CHƢƠNG 2 : ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.3. Trỡnh tự cỏc bƣớc nghiờn cứu
2.3.3. Qui trỡnh xột nghiệm bệnh phẩm
2.3.3.1. Đối với hạch cửa và hạch nỏch nghi ngờ làm sinh thiết tức thỡ
- Hạch cửa (màu xanh) và hạch nỏch nghi ngờ (non-sentinel lymph node)
sau khi phỏt hiện, sẽ đƣợc phẫu thuật viờn lấy ra nguyờn vẹn và đỏnh dấu riờng từng hạch và gửi ngay đến khoa giải phẫu bệnh.
47
bỏ hết tổ chức mỡ xung quanh hạch và cắt đụi hạch theo trục chớnh. Với cỏc hạch cú kớch thƣớc ≤ 5mm sẽ giữ nguyờn lỏt cắt đú để làm tiờu bản, cũn với cỏc hạch >5mm sẽ cắt tiếp cỏc lỏt cắt với độ dày 2 mm để làm tiờu bản.
- Sinh thiết tức thỡ hạch cửa và hạch nỏch nghi ngờ (khụng phải hạch cửa) để đỏnh giỏ tỡnh trạng di căn:
Bệnh phẩm hạch cửa và hạch nỏch nghi ngờ di căn, sau khi đó chuẩn bị đƣợc đƣa vào mỏy làm lạnh với nhiệt độ -20oC đến -30oC (Microm HM525 UV Cryostat, Rankin Biomedical Corporation, Hoa Kỳ). Khi đó đạt độ lạnh tối ƣu để cố định, bệnh phẩm đƣợc cắt và nhuộm H&E để đỏnh giỏ tỡnh trạng di căn. Khi dàn, cố định và cắt sao cho lỏt cắt đầu tiờn phải trỡnh bày đƣợc toàn bộ bề mặt đỏnh giỏ. Phần bệnh phẩm đối xứng sẽ đƣợc chuyển nhuộm H&E thƣờng qui và húa mụ miễn dịch.
Cỏc nhà Giải phẫu bệnh trả lời kết quả sau 20-30 phỳt trong mổ để quyết định cú hay khụng vột hạch nỏch.
- Nhuộm H&E thƣờng qui: bệnh phẩm đƣợc cố định bằng formalin trung
tớnh trong 8-12 giờ, sau đú đƣợc chuyển đỳc khối nến và nhuộm H&E thƣờng qui theo qui trỡnh chuẩn hiện hành.
2.3.3.2. Đối với hạch nỏch
- Hạch nỏch đƣợc tiến hành vột theo cỏc chặng trong cỏc trƣờng hợp: sinh thiết tức thỡ hạch cửa hoặc hạch nỏch nghi ngờ dƣơng tớnh, cỏc trƣờng hợp khụng nhận diện đƣợc hạch cửa sau 30 phỳt thực hiện thủ thuật.
- Phẫu tớch hạch nỏch, đếm số lƣợng hạch đó vột cho từng ca. Chuyển cựng bệnh phẩm lờn Khoa Giải phẫu bệnh.
- Cố định và nhuộm H&E thƣờng qui để đỏnh giỏ tỡnh trạng di căn hạch nỏch, số lƣợng hạch di căn trờn tổng số hạch nỏch đó phẫu tớch.
48
- Kết quả trả lời xột nghiệm giải phẫu bệnh thƣờng qui và húa mụ miễn dịch đƣợc ghi theo mẫu thống nhất theo quiđịnh.
2.3.3.3. Đối với khối u
Nhuộm H&E thƣờng qui để đỏnh giỏ cỏc đặc điểm mụ bệnh học. Cỏc tiờu chớ cụ thể về chẩn đoỏn mụ bệnh học:
Loại mụ học xếp theo phõn loại của Tổ chức Y tế Thế giới. Độ mụ học xếp theo hệ thống phõn độ Scarff-Bloom-Richardson.
Phõn loại ung thư biểu mụ tuyến vỳ của Tổ chức Y tế Thế giới
2003, mó ICD-10/C (International Classification of Diseases-10/ Code) [59].
Chia 2 loại chớnh là ung thƣ khụng xõm nhập (tại chỗ) và ung thƣ xõm nhập. Phõn loại mụ học u ở vỳ theo WHO:
Khụng xõm nhập
- Ung thƣ biểu mụ tiểu thựy tại chỗ 8520/2 - Ung thƣ biểu mụ ống tại chỗ 8500/2 - Ung thƣ biểu mụ nhỳ nội ống 8503/2 - Ung thƣ biểu mụ nhỳ nội nang 8504/2
Xõm nhập
- Ung thƣ biểu mụ ống xõm nhập loại khụng đặc biệt 8500/3 - Ung thƣ biểu mụ tiểu thuỳ xõm nhập 8520/3
- Ung thƣ biểu mụ ống nhỏ 8511/3
- Ung thƣ biểu mụ tủy 8510/3
- Ung thƣ biểu mụ nhầy 8480/3
- Ung thƣ biểu mụ tế bào nhẫn 8490/3 - U carcinoid khụng điển hỡnh 8249/3 - Ung thƣ biểu mụ tế bào nhỏ 8041/3
49
- Ung thƣ biểu mụ thần kinh nội tiết tế bào lớn 8013/3 - Ung thƣ biểu mụ nhỳ/vi nhỳ xõm nhập 8507/3 - Ung thƣ biểu mụ tuyến tiết rụng đầu 8401/3 - Ung thƣ biểu mụ dị sản 8575/3
+ Dị sản vẩy 8070/3
+ Dị sản tế bào hỡnh thoi 8572/3
+ Dị sản nhầy biểu bỡ 8430/3
+ Dị sản tuyến vảy 8560/3
+ Ung thƣ biểu mụ dị sản hỗn hợp biểu mụ/trung mụ 8573/3 - Ung thƣ biểu mụ giàu lipid 8314/3 - Ung thƣ biểu mụ chế tiết 8502/3 - Ung thƣ biểu mụ tế bào hạt 8290/3 - Ung thƣ biểu mụ dạng tuyến nang 8200/3 - Ung thƣ biểu mụ tế bào chựm nang 8550/3 - Ung thƣ biểu mụ tế bào sỏng giàu glycogen 8315/3
- Ung thƣ biểu mụ tuyến bó 8410/3
- Ung thƣ vỳ thể viờm 8530/3
Phõn độ mụ học theo Scarff -Bloom - Richardson.
Trong hệ thống này độ mụ học đƣợc đỏnh giỏ dựa trờn 3 thành phần: sự
hỡnh thành ống nhỏ, đa hỡnh thỏi của nhõn và số lƣợng nhõn chia. Mỗi thành phần này đƣợc cho điểm từ 1-3 và tổng sốđiểm cuối cựng từ 3-9. Cụ thể:
* Sự hỡnh thành ống nhỏ:
- 1 điểm: > 75% ống nhỏ
50 - 3 điểm: < 10% ống nhỏ
* Đa hỡnh thỏi của nhõn: kớch thƣớc và hỡnh dạng của nhõn - 1 điểm: nhõn nhỏ, đồng đều.
- 2 điểm: kớch thƣớc tăng, đa dạng, trung gian giữa 1 và 3. - 3 điểm: đa hỡnh thỏi, cú nhiều nhõn quỏi.
* Nhõn chia: đỏnh giỏ ở những vựng ngoại vi hoặc ở những vựng nhiều hoạt động nhõn chia nhất, quan sỏt 10 vi trƣờng ở vật kớnh x40.
- 1 điểm: 0 đến 9 nhõn chia - 2 điểm: 10 đến 19 nhõn chia - 3 điểm: trờn 20 nhõn chia
Phõn độ mụ học đƣợc tớnh bằng tổng điểm của 3 yếu tố trờn - Độ 1 (biệt húa cao): 3-5 điểm
- Độ 2 (biệt húa vừa): 6-7 điểm - Độ 3 (kộm biệt húa): 8-9 điểm
- Độ mụ học thấp: bao gồm độ 1 và cỏc loại ung thƣ cú tiờn lƣợng tốt:
ung thƣ thể nhỳ, thể nhày, thể vi nhỳ, tiểu thựy tại chỗ…
- Độ mụ học cao: độ 2, độ 3.
Tỡnh trạng thụ thể nội tiết ER, PR và yếu tố phỏt triển biểu mụ Her-
2neu:
Tỡnh trạng ER và PR đƣợc đỏnh giỏ bằng kĩ thuật nhuộm hoỏ mụ miễn dịch trờn cỏc lỏt cắt khối nến. Kết quả đƣợc đỏnh giỏ dƣới kớnh hiển vi quang học theo cỏc tiờu chớ đỏnh giỏ nhƣ sau:
- Ghi điểm theo tỷ lệ ƣớc lƣợng(tỷ lệ %): 0: khụng
51 2: 1/100 - 1/10 3: 1/10 - 1/3 4: 1/3 - 2/3 5: > 2/3 - Cƣờng độ đƣợc đỏnh giỏ theo 3 mức: 1: yếu 2: vừa 3: mạnh
Her-2/neu: Đỏnh giỏ kết quả, theo tiờu chuẩn của nhà sản xuất, đƣợc chia từ 0 đến (3+): 0-(1+) õm tớnh; (2+) nghi ngờ; (3+) dƣơng tớnh.
0: Hoàn toàn khụng bắt màu.
(1+): Khụng nhỡn thấy hoặc nhuộm màng bào tƣơng dƣới 10% tế bào u.
(2+): Màng bào tƣơng bắt màu từ yếu đến trung bỡnh ở > 10% tế bào u.
(3+): Màng bào tƣơng bắt màu toàn bộ với cƣờng độ mạnh đƣợc quan sỏt thấy trờn 10% cỏc tế bào u. Chỉ (3+) mới đƣợc coi là dƣơng tớnh để điều trị đớch.