Bai-4

TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC KHẢ NĂNG KÍCH THÍCH MIỄN DỊCH CỦA ARABINOXYLAN TÁCH CHIẾT TỪ CÁM GẠO VIỆT NAM Trịnh Tất Cường1, Giang Huy Diệm1, Hoàng Thị Mỹ Nhung , Nguyễn Thị Cúc1, Nguyễn Thị Vân Anh1 Phịng Thí nghiệm Trọng điểm Cơng nghệ Enzyme Protein Khoa Sinh học - Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Arabinoxylan sản xuất từ cám gạo Việt Nam đánh giá hoạt tính kích hoạt tế bào lymphocyte chuột sử dụng cho chuột bốn liều lượng 50, 75, 100 200 mg/kg/ngày 30 ngày Nghiên c ứu nhằm chứng minh khả kích hoạt tế bào lymphocyte Arabinoxylan từ cám gạo Việt Nam Liều lượng 200 mg/kg/lần kích thích tiết INF (interferon)-γ nồng độ cao huyết chuột 340 pg/ml Liều lượng 100 mg/kg/lần kích hoạt tế bào giết tự nhiên mức độ cao dẫn tới tỉ lệ giết tế bào Sarcoma 180 chết 183% so với đối chứng Như vậy, Arabinoxylan tách chiết từ cám gạo Việt Nam xem chất tiềm có khả kích thích hoạt động hệ thống miễn dịch thơng qua việc kích hoạt tế bào giết tự nhiên tăng q trình tiết INF-γ Từ khóa: Arabinoxylan, tế bào lymphocyte, tế bào Sacroma 180, INF-γ I ĐẶT VẤN ĐỀ Arabinoxylan chiết xuất từ cám gạo giúp cho thể sản xuất kháng thể Trong số nhóm nghiên cứu Hoa Kỳ đó, tế bào lympho T tế bào giết tự nhiên Nhật Bản chứng minh có khả tăng (NK) trực tiếp tham gia vào phá hủy virus cường miễn dịch chuột người với hiệu tế bào bị nhiễm vi khuẩn tế bào có cao nhiều chất khác có tự khả phát triển thành tế bào ung thư [3] nhiên dạng tổng hợp [1; 2; 3; 4] Mặc Một số cơng trình nghiên cứu chứng minh dù chưa nhận biết xác vai trị quan trọng Arabinoxylan chế tác động Arabinoxylan khả kích hoạt q trình hoạt động kết nghiên cứu chứng minh Ara- tế bào NK điều khiển thụ thể binoxylan có khả giúp thể tăng cường dịng tế bào thơng qua việc đánh giá khả trình sinh cytokine giống inter- tiết INF-γ Tuy nhiên, chưa feron (IFN), interleukin [1] Do vậy, Arabinoxy- có cơng trình nghiên cứu đánh giá lan có khả giúp thể phá hủy số tế vai trò Arabinoxylan tách chiết từ cám gạo bào bị hỏng virus Ngoài ra, Arabinoxylan Việt Nam hệ thống miễn dịch Do vậy, có khả kích thích hệ thống miễn dịch làm mục tiêu nghiên cứu nhằm chứng tăng cường hoạt động tế bào lymphocyte minh khả kích hoạt tế bào lympho- Trong hệ thống miễn dịch, tế bào lympho B cyte Arabinoxylan từ cám gạo Việt Nam Từ kết nghiên cứu cho thấy Địa liên hệ: Trịnh Tất Cường, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Email: cuongtrinhtat@gmail.com Ngày nhận: 23/9/2013 Ngày chấp thuận: TCNCYH 87 (2) - 2014 khả kích thích q trình tiết INF-γ huyết chuột kích hoạt tế bào lymphocyte chuột uống Arabinoxylan tách chiết từ nguồn cám gạo Việt Nam 21 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP nghiệm 106 tế bào ung thư - Phương pháp tách lấy tế bào ung thư Sarcoma 180 từ bụng báng chuột: Đối tượng - Chuột nhắt trắng dòng Swiss (Mus musculus) có trọng lượng trung bình từ 27 - 30 g/ Gây mê chuột ether, khử trùng toàn thân cồn 70oC Tiến hành mổ bộc lộ toàn viện Vệ sinh dịch tễ cung cấp - Dòng tế bào ung thư mô liên kết Sarcoma khoang bụng chuột Dùng bơm tiêm nước sạch, hút lấy dịch báng xoang 180 nhóm nghiên cứu Ung thư thực bụng chuột, chuyển dịch báng vào đĩa nghiệm, trường Đại học Khoa học Tự nhiên cung cấp ni cấy có sẵn mơi trường ly tâm để loại hồng cầu Tế bào vừa tách bổ - Chế phẩm Lentin plus 1000 (Nhật Bản) dạng Arabinoxylan thương phẩm bán sung môi trường mới, nuôi qua đêm tủ nuôi 37oC 5% CO2 thị trường, ký hiệu LP - Chế phẩm Arabinoxylan có kích thước 30 - Quy trình tách chiết Arabinoxylan từ cám gạo Việt Nam: Sản phẩm HA tách chiết từ cám - 50 kDa, tách chiết từ cám gạo Việt Nam nhóm nghiên cứu thuộc phịng Thí nghiệm Trọng điểm Cơng nghệ Enzyme Protein, trường Đại học Khoa học Tự nhiên thực (5), ký hiệu HA gạo Việt Nam mô tả chi tiết công bố khoa học tác giả Đinh Thị Hương cộng [5] Cám gạo sấy 120oC 30 phút để bất hoạt enzyme có sẵn Phương pháp cám gạo giết vi khuẩn Sau bột cám gạo sấy trộn với dung dịch đệm pH 6,0 - Phân lập tế bào lympho từ hạch bạch với tỷ lệ cám: thể tích đệm Các bước tiền huyết chuột: Tiến hành gây mê chuột ether mổ xử lý enzyme tiến hành với enzyme (i) amylase để thủy phân tinh bột, (ii) với cellu- bộc lộ toàn xoang bụng xoang ngực Sau đó, thu lấy hạch bạch huyết vị trí lase để thủy phân cellulose, (iii) với protease để thủy phân protein, (iv) xử lý nhiệt để bất chân cổ Các hạch bạch huyết sau thu chuyển vào đĩa ni cấy có hoạt tồn enzyme Cám gạo sau ly tâm loại dịch chứa sản phẩm thủy sẵn PBS 1X vô trùng Tiếp tục nghiền nhẹ phân, thu bã để tiếp tục thủy phân en- nhàng hạch bạch huyết đếm tế bào lymphocyte thu kính hiển vi soi ngược zyme endoxylase Nồng độ endoxylase sử dụng để thủy phân 0,04 Unit/g cám gạo, Sau đó, ly tâm thu tế bào lymphocyte - Phương pháp gây u báng chuột: đệm pH 5, nồng độ muối NaCl 120 mM, nhiệt độ 55°C, thời gian Sản phẩm sau thủy Dòng tế bào Sarcoma 180 rã đông chuyển vào ống ly tâm chứa sẵn 10ml phân lại ly tâm loại bỏ bã để thu dịch chiết thô Arabinoxylan Dịch chiết thô tiếp tục môi trường RPMI Trộn hỗn hợp ly tâm lọc qua cột lọc cut - off 300 kDa để thu loại bỏ dịch Bổ sung môi trường nuôi cấy để tế bào sinh trưởng tủ nuôi lấy dịch qua cột chứa arabinoxylan tiếp tục cho qua cột lọc cut-off 10 kDa để cô đặc Ara- 37oC 5% CO2 Khi tế bào phát triển tốt, tiến hành cấy truyền tế bào ung thư lên chuột binoxylan kích thước khoảng 30 - 50 kDa loại bỏ đường đơn phân tử lượng nhỏ cách đưa vào xoang bụng chuột thí Arabinoxylan đặc sau đông khô, 22 TCNCYH 87 (2) - 2014 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC lưu mẫu cho thử nghiệm đánh INF-γ tiết dịch huyết kít giá chất lượng Sản phẩm sau kiểm định chất lượng khoa Thực phẩm - Vệ sinh ELISA hãng BD Bioscience Tất bước phân tích thực dẫn an toàn thực phẩm, viện Dinh dưỡng Quốc gia Các thử nghiệm đánh giá chất lượng bao nhà sản xuất - Phương pháp nhuộm tế bào chết: gồm: (i) hàm lượng Arabinoxylan mạch dài (tổng hàm lượng arabinose xylose mạch PI (Propidium iodide) loại thuốc nhuộm huỳnh quang có khả liên kết với axit nu- dài, khơng kể đường đơn, 7,62 g/100 g cleic mạch đôi, thường sử dụng bột), kích thước Arabinoxylan (> 80% đạt kích thước 30 - 50 kDa) Ngồi cịn số để nhuộm DNA/RNA Tế bào nhuộm với PI nồng độ 1ug/ml 10 phút (tránh ánh tiêu protein tổng số, đường tổng số, độ ẩm, nhiễm asen, tổng số vi khuẩn hiếu khí, sáng) - Phương pháp xác định tỷ lệ tế bào chết: vi khuẩn gây bệnh E coli coliform nằm khoảng cho phép an toàn vệ sinh Hỗn hợp tế bào sau nhuộm với PI đếm máy FACS Canto II (BD) để thực phẩm xác định tỷ lệ tế bào chết PI kích thích - Phương thức liều tác động: Phân chia chuột cách ngẫu nhiên bước sóng 488 nm bước sóng phát khoảng 615nm Các tế bào phân loại thành lô sau: Đối chứng sinh học: ni bình thường (kí theo kích thước (FSC) độ phức tạp (SSC) Sau phân loại theo độ phát quang hiệu ĐCSH) Đối chứng dung môi: ngày uống 0,15 (PE) Tỷ lệ loại tế bào xử lý phần mềm BD Canto Diva ml nước (kí hiệu ĐCDM) Lơ uống LP HA liều 50 mg/kg/ngày: ngày uống 0,15ml nồng độ 10 mg/ml, ký - Phân tích thống kê: Đối với phân tích thống kê, số liệu lấy từ kết độc lập, thể ý nghĩa ± SD phân tích hiệu LP(L1) HA (A1) Lô uống LP HA liều 75 mg/kg/ngày: student’s t-test với điều chỉnh ngày uống 0,15 ml nồng độ 15 mg/ml, kí hiệu LP(L2) HA (A2) Bonferroni ANOVA nhiều phép so sánh Sự khác có ý nghĩa thống kê Lô uống LP HA liều 100 mg/kg/ngày: ngày uống 0,15 ml nồng độ 20 mg/ml, kí hiệu LP(L3) HA (A3) Lô uống LP HA liều 200 mg/kg/ngày: ngày uống 0,15 ml nống độ 40 mg/ml, kí hiệu LP(L4) HA (A4) Chuột cho uống chế phẩm lần/ p < 0,05 III KẾT QUẢ Tế bào lymphocyte tách từ hạch bạch huyết chuột Lượng tế bào NK hạch bạch huyết ngày, hàng ngày vào thời điểm chiếm khoảng 41 - 43% tổng số tế bào lym- kéo dài 30 ngày - Enzyme - linked immunosorbent assay phocyte Do vậy, hạch bạch huyết (ELISA): Máu chuột thu đem ly tâm để thu lymphocyte Các tế bào sau tách có huyết Sau đó, phân tích mức độ khoảng μm (hình 1) TCNCYH 87 (2) - 2014 chuột tách để thu nhận tế bào dạng hình trịn, với đường kính trung bình 23 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC B A Hình Tế bào lymphocyte sau 2h tách từ hạch bạch huyết (A): Các tế bào lymphocyte sau tách từ hạch lymphocyte Ảnh chụp kính hiển vi soi ngược Axiovert 40 CFL (Zeiss), độ phóng đại 200x (B): Tế bào lymphocyte sau nhuộm với kháng thể kháng CD8 gắn thuốc nhuộm huỳnh quang R-PE Đường kính tế bào khoảng 2µm Ảnh chụp kính hiển vi huỳnh quang Axioplan FL (Zeiss) Arabinoxylan tăng nhẹ trọng lượng chuột Để đánh giá tác động Arabinoxylan đến phát triển chuột, chuột cân ngày lần lô sau uống chế phẩm HA LP Đồng thời, theo dõi biểu hoạt động ăn, uống, vận động học chuột Kết cân trọng lượng chuột thể bảng cho thấy trọng lượng chuột cho uống HA tăng 10% cho uống LP tăng 15% so với lô đối chứng Chuột lô khỏe mạnh, ăn uống vận động bình thường (kết khơng trình bày đây) Bảng Tình hình cân nặng chuột thí nghiệm Lần cân HA HA2 HA3 HA4 LP1 LP2 LP3 LP4 ĐCSH ĐCDM 20,54 ± 19,444 ± 2,5 20,088 ± 0,5 19,174 ±2 20,172 ± 1,9 18,216 ± 2,3 20,72 ± 3,3 18,402 ± 0,5 20,974 ± 1,7 20,526 ± 1,7 24,626 ± 5,2 23,4 ± 4,5 24,506 ± 2,7 22,956 ± 3,5 24,108 ± 2,9 22,606 ± 4,7 26,314 ± 3,8 23,148 ± 2,8 23,96 ±2 25,762 ± 1,8 27,126 ± 6,7 27,344 ± 4,3 28,924 ± 3,1 28,062 ± 4,1 30,852 ± 4,2 28,67 ± 5,4 31,036 ± 4,9 26,706 ± 6,8 24,824 ± 2,6 27,14 ± 1,9 27,974 ± 5,9 27,128 ± 3,5 28,84 ± 3,1 28,744 ± 3,8 28,272 ± 5,8 27,386 ± 5,3 29,748 ± 5,6 25,646 ±7 23,692 ± 2,5 25,752 ± 2,3 30,942 ±6 30,59 ± 3,8 30,744 ± 3,4 30,01 ± 3,3 29,644 ±7 27,364 ± 5,8 30,752 ± 7,5 28,024 ± 8,2 28,542 ± 2,9 31,104 ± 4,2 31,966 ± 6,5 32,522 ± 4,6 33,062 ±4 32,64 ± 3,6 32,954 ± 7,7 30,716 ± 7,2 33,902 ± 8,2 30,9 ± 8,5 32,77 ± 2,7 33,202 ± 5,3 24 TCNCYH 87 (2) - 2014 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Lần cân HA HA2 HA3 HA4 LP1 LP2 LP3 LP4 ĐCSH ĐCDM 35,582 ± 6,8 34,806 ± 5,9 37,272 ± 4,7 37,492 ± 4,3 39,114 ± 8,2 33,386 ± 8,2 35,874 ± 9,5 36,786 ± 9,3 34,228 ± 7,3 38,214 ± 7,6 38,082 ± 6,1 35,476 ± 8,4 38,252 ± 5,3 39,264 ± 4,9 41,462 ± 8,1 36,195 ± 4,6 38,272 ± 9,3 39,51 ± 10 32,976 ± 6,2 36,18 ± 5,5 35,812 ± 5,2 33,284 ± 7,9 35,75 ± 4,3 33,608 ± 4,9 36,616 ± 6,8 32,924 ± 7,9 32,856 ± 8,5 35,642 ± 10 29,068 ± 5,7 33,985 15,8 10 38,894 ± 5,4 34,724 ± 9,1 38,704 ± 3,3 34,906 ± 6,3 40,354 ± 6,7 35,756 ± 8,6 37,834 ± 10,1 40,016 ± 10 30,778 ± 8,3 36,4125 ± 16,7 * ĐCSH: đối chứng sinh học; ĐCDM: đối chứng dung môi Khả kích thích tiết INF-γ Arabinoxylan huyết chuột Để đánh giá khả kích hoạt tế bào NK, huyết lô chuột uống HA LP với liều lượng 50 - 200 mg/kg/ngày sau 30 ngày phân tích nồng độ INF-γ Kết hình 2, lượng INF-γ lô chuột uống HA LP nồng độ khác tăng so với đối chứng Nồng độ INF-γ lô chuột uống với HA LP liều lượng khơng có khác biệt nhiều Khi tăng liều lượng HA LP khả sinh INF-γ tăng lên có ý nghĩa Nồng độ INF-γ tăng cao nhất, đạt khoảng gấp lần so với lô đối chứng cho chuột uống HA liều lượng 200 mg/kg/ngày Hình Mức độ biểu IFN-γ lô chuột sử dụng chế phẩm với liều lượng khác ĐCSH: đối chứng sinh học, HA1- HA4 liều cho chuột uống Arabionxylan sản xuất; LP1 - LP4 liều cho chuột uống Lentin plus 1000 Các mẫu lập lại ba lần TCNCYH 87 (2) - 2014 25 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Kết vùng mẫu chuẩn thông số chuẩn để phân tích mẫu Để đánh giá khả giết tế bào Sarcoma 180 tế bào lymphocyte máy BD FACS canto II, tế bào lymphocyte tách lơ (đối chứng thí nghiệm) ủ với tế bào ung thư Sarcoma với tỷ lệ 100/1 12h Các mẫu sau nhuộm PI để xác định tỷ lệ tế bào ung thư chết Các kết phân tích hình Kết thu tế bào lymphocyte không nhuộm PI cho thấy phần lớn quần thể mẫu tập trung vùng có giá trị SSC FSC nhỏ (hình 3A) Đồng thời, tín hiệu huỳnh quang thu nhuộm PI với tế đỉnh giá trị 103 đỉnh tín hiệu giá trị lớn 104 Đây hai vùng tín hiệu huỳnh quang hạt bead (hình 3D) Vùng tế bào Sarcoma 180 xác định tín hiệu huỳnh quang nhận thấy giá trị nhỏ 103 tương tự tế bào lymphocyte Như vậy, từ kết xác định vùng mẫu chuẩn thơng số chuẩn để đo mẫu thí nghiệm Giá trị tín hiệu huỳnh quang phải lớn 103 xác định có tín hiệu huỳnh quang, có nghĩa tế bào vùng xác định tế bào có PI tế bào chết mẫu thí nghiệm Tế bào lymphocyte gây chết tế bào Sarcoma 180 tác động Arabinoxylan bào lymphocyte tập trung vùng giá trị Sau xác định thông số nhỏ 103 (hình 3B) Để tăng độ xác, chuẩn (SSC, FSC, PE), tỉ lệ chết tế bào hỗn hợp tế bào lymphocyte Sarcoma 180 Sarcoma 180 phân tích Tỷ lệ chết với tỷ lệ 100/1 trộn với hạt bead tế bào Sarcoma 180 % tế chuẩn hãng có kích thước µm bào có tín hiệu huỳnh quang vùng mẫu gắn huỳnh quang PE với hai cường độ phát P2 (là vùng tế bào ung thư, 3C) phần mềm quang (yếu mạnh) Kết thu cho Diva tính tốn Từ giá trị xác định % thấy vùng phân bố tế bào lympho- tỷ lệ chết tăng mẫu thí nghiệm so với đối cyte xuất thêm vùng tế bào có kích chứng Kết hình cho thấy thước lớn độ phức tạp cao tế bào Sarcoma 180, ký hiệu P2 (hình 3C) Điều hồn tồn phù hợp tế bào Sarcoma 180 có kích thước lớn nhiều so với tế bào lymphocyte tế bào tỷ lệ tế bào Sarcoma 180 chết tăng dần tăng liều lượng HA LP đạt tỷ lệ chết cao tăng 183% so với đối chứng liều 100 mg/kg/ngày Tỷ lệ tế bào Sarcoma 180 chết Sarcoma có nhân phân thùy (hay cịn gọi lô chuột uống với HA LP nhân quái) Quan trọng quan liều lượng khơng có khác q lớn, sát tín hiệu huỳnh quang nhận thấy quần ngoại trừ nồng độ 50 mg/kg/ngày LP cho thể mẫu xuất thêm hai đỉnh tín hiệu: kết tốt 26 TCNCYH 87 (2) - 2014 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC A C B D Hình Kết phân tích vùng phân bố tế bào lymphocyte tế bào Sarcoma 180 không nhuộm nhuộm huỳnh quang PI (A): Các tế bào tập trung vùng có giá trị SSC FSC nhỏ (B): Các tế bào có tín hiệu huỳnh quang nhỏ 103 (C): Xuất vùng phân bố tế bào Sarcoma với giá trị SSC FSC lớn (D): Xuất hai đỉnh huỳnh quang hạt bead chuẩn hỗn hợp mẫu Hình Tỷ lệ (%) tế bào Sarcoma 180 chết sau ủ với tế bào lymphocyte tách từ chuột uống HA LP Tỷ lệ tế bào Sarcoma 180 chết so với lô chuột uống HA (màu xanh) chuột uống LP (màu đỏ) 1: HA1, LP1, 2: HA2, LP2, 3: HA3, LP3, 4: HA4, LP4 TCNCYH 87 (2) - 2014 27 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC IV BÀN LUẬN Đối với chuột lô uống HA LP phần lớn tăng sau lần cân, khơng có chênh lệch nhiều tốc độ tăng trọng lô Kết giống công bố trước [6] Tuy nhiên, lần cân thứ thứ có giảm trọng lượng chuột tất lô, kể lơ đối chứng Tốc độ tăng trọng trung bình theo lần cân khơng có khác biệt đáng kể lô (bảng 1) Ở giai đoạn sau trình uống thuốc, tốc độ tăng trọng lơ thí nghiệm HA3 LP3 có xu hướng cao so với đối chứng, khoảng 10 - 15% Chuột lô uống chế phẩm dấu hiệu hoạt động khác thường so với lơ đối chứng Từ kết cho thấy chế phẩm khơng có ảnh hưởng đến hoạt động sống chuột Phân tích nồng độ INF-γ huyết lô chuột xử lý với HA LP cho thấy nồng độ INF-γ tăng dần từ 120 pg/ml đến 340 pg/ml phụ thuộc vào liều lượng tăng dần Arabinoxylan (hình 2) Từ kết cho thấy Arabinoxylan chất có tiềm kích thích sinh INF-γ, điều chứng minh mức in vitro dòng tế bào macrophage người U937, macrophage đạt kết gây chết tế bào ung thư tốt Tiếp tục tiến hành so sánh tỷ lệ chết tế bào Sarcoma 180 lô uống HA LP Kết cho thấy, hai chế phẩm có tác dụng làm tăng tỷ lệ chết tế bào ung thư so với mẫu đối chứng không uống chế phẩm Cả hai chế phẩm đạt giá trị gây chết cao nồng độ HA3 LP3 Tuy nhiên, tỷ lệ tế bào chết lô chuột uống HA cao so với lô chuột uống chế phẩm thương mại LP (hình 4) (khác biệt có ý nghĩa với p < 0,05 V KẾT LUẬN Chế phẩm Arabinoxylan tách chiết từ cám gạo Việt Nam (HA) có khả làm tăng trọng lượng chuột thí nghiệm Quan trọng hơn, chế phẩm Arabinoxylan kích thích q trình sinh INF-γ dẫn tới kích hoạt dòng tế bào lymphocyte gây độc tố tiêu diệt tế bào ung thư Sarcoma 180 giảm đáng kể Liều uống có tác dụng tăng hoạt tính cao chế phẩm Arabinoxylan để tế bào lymphocyte hoạt động có hiệu 100mg/kg thể trọng/lần Lời cảm ơn Các tác giả chân thành cảm ơn Bộ Cơng thương tài trợ kinh phí (Đề tài mã số chuột dòng tế bào RAW 264.7 [3] Với hàm ĐT.02.11/CNSHCB, thuộc Đề án phát triển ứng dụng công nghệ sinh học lĩnh vực lượng INF-γ tăng lên huyết chuột công nghiệp chế biến đến năm 2020) để thực kích hoạt số tế bào thuộc tế bào lym- nghiên cứu phocyte tế bào T, tế bào giết tự nhiên INF-γ biết có độc tính mạnh TÀI LIỆU THAM KHẢO dòng tế bào ung thư [3] Từ gợi ý tế bào lymphocyte kích hoạt gây độc Badr El-Din NK, Noaman E, and Ghoneum M (2008) In vivo tumor inhibitory effects of nutritional rice bran supplement MGN3/Biobran on Ehrlich carcinoma-bearing mice tố tế bào Sarcoma 180 Trong bốn liều sử dụng (50, 75, 100 200 mg/kg thể trọng), tỷ lệ chết tăng cao (so với đối chứng) 183,3% nồng độ uống 100mg/kg/lần (hình 4) Như vậy, liều phù hợp để 28 Nutrition and Cancer, (60), 235 - 244 Ghoneum M and A Jewett (2000) Production of tumor necrosis factor-and inter- TCNCYH 87 (2) - 2014 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC feron-from human peripheral blood lympho- cells to death receptor (CD95)-induced apop- cytes by MGN-3, a modified arabinoxylan from rice bran, and its synergy with interleukin-2 in tosis Cancer Letter, (201), 41 - 49 vitro Cancer Detec.Prev, (24), 314 Ngô Thị Huyền Trang cộng (2012) Ghoneum M, and Matsuura M (2004) Augmentation of macrophage phagocytosis by modified arabinoxylan rice bran (MGN-3/ Xây dựng quy trình tách chiết arabinoxylan từ biobran) International Journal of Immunopathology and Pharmacology, (17), 283 - 292 Đinh Thị Hương, Nguyễn Minh Ngọc, cám gạo Tạp chí Khoa học Đại học Quốc gia, (28), 129 - 136 Ogawa K, Takeuchi M, Nakamura N Ghoneum M, and Gollapudi S (2003) Modified arabinoxylan rice bran (MGN-3/ (2005) Immunological effects of partially hy- Biobran) sensitizes human T cell leukemia Biosci Biotechnol Biochem, 69 (1), 19 - 25 drolyzed arabinoxylan from corn husk in mice Summary IMMUNOSTIMULATING ACTIVITY OF ARABINOXYLAN EXTRACTED FROM VIETNAMESE RICE BRAN Arabinoxylan extracted from Vietnamese rice bran was examined for its effect on murine lymphocyte activity The mice were administered orally at four different doses: 50, 75, 100, 200 mg/kg/day for 30 days The highest secretion of INF-γ in mouse serum was 340 pg/ml at 200 mg/ kg/day dosage However, the maxium increasing rate in mortality of Sarcoma 180 cell line was 183.3% at a dose of 100 mg/kg/day, in comparison to the control Thus, Arabinoxylan from Vietnamese rice bran acts as a potential immunomodulator to stimulate the immune system through stimulating the natural killer cell activity and secretion of INF-γ Keywords: Arabinoxylan, Lymphocyte cell, Sacroma 180 cell, INF-γ TCNCYH 87 (2) - 2014 29 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC KHẢ NĂNG KÍCH THÍCH MIỄN DỊCH CỦA ARABINOXYLAN TÁCH CHIẾT TỪ CÁM GẠO VIỆT NAM Trịnh Tất Cường1, Giang Huy Diệm1, Hoàng Thị Mỹ Nhung , Nguyễn Thị Cúc1, Nguyễn Thị Vân Anh1 Phịng Thí nghiệm Trọng điểm Cơng nghệ Enzyme Protein Khoa Sinh học - Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Arabinoxylan sản xuất từ cám gạo Việt Nam đánh giá hoạt tính kích hoạt tế bào lymphocyte chuột sử dụng cho chuột bốn liều lượng 50, 75, 100 200 mg/kg/ngày 30 ngày Nghiên c ứu nhằm chứng minh khả kích hoạt tế bào lymphocyte Arabinoxylan từ cám gạo Việt Nam Liều lượng 200 mg/kg/lần kích thích tiết INF (interferon)-γ nồng độ cao huyết chuột 340 pg/ml Liều lượng 100 mg/kg/lần kích hoạt tế bào giết tự nhiên mức độ cao dẫn tới tỉ lệ giết tế bào Sarcoma 180 chết 183% so với đối chứng Như vậy, Arabinoxylan tách chiết từ cám gạo Việt Nam xem chất tiềm có khả kích thích hoạt động hệ thống miễn dịch thơng qua việc kích hoạt tế bào giết tự nhiên tăng q trình tiết INF-γ Từ khóa: Arabinoxylan, tế bào lymphocyte, tế bào Sacroma 180, INF-γ I ĐẶT VẤN ĐỀ Arabinoxylan chiết xuất từ cám gạo giúp cho thể sản xuất kháng thể Trong số nhóm nghiên cứu Hoa Kỳ đó, tế bào lympho T tế bào giết tự nhiên Nhật Bản chứng minh có khả tăng (NK) trực tiếp tham gia vào phá hủy virus cường miễn dịch chuột người với hiệu tế bào bị nhiễm vi khuẩn tế bào có cao nhiều chất khác có tự khả phát triển thành tế bào ung thư [3] nhiên dạng tổng hợp [1; 2; 3; 4] Mặc Một số cơng trình nghiên cứu chứng minh dù chưa nhận biết xác vai trò quan trọng Arabinoxylan chế tác động Arabinoxylan khả kích hoạt trình hoạt động kết nghiên cứu chứng minh Ara- tế bào NK điều khiển thụ thể binoxylan có khả giúp thể tăng cường dịng tế bào thơng qua việc đánh giá khả trình sinh cytokine giống inter- tiết INF-γ Tuy nhiên, chưa feron (IFN), interleukin [1] Do vậy, Arabinoxy- có cơng trình nghiên cứu đánh giá lan có khả giúp thể phá hủy số tế vai trò Arabinoxylan tách chiết từ cám gạo bào bị hỏng virus Ngoài ra, Arabinoxylan Việt Nam hệ thống miễn dịch Do vậy, có khả kích thích hệ thống miễn dịch làm mục tiêu nghiên cứu nhằm chứng tăng cường hoạt động tế bào lymphocyte minh khả kích hoạt tế bào lympho- Trong hệ thống miễn dịch, tế bào lympho B cyte Arabinoxylan từ cám gạo Việt Nam Từ kết nghiên cứu cho thấy Địa liên hệ: Trịnh Tất Cường, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Email: cuongtrinhtat@gmail.com Ngày nhận: 23/9/2013 Ngày chấp thuận: TCNCYH 87 (2) - 2014 khả kích thích trình tiết INF-γ huyết chuột kích hoạt tế bào lymphocyte chuột uống Arabinoxylan tách chiết từ nguồn cám gạo Việt Nam 21 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP nghiệm 106 tế bào ung thư - Phương pháp tách lấy tế bào ung thư Sarcoma 180 từ bụng báng chuột: Đối tượng - Chuột nhắt trắng dịng Swiss (Mus musculus) có trọng lượng trung bình từ 27 - 30 g/ Gây mê chuột ether, khử trùng toàn thân cồn 70oC Tiến hành mổ bộc lộ toàn viện Vệ sinh dịch tễ cung cấp - Dịng tế bào ung thư mơ liên kết Sarcoma khoang bụng chuột Dùng bơm tiêm nước sạch, hút lấy dịch báng xoang 180 nhóm nghiên cứu Ung thư thực bụng chuột, chuyển dịch báng vào đĩa nghiệm, trường Đại học Khoa học Tự nhiên cung cấp ni cấy có sẵn mơi trường ly tâm để loại hồng cầu Tế bào vừa tách bổ - Chế phẩm Lentin plus 1000 (Nhật Bản) dạng Arabinoxylan thương phẩm bán sung môi trường mới, nuôi qua đêm tủ nuôi 37oC 5% CO2 thị trường, ký hiệu LP - Chế phẩm Arabinoxylan có kích thước 30 - Quy trình tách chiết Arabinoxylan từ cám gạo Việt Nam: Sản phẩm HA tách chiết từ cám - 50 kDa, tách chiết từ cám gạo Việt Nam nhóm nghiên cứu thuộc phịng Thí nghiệm Trọng điểm Cơng nghệ Enzyme Protein, trường Đại học Khoa học Tự nhiên thực (5), ký hiệu HA gạo Việt Nam mô tả chi tiết công bố khoa học tác giả Đinh Thị Hương cộng [5] Cám gạo sấy 120oC 30 phút để bất hoạt enzyme có sẵn Phương pháp cám gạo giết vi khuẩn Sau bột cám gạo sấy trộn với dung dịch đệm pH 6,0 - Phân lập tế bào lympho từ hạch bạch với tỷ lệ cám: thể tích đệm Các bước tiền huyết chuột: Tiến hành gây mê chuột ether mổ xử lý enzyme tiến hành với enzyme (i) amylase để thủy phân tinh bột, (ii) với cellu- bộc lộ toàn xoang bụng xoang ngực Sau đó, thu lấy hạch bạch huyết vị trí lase để thủy phân cellulose, (iii) với protease để thủy phân protein, (iv) xử lý nhiệt để bất chân cổ Các hạch bạch huyết sau thu chuyển vào đĩa nuôi cấy có hoạt tồn enzyme Cám gạo sau ly tâm loại dịch chứa sản phẩm thủy sẵn PBS 1X vô trùng Tiếp tục nghiền nhẹ phân, thu bã để tiếp tục thủy phân en- nhàng hạch bạch huyết đếm tế bào lymphocyte thu kính hiển vi soi ngược zyme endoxylase Nồng độ endoxylase sử dụng để thủy phân 0,04 Unit/g cám gạo, Sau đó, ly tâm thu tế bào lymphocyte - Phương pháp gây u báng chuột: đệm pH 5, nồng độ muối NaCl 120 mM, nhiệt độ 55°C, thời gian Sản phẩm sau thủy Dịng tế bào Sarcoma 180 rã đơng chuyển vào ống ly tâm chứa sẵn 10ml phân lại ly tâm loại bỏ bã để thu dịch chiết thô Arabinoxylan Dịch chiết thô tiếp tục môi trường RPMI Trộn hỗn hợp ly tâm lọc qua cột lọc cut - off 300 kDa để thu loại bỏ dịch Bổ sung môi trường nuôi cấy để tế bào sinh trưởng tủ nuôi lấy dịch qua cột chứa arabinoxylan tiếp tục cho qua cột lọc cut-off 10 kDa để cô đặc Ara- 37oC 5% CO2 Khi tế bào phát triển tốt, tiến hành cấy truyền tế bào ung thư lên chuột binoxylan kích thước khoảng 30 - 50 kDa loại bỏ đường đơn phân tử lượng nhỏ cách đưa vào xoang bụng chuột thí Arabinoxylan đặc sau đơng khơ, 22 TCNCYH 87 (2) - 2014 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC lưu mẫu cho thử nghiệm đánh INF-γ tiết dịch huyết kít giá chất lượng Sản phẩm sau kiểm định chất lượng khoa Thực phẩm - Vệ sinh ELISA hãng BD Bioscience Tất bước phân tích thực dẫn an toàn thực phẩm, viện Dinh dưỡng Quốc gia Các thử nghiệm đánh giá chất lượng bao nhà sản xuất - Phương pháp nhuộm tế bào chết: gồm: (i) hàm lượng Arabinoxylan mạch dài (tổng hàm lượng arabinose xylose mạch PI (Propidium iodide) loại thuốc nhuộm huỳnh quang có khả liên kết với axit nu- dài, không kể đường đơn, 7,62 g/100 g cleic mạch đôi, thường sử dụng bột), kích thước Arabinoxylan (> 80% đạt kích thước 30 - 50 kDa) Ngồi cịn số để nhuộm DNA/RNA Tế bào nhuộm với PI nồng độ 1ug/ml 10 phút (tránh ánh tiêu protein tổng số, đường tổng số, độ ẩm, nhiễm asen, tổng số vi khuẩn hiếu khí, sáng) - Phương pháp xác định tỷ lệ tế bào chết: vi khuẩn gây bệnh E coli coliform nằm khoảng cho phép an toàn vệ sinh Hỗn hợp tế bào sau nhuộm với PI đếm máy FACS Canto II (BD) để thực phẩm xác định tỷ lệ tế bào chết PI kích thích - Phương thức liều tác động: Phân chia chuột cách ngẫu nhiên bước sóng 488 nm bước sóng phát khoảng 615nm Các tế bào phân loại thành lơ sau: Đối chứng sinh học: ni bình thường (kí theo kích thước (FSC) độ phức tạp (SSC) Sau phân loại theo độ phát quang hiệu ĐCSH) Đối chứng dung môi: ngày uống 0,15 (PE) Tỷ lệ loại tế bào xử lý phần mềm BD Canto Diva ml nước (kí hiệu ĐCDM) Lô uống LP HA liều 50 mg/kg/ngày: ngày uống 0,15ml nồng độ 10 mg/ml, ký - Phân tích thống kê: Đối với phân tích thống kê, số liệu lấy từ kết độc lập, thể ý nghĩa ± SD phân tích hiệu LP(L1) HA (A1) Lơ uống LP HA liều 75 mg/kg/ngày: student’s t-test với điều chỉnh ngày uống 0,15 ml nồng độ 15 mg/ml, kí hiệu LP(L2) HA (A2) Bonferroni ANOVA nhiều phép so sánh Sự khác có ý nghĩa thống kê Lô uống LP HA liều 100 mg/kg/ngày: ngày uống 0,15 ml nồng độ 20 mg/ml, kí hiệu LP(L3) HA (A3) Lơ uống LP HA liều 200 mg/kg/ngày: ngày uống 0,15 ml nống độ 40 mg/ml, kí hiệu LP(L4) HA (A4) Chuột cho uống chế phẩm lần/ p < 0,05 III KẾT QUẢ Tế bào lymphocyte tách từ hạch bạch huyết chuột Lượng tế bào NK hạch bạch huyết ngày, hàng ngày vào thời điểm chiếm khoảng 41 - 43% tổng số tế bào lym- kéo dài 30 ngày - Enzyme - linked immunosorbent assay phocyte Do vậy, hạch bạch huyết (ELISA): Máu chuột thu đem ly tâm để thu lymphocyte Các tế bào sau tách có huyết Sau đó, phân tích mức độ khoảng μm (hình 1) TCNCYH 87 (2) - 2014 chuột tách để thu nhận tế bào dạng hình trịn, với đường kính trung bình 23 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC B A Hình Tế bào lymphocyte sau 2h tách từ hạch bạch huyết (A): Các tế bào lymphocyte sau tách từ hạch lymphocyte Ảnh chụp kính hiển vi soi ngược Axiovert 40 CFL (Zeiss), độ phóng đại 200x (B): Tế bào lymphocyte sau nhuộm với kháng thể kháng CD8 gắn thuốc nhuộm huỳnh quang R-PE Đường kính tế bào khoảng 2µm Ảnh chụp kính hiển vi huỳnh quang Axioplan FL (Zeiss) Arabinoxylan tăng nhẹ trọng lượng chuột Để đánh giá tác động Arabinoxylan đến phát triển chuột, chuột cân ngày lần lô sau uống chế phẩm HA LP Đồng thời, theo dõi biểu hoạt động ăn, uống, vận động học chuột Kết cân trọng lượng chuột thể bảng cho thấy trọng lượng chuột cho uống HA tăng 10% cho uống LP tăng 15% so với lô đối chứng Chuột lơ khỏe mạnh, ăn uống vận động bình thường (kết khơng trình bày đây) Bảng Tình hình cân nặng chuột thí nghiệm Lần cân HA HA2 HA3 HA4 LP1 LP2 LP3 LP4 ĐCSH ĐCDM 20,54 ± 19,444 ± 2,5 20,088 ± 0,5 19,174 ±2 20,172 ± 1,9 18,216 ± 2,3 20,72 ± 3,3 18,402 ± 0,5 20,974 ± 1,7 20,526 ± 1,7 24,626 ± 5,2 23,4 ± 4,5 24,506 ± 2,7 22,956 ± 3,5 24,108 ± 2,9 22,606 ± 4,7 26,314 ± 3,8 23,148 ± 2,8 23,96 ±2 25,762 ± 1,8 27,126 ± 6,7 27,344 ± 4,3 28,924 ± 3,1 28,062 ± 4,1 30,852 ± 4,2 28,67 ± 5,4 31,036 ± 4,9 26,706 ± 6,8 24,824 ± 2,6 27,14 ± 1,9 27,974 ± 5,9 27,128 ± 3,5 28,84 ± 3,1 28,744 ± 3,8 28,272 ± 5,8 27,386 ± 5,3 29,748 ± 5,6 25,646 ±7 23,692 ± 2,5 25,752 ± 2,3 30,942 ±6 30,59 ± 3,8 30,744 ± 3,4 30,01 ± 3,3 29,644 ±7 27,364 ± 5,8 30,752 ± 7,5 28,024 ± 8,2 28,542 ± 2,9 31,104 ± 4,2 31,966 ± 6,5 32,522 ± 4,6 33,062 ±4 32,64 ± 3,6 32,954 ± 7,7 30,716 ± 7,2 33,902 ± 8,2 30,9 ± 8,5 32,77 ± 2,7 33,202 ± 5,3 24 TCNCYH 87 (2) - 2014 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Lần cân HA HA2 HA3 HA4 LP1 LP2 LP3 LP4 ĐCSH ĐCDM 35,582 ± 6,8 34,806 ± 5,9 37,272 ± 4,7 37,492 ± 4,3 39,114 ± 8,2 33,386 ± 8,2 35,874 ± 9,5 36,786 ± 9,3 34,228 ± 7,3 38,214 ± 7,6 38,082 ± 6,1 35,476 ± 8,4 38,252 ± 5,3 39,264 ± 4,9 41,462 ± 8,1 36,195 ± 4,6 38,272 ± 9,3 39,51 ± 10 32,976 ± 6,2 36,18 ± 5,5 35,812 ± 5,2 33,284 ± 7,9 35,75 ± 4,3 33,608 ± 4,9 36,616 ± 6,8 32,924 ± 7,9 32,856 ± 8,5 35,642 ± 10 29,068 ± 5,7 33,985 15,8 10 38,894 ± 5,4 34,724 ± 9,1 38,704 ± 3,3 34,906 ± 6,3 40,354 ± 6,7 35,756 ± 8,6 37,834 ± 10,1 40,016 ± 10 30,778 ± 8,3 36,4125 ± 16,7 * ĐCSH: đối chứng sinh học; ĐCDM: đối chứng dung mơi Khả kích thích tiết INF-γ Arabinoxylan huyết chuột Để đánh giá khả kích hoạt tế bào NK, huyết lơ chuột uống HA LP với liều lượng 50 - 200 mg/kg/ngày sau 30 ngày phân tích nồng độ INF-γ Kết hình 2, lượng INF-γ lô chuột uống HA LP nồng độ khác tăng so với đối chứng Nồng độ INF-γ lô chuột uống với HA LP liều lượng khác biệt nhiều Khi tăng liều lượng HA LP khả sinh INF-γ tăng lên có ý nghĩa Nồng độ INF-γ tăng cao nhất, đạt khoảng gấp lần so với lô đối chứng cho chuột uống HA liều lượng 200 mg/kg/ngày Hình Mức độ biểu IFN-γ lơ chuột sử dụng chế phẩm với liều lượng khác ĐCSH: đối chứng sinh học, HA1- HA4 liều cho chuột uống Arabionxylan sản xuất; LP1 - LP4 liều cho chuột uống Lentin plus 1000 Các mẫu lập lại ba lần TCNCYH 87 (2) - 2014 25 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Kết vùng mẫu chuẩn thơng số chuẩn để phân tích mẫu Để đánh giá khả giết tế bào Sarcoma 180 tế bào lymphocyte máy BD FACS canto II, tế bào lymphocyte tách lô (đối chứng thí nghiệm) ủ với tế bào ung thư Sarcoma với tỷ lệ 100/1 12h Các mẫu sau nhuộm PI để xác định tỷ lệ tế bào ung thư chết Các kết phân tích hình Kết thu tế bào lymphocyte không nhuộm PI cho thấy phần lớn quần thể mẫu tập trung vùng có giá trị SSC FSC nhỏ (hình 3A) Đồng thời, tín hiệu huỳnh quang thu nhuộm PI với tế đỉnh giá trị 103 đỉnh tín hiệu giá trị lớn 104 Đây hai vùng tín hiệu huỳnh quang hạt bead (hình 3D) Vùng tế bào Sarcoma 180 xác định tín hiệu huỳnh quang nhận thấy giá trị nhỏ 103 tương tự tế bào lymphocyte Như vậy, từ kết xác định vùng mẫu chuẩn thông số chuẩn để đo mẫu thí nghiệm Giá trị tín hiệu huỳnh quang phải lớn 103 xác định có tín hiệu huỳnh quang, có nghĩa tế bào vùng xác định tế bào có PI tế bào chết mẫu thí nghiệm Tế bào lymphocyte gây chết tế bào Sarcoma 180 tác động Arabinoxylan bào lymphocyte tập trung vùng giá trị Sau xác định thơng số nhỏ 103 (hình 3B) Để tăng độ xác, chuẩn (SSC, FSC, PE), tỉ lệ chết tế bào hỗn hợp tế bào lymphocyte Sarcoma 180 Sarcoma 180 phân tích Tỷ lệ chết với tỷ lệ 100/1 trộn với hạt bead tế bào Sarcoma 180 % tế chuẩn hãng có kích thước µm bào có tín hiệu huỳnh quang vùng mẫu gắn huỳnh quang PE với hai cường độ phát P2 (là vùng tế bào ung thư, 3C) phần mềm quang (yếu mạnh) Kết thu cho Diva tính tốn Từ giá trị xác định % thấy vùng phân bố tế bào lympho- tỷ lệ chết tăng mẫu thí nghiệm so với đối cyte xuất thêm vùng tế bào có kích chứng Kết hình cho thấy thước lớn độ phức tạp cao tế bào Sarcoma 180, ký hiệu P2 (hình 3C) Điều hồn tồn phù hợp tế bào Sarcoma 180 có kích thước lớn nhiều so với tế bào lymphocyte tế bào tỷ lệ tế bào Sarcoma 180 chết tăng dần tăng liều lượng HA LP đạt tỷ lệ chết cao tăng 183% so với đối chứng liều 100 mg/kg/ngày Tỷ lệ tế bào Sarcoma 180 chết Sarcoma có nhân phân thùy (hay cịn gọi lô chuột uống với HA LP nhân quái) Quan trọng quan liều lượng khơng có khác q lớn, sát tín hiệu huỳnh quang nhận thấy quần ngoại trừ nồng độ 50 mg/kg/ngày LP cho thể mẫu xuất thêm hai đỉnh tín hiệu: kết tốt 26 TCNCYH 87 (2) - 2014 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC A C B D Hình Kết phân tích vùng phân bố tế bào lymphocyte tế bào Sarcoma 180 không nhuộm nhuộm huỳnh quang PI (A): Các tế bào tập trung vùng có giá trị SSC FSC nhỏ (B): Các tế bào có tín hiệu huỳnh quang nhỏ 103 (C): Xuất vùng phân bố tế bào Sarcoma với giá trị SSC FSC lớn (D): Xuất hai đỉnh huỳnh quang hạt bead chuẩn hỗn hợp mẫu Hình Tỷ lệ (%) tế bào Sarcoma 180 chết sau ủ với tế bào lymphocyte tách từ chuột uống HA LP Tỷ lệ tế bào Sarcoma 180 chết so với lô chuột uống HA (màu xanh) chuột uống LP (màu đỏ) 1: HA1, LP1, 2: HA2, LP2, 3: HA3, LP3, 4: HA4, LP4 TCNCYH 87 (2) - 2014 27 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC IV BÀN LUẬN Đối với chuột lô uống HA LP phần lớn tăng sau lần cân, khơng có chênh lệch nhiều tốc độ tăng trọng lô Kết giống công bố trước [6] Tuy nhiên, lần cân thứ thứ có giảm trọng lượng chuột tất lô, kể lô đối chứng Tốc độ tăng trọng trung bình theo lần cân khơng có khác biệt đáng kể lô (bảng 1) Ở giai đoạn sau trình uống thuốc, tốc độ tăng trọng lơ thí nghiệm HA3 LP3 có xu hướng cao so với đối chứng, khoảng 10 - 15% Chuột lô uống chế phẩm khơng có dấu hiệu hoạt động khác thường so với lô đối chứng Từ kết cho thấy chế phẩm khơng có ảnh hưởng đến hoạt động sống chuột Phân tích nồng độ INF-γ huyết lô chuột xử lý với HA LP cho thấy nồng độ INF-γ tăng dần từ 120 pg/ml đến 340 pg/ml phụ thuộc vào liều lượng tăng dần Arabinoxylan (hình 2) Từ kết cho thấy Arabinoxylan chất có tiềm kích thích sinh INF-γ, điều chứng minh mức in vitro dòng tế bào macrophage người U937, macrophage đạt kết gây chết tế bào ung thư tốt Tiếp tục tiến hành so sánh tỷ lệ chết tế bào Sarcoma 180 lô uống HA LP Kết cho thấy, hai chế phẩm có tác dụng làm tăng tỷ lệ chết tế bào ung thư so với mẫu đối chứng không uống chế phẩm Cả hai chế phẩm đạt giá trị gây chết cao nồng độ HA3 LP3 Tuy nhiên, tỷ lệ tế bào chết lô chuột uống HA cao so với lô chuột uống chế phẩm thương mại LP (hình 4) (khác biệt có ý nghĩa với p < 0,05 V KẾT LUẬN Chế phẩm Arabinoxylan tách chiết từ cám gạo Việt Nam (HA) có khả làm tăng trọng lượng chuột thí nghiệm Quan trọng hơn, chế phẩm Arabinoxylan kích thích q trình sinh INF-γ dẫn tới kích hoạt dịng tế bào lymphocyte gây độc tố tiêu diệt tế bào ung thư Sarcoma 180 giảm đáng kể Liều uống có tác dụng tăng hoạt tính cao chế phẩm Arabinoxylan để tế bào lymphocyte hoạt động có hiệu 100mg/kg thể trọng/lần Lời cảm ơn Các tác giả chân thành cảm ơn Bộ Cơng thương tài trợ kinh phí (Đề tài mã số chuột dòng tế bào RAW 264.7 [3] Với hàm ĐT.02.11/CNSHCB, thuộc Đề án phát triển ứng dụng công nghệ sinh học lĩnh vực lượng INF-γ tăng lên huyết chuột công nghiệp chế biến đến năm 2020) để thực kích hoạt số tế bào thuộc tế bào lym- nghiên cứu phocyte tế bào T, tế bào giết tự nhiên INF-γ biết có độc tính mạnh TÀI LIỆU THAM KHẢO dòng tế bào ung thư [3] Từ gợi ý tế bào lymphocyte kích hoạt gây độc Badr El-Din NK, Noaman E, and Ghoneum M (2008) In vivo tumor inhibitory effects of nutritional rice bran supplement MGN3/Biobran on Ehrlich carcinoma-bearing mice tố tế bào Sarcoma 180 Trong bốn liều sử dụng (50, 75, 100 200 mg/kg thể trọng), tỷ lệ chết tăng cao (so với đối chứng) 183,3% nồng độ uống 100mg/kg/lần (hình 4) Như vậy, liều phù hợp để 28 Nutrition and Cancer, (60), 235 - 244 Ghoneum M and A Jewett (2000) Production of tumor necrosis factor-and inter- TCNCYH 87 (2) - 2014 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC feron-from human peripheral blood lympho- cells to death receptor (CD95)-induced apop- cytes by MGN-3, a modified arabinoxylan from rice bran, and its synergy with interleukin-2 in tosis Cancer Letter, (201), 41 - 49 vitro Cancer Detec.Prev, (24), 314 Ngô Thị Huyền Trang cộng (2012) Ghoneum M, and Matsuura M (2004) Augmentation of macrophage phagocytosis by modified arabinoxylan rice bran (MGN-3/ Xây dựng quy trình tách chiết arabinoxylan từ biobran) International Journal of Immunopathology and Pharmacology, (17), 283 - 292 Đinh Thị Hương, Nguyễn Minh Ngọc, cám gạo Tạp chí Khoa học Đại học Quốc gia, (28), 129 - 136 Ogawa K, Takeuchi M, Nakamura N Ghoneum M, and Gollapudi S (2003) Modified arabinoxylan rice bran (MGN-3/ (2005) Immunological effects of partially hy- Biobran) sensitizes human T cell leukemia Biosci Biotechnol Biochem, 69 (1), 19 - 25 drolyzed arabinoxylan from corn husk in mice Summary IMMUNOSTIMULATING ACTIVITY OF ARABINOXYLAN EXTRACTED FROM VIETNAMESE RICE BRAN Arabinoxylan extracted from Vietnamese rice bran was examined for its effect on murine lymphocyte activity The mice were administered orally at four different doses: 50, 75, 100, 200 mg/kg/day for 30 days The highest secretion of INF-γ in mouse serum was 340 pg/ml at 200 mg/ kg/day dosage However, the maxium increasing rate in mortality of Sarcoma 180 cell line was 183.3% at a dose of 100 mg/kg/day, in comparison to the control Thus, Arabinoxylan from Vietnamese rice bran acts as a potential immunomodulator to stimulate the immune system through stimulating the natural killer cell activity and secretion of INF-γ Keywords: Arabinoxylan, Lymphocyte cell, Sacroma 180 cell, INF-γ TCNCYH 87 (2) - 2014 29