứa mg/l BA 0,5 mg/l NAA cho phát sinh chồi từ chồi ngủ tốt giống Dendrobium Caesar White, với chiều cao 3,25 cm phù hợp cho thí nghiệm tạo phơi Mơi trường Knudson C chứa mg/l BA 0,5 mg/l NAA cho số chồi phát sinh mẫu tốt (1,56 chồi) chiều cao chồi trung bình 2,39 cm giống lan Dendrobium Uraiwan Môi trường Kundson C bổ sung 20% nước dừa 1,5 mg/l BA kết hợp 0,3 mg/l NAA cho tỉ lệ tạo phôi soma trực tiếp từ chồi in vitro giống lan Dendrobium Caesar White đạt 77,78% Môi trường Kundson C chứa 1,5 mg/l BA kết hợp 0,3 mg/l NAA bổ sung thêm 20% nước dừa không cho kết cảm ứng tạo phôi soma trực tiếp giống Dendrobium Uraiwan Môi trường Knudson C bổ sung mg/l BA kết hợp 0,5 mg/l IBA, 15% nước dừa, 0,5 g/l than hoạt tính cho 100% mẫu phôi tái sinh thành chồi, số chồi/mẫu đạt 13,48 chồi TÀI LIỆU THAM KHẢO Bùi Trang Việt 2000 Phát triển Sinh lý thực vật đại cương Nhà xuất Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh Chung H H., Tsung J., and Chang W.C 2005 Cytokinins induce direct somatic embryogenesis of Dendrobium Chiengmai Pink and subsequent plant regeneration In vitro Cell Dev Biol-Plant 41: 765-769 425 Chung H H., Tsung J., and Chang W.C 2007 Plant regeneration through direct somatic embryogenesis from leaf explants of Dendrobium Biologia Plantarum 51 (2): 346-350 Dương Tấn Nhựt, Hồng Ngọc Trâm, Nguyễn Phúc Huy, Đinh Văn Khiêm 2009 Ảnh hưởng nước dừa sucroza lên tăng sinh mơ sẹo hình thành phơi vơ tính lồi lan hồ điệp [Phalaenopsis Amabilis (L.) Blume] Tạp chí sinh học 31: 77-84 Dương Cơng Kiên 2002 Nuôi cấy mô thực vật Nhà xuất Đại học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh Dương Tấn Nhựt 2011 Công nghệ sinh học thực vật: Nghiên cứu ứng dụng Nhà xuất Nông nghiệp Edwin F George 1993 Plant Propagation by Tissue Culture Exegetics Ltd., Edington, Wilts BA13 4QG, England Mai Xuân Lương 2005 Giáo trình Cơng nghệ sinh học Thực vật Đại học Đà Lạt Nguyễn Bảo Toàn 2010 Giáo trình ni cấy mơ tế bào thực vật Nhà xuất Đại học Cần Thơ 10 Nguyễn Đức Lượng, Lê Thị Thuỷ Tiên 2002 Công nghệ tế bào Nhà xuất Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh 11 Pyati A.N, Murthy H.N, Halhm E.J & Pack K.Y 2002 In vitro propagation of Dendrobium macrostachyum Lindl - A threatened orchid Indian Journal of Experimental Biology: 620-623 12 Trần Thị Dung 2003 Bài giảng nuôi cấy mô tế bào thực vật Trường Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh 13 Trần Văn Minh 1999 Giáo trình Cơng nghệ sinh học Thực vật Viện sinh học nhiệt đới 426 ... phù hợp cho việc tạo phôi soma trực tiếp từ chồi in vitro Ảnh hưởng nồng độ BA IBA đến khả tái sinh chồi từ phôi soma Các phôi soma tách từ chồi chuyển sang môi trường tăng sinh Knudson C bổ... sinh phôi soma trực tiếp mà quan sát tạo chồi giống lan Hình Phơi soma lan Dendrobium Caesar White A Phơi hình tim; B Phơi nảy mầm 3.3 Ảnh hưởng nồng độ BA IBA đến khả tái sinh chồi từ phôi soma. .. Hình Phôi soma trực tiếp tạo từ chồi lan Dendrobium Caesar White mơi trường có bổ sung BA NAA Kết nghiên cứu Chung cs (2005) việc tạo phôi soma trực tiếp từ giống lan Dendrobium Chiengmai Pink