XÁC ĐỊNH ĐƯỜNG CONG SINH TRƯỞNG VÀ KHẢ NĂNG SINH AXIT LACTIC. Theo dõi sự sinh trưởng của vi sinh vật cụ thể là vi khuẩn lactic, thể hiện trên 2 yếu tố: Mật độ của vi khuẩn lactic trong quá trình nuôi. Lượng axit lactic được sinh ra. Ứng dụng chế biến các sản phẩm lên me, muối chua từ vi khuẩn lactic. ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ TỚI QUÁ TRÌNH THỦY PHÂN CỦA ENZYME. XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH CỦA EMZYME UREASE.
HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM ******************** BÁO CÁO THỰC HÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM Nhóm thực : Nhóm Lê Thị Hương Hoàng Thị Huyền Đoàn Thị Linh Nguyễn Thị Liên HÀ NÔI - 2016 571935 591385 591706 601216 BÀI + 2: XÁC ĐỊNH ĐƯỜNG CONG SINH TRƯỞNG VÀ KHẢ NĂNG SINH AXIT LACTIC Mục đích Theo dõi sinh trưởng vi sinh vật cụ thể vi khu ẩn lactic, th ể hi ện yếu tố: - Mật độ vi khuẩn lactic trình ni Lượng axit lactic sinh Ứng dụng chế biến sản phẩm lên me, muối chua từ vi khuẩn lactic a - Tiến hành nghiệm Nuôi cấy vi khuẩn lactic Chuẩn bị môi trường nuôi cấy, môi trường dich thể Giống vi sinh vật ( vi khuẩn lactic) Dụng cụ vô trùng Cách tiến hành Chuẩn bị bình tam giác Cho 99 ml mơi trường ni cấy vào bình Cho ml dung dịch chứa giống vi khuẩn lactic Theo dõi thời điểm 0h - 18h - 24h - 42h - 48h, theo dõi ch ỉ tiêu hàm lượng axit sinh mật độ vi sinh vật b Tiến hành theo dõi - Theo dõi hàm lượng axit lactic sinh - Nguyên tắc : NaOH + CH3 COOH => CH3 COONa + H2 O Áp dụng công thức : V1N1 = V2N2 để tính nồng độ axit lactic => hàm lượng axit lactic tạo thành Chuẩn bị bình tam giác - Theo dõi mật độ vi khuẩn lactic đo quang (Abs) Lấy – ml dịch nuôi cấy cho vào cuvet (1 cm) Đo bước sóng 600 nm Làm tương tự môi trường nuôi cấy Lâý OD dịch nuôi cấy trừ OD môi trường nuôi cấy đ ể OD m ật độ vi khuẩn môi trường Kết thí nghiệm Bảng theo dõi OD lượng NaOH tiêu tốn để trung hòa acid lactic Thời gian OD dịch OD môi (h) nuôi cấy trường 0.171 0.160 18 0.722 0.160 24 0.988 0.160 42 1.265 0.160 48 1.123 0.160 Bảng hàm lượng acid lactic theo thời gian OD mật độ vi khuẩn 0.011 0.562 0.828 1.105 0.963 Thời gian (h) số đương lượng gam acid lactic Hàm lượng acid lactic (gam) 18 24 42 48 0.00002 0.0001 0.000085 0.0001 0.00009 0.0018 0.0090 0.0077 0.0090 0.0081 Số ml NaOH 0.2 0.85 0.9 Nhận xét - Trong q trình ni cấy, đường cong sinh trưởng vi khu ẩn lactic có nhiều điểm khác biệt so với đường cong sinh trưởng vi sinh vật Pha tiền phát rõ trình sinh trưởng Pha log diễn từ lúc nuôi cấy đến 24 sau Pha cân diễn từ khoảng 24 42 Pha suy vong bất đầu sau 42 Nguyên nhân: Do thời gian tiến hành đo thí nghiệm khơng phù hợp v ới trình phát triển vi sinh vẩt, pha tiền phát diễn gi đầu q trình ni cấy Tuy nhiên điều kiện phịng nghiệm khơng cho phép ti ến hành đo mẫu thường xuyên dẫn đến thiếu khách quan s ố liệu Hàm lượng axit sinh tương ứng với đường cong sinh trưởng vi khu ẩn lactic Hàm lượng axit tăng tăng nhanh 18 gi đầu, sau hàm l ượng axit không ổn định 24 bắt đầu giảm sau 42 Kết nghiệm chưa thực theo lý thuyết axit lactic ch ỉ sinh đầu pha log đạt giá trị lớn pha cân b ằng Nhưng nhìn vào đồ thị ta lại thấy hàm lượng axit pha cân không ổn định Nguyên nhân : Lỗi người tiến hành đo thí nghiệm gây sai sót q trình xác đ ịnh hàm lượng axit Sai sót thao tác tiến hành Hóa chất sử dụng khơng nơng độ dẫn đến kết bị sai lệch BÀI : ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ TỚI QUÁ TRÌNH THỦY PHÂN CỦA ENZYME XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH CỦA EMZYME UREASE Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả thủy phân tinh b ột điều kiện nhiệt độ khác Đánh giá khả th ủy phân c enzyme theo phương pháp thử bẳng iod a Nguyên tắc: Enzyme amylase sử dụng để thủy phân tinh bột ều kiện nhiệt độ khác Sau đánh giá khả thủy phân enzyme theo phương pháp thử iod b Tiến hành: 1,Chuẩn bị ống nghiệm, chp vào ống nghiệm 2ml tinh bột 1% 2,Đặt ống nghiệm vào bể ổn định nhiệt 80 0C, ống nhiệt độ phòng, ống nước đá 3,Sau 15 phút cho vào ống nghiệm 0,5ml dung dịch enzyme ti ếp tục giữ nhiệt độ 15 phút 4,Lấy từ ống nghiệm giọt dung dịch nhỏ vào ống nghiệm tương ứng 5,Sau nhỏ vào giọt dung dịch iod Quan sát tượng c Kết quả: - Ống nghiệm để nhiệt độ 800C có màu đậm (màu rơm ) - Ống nghiệm đặt nhiệt độ phịng (330C) thấy có màu nhạt - Ống nghiệm để nước đá có màu tím nâu d Nhận xét: Qua kết thí nghiệm ta thấy: Enzyme amylase bị hoạt tính nhiệt độ 80 0C, hoạt động mạnh nhiệt độ phòng (330C), hoạt động yếu nhiệt độ nước đá Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng pH tới khả th ủy phân tinh b ột c enzyme amylaze a Nguyên tắc: Enzyme amylase sử dụng để thủy phân tinh bột ều kiện ph khác Sau đánh giá khả thủy phân enzyme theo ph ương pháp thử iod b Tiến hành: 1,Chuẩn bị ống nghiệm, cho vào: - Ống nghiệm 1: 2mldung dịch đệm ph Ống nghiệm 2: 2ml dung dịch đệm ph4,5 Ống nghiệm 3: 2ml dung dịch đệm ph 2,Thêm vào ống nghiệm 1ml dung dịch tinh bột 1% 3,Thêm vào ống nghiệm 1ml dung dịch enzyme amylase 4,Lắc đều, sau phút lấy giọt để phản ứng với iod ( thêm gi ọt iod ) C ứ sau phút thử lần phản ứng âm tính với iod c Kết quả: - Ống ph=8 giọt k có phản ứng xảy dung d ịch không màu - Ống ph=4 ph=2 dung dịch có màu tím xanh, khơng thay đ ổi sau nh ỏ dung dịch iod vào d Nhận xét: Enzyme amylase hoạt động mạnh ph=8 cịn ph=4,5 ph=2 ho ạt động yếu hay bị hoạt tính ph=2 nồng độ acid cao kìm hãm hoạt động enzyme Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng chất kích thích NaCl ch ất kìm hãm CuSO tới hoạt tính amylase a Nguyên tắc Đánh giá khả thủy phân tinh bột enzyme amylase ều ki ện có khơng có Nacl CuSO4 b Cách tiến hành: Chuẩn bị ống nghiệm cho vào ống 2ml tinh bột Thêm vào ống 1: 1ml nước cất Thêm vào óng 2: 0,8ml nước cất 0,2ml Nacl 1% Thêm vào ống 3: 0,8ml nước cất 0,2 ml CuSO4 5% Lắc cho vào mõi ống nghiệm ml dung dịch enzyme amylase, lắc để phút Thêm vào ống giọt dung dịch iod, lắc quan sát c Hiện tượng xảy ống 1: Dung dịch không màu ống 2: Dung dịch không màu ống 3: Dung dịch từ không màu chuyển sang màu xanh đậm d Giải thích tượng ống 1: Dung dịch không màu enzyme amylase thủy phân thành gluco , khơng cịn tinh bột ống nghiệm nên khơng có phản ứng màu với iod ống 2: Cl- Nacl làm chất hoạt hóa enzyme amylase Amylase ph ản ứng hết với tinh bột nên cho iod vào không chuyển màu ống 3: Vì có mặt CuSO4 chất kìm hãm hoạt đ ộng c enzyme amylase làm enzyme hoạt tính xúc tác nên tinh bột h ầu không phân gi ải tinh bột ống nghiệm phản ứng với iod cho màu xanh đậm Thí nghiệm 4: Xác định hoạt độ enzyme urease theo phương pháp chu ẩn độ axit a Nguyên tắc: H2 N-CO-NH2 + H2 O => CO2 + NH3 NH3 + H2O NH4 + + OH- Chuẩn độ H2 SO4 0.1 N b Tiến hành thí nghiệm c Kết thí nghiệm Bình Bình V H2 SO4 0.1 N 14 ml 1.5 ml Tính tốn kết Công thức hoạt độ enzyme : H = (a – b) 1,4 5/t a: số ml dung dịch H2 SO4 0.1 N chuẩn độ hết bình nghiệm (bình 1) b: số ml dung dịch H2 SO4 0.1 N chuẩn độ hết bình 1,4: số mg nitơ tương ứng với 1ml dung dịch H2 SO4 0.1 N t: thời gian enzyme tác dụng ( phút ) Đơn vị hoạt tính lượng enzyme có khả phân giải ure t ạo thành mg NH3 sau phút điều kiện nhiệt độ phòng, pH H = (14 – 1,5) 1,4 5/ 30 = 2.92 d Nhận xét Đối với bình ( bình thí nghiệm ) sử dụng urease phân giải ure ều ki ện thường, lúc tiến hành nghiệm có thực lắc dung dịch bình Qua trình lắc làm lượng NH ngồi Đây sai sót lúc tiến hành thí nghiệm, kết chưa xác Đối với bình ( bình đối chứng) sử dụng urease phân gi ải ure ều ki ện đun sôi, nhận thấy lượng H2 SO4 0.1 N tiêu tốn 1.5 ml, điều chứng tỏ lượng ure bị phân giải Nhưng lượng ure phân giản trình v ận chuyển bình đun sối, q trình đun sơi enzyme urease b ị b ất hoạt, q trình phân giải ure khơng diễn Đây sai sót q trình ti ến hành thí nghiệm, kết chưa xác ... CONG SINH TRƯỞNG VÀ KHẢ NĂNG SINH AXIT LACTIC Mục đích Theo dõi sinh trưởng vi sinh vật cụ thể vi khu ẩn lactic, th ể hi ện yếu tố: - Mật độ vi khuẩn lactic q trình ni Lượng axit lactic sinh. .. xét - Trong q trình ni cấy, đường cong sinh trưởng vi khu ẩn lactic có nhiều điểm khác biệt so với đường cong sinh trưởng vi sinh vật Pha tiền phát rõ trình sinh trưởng Pha log diễn từ lúc nuôi... 18h - 24h - 42h - 48h, theo dõi ch ỉ tiêu hàm lượng axit sinh mật độ vi sinh vật b Tiến hành theo dõi - Theo dõi hàm lượng axit lactic sinh - Nguyên tắc : NaOH + CH3 COOH => CH3 COONa + H2 O Áp