3.3 .Phương pháp nghiên cứu
3.3.3.2 .Giải phẫu mẫu thực vật
Mẫu được thu về tiến hành giải xử lý mẫu và tiến hành quan sát bằng kính hiển vi đếm số lượng tế bào thực vật.
Quy trình giải phẫu mẫu:
Hình 3.2: Giải phẫu mẫu. a) mẫu rễ thân lá sau khi cắt; b) rửa mẫu đã rửa qua dung
dịch rửa; c) mẫu sau khi nhuộm màu; d) mẫu được quan sát dưới vật kính10.
Hình 3.3 Sơ đồ quy trình giải phẫu mẫu đếm tế bào.
Lá được cắt tại vị trí lá thứ nhất tính từ trên ngọn xuống Thân được cắt tại vị trí ngọn cây
Bước 2: Rửa mẫu bằng dung dịch rửa Javen 50 %, axit Axetic 30% Bước 3: Nhuộm mẫu tế bào bằng phẩm nhuộm 2 màu Carmin và Iod
Bước 4: Tiến hành quan sát và chụp hình mẫu tế bào dưới kính hiển vi điện tử
Bước 5: Tiến hành đếm tế bào. Dựa trên hình chụp được mẫu tế bào được chia làm 8 phần. Tiến hành đếm tế bào trên 1 phần, từ đó cho ra kết quả số lượng tế bào
Hình 3.3 Mẫu được phân vùng đếm tế bào.
Ngồi ra mẫu thực vật cịn được xử lý và tiến hành đo hàm lượng Chlorophyll A và Chlorophyll B bằng phương pháp huỳnh quang.
Quy trình đo Chlorophyll A và Chlorophyll B
Bước 1: Xử lý mẫu. Cân 25 mg mẫu lá cắt nhuyễn ra rồi cho vào ống nghiệm. Cho vào ống nghiệm đã có mẫu cây 10 ml dung dịch Axetol 99,5%, sau đó ống nghiệm được đậy kính bằng bơng và được bảo quản trong điều kiện tối 3 ngày.
Bước 2: Tiến hành chạy máy. Mẫu sau khi được xử lý cho đến khi bị mất màu hồn tồn. Sau khi mẫu đã mất màu thì dung dịch được sau khi xử lý được đem vào chạy bằng máy phát huỳnh quang với 2 bước sóng 645 và 663.
Các cơng thức tính hàm lượng Chlorophyll
Hàm lượng Chlorophyll A: ((12.7*Y) – (2.69*X))*10/A Hàm lượng Chlorophyll B: ((22.9*X) – (4.68*Y))*10/A
Tỷ lệ Chlorophyll A/ Chlorophyll B: Chlorophyll A/B Tổng hàm lượng Chlorophyll trên lá: Chlorophyll A+B Trong đó: X là kết quả ở bước sóng 645nm
Y là kết quả ở bước sóng 663nm A là khối lượng tươi của lá