Giai đoạn Thể tích (ml) Khối lƣợng (mg) GlcNAc (mg/mL) GlcNAc (mg/g sản phẩm) GlcNAc tổng Hiệu suất thu hồi (%) Chitin 5964 Thủy phân 167 14,58 2435,58 100
Học viên: Đồng Thị Hương Trầm Trang 40
Dịch nổi thu được tiến hành cô quay loại cồn và cô đặc 8,3 lần tương ứng bằng thiết bị cô quay chân không ở nhiệt độ 50oC. Dịch sau cô đặc đem giữ ở 4oC để theo dõi sự kết tinh. Sau 5 ngày, khơng có kết tinh, tiến hành đơng khô thu sản phẩm bột. Khối lượng mẫu là 3855,12mg với độ ẩm tương ứng 11,93%. Kết quả sấy đông khô được thể hiện ở bảng 3.3.
Kết quả bảng 3.3 cho thấy tỉ lệ hao hụt mẫu trong q trình cơ đặc và sấy với lượng GlcNAc ban đầu 2435,58 mg là 21%, thấp hơn một ít so với phương pháp sấy phun. Tuy nhiên sự hao hụt sản phẩm phụ thuộc nhiều vào lượng sản phẩm do vậy số liệu này chỉ mang tính chất để tham khảo.
Sản phẩm dạng bột thu được sau sấy đông khô tiến hành xác định phổ sản phẩm trên bản sắc ký silica gel. Kết quả chạy sắc ký được trình bày qua hình 3.12.
H 18Hình 3.12. Hình ảnh TLC sản phẩm GlcNAc sau đơng khơ
1. GlcNAc chuẩn (20g/l); 2. GlcNAc sau đơng khơ (20g/l)
Nhìn vào hình ảnh sắc ký ta có thể thấy được sản phẩm đơng khơ thu được chứa phần lớn GlcNAc. Mẫu đơng khơ có độ tinh sạch là 56,93% dựa theo hàm lượng GlcNAc cao hơn nhiều so với phương pháp sấy phun là 44,52%. Nguyên nhân là do trong sấy đông khô không sử dụng chất độn Magie stearate.
Học viên: Đồng Thị Hương Trầm Trang 41
3.3.2. Nghiên cứu tinh sạch N-acetyl-D-glucosamine
Tiến hành tinh sạch GlcNAc theo qui trình mơ tả ở phần vật liệu và phương pháp nghiên cứu. Dịch thủy phân có hàm lượng GlcNAc đạt 6,70mg/mL được ly tâm 10000vòng/phút, 15 phút để loại cặn và cơ chất dư. Sau đó dịch nổi được xử lý với than hoạt tính nồng độ 20g/l ở 80oC trong 15 phút. Dịch sau lọc than hoạt tính đem tiến hành cơ quay dịch từ 1500ml xuống còn 30ml. Theo dõi sự kết tinh trong 48h, sau 48h khơng có kết tinh, tiến hành kết tủa cồn đến 90o qua đêm. Sau khi kết tủa cồn, ly tâm 10000vòng/phút thu dịch nổi và kết tủa mẫu 1. Tiếp tục cô đặc và loại cồn. Q trình cơ đặc thu được 5 mẫu sản phẩm kí hiệu từ 2 đến 6.