ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Đối tượng và phạm vi nghiên cứu
- Vịt nuôi tại tỉnh Thái Nguyên
- Bệnh đơn bào Leucocytozoon ở vịt
Các mẫu được thu thập từ các nông hộ và trại chăn nuôi vịt ở xã Phúc Hà, huyện Đại Từ, huyện Phú Lương, và huyện Phú Bình, tỉnh Thái Nguyên, với quy mô đa dạng.
- Địa điểm xét nghiệm mẫu: Phòng thí nghiệm Khoa Chăn nuôi Thú y – Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên
- Thời gian nghiên cứu: Từ 28/5/2020 đến 28/11/2020.
Vật liệu nghiên cứu
- Vịt bị bệnh do Leucocytozoon
3.2.2 Dụng cụ và hoá chất
- Kính hiển vi quang học, kính lúp
- Dầu soi kính, cồn methanol, cồn 96 0
- Hoá chất và các dụng cụ thí nghiệm khác
Nội dung nghiên cứu
3.3.1 Nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ bệnh Leucocytozoon ở vịt tại tỉnh
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở vịt tại các địa phương
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở vịt theo mùa
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo tuổi vịt
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo điều kiện vệ sinh thú y
3 3.2 Nghiên cứu bệnh do đơn bào Leucocytozoon gây ra ở vịt tại tỉnh Thái Nguyên
- Thành phần loài đơn bào Leucocytozoon ký sinh ở vịt tại các địa phương
- Đặc điểm bệnh lý và lâm sàng bệnh Leucocytozoon ở vịt
3.3.3 Nghiên cứu biện pháp phòng và trị bệnh
Xác định hiệu lực và độ an toàn của phác đồ điều trị bệnh Leucocytozoon cho vịt.
Bố trí thí nghiệm và phương pháp nghiên cứu
3.4.1 Phương pháp bố trí theo dõi xác định loài Leucocytozoon ký sinh ở vịt tại tỉnh Thái Nguyên
Sau khi xét nghiệm mẫu máu và phát hiện có sự hiện diện của đơn bào đường máu ký sinh, tôi tiến hành phân loại chúng dựa trên hình thái của các loại đơn bào đã được xác định, theo khóa định loại của Mathis và Leger, năm 1910.
3.4.2 Bố trí lấy mẫu và phương pháp xác định tỷ lệ, cường độ nhiễm Leucocytozoon ở vịt
3.4.2.1 Bố trí thu thập mẫu
Thu thập mẫu tại 4 huyện trên địa bàn tỉnh Thái Nguyên
Mỗi mẫu máu vịt làm 3 tiêu bản
3.4.2.2 Phương pháp xác định tỷ lệ và cường độ nhiễm Lecocytozoon ở gà tại các địa phương
* Phương pháp thu thập mẫu
Mẫu máu được thu thập ngẫu nhiên từ vịt nuôi thả vườn tại các nông hộ, các trại chăn nuôi gà ở các địa phương của tỉnh Thái Nguyên
Chuẩn bị phiến kính mới bằng cách tẩy mỡ, ngâm và rửa với xà phòng, sau đó ngâm trong cồn 96 độ trong 3 giờ Lau khô bằng khăn mềm không xơ và chọn lamen kích thước 2 x 2 cm với rìa phẳng, nhẵn.
Trước khi lấy mẫu máu xét nghiệm, cần quan sát kỹ các biểu hiện lâm sàng của vịt Sử dụng kim để lấy 1 giọt máu tươi tại tĩnh mạch cánh và đặt lên phiến kính cách bờ khoảng 1 cm Đặt lamen nghiêng 45 độ và đẩy lamen để máu dàn thành lớp mỏng đều Cố định tiêu bản bằng cồn methanol và làm 3 tiêu bản cho mỗi con vịt Tiêu bản được ghi số thứ tự bằng bút lông dầu và ghi nhật ký thí nghiệm với các thông tin như chủ hộ, địa chỉ, ngày lấy mẫu, tuổi vịt, phương thức chăn nuôi, trạng thái và màu sắc phân, điều kiện vệ sinh thú y, cùng các biểu hiện lâm sàng.
* Chuẩn bị thuốc nhuộm giemsa cơ bản: Dung dịch giemsa mẹ
Nguyễn Thị Kim Lan và cs (2008) [5] […] cho biết: Nhuộm tiêu bản máu bằng thuốc nhuộm giemsa gồm 3 bước như sau:
- Bước 1: Pha thuốc nhuộm giemsa
+ Nước cất trung tính (pH = 7,2): 9 phần
Nước cất để sẵn trong 1 cốc nhỏ có mỏ (100 ml), lấy dung dịch giemsa cơ bản bằng 1 pipet, nhỏ chậm giemsa vào cốc nước, không được lắc cốc
- Bước 2: Đổ chậm dung dịch nhuộm vào hộp nhuộm cho ngập các tiêu bản, đậy nắp hộp nhuộm để tránh bụi
Dùng 1 pince kẹp, cặp lần lượt từng tiêu bản và để nghiêng dưới vòi nước cất chảy nhẹ (pH = 7,2) cho trôi hết thuốc nhuộm dư thừa Sau đó dựng nghiêng tiêu bản vào cạnh 1 cái hộp, để khô tự nhiên
Phương pháp kiểm tra Leucocytozoon trên tiêu bản máu nhuộm giemsa bao gồm việc nhỏ một giọt dầu soi kính lên tiêu bản và quan sát dưới kính hiển vi với vật kính dầu, độ phóng đại 10 x 90 hoặc 10 x 100 Nếu phát hiện đơn bào Leucocytozoon trong mẫu máu, thì mẫu đó được xác định là có nhiễm, ngược lại sẽ được coi là không nhiễm.
Cường độ nhiễm được xác định dựa trên tỷ lệ phần trăm hồng cầu có đơn bào ký sinh, từ đó phân loại các mức cường độ nhiễm thành nhẹ, trung bình và nặng.
- Nhiễm mức độ nhẹ: ≤ 5% số hồng cầu có đơn bào ký sinh, đồng thời vịt không có biểu hiện lâm sàng
- Nhiễm mức độ trung bình: > 5% – 10% số hồng cầu có đơn bào ký sinh, đồng thời vịt có một số triệu chứng lâm sàng nhưng chưa rõ rệt
- Nhiễm mức độ nặng: > 10% số hồng cầu có đơn bào ký sinh, đồng thời vịt có triệu chứng lâm sàng rõ rệt
3.4.2.3 Quy định một số yếu tố dịch tễ liên quan đến tình hình nhiễm đơn bào Leucocytzoon ở vịt
* Mùa: Thu thập 400 mẫu máu vịt tại các địa phương theo mùa trong năm, số lượng mẫu thu thập theo từng mùa như sau:
- Mùa Hè (từ tháng 6 đến tháng 8): 200 mẫu
- Mùa Thu (từ tháng 9 đến tháng 11): 200 mẫu
* Lứa tuổi vịt: Thu thập 400 mẫu máu vịt tại các địa phương theo 4 lứa tuổi, số lượng mẫu máu thu thập theo từng lứa tuổi như sau:
* Tình trạng vệ sinh thú y: Thu thập mẫu máu vịt tại các địa phương theo các tình trạng VSTY như sau:
Để đảm bảo VSTY tốt cho vật nuôi, cần thiết lập chuồng trại cao ráo, thoáng mát và sạch sẽ Thường xuyên quét dọn chuồng nuôi, khu vực xung quanh và bãi chăn thả là rất quan trọng Định kỳ phun thuốc khử trùng, thuốc diệt muỗi và tiêu độc chuồng trại cùng với dụng cụ chăn nuôi cũng góp phần nâng cao vệ sinh Ngoài ra, việc phát quang cây cỏ và khơi thông cống rãnh sẽ giúp cải thiện môi trường sống cho vật nuôi.
VSTY trung bình cho thấy việc quản lý vệ sinh trong chăn nuôi còn hạn chế, với việc không thường xuyên quét dọn chuồng nuôi và khu vực xung quanh, dẫn đến sự tồn đọng nước đọng và môi trường ẩm ướt Ngoài ra, việc phun thuốc diệt muỗi và dĩn cũng diễn ra không đều đặn, cùng với việc không thường xuyên tiêu độc chuồng trại và dụng cụ chăn nuôi Việc phát quang cây cỏ và khơi thông cống rãnh gần khu vực chăn nuôi cũng chưa được thực hiện thường xuyên, tạo điều kiện cho dịch bệnh phát triển.
VSTY kém thường xuất hiện ở những khu vực chuồng nuôi có môi trường ẩm thấp, với nhiều vũng nước đọng và bụi cây rậm rạp Việc không tiêu độc chuồng trại và dụng cụ chăn nuôi, cũng như không khơi thông cống rãnh, góp phần làm gia tăng nguy cơ bệnh tật cho vật nuôi.
3.4.3 Phương pháp xác định quy luật hoạt động của dĩn – véc tơ truyền bệnh Leucocytozoon cho vịt theo tháng trong thời gian thực tập
Theo dõi sự xuất hiện và hoạt động của dĩn từ tháng 6 đến tháng 11 giúp xác định quy luật hoạt động của chúng, xác định các tháng dĩn hoạt động mạnh và ngừng hoạt động Kết quả này sẽ cung cấp cơ sở khoa học để khuyến cáo người chăn nuôi áp dụng biện pháp diệt dĩn – véc tơ truyền Leucocytozoon cho gà, nhằm hạn chế tác hại do bệnh Leucocytozoon gây ra ở vịt.
Các tháng có hoạt động nhiều được ký hiệu bằng (+++), trong khi tháng có hoạt động bình thường được ký hiệu là (++) Tháng có hoạt động ít sẽ được ký hiệu bằng (+), và tháng dừng hoạt động sẽ được ký hiệu là (-).
3.4.4 Phương pháp đánh giá hiệu lực và độ an toàn của phác đồ điều trị bệnh Leucocytozoon cho vịt
Bố trí thí nghiệm sử dụng 2 phác đồ điều trị cho những vịt có kết quả xét nghiệm máu là nhiễm Leucocytozoon theo sơ đồ sau:
Phác đồ sử dụng và liều lượng
(Giải độc gan) (1g/1 lít nước)
- Paradol K + C (hạ sốt) (1g/ 2 lít nước)
- TOP – PHOSRETIC (Giải độc gan) (1g/1 lít nước)
- Paradol K + C (hạ sốt) (1g/ 2 lít nước) Liệu trình
* Thành phần thuốc có trong các phác đồ điều trị như sau:
- TOP – PHOSRETIC (Giải độc gan): Vitamin A (min) 500.000 UI
- TOP – C 20%: Vitamin C (min) 200.000 mg Độ ẩm (max) 10%
Tá dược vừa đủ 1kg
* Phương pháp xác định hiệu lực và độ an toàn của phác đồ điều trị
Để điều trị bệnh Leucocytozoon ở vịt, cần sử dụng hai phác đồ điều trị khác nhau Sau khi cho vịt uống thuốc, tiến hành lấy máu hàng ngày để xét nghiệm bằng phương pháp dàn tiêu bản máu và nhuộm giemsa, kiểm tra dưới kính hiển vi nhằm đánh giá hiệu quả từng phác đồ Theo dõi liên tục đến ngày thứ 10 sau khi dùng thuốc; nếu không phát hiện đơn bào Leucocytozoon trong máu, thuốc được xem là có hiệu lực triệt để Nếu vẫn thấy Leucocytozoon nhưng với số lượng giảm rõ rệt, thuốc được đánh giá là có hiệu lực nhưng chưa triệt để Ngược lại, nếu số lượng Leucocytozoon không giảm hoặc giảm không đáng kể, thuốc được coi là không có hiệu lực.
Theo dõi vịt sau dùng thuốc về các chỉ tiêu: ăn uống, vận động, và các phản ứng khác để xác định thuốc có an toàn hay không.
Phương pháp xử lý số liệu
Số liệu thu thập được xử lý theo phương pháp thống kê sinh học (Nguyễn Văn Thiện, 2008) và trên phần mềm Microsoft Excel
PHẦN 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1 Thành phần loài đơn bào Leucocytozoon gây bệnh ở vịt tại tỉnh Thái Nguyên Để xác định loài đơn bào Leucocytozoon gây bệnh cho vịt tại tỉnh Thái
Nguyên đã thực hiện việc làm tiêu bản máu, nhuộm giemsa và đọc kết quả dưới kính hiển vi Dựa theo mô tả của Levine N D (1985) về hình thái các loài đơn bào, Nguyên xác định được một loài đơn bào ký sinh gây bệnh cho vịt tại tỉnh Thái Nguyên Kết quả được trình bày trong bảng 3.1.
Bảng 4.1 Thành phần loài Leucocytozoon gây bệnh ở vịt tại Thái Nguyên Địa phương Loài Leucocytozoon Số loài phát hiện
Bảng 4.1 cho thấy đã xác định được một loài đơn bào thuộc giống Leucocytozoon, cụ thể là L simondi, gây bệnh cho vịt tại bốn địa phương của tỉnh Thái Nguyên Loài L simondi có sự phân bố rộng rãi và phổ biến, xuất hiện ở tất cả các địa phương được nghiên cứu Đặc biệt, trong các mẫu định loài tại bốn địa phương này, không ghi nhận sự hiện diện của các loài Leucocytozoon khác.
Loài đơn bào thấy ở 4 địa phương tỉnh Thái Nguyên có vị trí phân loại như sau:
Loài Leucocytozoon simondi (Mathis et Leger, 1910) thuộc giống
Leucocytozoon (Sambon, 1908), họ Leucocytozoidae (Doflein, 1916), bộ
Haemosporoda (Jacques Euzéby, 1988), lớp Aconoidasida (Mehlhorn, 1980), ngành Apicomplexa (Levine, 1970)
Loài L simondi là một loại đơn bào có hình dạng cầu, khi ký sinh trong tế bào hồng cầu của vịt, nó khiến cho nhân hồng cầu lệch sang một bên, làm cho hồng cầu của vịt có hình dạng gần tròn.
Hình thái của loài đơn bào phát hiện được trên vịt ở Thái Nguyên hoàn toàn phù hợp với mô tả của Levine N D (1985) [27]
Theo nghiên cứu của Phạm Sỹ Lăng (2010), loài Leucocytozoon chủ yếu gây bệnh cho đàn vịt ở Việt Nam là L simondi Kết quả từ các mẫu máu vịt được thu thập tại 4 địa phương thuộc tỉnh Thái Nguyên cho thấy chỉ có sự xuất hiện của một loài đơn bào ký sinh, đó là L simondi.
Theo nghiên cứu của Nguyễn Thị Kim Lan (2012), Leucocytozoon thường ký sinh trong hồng cầu và đôi khi trong bạch cầu của gà Tuy nhiên, trong các mẫu máu vịt được kiểm tra tại Thái Nguyên, chỉ phát hiện Leucocytozoon ký sinh trong hồng cầu, không có mẫu nào cho thấy ký sinh trong bạch cầu.
4.2 Một số đặc điểm dịch tễ bệnh đơn bào Leucocytozoon ở vịt tại tỉnh Thái Nguyên
4.2.1 Tình hình nhiễm đơn bào đường máu Leucocytozoon ở vịt
4.2.1.1 Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở vịt theo địa phương Để đánh giá được tỷ lệ và cường độ nhiễm đơn bào Leucocytozoon theo địa phương, em đã tiến hành thu thập và xét nghiệm 400 mẫu máu vịt ở huyện Đồng Hỷ, huyện Đại Từ, huyện Phú Lương, huyện Phú Bình thuộc tỉnh Thái Nguyên Kết quả được trình bày ở bảng 4.2
Bảng 4.2 Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở vịt theo địa phương Địa phương
Số vịt xét nghiệm (con)
Cường độ nhiễm (% số hồng cầu có đơn bào)
Huyện Đồng Hỷ 100 19 19,00 8 42,10 11 57,90 0 0,00 Huyện Đại Từ 100 6 6,00 4 66,67 2 33,33 0 0,00 Huyện Phú Lương 100 12 12,00 9 75,00 2 16,67 1 8,33 Huyện Phú Bình 100 27 27,00 14 51,85 7 25,92 6 22,23
Theo điều tra, vịt nhiễm đơn bào Leucocytozoon xuất hiện ở tất cả các địa phương nghiên cứu, nhưng tỷ lệ và cường độ nhiễm khác nhau giữa các khu vực Sự khác biệt này chủ yếu do điều kiện tự nhiên và kinh tế xã hội ảnh hưởng đến sự phân bố của véc tơ truyền bệnh Leucocytozoon, dẫn đến sự khác nhau về tỷ lệ và cường độ nhiễm tại từng địa phương.
Trong tổng số 400 vịt được xét nghiệm máu có 64 vịt nhiễm đơn bào
Leucocytozoon, tỷ lệ nhiễm chung ở 4 địa phương là 16,00%; biến động từ
6,00% – 27,00% theo từng địa phương Trong đó, vịt ở huyện Phú Bình nhiễm với tỷ lệ là 27,00% chiếm tỷ lệ cao nhất
Theo điều tra, hầu hết các hộ chăn nuôi vịt chưa quan tâm đến việc xây dựng chuồng trại hợp vệ sinh, nhiều hộ còn sử dụng chuồng tạm bợ và khu vực xung quanh chuồng còn nhiều rãnh nước đọng Ngoài ra, việc vệ sinh chuồng và khu vực xung quanh cũng chưa được các hộ dân chú trọng Đặc biệt, nhiều hộ chăn nuôi vẫn sử dụng thuốc phun diệt dĩn và thuốc phòng bệnh đơn bào mà không có sự chú ý đúng mức.
Leucocytozoon cho vịt còn rất ít Đây cũng là nguyên nhân này làm cho tỷ lệ vịt mắc bệnh Leucocytozoon ở huyện Phú Bình tương đối cao
Tại các địa phương, vịt đều bị nhiễm Leucocytozoon, với tổng số 64 con vịt nhiễm Trong đó, 54,69% nhiễm ở cường độ nhẹ, 34,37% ở cường độ trung bình và 10,94% ở cường độ nặng.
Huyện Đồng Hỷ ghi nhận tổng cộng 19 con vịt nhiễm bệnh, trong đó có 8 con nhiễm ở cường độ nhẹ, chiếm 42,10%, và 11 con nhiễm ở cường độ trung bình, chiếm 57,90% Đáng chú ý, không có con vịt nào nhiễm ở cường độ nặng.
- Huyện Đại Từ: Có 66,67% nhiễm ở cường độ nhẹ, 33,33% vịt nhiễm ở cường độ trung bình và không có vịt nhiễm ở cường độ nặng
- Huyện Phú Lương: Có 9/12 vịt nhiễm Leucocytozoon ở cường độ nhẹ, chiếm 75,00%; 2 vịt nhiễm ở cường độ trung bình, chiếm 16,67%; 1 vịt nhiễm ở cường độ nặng, chiếm 8,33%
Huyện Phú Bình ghi nhận số lượng vịt nghiên cứu có cường độ nhiễm cao nhất trong 4 địa phương, với 14 vịt nhiễm ở cường độ nhẹ, chiếm 51,85%; 7 vịt nhiễm ở cường độ trung bình, chiếm 25,92%; và 6 trường hợp nhiễm ở cường độ nặng, chiếm 22,23%.
Mức độ nặng nhẹ của bệnh Leucocytozoon ở gia cầm chịu ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố, bao gồm tuổi của gia cầm, mùa vụ, phương thức chăn nuôi, điều kiện vệ sinh thú y và kỹ thuật chăm sóc nuôi dưỡng.
Kết quả điều tra cho thấy, bốn địa phương thuộc tỉnh Thái Nguyên chịu ảnh hưởng của khí hậu trung du miền núi phía Bắc, với mùa Đông khô lạnh và ít mưa, mùa Hè nóng ẩm và mưa nhiều, tạo điều kiện thuận lợi cho các loại dĩn hút máu phát triển Các địa phương xa trung tâm tỉnh có điều kiện chăn nuôi và vệ sinh thú y yếu kém, người dân chưa ý thức đầy đủ về việc phòng trị bệnh cho vật nuôi Nhiều hộ chăn nuôi chủ yếu theo phương thức chăn thả và bán chăn thả, trong khi một số hộ có quy mô chuồng trại nhất định.
Vịt nuôi ở những khu vực có điều kiện thuận lợi cho véc tơ truyền đơn bào Leucocytozoon phát triển, như thảm thực vật dày, vệ sinh thú y kém, và phương thức chăn nuôi lạc hậu, sẽ có nguy cơ cao về tỷ lệ và cường độ nhiễm bệnh Để giảm thiểu tình trạng nhiễm Leucocytozoon, người chăn nuôi cần thường xuyên thực hiện các biện pháp tiêu diệt véc tơ, đồng thời tăng cường công tác vệ sinh thú y và chăm sóc nuôi dưỡng cho vịt.
4.2.1.2 Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở vịt theo mùa
Do thời gian thực tập có hạn, tôi chỉ thực hiện việc lấy mẫu máu vịt tại 4 địa phương trong 3 mùa (Hè, Thu, Đông) để kiểm tra tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon theo mùa Kết quả xét nghiệm được trình bày trong bảng.
Bảng 4.3 Tỷ lệ và cường độ nhiễm Leucocytozoon ở vịt theo mùa
Mùa Số vịt xét nghiệm (con)
Cường độ nhiễm (% số hồng cầu có đơn bào)
