Science & Technology Development, Vol 19, No.T5-2016 Khảo sát hoạt tính kháng oxy hố kháng vi khuẩn Enterobacter cloacae cao chiết từ cỏ mực (Eclipta alba Hassk.) Đái Thị Xuân Trang Võ Thị Tú Anh Trường Đại học Cần Thơ (Bài nhận ngày 03 tháng 03 năm 2016, nhận đăng ngày 02 tháng 12 năm 2016) TÓM TẮT Khảo sát khả kháng vi khuẩn kháng oxy hoá khả ức chế tăng trưởng Enterobacter cloacae kháng oxy hóa cao vi khuẩn E cloacae Trong đó, hoạt tính methanol, hexane, chloroform ethyl acetate kháng khuẩn kháng oxy hoá cao ethyl acetate cỏ mực (thân, rễ) Bộ phận cỏ cao tất loại cao chiết khảo mực ly trích dung mơi methanol, sát Đường kính vịng vơ khuẩn lớn 26,3 hexane, chloroform ethyl acetate Khả mm nồng độ cao ethyl acetate 32 g/mL kháng vi khuẩn Enterobacter cloacae cao Cao ethyl acetate cỏ mực có khả kháng chiết từ cỏ mực xác định phương oxy hóa cao loại cao khảo sát cịn lại với pháp Kirby-Bauer khả kháng oxy hóa giá trị EC50 = 419,38 μg/mL thấp tiến hành phương pháp trung hòa gốc khả trung hòa gốc tự DPPH vitamin tự DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) Tất C (EC50 = 22,08 μg/mL) khoảng 18,99 lần 12 loại cao khảo sát thể hoạt tính Từ khóa: cỏ mực, Enterobacter cloacae, kháng khuẩn, kháng oxy hoá, thành phần hoá học MỞ ĐẦU Enterobacter nhóm tác nhân gây bệnh hội quan trọng người, nguyên nhân gây bệnh nhiễm trùng nhiễm trùng đường tiết niệu, viêm tủy xương, viêm túi mật, viêm màng não trẻ sơ sinh [1] Enterobacter cloacae tác nhân gây bệnh nhiễm trùng phổ biến bệnh viện có tính kháng kháng sinh cao khó tiêu diệt phương pháp khử trùng thông thường [2], nên việc điều trị bệnh nhiễm trùng loài vi khuẩn gây gặp nhiều khó khăn Bên cạnh đó, vấn đề phát sinh gốc tự thể trở thành mối quan tâm hàng đầu nhà khoa học Gốc tự nguyên nhân làm tế bào già gây rối loạn thể dẫn đến bệnh lý nghiêm trọng khác ung thư, tim mạch, bệnh Alzheimer bệnh đái tháo đường [3] Trang 76 Ngày nay, có nhiều mối quan tâm chất kháng oxy hóa có nguồn gốc từ thực vật có tác dụng ngăn chặn q trình oxy hóa khơng mong muốn thể hợp chất carotenoid, flavonoid, phenol, vitamin C, vitamin E, [4] Việc ứng dụng loại thảo dược thiên nhiên để điều trị bệnh giới quan tâm độ hữu hiệu tính an tồn sử dụng Cây cỏ mực (Eclipta prostrata L., syn Eclipta alba L.) thuốc sử dụng phổ biến Y học cổ truyền Việt Nam số nước giới Cỏ mực nghiên cứu có khả kháng số loài vi khuẩn như: Edwardsiella tarda, Edwardsiella ictaluri, Staphylococcus aureus Aeromonas hydrophila [5] Cỏ mực nghiên cứu khả làm giảm glucose huyết cải thiện trọng lượng chuột bị bệnh đái tháo đường [6] Ngồi ra, TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 19, SỐ T5- 2016 cao chiết benzene, hexane, ethyl acetate, methanol chloroform cỏ mực nghiên cứu khả gây chết ấu trùng muỗi Aedes aegypti - tác nhân gây bệnh sốt rét [7] Mục tiêu nghiên cứu đánh giá khả kháng vi khuẩn Enterobacter cloacae khả kháng oxy hoá cao gồm methanol, hexane, chloroform ethyl acetate điều chế từ phận rễ thân cỏ mực VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Vật liệu Vật liệu thí nghiệm cỏ mực (thân, rễ) thu hái xã Thới Hưng, huyện Cờ Đỏ, thành phố Cần Thơ Cây cỏ mực định danh theo hệ thống phân loại Cây cỏ Việt Nam [8] Dòng vi khuẩn Enterobacter cloacae phân lập từ ruột tôm sú bệnh định danh phương pháp xác định đặc điểm sinh hoá với kit API 20E kết hợp với phương pháp: Maldi Tof Mass giải trình tự gen 16S rRNA [9] Thiết bị sử dụng nghiên cứu gồm máy cô quay chân không Heidolph (Đức), Metler Toledo, cân phân tích, máy đo quang phổ, tủ ủ, tủ cấy vô trùng Laminar (Việt Nam), nồi khử trùng Hóa chất sử dụng thí nghiệm gồm: DPPH (2,2–diphenyl–1–picrylhydrazyl) (Wako, Japan), vitamin C, methanol (Merck), dimethyl sulfoside (Merck), sodium chloride (Merck), yeast extract (Himeda, India), chloroform (Merck), peptone (Merck) Phương pháp Điều chế cao chiết methanol Các phận rễ, thân cỏ mực sấy khô 40 C xay thành bột Bột thô rễ, thân, cỏ mực có trọng lượng 480 g, 1680 g 1000 g, ngâm dung mơi methanol 48 Sau đó, hỗn hợp lọc cô quay áp suất thấp thu cao rễ, thân dạng sệt 40 g, 85 g 90 g Cao methanol rễ, thân cỏ mực chiết phân bố lỏng – lỏng thu cao chiết hexane, chloroform ethyl acetate [10] Khảo sát kháng E cloacae Cao chiế t cỏ mực đươ ̣c pha v ới methanol để đươ ̣c các n ồng độ 2, 4, 8, 16 32 µg/mL Dịch vi khuẩn có nồng độ 106 CFU trãi môi trường thạch LB Đĩa thạch để khô 15 phút trước đặt khoanh giấy tẩm cao chiết cỏ mực Khả kháng khuẩn xác định dựa xuất vịng trịn vơ khuẩn xung quanh khoanh giấy tẩm cao chiết Kích thước vịng vơ khuẩn ghi nhận thước đo mm [11-13] Khảo sát khả kháng oxy hóa DPPH Khả kháng oxy hóa cao thơ ly trích từ cỏ mực thực theo phương pháp DPPH (2,2–diphenyl–1– picrylhydrazyl) sau: nồng độ cuối cao cỏ mực thí nghiệm 100; 200; 300; 400; 500; 600; 700 µg/mL Lượng cao chiết pha vào phản ứng 100 µL DPPH 6.10-4 M 100 µL (mỗi nồng độ lặp lại lần) Hỗn hợp phản ứng ủ 60 phút tối, sau đo độ hấp thu quang phổ bước sóng 517 nm Khả kháng oxy hóa tính dựa vào giá trị EC50 Giá trị EC50 tính dựa phương trình tuyến tính cao chiết [14, 15] Thống kê phân tích số liệu Kết phân tích thống kê phần mềm Minitab 16.0 đồ thị vẽ phần mềm Microsoft Excel KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Khảo sát khả kháng khuẩn cao chiết cỏ mực Khả kháng khuẩn cao chiết cỏ mực thể qua đường kính vịng vơ khuẩn xuất xung quanh khoanh giấy tẩm cao chiết Thí nghiệm đối chứng tiến hành kháng sinh cefoperazone Ảnh hưởng dung môi methanol lên phát triển vi khuẩn khảo sát tương tự thí nghiệm với cao chiết (Hình 1) Trang 77 Science & Technology Development, Vol 19, No.T5-2016 A B C Hình Ảnh hưởng cao chiết kháng sinh lên phát triển vi khuẩn Chú thích: Vịng vơ khuẩn khơng tạo tẩm methanol (A) Vịng vơ khuẩn tạo cao thân ethyl acetate nồng độ g/mL (B) Vòng vô khuẩn tạo cefoperazone nồng độ g/mL (C) Kết cho thấy, xung quanh khoanh giấy tẩm cao chiết xuất vịng trịn vơ khuẩn với kích thước thay đổi tùy nồng độ cao chiết (Hình 1) Đồng thời, khơng có xuất vịng vơ khuẩn xung quanh khoanh giấy tẩm methanol Như vậy, việc sử dụng dung môi methanol không ảnh hưởng đến kết thí nghiệm Điều liên quan đến tốc độ bay nhanh methanol khiến chất không đủ thời gian ức chế vi khuẩn E cloacae Kết khả kháng khuẩn loại cao cỏ mực trình bày Bảng Kết kháng khuẩn loại cao cỏ mực trình bày Bảng cho thấy, nồng độ cao chiết tăng dần đường kính vịng vơ khuẩn tăng Tuy nhiên, thay đổi kích thước vịng vơ khuẩn khơng đáng kể Ở hầu hết loại cao chiết, đường kính vịng vơ khuẩn khác biệt không ý nghĩa thống kê (P