Chương II TÀI LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.2. Phương pháp nghiên cứu đặc điểm sinh sản, độ béo, tốc độ sinh trưởng và sự la
và sự lai của hai loài ngao (Meretrix meretrix và Meretrix lyrata) tại vùng nghiên cứu
- Phương pháp cân, đo ngao
Cách đo ngao theo quy ước của Dore, 1991[83] gồm: Chiều cao là khoảng cách từ đỉnh tới mép vỏ. Chiều dài là khoảng rộng nhất vng góc với chiều cao. Chiều rộng được đo là phần dày nhất của hai mảnh vỏ (hình 2.2)
.
Hình 2. 2. Quy ước sử dụng để đo những kích thước chính của vỏ ngao
Hình 2. 3. Cân đo ngao
Đo ngao bằng thước kẹp panmer điện tử hiệu Mitutoyo của Nhật, độ chính xác 0,01 mm. Cân ngao bằng cân kỹ thuật (Adam /AQT – 200 của Anh, độ chính xác 0,1 g)
-Phương pháp nghiên cứu đặc điểm sinh sản, độ béo của ngao
Phương pháp thu mẫu ngao: Mẫu ngao được thu tại các quần đàn ngao khai thác, mẫu thu đại diện cho ngao ở các nhóm kích thước thường xun khai thác được tại bãi triều Giao Thủy – Nam Định. Đối với ngao dầu nghiên cứu trên tổng số 1158 cá thể
được thu từ tháng 10/2011 đến tháng 9/2012 với 6 nhóm kích thước ( 20 - 29 mm, 30 - 39 mm, 40 - 49 mm, 50 -59 mm, 60 - 69 mm và 70 -79 mm), khối lượng trung bình của tất cả các nhóm kích thước 52, 68 gam. Đối với ngao trắng nghiên cứu trên tổng số 820 cá thể ngao được thu từ tháng 2/2012 đến tháng 1/ 2013, với 4 nhóm kích thước thước ( 20 – 29 mm, 30 – 39 mm, 40 - 49 mm và 50 - 59 mm), khối lượng trung bình của tất cả các nhóm là 25,36 gam. Tần suất thu mẫu 2 lần/tháng, 25 – 50 mẫu/lần,.
Phương pháp mổ ngao theo hướng dẫn mổ ĐVTM hai mảnh vỏ của Thái Trần Bái và Nguyễn Văn Khang, 2000 [13]. Sản phẩm sinh dục của ngao được thu và bảo quản theo Braley, 1988 [72], Helm và Bourne, 2004) [91] và Quayle và Newkirk, 1989 [121] được mô tả vắn tắt như sau: Cố định tuyến sinh dục bằng dung dịch formol nồng độ 10%. Tiến hành loại bỏ nước bằng dung dịch etanol (nồng độ 70%), tiếp theo làm sạch nước bằng xylene hoặc cồn. Sau đó đúc parafin và cắt lát mỏng từ 5 -7 µm bằng máy cắt Microtome. Nhuộm mẫu bằng dung dịch hematoxylin và eosin. Quan sát tiêu bản bằng kính hiển vi quang học ở độ phóng đại khoảng 100 – 400 lần.
Quan sát sự phát triển của tuyến sinh dục, tế bào sinh dục của ngao theo thang 5 bậc Braley, 1988) [72], Quayle và Newkirk, 1989 [121] và Helm và Bourne, 2004 [91]. Ngao thành thục sinh dục là ngao có tuyến sinh dục với các tế bào sinh dục ở giai đoạn III, IV.
- Xác định mùa vụ sinh sản: Được xác định thông qua tỷ lệ thành thục sinh dục (TLTTSD) theo Nguyễn Chính, Châu Thanh, Trần Mai Kim Hịa, 2001[16], Hồng Thị Bích Đào, 2004, [17]) và chỉ số thành thục sinh dục (Gonad Index) xác định theo Walker và Heffernan, 1994 [134] qua các đợt thu mẫu.
+ TLTTSD (%) = Số cá thể thành thục sinh dục x 100 (2.5) Số cá thể thu mẫu phân tích
(n1a1 + n2a2 + ...+ niai) (2.6) + GI (Gonad Index) =
n
Trong đó: n1,n2...ni : cá thể ngao thứ 1, 2...i;
a1,a2....ai: giai đoạn tuyến sinh dục của cá thể thứ 1,2...i; n: số cá thể ngao thu mẫu phân tích
- Cơ cấu giới tính: Nhìn hình dạng bên ngồi khơng xác định được giới tính của ngao. Để phân biệt được giới tính đực, cái cần thiết phải tiến hành mổ và quan sát tuyến sinh dục (TSD) của chúng. Xác định cơ cấu giới tính theo thời gian và theo nhóm kích thước dựa trên sự quan sát số lượng cá thể đực, cá thể cái và các cá thể không phân biệt từ mẫu ngẫu nhiên tại các lần thu mẫu.
- Kích thước thành thục sinh dục lần đầu (Lm50): Là kích thước nhỏ nhất mà tại đó có tỷ lệ trên 50% số cá thể trong quần đàn thành thục sinh dục vào mùa sinh sản.
- Xác định sức sinh sản của ngao cái.
+ Sức sinh sản tuyệt đối – Fa (trứng/cá thể cái): là toàn bộ số lượng trứng ở giai
đoạn thành thục sinh dục (giai đoạn III, IV) của một cá thể ngao. Fa được tính cho từng nhóm kích thước vào đầu mùa sinh sản.
Cách xác định Fa như sau: Tách buồng trứng ra khỏi phần thân mềm và hòa tất cả số trứng vào một thể tích nước biển lọc sạch nhất định. Dung dịch chứa trứng được hút bỏ các tạp chất, khuấy đều rồi lấy mẫu 1ml. Đếm trứng bằng buồng đếm động vật phù du.
Tính số lượng trứng của một cá thể theo công thức:
Fa (trứng/cá thể cái) = n x V (2.7)
Trong đó: Fa là sức sinh sản tuyệt đối (trứng/cá thể cái); n : số trứng trong 1 ml;
V : thể tích nước biển lọc sạch chứa trứng (ml).
+ Sức sinh sản tương đối – Frg( Trứng /g): là tỉ số giữa sức sinh sản tuyệt đối với
khối lượng toàn thân hoặc khối lượng thân mềm. Các cơng thức tính sức sinh sản tương đối là:
Frg1 (trứng/gWtt) = (2.8)
Frg2 (trứng/gWtm) =
(2.9)
Trong đó:
Frg1 (trứng/gWtt) : Sức sinh sản tương đối tính theo khối lượng tồn thân; Frg2 (trứng/gWtm) : Sức sinh sản tương đối tính theo khối lượng thân mềm; Wtt: Khối lượng toàn thân cả vỏ;
Wtm: Khối lượng phần thân mềm.
Các thao tác cân khối lượng, đo kích thước, mổ ngao, xác định tỉ lệ đực cái, xác định sự phát triển của tuyến sinh dục, sức sinh sản tương đối, tuyệt đối được tiến hành tại Viện Tài nguyên và Môi trường biển. Đúc mẫu, cắt tiêu bản TSD của ngao được thực hiện tại Phịng mơ bệnh phẩm, Bệnh viện Việt Tiệp Hải Phòng.
- Độ béo của ngao: Được xác định bằng cách tách ngẫu nhiên khối lượng thịt của ngao theo các kích cỡ khác nhau, ở các lần thu mẫu. Sử dụng giấy thấm để loại bỏ nước. Tính độ béo của ngao theo cơng thức sau:
- Độ béo ngao (%) = Khối lượng thịt ngao (2.10) x 100
Tổng khối lượng ngao
Độ béo của ngao theo từng nhóm kích thước của hai lồi ngao là trung bình của từng nhóm kích thước ngao trong năm. Đối với ngao dầu nghiên cứu trên 6 nhóm kích thước ( 20 – 29 mm, 30 – 39 mm, 40 – 49 mm, 50 -59 mm, 60 -69 mm và 70 -79 mm), khối lượng trung bình của các nhóm kích thước 52,68 gam. Đối với ngao trắng do không thu được mẫu ngao lớn nên chỉ nghiên cứu trên 4 nhóm kích thước thước ( 20 – 29 mm, 30 – 39 mm, 40 – 49 mm và 50 - 59 mm), khối lượng trung bình của các nhóm kích thước 25, 36 gam; Độ béo của hai loài ngao theo thời gian giữa các tháng trong năm là trung bình của tồn bộ ngao thu mẫu nghiên cứu mỗi tháng
- Phương pháp nghiên cứu tốc độ sinh trưởng của ngao
Thu mẫu nghiên cứu sinh trưởng của ngao tại địa điểm thực hiện mơ hình ni ngao, mỗi lần thu từ 20 – 40 mẫu để tính tốn sinh trưởng trong chu kỳ một năm từ tháng 5/2014 đến tháng 5/2015. Đo kích thước và cân khối lượng cả vỏ và khối lượng thân mềm. Tổng số 315 cá thể ngao dầu và 455 cá thể ngao trắng đưa vào cân, đo.
- Tính tốn và và xử lý số liệu sinh trưởng dựa theo JaraJara et al, 1997 [98], Caofujun et al, 2009 [75] và Lijimin et al, 2010[106].
+ Tốc độ sinh trưởng tương đối của ngao (SGR - %/ngày) tính theo cơng thức sau:
(LnWf - LnWi)
SGR (%.ngày-1) = x 100 (2.11) t
SGR(%.ngày-1) = (LnLf - LnLi) (2.12) x 100
t
+ Tốc độ sinh trưởng tuyệt đối của ngao (DGR – mm/ngày, g/ngày) tính theo cơng thức sau: DGR (mm/ngày) = () (2.13) DGR (g/ngày) = ( – ) (2.14) Trong các công thức (2.11), (2.12), (2.13), (2.14):
Li và Lf theo thứ tự là chiều dài đo lần trước và chiều dài đo lần sau; Wi và Wf theo thứ tự là khối lượng lần trước và khối lượng lần sau t là số ngày theo dõi thí nghiệm.
- Nghiên cứu sự lai của hai loài ngao
Các kết quả nghiên cứu của Huvet et al, 2004 và Ayako Yashiki Yamakawa et al, 2012 cho thấy, một số loài ĐVTM hai mảnh vỏ sống trong cùng một mơi trường có khả năng lai với nhau, đây là cơ sở để tác giả tiến hành nghiên cứu lai giữa hai loài ngao dầu và ngao trắng cùng sống trong một mơi trường có mùa vụ sinh sản tương đồng nhau. Khi ngao vào mùa sinh sản (tháng 6/2014) lựa chọn 300 cá thể ngao dầu và 300 cá thể ngao trắng bố mẹ tại vùng triều xã Giao Xuân đưa về trại sản xuất giống tại xã Giao Long, huyện Giao Thủy làm thí nghiệm.
Tiến hành mổ, quan sát tuyến sinh dục để xác định giới tính của ngao, sau đó lấy sản phẩm sinh dục (tinh trùng và trứng) đưa vào các bơ can (2lít) chứa nước biển lọc sạch ở điều kiện độ muối 22 ‰, nhiệt độ 280C (đây là điều kiện thích hợp cho sản xuất ngao giống) [44] trong điều kiện sục khí liên tục, bố trí thí nghiệm với các cơng thức lai như sau:
Công thức 1: 20 cá thể đực ngao dầu x 20 cá thể cái ngao trắng Công thức 2: 20 cá thể đực Ngao trắng x 20 cá thể cái ngao dầu
Công thức 3: 20 cá thể đực ngao dầu x 20 cá thể cái ngao dầu (đối chứng) Công thức 4: 20 cá thể đực ngao trắng x 20 cá thể cái ngao trắng (đối chứng) Quan sát sự thụ tinh, sự phát triên phôi và ấu trùng của các cơng thức thí nghiệm để đánh giá sự lai giữa hai lồi ngao. Mỗi cơng thức thí nghiệm lặp lại ba lần